联合检测外周血 CK19和SCCAg mRNA对早期宫颈癌患者微转移的诊断价值

［摘要］目的　采用qRT-PCR技术检测早期宫颈癌患者根治术术前外周血中CK19和SCCAg mRNA表达水平的变化,研究联合检测外周血 CK19和SCCAg mRNA对早期宫颈癌患者微转移的诊断价值．方法　昆明医科大学第三附属医院妇瘤科30例早期（ⅠA2～ⅡA）宫颈癌患者为实验组,15例子宫肌瘤患者和15例健康志愿者为为阴性对照组,15例晚期（ⅡB～ⅢB）宫颈癌患者为阳性对照组．收集外周血样本,qRT-PCR技术检测外周血CK19和SCCAg mRNA表达水平的变化．结果　实验组外周血中CK19和SCCAg mRNA表达水平与阴性对照组、阳性对照组比较,差异有明显统计学意义（P＜0.01）; 30例宫颈癌患者手术前外周血CK19和SCCAg mRNA阳性检出率分别为30%（9/30）和20%（6/30）,手术前联合检测二者的表达可使阳性检出率提高至43.3%,联合检测2种标志物的阳性检出率高于检测单一标志物,差异有统计学意义（P＜0.05）．结论　外周血CK19和SCCAg mRNA表达水平均可能作为诊断早期宫颈癌微转移的标志物．qRT-PCR技术联合检测两项指标,可提高诊断微转移的敏感度和特异性     

胃癌患者外周血CEA mRNA的检测及意义

目的 探讨胃癌患者外周血中CEA mRNA的表达及临床意义。方法 采用巢式RT-PCR技术检测70例胃癌患者手术前、后外周血CEA mRNA的表达情况，并以20例健康志愿者为阴性对照组，以10例新鲜胃癌组织作阳性对照。结果 CEAmRNA术前阳性表达率为51．4％，阳性表达率与组织学类型、TNM分期具有显著相关性（P〈0．05），而与肿瘤的部位、患者性别无相关性（P〉0．05）；20例健康志愿者无1例阳性表达，10例胃癌组织均为阳性表达。结论 CEA mRNA作为标志物检测胃癌血循环微转移是可靠的，对于指导临床诊断、治疗及判断预后具有重要意义。     

三种基因在非小细胞肺癌外周血有核细胞中阳性表达的意义

目的 为确定外周血有核细胞中LUNX基因、CK19基因和S100A4基因是检测非小细胞肺癌外周血微转移的重要指标提供实验依据.方法 术前抽取外周血,通过荧光定量PCR （PCR）检测其肺组织特异性蛋白（LUNX）、细胞角蛋白19（CK19）和钙结合蛋白A4（S100A4）的表达情况,并对其进行半定量分析.结果 肺癌患者外周血标本中LUNX mRNA、CK19 mRNA和S100A4mRNA的阳性表达率分别为66.7％、62.5％和56.3％,明显高于肺良性疾病患者和健康志愿者（P＜0.05）,这三种基因的表达与组织学类型、肿瘤位置有关,在腺癌中的阳性表达高于鳞癌,在周围型肺癌中的表达高于中央型肺癌.3种基因的表达与肿瘤的大小无明确关系.随着肿瘤分期的增高和淋巴结转移的发生,三种基因的表达有明显增高的趋势.结论 LUNX mRNA和CK19 mRNA、S100A4mRNA可作为检测肺癌微转移的分子标志物.     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及意义

目的探讨大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的表达及临床意义。方法采用巢式RT-PCR技术检测48例大肠癌患者手术前、后外周血CK20mRNA的表达情况，并以12例健康志愿者为阴性对照，以胃腺癌细胞株BGC-823作阳性对照。结果CK20mRNA术前阳性表达率分别为60．4％，阳性表达率与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移具有相关性（P〈0．05），而与分化程度、肿霜邵位、患者性别无明显相关性（P〉0．05）；术后CK20mRNA阳性表达率明显高于术前（P〈0．05）；12例健康志愿者无一例阳性表达，胃腺癌细胞株BGC-823均为阳性表达。结论CK20mRNA作为标志物用于检测大肠癌的血循环微转移是可靠的，手术操作可促使肿瘤细胞释放入血。     

