低氧和自噬与肿瘤的发生发展

自噬作为真核生物的一种应激调控机制,既可以促进肿瘤的发生发展,又可以抑制肿瘤的增殖。在肿瘤局部低氧的微环境下,低氧诱导因子-1α、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号转导通路抑制、内质网应激均可促进自噬的发生。在肿瘤快速地发生发展过程中,肿瘤的糖代谢功能增强、活性氧族增多、窖蛋白1下调以及上皮间质转化的激活均诱导了自噬的发生并促进肿瘤的局部浸润、侵袭转移和耐药,因此,抑制自噬可能为肿瘤治疗提供一种新的策略。     

诱导自噬在口腔癌治疗中的研究进展

口腔癌恶性程度高,易复发、易转移,预后欠佳。自噬是细胞在应激条件下诱导的分解代谢过程。近年研究发现上皮细胞自噬激活可通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）,激活腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）信号通路等,激活口腔癌细胞自噬,抑制口腔癌细胞存活。诱导自噬可以降解真核起始因子4E蛋白,抑制口腔癌转移。在口腔癌治疗中发现,诱导口腔癌细胞自噬能抑制口腔癌细胞增殖,促进口腔癌细胞凋亡。与单独放化疗相比,联合使用自噬诱导剂有助于提高口腔癌患者的疗效和存活率。此外诱导口腔癌细胞自噬可提高机体免疫功能,增强口腔癌免疫疗法疗效。本文就自噬与口腔癌的关系,诱导自噬与放化疗及免疫治疗联合应用治疗口腔癌的作用研究进行综述,为诱导自噬治疗口腔癌,提高口腔癌治疗效果和患者存活率提供新思路。当前诱导自噬治疗口腔癌的作用机制尚不明确,研究其作用机制,精准调控诱导自...     

山奈酚通过mTORC1信号促进牵张力下小鼠骨髓间充质细胞成骨分化机制研究

目的探讨山奈酚(kaempferol,Kae)对周期性单轴牵张力下小鼠骨髓间充质细胞(bone marrow mes?enchymal cells,BMMCs)成骨分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin com?plex 1,mTORC1)信号通路的作用。方法对体外分离培养的小鼠BMMCs施加形变量10%的单轴动态牵张力,通过细胞毒性试验筛选出合适浓度Kae,并添加工具药pp242改变内源性mTOR信号,在牵张后4 h利用化学比色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性变化、ELISA法检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达量,流式细胞仪检测细胞内钙离子相对含量;利用Western Blot检测内源性mTORC1信号通路主要分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal proteinS6 kinases,S6K)、4E/BP1的磷酸化表达及成骨转录因子Runx2和Osterix的表达变化,qRT?PCR检测上述因子mRNA表达水平。结果10μmol/L Kae对细胞的抑制作用较小,且成骨能力最强。加力结束后4 h,Kae能够有效促进BMMCs成骨分化,ALP表达为(153.04±18.72)U/mg,OCN表达为(1.64±0.25)U,成骨转录因子Runx2、Osterix的mRNA水平和蛋白水平表达上调,细胞内钙离子含量下降,同时mTORC1信号通路中mTOR、S6K mRNA水平及蛋白磷酸化表达上调,4E/BP1 mRNA水平及蛋白磷酸化表达下调;在加入pp242抑制mTORC1信号表达后,mTOR、S6K mRNA水平及蛋白磷酸化表达下调,4E/BP1 mRNA水平及蛋白磷酸化表达上调,BMMCs成骨分化效应显著被抑制,Runx2、Osterix的mRNA水平和蛋白表达显著下调,ALP及OCN表达下调,细胞内钙离子含量增高。结论Kae通过mTORC1信号通路促进牵张力下小鼠BMMCs成骨分化。     

雷帕霉素促进上颌窦黏膜细胞成骨分化

目的:探讨雷帕霉素对上颌窦黏膜细胞成骨分化的影响。方法:上颌窦黏膜细胞经不同浓度的自噬激动剂雷帕霉素处理后诱导成骨分化,然后进行碱性磷酸酶活性检测、茜素红染色以及自噬基因和成骨基因转录水平的检测,评估上颌窦黏膜细胞成骨分化和自噬水平的改变。结果:碱性磷酸酶活性、钙结节形成量以及成骨基因的表达随成骨诱导逐渐增加,并且100 nmol/L的雷帕霉素处理组表现出较强的成骨能力和自噬水平。结论:合适浓度的雷帕霉素可促进上颌窦黏膜细胞的成骨分化,这一过程可能与自噬途径相关。     

