1，25-二羟基维生素D3对小鼠骨髓细胞形成破骨细胞样细胞及其骨吸收效应的影响

目的动态观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对NH小鼠骨髓细胞培养在体外形成破骨细胞及其骨吸收的剂量效应和作用时象.方法收集NH小鼠骨髓细胞于含10%胎牛血清的α-MEM培养基中行体外培养,设置不同的1,25-(OH)2D3浓度组和给药时间组,并于培养第3、6、9、12天观察记录抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)阳性多核巨细胞[或破骨细胞样细胞(osteroblast-like cell,OLC)]以及骨磨片上骨吸收陷窝的数目.结果高于10-9mmol/L的1,25-(OH)2D3单一刺激可于培养第6天诱导TRAP阳性OLC形成,并且可在骨磨片上观察到骨吸收陷窝;随1,25-(OH)2D3浓度的增高,OLC和骨吸收陷窝数目均随之增加;各浓度组OLC数目于培养第9天达最高值,随后则趋于减少,而骨吸收陷窝数于培养第9和第12天均有所增加;采用单一1,25-(OH)2D3浓度(10-8mmol/L),TRAP阳性OLC和骨吸收陷窝见于培养3 d后用药和全程用药组,而仅在培养前3 d用药则不能诱导OLC和骨吸收陷窝的形成.结论 1,25-(OH)2D3可在体外诱导骨髓单核细胞分化形成OLC并使其具有破骨活性,诱导作用的强弱与1,25-(OH)2D3的浓度相关,而且其作用时象可能是在培养3 d以后.     

1，25-二羟基维生素D3对小鼠骨髓细胞形成 破骨细胞样细胞及其骨吸收效应的影响

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氟对破骨细胞骨吸收陷窝的影响

目的 观察氟对大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)形成的骨吸收陷窝的影响。方法 通过机械分离新生大鼠乳鼠四肢长骨方法体外培养Oc,并于1 d后加入含不同浓度氟的培养基,观察氟对OC形成的骨吸收陷窝数量及面积的影响。结果 随染氟剂量的增加,骨吸收陷窝数及陷窝面积逐渐增加,各剂量组与对照组比差异均有显著性(P<0.05),其中尤以4.0mg/L染氟组最为明显(P<0.01)。结论 在一定的剂量范围内,随染氟剂量的增加,OC的骨吸收作用是增强的。     

阿伦膦酸钠对骨髓生成破骨细胞及骨吸收作用的影响

[目的]研究阿伦膦酸钠对体外培养的小鼠骨髓生成破骨细胞及其骨吸收作用的影响。[方法]收集小鼠骨髓细胞于含有10^-8mol／L的1，25二羟基维生素D3[1，25-（OH）2D3]的α-MEM完全培养基中体外培养，设置不同浓度的阿伦膦酸钠给药，并于培养的第6、9、12d观察记录抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acidphosphatase，TRAP）阳性多核巨细胞[破骨样细胞（osteoclast-like cell，OLC）]生成数，反映破骨细胞生成情况。记数培养12d骨磨片上骨吸收陷窝数及吸收面积，反映骨吸收情况。[结果]随着阿伦膦酸钠浓度的增高，TRAP阳性的细胞数减少，骨吸收陷窝数及面积均减少。[结论]阿伦膦酸钠可抑制骨髓细胞体外培养中破骨样细胞的形成，体外可抑制破骨细胞骨吸收作用。     

新伐他汀体外对破骨细胞性骨吸收及大鼠骨代谢的影响

目的探讨新伐他汀体外对破骨细胞骨吸收功能的作用及其大鼠骨代谢的影响.方法采用体外成熟破骨细胞和大鼠颅盖骨培养体系,检测新伐他汀作用7 d后破骨细胞骨吸收陷窝和培养上清钙的变化;检测大鼠颅盖骨培养上清碱磷酶和钙含量,组织学观察颅盖骨形态学变化.结果新伐他汀体外可明显抑制破骨细胞骨吸收陷窝的形成及培养上清钙的释放,新伐他汀体外可增强大鼠颅盖骨培养上清碱磷酶的活性,组织学观察到新伐他汀使大鼠颅盖骨矿化增强.结论新伐他汀体外不仅可促进大鼠颅盖骨的成骨活性,并且可明显抑制破骨细胞骨吸收功能,对骨质疏松有重要的防治作用.     