检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA微转移的临床意义

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CK19 mRNA的表达情况,探讨其作为分子标志物检测NSCLC微转移的可行性。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测48例NSCLC患者,15例肺良性疾病（BLD）患者和10例健康人外周血CK19 mRNA的表达。结果NSCLC患者CK19 mRNA的阳性表达率明显高于BLD患者和健康对照者,差异有统计学意义（Х^2=24．735,P=0．000）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者外周血中CK19 mRNA阳性表达率分别为44．4％（8／18）,75．0％（9／12）,92．3％（12／13）,4／5,不同临床分期NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性表达率比较差异有统计学意义（Х^2=8．820,P=0．032）;有无淋巴结转移NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性表达率比较差异亦有统计学意义（Х^2=6．813,P=0．009）;而不同病理类型、不同分化程度NSCLC患者外周血CK19 mRNA阳性表达率比较差异无统计学意义（Х^2=4．655,P=0．459;Х^2=1．204,P=0．548）。结论检测外周血CK19 mRNA表达可作为诊断NSCLC患者微转移的一个有价值的参考指标。     

CK19、CK20 mRNA在上皮性恶性肿瘤患者外周血中的表达及其意义

目的：分析上皮性恶性肿瘤患者外周血中CK19、CK20mRNA的表达水平，探讨其临床病理意义。方法：随机选择和收集53例上皮性恶性肿瘤患者的外周血，应用巢式RT－PCR法联合检测其CK19、CK20mRNA表达情况，另取15例上皮性肿瘤组织的为阳性对照，15例非肿瘤患者外周血为阴性对照。结果：53例肿瘤患者外周血中CK19阳性率为35．8％（19／53，CK20阳性率41．5％（22／53），两者至少1项阳性者69．8％（31／53）。15例肿瘤组织中CK20阳性率为100％（15／15），CK19阳性率86％（13／15）；15例阴性对照CK19阳性2例，CK20阳性1例，结合肿瘤的临床病理资料分析，肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达与肿瘤浸润深度，临床分期及淋巴结转移存在明显的相关性，而与肿瘤患者的年龄，性别，肿瘤分化程度无明显相关。结论：CK19、CK20mRNA可作为检测上皮性肿瘤外周血微转移的靶基因。联合检测肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA可增加外周血循环癌细胞的检测率。     

胃癌中Survivin的表达与肿瘤血管生成及周围静脉血微转移的关系

目的 研究胃癌组织中Survivin的表达及其与肿瘤血管生成和外周血微转移的关系.方法 用免疫组织化学方法检测胃癌组织中Survivin的表达和微血管密度(MVD),用巢式RT-PCR方法检测胃癌患者外周血癌细胞微转移.结果 60例胃癌中,41例(68.3%)胃癌组织Survivin表达阳性,Survivin阳性肿瘤的MVD计数(43.5±18.3)显著大于Survivin阴性肿瘤f(22.6±11.7),P＜0.011;60例胃癌中,21例(35.0%)周围静脉血中CK19 mRNA表达阳性.Survivin阳性胃癌患者外周血微转移阳性率(43.9%)显著高于Survivin阴性胃癌患者(15.8%,P＜0.05).结论 胃癌组织中Survivin表达的增加与胃癌组织血管化程度及周围静脉血微转移密切相关.     

外周血表皮生长因子受体mRNA表达对胃癌微转移和预后的价值

目的：分析检测胃癌和胃良性病患者外周血中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor EGFR）的表达情况，探讨其对胃癌微转移和预后的价值。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测57例胃癌，及40例胃良性病变患者外周血EGFR mRNA。结果：40例胃良性病变患者对照组外周血EGFR均为阴性。胃癌患者组EGFR mRNA表达阳性为42.1％（24／57）。EGFR mRNA表达阳性在胃癌TNM分期中为I期27.3％（3／11），Ⅱ期15.8％（3／19），Ⅲ期61.9％（13／21）及Ⅳ期83.3％（5／6），（P〈0.05）。EGFR mRNA表达阳性在低未分化及中高分化癌间有显著差异（P〈0.05）。结论：胃癌患者中外周血中EGFRmRNA可以作为检测胃癌患者外周血微转移的分子标志，可作为胃癌微转移及预后的参考指标。     