马来酸噻吗洛尔对人脐静脉内皮细胞VEGF传导通路表达的影响

目的:研究马来酸噻吗洛尔在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中血管生成信号传导通路的表达,以探讨这些药物作为治疗婴幼儿血管瘤的作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、局部黏着斑激酶(FAK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。应用SPSS17.0统计包进行数据分析。结果:RT-PCR检测发现,马来酸噻吗洛尔以剂量依赖的方式明显抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的ERK、Akt、mTOR及FAK的mRNA表达;Western blot结果显示:马来酸噻吗洛尔以剂量依赖的方式明显抑制VEGF对磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的调控。结论:马来酸噻吗洛尔可以通过抑制ERK、Akt、mTOR、FAK信号通路的表达,抑制血管瘤内皮细胞增殖和促进细胞凋亡,从而达到治疗婴幼儿血管瘤的目的。     

自噬在骨组织疾病中的调控作用研究进展

骨是一种动态活性组织,通过持续的骨重塑维持矿化平衡和自身结构稳定。而自噬是细胞依赖溶酶体进行自体溶解的过程,对骨组织细胞功能具有重要作用,自噬平衡的打破与骨类疾病发生发展密不可分。因此,全面认识自噬对骨组织的调控作用具有重要理论意义和实际应用价值。本文就自噬的形成、自噬与骨组织细胞的作用机制及自噬在骨组织疾病发生发展中的调控机制做一综述,为进一步探讨通过调控自噬治疗骨类疾病提供指导。     

磁场成骨效应在口腔领域的应用及机制研究进展

磁场是一种安全、无创的物理治疗方法。大量研究证实磁场具有良好的成骨效应,在加速正畸牙移动、促进种植体骨整合、促进骨折愈合和提高牵张成骨效果等方面有一定的临床应用价值,有望成为治疗口腔疾病的一种有效辅助手段。为更好地将磁场应用于临床,本文就磁场在口腔领域的应用、对骨组织细胞的生物学效应和磁场调控骨代谢的分子机制三方面进行综述。磁场对骨组织细胞的生物学效应主要体现为促进成骨细胞和间充质干细胞的成骨,降低骨细胞的凋亡率,对破骨细胞的影响则尚无定论。在分子层面,骨组织细胞感应并响应磁刺激,磁信号经位移电流、洛伦磁力和自由基对效应等机制转变为生物可识别的电信号,进而激活下游P2嘌呤能受体、腺苷受体信号通路、转化生长因子-β受体信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,m TOR）和Notch通路等信号网络。此外,本文还探讨了影响磁场成骨效应的因素——磁场参数,以期为临床医生提供参考。然而,磁场成骨效应的作用机制目前尚未明确,继续深入研究磁场的作用机制可为骨组织再生和牙周组织再生提供有效策略。另外,聚焦磁场的作用靶点,将磁场与其他药物联合应用,可...     

脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1基因调控口腔及全身骨代谢的作用

近日钟基因调控哺乳动物的昼夜节律,脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1(Bmal1)基因作为其核心组分之一,与多种生物行为活动密切相关,近年来,其在调控骨代谢方面具有的重要作用也受到越来越多的关注。Bmal1基因可通过下游多种信号通路的介导,分别参与调节骨相关成骨细胞、破骨细胞及软骨细胞等细胞的生理活动,进而影响如骨质疏松、骨关节炎等骨代谢相关疾病,同时也在颌骨的生理病理过程中发挥作用。本文就Bmal1基因调控骨代谢的研究进展作一综述,为口腔及全身相关骨代谢疾病的诊疗提供可能思路。     