黔岭藿对体外培养的破骨细胞作用的研究

从新生兔四肢长骨中分离的破骨细胞与牛骨片在体外培养后，加入不同浓度黔岭霍注射液再培养，并设立对照，用倒置相差显微镜观察黔岭霍对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响。结果显示黔岭著３个浓度组（０．１５ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ）与对照组比较均能抑制破骨细胞在骨片上形成吸收陷窝的数量，增加药物浓度抑制作用亦趋增强（Ｐ＜０．０５）。     

IL—2,TNF—α和PGE2对破骨细胞性骨吸收的作用

从新生兔的四肢长骨中分离出破骨细胞，将其与大小约６ｍｍ×６ｍｍ、厚约１０μｍ的牛骨片共同培养。２４小时后，培养液中分别加入ＩＬ－２（５０Ｕ／ｍｌ，１００Ｕ／ｍｌ）；ＴＮＦ－α（１０￣（－１０）Ｍ，５×１０￣（－１０）Ｍ，１０￣（－９）Ｍ）；ＰＧＥ＿２（１００ｎｇ／ｍｌ）；并做空白对照。培养４０小时、６４小６寸及１周，利用相差显微镜计数吸收陷窝数，通过图像分析系统计算吸收陷窝表面积。结果表明：ＩＬ－２能促进破骨细胞性骨吸收：ＴＮＦ－α对分离破骨细胞性骨吸收无明显影响；ＰＧＥ＿２则对体外分离的破骨细胞具有抑制作用。     

RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264.7分化成成熟破骨细胞

目的观察小鼠的单核／巨噬细胞RAW264．7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征。方法RANKI，诱导RAW264．7细胞6d后，用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP阳性多核细胞，吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态；诱导RAW264．7细胞9d后，RT、PCR检测RAW264．7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其RANKL诱导后变化；诱导RAW264．7细胞12d后，钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果RAW264．7细胞TRAP染色阴性，单核或2个核，能表达破骨细胞表型和功能基因，无骨吸收功能。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞，上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因mRNA的表达。结论RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱，是一种较好的破骨前体细胞模型。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成成熟破骨细胞。     

1,25-二羟维生素D3对小鼠移植皮片、血清钙、胸腺及脾脏指数的影响

1 ,2 5 二羟维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 D3 ]是维生素D在体内唯一有活性的形式 ,以往认为其功能为调节钙、磷的代谢。近来 ,随着对其功能研究的深入 ,已有实验表明 1,2 5 (OH) 2 D3 具有抑制机体免疫功能的作用[1] 。因此 ,我们研究了 1,2 5 (OH) 2 D3 的上市药物罗盖全对不同系小鼠间皮肤移植术后免疫器官的作用 ,以期为临床器官移植的抗排斥治疗提供实验依据。一、材料与方法罗盖全 [1,2 5 (OH ) 2 D3 ]购自上海Roche制药有限公司。近交系C57BL/6(H 2 b)小鼠 5 0只作为皮肤移植受鼠。近交系BALB/C(H 2 d)小鼠 2 0只作为移植皮…     

淫羊藿苷对小鼠骨髓源性破骨细胞诱导生成及骨吸收功能的影响

目的探讨淫羊藿苷对破骨细胞诱导产生及骨吸收功能的影响。方法用终浓度分别为25ng·mL^-1、30ng·mL^-1、10^-8mol·L^-1的M—CSF、RANKL、1，25（OH）2VitD3体外诱导培养小鼠骨髓源性破骨细胞，在此过程中加入终浓度分别为0、10^-7mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-5mol·L^-1的淫羊藿苷。倒置相差显微镜下观察活体细胞、HE染色、TRAP染色及降钙素受体染色鉴定破骨细胞，计数骨片上骨吸收陷窝数及面积，玻片上TRAP阳性多核细胞数。结果加药组随淫羊藿苷浓度的增加，骨片上形成的骨吸收陷窝数及面积，玻片上的TRAP阳性多核细胞数呈量的依赖性的减少，与非加药组比较，10^-5mol·L^-1、10^-5mol·L^-1浓度的淫羊藿苷组，差异有显著性（P〈0．05）。结论淫羊藿苷具有抑制破骨细胞诱导产生及骨吸收功能的作用，并随浓度增加抑制作用增强。     