胃癌患者腹腔灌洗液CK19 mRNA、CEA mRNA的检测及其临床意义

目的观察采用巢式逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）检测胃癌患者腹腔冲洗液中细胞角蛋白19（CK19）mRNA和癌胚抗原（CEA）mRNA的临床价值。方法收集67例胃癌患者和8例胃良性病变患者腹腔冲洗液或腹水。常规行H-E染色细胞学检查，采用巢式RT-PCR方法检测腹腔冲洗液中CK19 mRNA和CEA mRNA的表达，并以胃癌细胞SGC7901为阳性对照。结果67例胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA的阳性表达率为58.2％（39/67）；CEA mRNA的阳性表达率为53.7％（36/67）；CK19 mRNA和CEA mRNA的联合检测阳性率为67.2％（45/67），皆高于细胞病理学检查的19.4％（13/67），而13例细胞病理学检查阳性患者的CK19 mRNA、CEA mRNA检测结果均为阳性。CK19 mRNA、CEA mRNA阳性率与肿瘤胃壁浆膜受侵、淋巴结转移和胃癌分期明显相关（P＜0.05）。结论采用巢式RT-PCR方法检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达敏感性高，对于早期诊断胃癌患者腹腔种植转移有一定临床价值。     

非小细胞肺癌患者外周血LUNX mRNA表达及临床意义

目的：通过检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者化疗前后外周血中肺特异性X蛋白（LUNX）mRNA的表达,探讨其对NSCLC微转移的诊断价值。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,对54例NSCLC患者化疗前后、非肺癌恶性肿瘤患者36例、肺良性疾病患者16例及健康志愿者15例的外周血进行LUNX mRNA检测。结果：54例NSCLC患者化疗前后外周血LUNX mRNA的阳性表达率分别是48.1%（26/54）和25.9%（14/54）,差异比较有统计学意义（P〈0.05）;非肺癌恶性肿瘤患者、肺良性疾病患者及健康志愿者外周血LUNX mRNA的阳性表达率均为0,与NSCLC组比较均有统计学意义（P〈0.01）;LUNX mRNA的阳性表达率在化疗前后均随TNM分期增加而升高（P〈0.05）,与患者年龄、性别、病理类型及分化程度无明显相关性（P〉0.05）;NSCLC外周血LUNX mRNA表达与化疗近期疗效无关（P〉0.05）。结论：LUNX mRNA是一种检测NSCLC外周血微转移较好的特异性标志物;化疗后NSCLC外周血LUNX mRNA的表达比化疗前显著降低,表明有效化疗可消灭NSCLC患者的微转移癌细胞。     

定量RT-PCR法检测CK20 mRNA、CEAmRNA在胃肠道肿瘤外周血中的表达

目的检测胃癌、大肠癌、健康人外周血cK20 mRNA、CEA mRNA的表达，探讨其临床意义。方法用定量RT—PCR法检测外周血白细胞中CK20 mRNA、CEA mRNA的含量，肿瘤组30人，健康对照组23人。结果试验结果显示肿瘤组CEA mRNA、CK20 mRNA表达水平明显高于健康对照组（P=0．000、P=0．000）。分组比较中Ⅳ期CK20 mRNA明显高于Ⅰ～Ⅲ期，P为0．000，差异显著；Ⅳ期与Ⅰ～Ⅲ期CEA mRNA没有差别。肿瘤组其中之一阳性28人，阳性率93．75％；两指标同时阳性22人，阳性率73．33％。结论本试验胃癌、大肠癌外周血检测CEA mRNA敏感性和特异性高于CK20 mRNA，但CEA mRNA数值高低与分期无关，CK20 mRNA的表达量与肿瘤分期有关。两指标联合检测未提高阳性率。     