雷帕霉素抑制口腔鳞癌细胞增殖及其分子机制研究

目的 通过不同浓度雷帕霉素干预口腔鳞癌细胞系SCC-4的增殖情况，检测雷帕霉素干预后p-AKT、p-STAT3、p-S6K1及免疫因子在SCC-4中的表达，探讨雷帕霉素对口腔鳞癌细胞体外生长的抑制作用及其分子机制。方法 采用20、40、80μmol/L雷帕霉素分别干预体外培养的SCC-4，并设含0μmol/L雷帕霉素的培养液作为对照组，作用24h后，通过MTT检测不同浓度雷帕霉素对于SCC-4增殖的影响；使用Western blotting方法检测雷帕霉素对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关相关蛋白（AKT,STAT3,S6K1）磷酸化情况变化；通过酶联免疫吸附法检测雷帕霉素对PI3K/AKT/mTOR信号通路下游共刺激因子B7-H1表达的影响。结果 MTT结果显示雷帕霉素对于SCC-4细胞的抑制效应呈明显的浓度依赖关系；酶联免疫吸附法结果表明雷帕霉素能够降低PI3K/AKT/mTOR信号通路下游相关共刺激分子（B7-H1）的浓度；蛋白免疫印迹结果则表明在雷帕霉素干预下SCC-4细胞的PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白p-AKT,p-STAT3,p-S6K1表达水平明显降低...     

mTOR�ź�ͨ·�ڿ�ǻҽѧ���������о���չ

mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,不仅在正常细胞的生长增殖中起着极其重要的作用,而且与癌细胞的生长密切相关,是细胞生长、分化的中心调控者。mTOR参与体内多条信号通路,并在基因转录、蛋白质翻译、核糖体合成等过程中发挥重要作用。本文对mTOR信号通路在口腔医学领域中的作用做一综述。     

mTOR信号通路在口腔医学领域作用研究进展

mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,不仅在正常细胞的生长增殖中起着极其重要的作用,而且与癌细胞的生长密切相关,是细胞生长、分化的中心调控者。mTOR参与体内多条信号通路,并在基因转录、蛋白质翻译、核糖体合成等过程中发挥重要作用。本文对mTOR信号通路在口腔医学领域中的作用做一综述。     

Temsirolimus诱导的自噬对腺样囊性癌的作用

目的：探讨Temsirolimus对腺样囊性癌ACC-M细胞株自噬水平的影响,以研究该药物诱导的自噬对腺样囊性癌细胞的作用。方法：通过细胞增殖实验研究Temsirolimus对ACC-M细胞增殖的影响;通过Western印迹检测实验组与对照组微管相关蛋白1轻链3（LC3）和Beclin1的表达差异;利用透射电镜观察ACC-M细胞中自噬体的形态及数量,采用SPSS15.0软件包对实验结果进行t检验。结果：Temsirolimus对ACC-M细胞具有明显的生长抑制作用,并呈现出剂量-效应关系;LC3和Beclin1在实验组细胞中表达水平高于对照组（P〈0.05）;透射电镜实验中,实验组细胞胞内自噬体及自噬溶酶体数量明显高于对照组（P〈0.01）。结论：Temsirolimus通过诱导ACC-M细胞自噬,产生了明显的抑制肿瘤细胞生长的作用,提示细胞自噬是Temsirolimus作用于唾液腺腺样囊性癌的重要抗肿瘤机制。     

颞下颌关节软骨对咬合力刺激响应特征的动物实验启示

关节软骨主要的功能之一是承受一定的运动负荷,颞下颌关节髁突软骨所承受的功能负荷与咬合密切相关,因而颞下颌关节髁突软骨可以随咬合的变化而进行相应的改建。我们利用大鼠、小鼠进行的实验研究显示,用佩戴金属冠的方法加高小鼠双侧前牙咬合(bilateral anterior elevation,BAE),可导致小鼠髁突软骨明显增厚;而用金属冠制作单侧前牙反[牙合](unilateral anterior crossbite,UAC)不良修复体,则可导致髁突软骨出现明显的退行性变,直至髁突变形。我们利用这些可导致髁突软骨出现增殖性或退行性改建的动物模型进行在体基因修饰实验,探索髁突软骨改建过程中与细胞自噬、凋亡、终末分化等活动密切相关的信号通路,例如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapmycin,mTOR)信号,印第安刺猬信号(India hedgehog,Ihh),以及甲状旁腺素及其相关蛋白受体信号等,其结论有望指导临床工作中在纠正异常咬合基础上,从细胞和分子水平干预软骨细胞功能,预防和治疗颞下颌关节软骨退变。     