小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立

目的 建立小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型,为探讨成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法 利用24 h内新生小鼠颅骨和4～8周龄成年小鼠四肢长骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨髓单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养一定时间后进行破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一步采用RT-PCR对破骨细胞标志酶基因基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和组织蛋白酶K (Cathepsin K ) 的表达进行检测.结果 共培养5天后可见TRAP( )多核细胞形成,13天TRAP( )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志基因TRAP 在共培养3天时开始表达,而MMP-9和 Cathepsin K则在共培养5天后表达.结论 共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著,诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.     

l，25(OH)2D3诱导鼠骨髓细胞形成多核破骨细胞的实验研究

目的：观察１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对骨髓干细胞形成破骨细胞的调控作用，从而为破骨细胞骨吸收机制的研究奠定方法学的基础。方法：将不同浓度１，２５（ＯＨ）２Ｄ３加入原代培养的刀骨髓细胞培养液中，利用抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色，监测不同时间点破骨细胞的形成情况，利用倒置光相差异微镜和扫描电镜检测所诱导形成破骨细胞的骨吸收功能情况。结果：培养前３天，细胞ＴＲＡＰ染色阴性，第４天出现ＴＲＡＰ阳性单核细     

辛伐他汀对PTHrP诱导的破骨细胞性骨吸收及小鼠颅盖骨代谢的影响

[目的]探讨辛伐他汀对体外甲状旁腺素相关肽（PTHrP）诱导小鼠的破骨细胞骨吸收功能的作用及其小鼠骨代谢的影响。[方法]采用PTHrP诱导小鼠骨髓细胞培养破骨细胞和小鼠颅盖骨培养体系，检测辛伐他汀作用8d后破骨细胞骨吸收陷窝和培养上清钙的变化；检测小鼠颅盖骨培养上清碱性磷酸酶和钙含量，组织学观察小鼠颅盖骨形态学变化。[结果]辛伐他汀体外可明显抑制PTHrP诱导小鼠的破骨细胞骨吸收陷窝的形成及培养上清钙的释放，辛伐他汀体外可增强小鼠颅盖骨培养上清碱性磷酸酶的活性，组织学观察到辛伐他汀使小鼠颅盖骨矿化增强。[结论]辛伐他汀体外不仅可促进小鼠颅盖骨的成骨活性，并且可明显抑制PTHrP诱导小鼠的破骨细胞骨吸收功能，对骨吸收性疾病有着重要的防治作用。     

1α,25—二羟维生素D3对前列腺癌LNCaP细胞中E—cadherin调？…

为探讨１α２５－二羟维生素Ｄ３与前列腺癌转移之间的关系，采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ印迹及免疫荧光法分析了前列腺癌细胞株ＬＮＣａＰ细胞中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达，用逆转录聚合酶链反应分析了Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ的表达。结果当培养液中加入０．０１、０．１和１．０ｎｍｏｌ／Ｌ浓度的１α，２５－二羟生素Ｄ３时，ＬＮＣａＰ细胞中Ｅ－＝ｃａｄｈｅｒｉｎ表达增强，当浓度增加到１０和１００ｎｍｏｌ／Ｌ时，     

1,25二羟维生素D3对乳腺癌细胞株生长及调亡的影响

目的 研究１,２５二羟维生素Ｄ３〖１,２５（ＯＨ）２Ｄ３〗对乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７生长及凋亡的影响。方法 采用四唑氮蓝比色（ＭＴＴ）法检测细胞增殖,光镜和电镜形态学观察,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记（ＴＵＮＥＬ）法计数凋亡细胞,免疫印迹法检测ｂｃｌ－２蛋白表达。结果 １０＾－７ｍｏｌ／Ｌ的１,２５（ＯＨ）２Ｄ３就可以抑制ＭＣＦ－７增生,改变细胞周期时相分布,     