巢式RT-PCR检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值?方法:采用MCF-7 RNA与健康志愿者外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)RNA进行梯度混合后的反转录产物,检测优化后巢式RT-PCR体系的敏感性,再选择10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血检测其特异性后,对56例乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA及SBEM mRNA表达情况进行检测? 结果:优化后的检测体系能够在3 ml外周血PMNCs中检测到1个MCF-7细胞,10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血中未检测到CK19 mRNA与SBEM mRNA的表达;两者的表达与原发肿瘤大小,腋窝淋巴结状况及TNM分期相关(P < 0.05),而与原发肿瘤病理类型,激素受体以及C-erbB-2的表达无明显相关性(P > 0.05)? 结论:经过优化的巢式RT-PCR体系联合检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA及SBEM mRNA的表达敏感性和特异性较高,能用于检测外周血CTC,对进一步精确评估预后及指导治疗可能有较高的临床价值?     

非小细胞肺癌外周血分子微转移研究

目的: 研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血癌胚抗原(CEA)、CK19、Lunx mRNA表达对于肿瘤微转移的价值。方法: 采用RT-PCR技术,对46例NSCLC患者(其中肺癌Ⅰ期组6例,Ⅱ期组9例,Ⅲ期组14例,Ⅳ期组17例))和同期18例良性肺部疾病(对照组)患者外周血CEA、CK19、Lunx mRNA进行检测。结果: NSCLC患者外周血Lunx、CEA、CK19 mRNA的阳性率为52.2%、43.5%、41.3%,其中Ⅰ期组Lunx、CEA和CK19 mRNA的阳性率为16.6%(1/6)、16.6%(1/6)和0%(0/6),与对照组差异均无统计学意义(P > 0.05);Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期组NSCLC患者Lunx mRNA的阳性率为44.4%(4/9)、50.0%(7/14)、70.6%(12/17),CEA mRNA的阳性率为33.3%(3/9)、50.0%(7/14)、52.9%(9/17),CK19 mRNA的阳性率为22.2%(2/9)、42.9%(6/14)、64.7%(11/17),肺癌Ⅱ期组Lunx、肺癌Ⅲ期组CEA和Lunx、肺癌Ⅳ期组CEA、CK19、LunxmRNA表达阳性与对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。结论: 检测外周血CEA、CK19、Lunx mRNA表达可作为诊断早期NSCLC患者微转移重要的参考指标。     

胃癌患者外周血CK20 mRNA表达及其临床意义

目的:探讨胃癌患者外周血CK20 mRNA表达及临床意义。方法:应用Taq Man定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例胃癌患者(其中50例化疗2周期后复查CK20 mRNA)、20例健康对照者外周血CK20 mRNA表达;患者平均随访2年。结果:胃癌患者外周血CK20 mRNA阳性率为46.55%(27/58),显著高于健康对照组,二者差异有统计学意义(P<0.001);单因素分析胃癌患者外周血CK20 mRNA表达与远处转移(P<0.05)和临床分期相关(、期之间比较P<0.05);多因素Logistic回归分析表明:远处转移是影响胃癌患者外周血CK20 mRNA表达的独立因素;化疗2周期后CK20mRNA阳性率无显著下降,但近期疗效无效的患者外周血CK20 mRNA阳性率显著高于近期疗效有效的患者(P<0.05)。平均随访2年后,CK20 mRNA阳性患者与阴性患者的1年生存率分别为34.78%和64.29%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:外周血CK20 mRNA可作为检测胃癌患者肿瘤细胞微转移的分子标志;定期监测胃癌患者外周血CK20 mRNA表达有助于评估化疗疗效和预测预后。     

乳腺癌患者外周血中角蛋白19 mRNA,乳腺小粘蛋白mRNA和泌乳素诱导蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌患者外周血中角蛋白(CK)19mRNA,乳腺小粘蛋白(SBEM)mRNA和泌乳素诱导蛋白(PIP)mRNA的表达,并探讨三者在微转移检测中的意义。方法:用RT-PCR检测乳腺癌患者50例、结直肠癌20例、乳腺良性肿瘤21例、健康者20例外周血中的CK19mRNA、SBEM mRNA、PIP mRNA。结果:CK19mRNA在乳腺癌组的阳性率(36.0%)明显高于乳腺良性肿瘤组(0.0%,P<0.05)与健康者(0.0%,P<0.05)。SBEM mRNA、PIP mRNA在乳腺癌组的阳性率(28.0%、18.0%)明显高于其它3组(0.0%,P<0.05)。联合检测3个基因,可将阳性率提高到62.0%。结论:乳腺癌患者外周血中的SBEM mRNA、PIP mRNA均可能作为微转移标志物;而CK19mRNA作为乳腺癌微转移标志物的特异性尚待探讨;联合检测三者可提高乳腺癌外周血微转移的检出率。     