Effect of metformin on human periodontal ligament stem cells cultured with polydopamine‐templated hydroxyapatite

Polydopamine‐templated hydroxyapatite (tHA) is a type of nano‐biomaterial that can promote osteogenesis in bone tissue engineering. However, high concentrations of tHA stimulate production of reactive oxygen species (ROS), resulting in cell injury and apoptosis. Metformin has been demonstrated to activate the adenosine monophosphate‐activated protein kinase (AMPK) signaling pathway, which induces autophagy and decreases ROS production to prevent apoptosis. The present study was performed to investigate the potential application of tHA in combination with metformin in periodontal bone tissue engineering. Human periodontal ligament stem cells (hPDLSCs) were exposed to tHA in the presence or absence of metformin, and cytocompatibility and osteogenesis were detected by related assays. Additionally, the autophagy signaling pathway was analyzed by western blotting. Polydopamine‐templated hydroxyapatite, in combination with metformin, substantially reduced ROS production and apoptosis, and enhanced proliferation and osteogenic differentiation of hPDLSCs. Enhanced levels of microtubule‐associated protein 1 light chain 3 II and Beclin‐1 were observed after exposure to tHA plus metformin. Expression of phosphorylated AMPK was increased and that of phosphorylated mammalian target of rapamycin (mTOR) was decreased after exposure to tHA plus metformin. Taken together, our results demonstrate that tHA, combined with metformin, increases the viability of hPDLSCs via the AMPK/mTOR signaling pathway by regulating autophagy and further improving the osteogenic effect.     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在牙周炎大鼠相关肾损伤中的作用

目的 本研究旨在初步探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在牙周炎大鼠相关肾损伤中的作用。方法 20只雄性Wistar大鼠被随机分为对照组和牙周炎组,每组各10只。牙周炎组采用0.2 mm正畸丝结扎法构建牙周炎动物模型,对照组不作结扎处理。8周后,分别记录两组大鼠牙龈出血指数、牙周袋探诊深度及松动度,并通过Micro-CT分析牙槽骨吸收情况;采用HE及PAS染色进行组织学分析。qRT-PCR和Western Blot分别检测大鼠肾组织内的mTOR、phosphor-mTOR(p-mTOR)和BECN1(Beclin-1)的mRNA及蛋白表达情况。结果 与对照组对比,牙周炎组大鼠的牙龈组织出现明显肿胀、颜色及质地的改变,牙龈出血指数、牙周袋探诊深度及松动度均明显增加,牙槽骨吸收明显;肾小球鲍曼氏囊腔明显扩张,基底膜增厚,肾小管间质充血明显,刷状缘破坏;肾脏功能未见明显差异;牙周炎组的mTOR的mRNA及蛋白表达(p-mTOR/mTOR)均明显高于对照组,Beclin-1的mRNA及蛋白表达均明显低于对照组。结论 mTOR可能通过抑制自噬过程在大鼠牙周炎相关肾损伤中发挥作用。     

miR-30a在雷帕霉素刺激人炎症牙周膜干细胞后的表达情况及其与Beclin1基因的靶向调控作用的研究

目的:研究雷帕霉素对人牙周膜干细胞中miR-30a的表达的影响,并验证其与Beclin1的靶向调控关系,探讨miR-30a与自噬途径在牙周膜干细胞的炎症作用机制。方法:分离培养人牙周膜干细胞,并分别进行50 μg/L雷帕霉素作用2 h,10 nmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12 h,收集细胞,提取总RNA;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-30a的表达水平;应用qRT-PCR、Western blot及双荧光素酶报告系统验证miR-30a与Beclin1的相互作用关系。结果:雷帕霉素刺激细胞后,细胞内的miR-30a的表达升高;qRT-PCR、Western blot及双荧光素酶报告系统证实,miR-30a对Beclin1的mRNA及蛋白均有抑制,且与Beclin1的3’UTR具有靶向抑制作用。结论:miR-30a可靶向抑制自噬相关基因Beclin1的表达,并参与人牙周膜干细胞的细胞自噬过程。