1,25-二羟维生素D3对慢性肾脏疾病非钙磷代谢调节的肾脏保护作用

慢性肾脏疾病（chronic kidney disease,CKD）具有高发病率、高住院率、高死亡率及高额治疗费用等特点,已经成为危害全世界公共卫生健康的重大疾病。1,25-二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]自应用于临床以来,在治疗CKD引发的继发性甲状旁腺功能亢进和肾性骨营养不良取得了显著的效果。目前,大量研究证实1,25（OH）2D3不仅可以维持钙磷及骨代谢平衡,还可从多种病理途径,如抗炎症反应、抑制肾素一血管紧张素系统（renin—angiotensin system,RAS）、减少蛋白尿、     

1,25二羟维生素D3对胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡的影响

目的 探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]对胆管癌细胞系QBC939的体外增殖及凋亡的影响.方法 将不同浓度的1,25(OH)2 D3与胆管癌细胞系QBC939共同培养,采用MTT法测定细胞增殖能力、显微镜观察细胞形态学的改变、流式细胞仪检测细胞周期与凋亡、免疫细胞化学观察bcl-2的表达.结果 0.1～0.5μmol/L的1,25(OH)2 D3对胆管癌细胞QBC939有抑制作用,呈剂量依赖性.经1,25(OH)2 D3作用72h后细胞G1期比例升高,S期比例下降,其中0.5μmol/L组细胞G1期由(50.3±1.0)%上升至(65.5±3.2)%,S期由(39.4±0.5)%下降至(23.6±0.7)%;并且可诱导细胞产生凋亡,0.5μmol/L组作用后细胞凋亡率由0.5%上升至24.6%;bcl-2的表达下调.结论 1,25(OH)2 D3能抑制胆管癌细胞系QBC939增殖并诱导细胞凋亡,其引起凋亡的机制可能与下调bcl-2的表达相关.     

1a，25双羟维生素D3对成骨样细胞增殖与分化的影响

采用同位素掺入．细胞周期、细胞化学和扫描电镜等方法观察了1a，25双羟维生素D3[1．25(0H)2D3]对人及大鼠成骨样细胞OS-732和ROSl7／2．8增殖及分化的影响。结果表明：1，25(OH)2D2对0S-732细胞增殖的抑制作用呈明显的时效和量效关系。在给10^7mol／L的1.25(OH)2D3后第4和第6天，对0S-732细胞生长的抑制率分别为40%和60%；对DNA．RNA和蛋白质合成的抑制作用分别为59%，4l%和22%。流式细胞计测定结果表明：1.25(0H)2D3使DNA合成受阻；扫描电镜显示：1，25(OH)2D3有抑制ROSl7／2．8细胞表面徽绒毛的作用。此外，细胞化学染色表明：该激素有增加成骨样细胞碱性磷酸酶活性和促进骨形态形成蛋白合成的作用，即刺激骨形成的作用。     

1,25二羟维生素D3与5-氟尿嘧啶对乳腺癌细胞生长及凋亡的影响

目的研究1，25二羟维生素D3[1，25(OH)2D3]与5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人乳腺癌细胞株MCF-7生长及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞术测定细胞周期和凋亡率，免疫组织化学法检测bcl-2蛋白表达。结果1，25(OH)2D3与5-Fu均可抑制MCF-7细胞生长、1，25(OH)2D3阻滞细胞周期于G0／G1期，5-Fu阻滞细胞周期于S期，并可诱导细胞凋亡；当两药联合应用时，上述作用得到显著加强，凋亡率明显上升。两药均可下调bcl-2蛋白表达，当两药联合应用时，bcl-2蛋白几乎不表达。结论1，25(OH)2D3与5-Fu联合应用对乳腺癌细胞具有协同抑制生长和诱导凋亡作用。