子宫内膜癌患者外周血细胞CK20 mRNA的表达及其临床意义

目的:检测子宫内膜癌患者外周血细胞中细胞角蛋白 20(CK20)基因 mRNA表达,探讨其表达对子宫内膜癌微转移的诊断价值。方法: 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测44例子宫内膜癌患者、34例子宫良性病变患者和 32名健康志愿者外周血细胞中CK20 mRNA表达水平,分析其表达与子宫内膜癌患者病理学参数之间的关系。结果: 44例子宫内膜癌患者外周血细胞CK20 mRNA检测出阳性12例,阳性率为27.3％;子宫良性病变患者及健康女性外周血中均未见其表达,子宫内膜癌患者CK20 mRNA阳性表达率高于子宫良性病变患者及健康女性（χ2=20.204,P<0.05）;子宫内膜癌患者外周血细胞CK20 mRNA 表达水平与临床分期（χ2=16.712,P<0.05）、淋巴结转移（χ2=6.381,P<0.05）和浸润深度（χ2=6.381,P<0.05）存在关联性,而与病理分级（χ2= 0.229,P>0.05）及是否绝经（χ2=0.004,P>0.05）无关联。结论:相对于子宫良性病变患者及健康女性,CK20 mRNA在子宫内膜癌患者中阳性表达率明显升高,且表达水平与临床分期、是否有淋巴结转移及浸润深度有关;CK20的特异性强,可作为判断子宫内膜癌血源性微转移的参考指标。     

早期宫颈癌患者外周血中CK19 mRNA的检测意义

目的:探讨CK19 mRNA在早期宫颈癌患者外周血中的表达水平及临床意义.方法:采用RT - PCR技术对47例Ⅰ a～Ⅱa期宫颈癌患者及37例对照组健康体检者行外周血CK19 mRNA检测.结果:在Ⅰ a～Ⅱa期患者外周血中CK19 mRNA阳性表达率为14.89％ (7/47),对照组外周血中CK19mRNA阳性表达率为0％ (0/37).在Ⅰ a～Ⅱa期中CK19 mRNA表达与淋巴结转移正相关(rs=0.367,P＜0.05),与年龄、病理类型及分化程度无关(P＞0.05).结论:CK19 mRNA表达在早期宫颈癌与淋巴是否结转移相关,与年龄、病理类型及分化程度无关;推测检测此指标可以作为预测宫颈癌淋巴结转移的指标.     

腹腔镜胃癌根治术对肿瘤细胞血循环微转移影响的初步研究

目的通过检测腹腔镜胃癌根治术患者与开腹胃癌根治术患者的外周静脉血液微转移发生的情况,探讨腹腔镜胃癌根治术对胃癌细胞血循环微转移的影响。方法本研究采用FQ-PCR技术,以细胞角蛋白(CK19)mRNA为标志物,以51例胃癌患者为研究对象,分为腹腔镜组(14例)及开腹组(37例),分别行腹腔镜胃癌根治术及开腹胃癌根治术;在手术前后采取静脉血,提取RNA,检测其血液微转移发生情况。结果两组患者手术前后CK19差异均无统计学意义(均>0.05)。术前Ⅲ期CK19mRNA表达阳性率为53.85%,Ⅰ期+Ⅱ期阳性率为20.00%,差异有统计学意义(=0.0197);术后Ⅲ期CK19mRNA表达阳性率为60.71%,Ⅰ期+Ⅱ期阳性率为30.00%,差异有统计学意义(=0.0173)。结论腹腔镜胃癌根治术并不增加静脉血CK19mRNA的阳性率,不增加术后肿瘤血循微转移的危险性。