IL—1α诱导牛脑微血管内皮细胞释放血小板衍生性生长因子

目的；研究白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）诱导牛脑微血管 细胞（ＢＣＭＥＣ０释放血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ），以及药物地由之引起的牛脑微血管平滑肌细胞（ＢＣＭＳＭＣ）增殖拮抗作用。方法；体外培养ＢＣＭＥＣ和ＢＣＭＳＭＣ，结晶紫染色法测定细胞增殖。结果；ＩＬ－１α不能直接促进ＢＣＭＳＭＣ的增殖；但经ＩＬ－１α刺激的ＢＣＭＥＣ培养上清能显著地促进ＢＣＭＳＭＣ的增殖。这种增殖作用与ＩＬ－１α剂量呈正相     

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞释放前列腺素E2的经时变化

目的探讨白细胞介素1β(IL-1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞释放前列腺素E2(PGE2)的经时变化. 方法30 ng/ml浓度的IL-1β刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞,分别于刺激后0.5、1、2、4、8、12和24 h收集细胞外液,用酶联免疫法(ELISA)测定各时间点细胞外液PGE2含量,并对各相应时间点的内皮细胞进行细胞计数. 结果①空白组内皮细胞计数值随时间延长而持续性增加,12 h趋于稳定;IL-1β刺激组细胞计数值随时间延长也相应增加,12 h基本趋于稳定,虽各时间点细胞数绝对值略少于空白组,但两者无统计学差异(P>0.05). ②由于细胞的不断生长,空白组PGE2含量也在不断地增加,12 h 为(10.80±1.46) pg/ml,达最大值,24 h为(9.72±2.78) pg/ml,有所下降.加入IL-1β刺激后8 h,细胞外液PGE2含量已开始明显增加,12 h 为(16.93±2.98)pg/ml,达最大值,与空白组比较,有显著性差异(P<0.01);24 h为(16.82±1.54)pg/ml,虽有所降低,但与空白组比较,仍具显著性差异(P<0.01). 结论大鼠脑微血管内皮细胞经IL-1β刺激后,细胞释放的PGE2在12 h达峰值,以后缓慢下降.     

白细胞介素－1α诱导牛脑微血管平滑肌细胞增殖及药物的拮抗作用

作者研究了白细胞介素－１α（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１α，ＩＬ－１α）对培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖的影响。在５～５００ｐｇ·ｍｌ－１范围内，ＩＬ－１α可诱导培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖，当用５０ｐｇ·ｍｌ－１ＩＬ－１α与该平滑肌细胞共孵育２４ｈ时，刺激作用最强，增殖率达２９．１％。欧芹素乙、异欧芹素乙，６－（α，α－苯基乙酰哌嗪基苯基）－４，５－二氢－５－甲基－３（２Ｈ）哒嗪酮在浓度为１０－６～１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１时，可剂量依赖性地拮抗ＩＬ－１α诱导的该平滑肌细胞增殖，药物浓度最高（１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１）时，抑制率值最大；６－（α，α－二苯基乙酰哌嗪基苯基）－４，５－二氢－５－甲基－３（２Ｈ）哒嗪酮，在低浓度时（１０－６和１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）可抑制ＩＬ－１α诱导的该平滑肌细胞增殖，药物浓度升高，抑制率也加大，而在高浓度时（１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１）抑制率下降。     

白细胞介素—1α诱导牛脑微血管平滑肌细胞增殖及药物的拮抗作用

作研究了白细胞介素－１α对培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖的影响。在５～５００ｐｇ～ｍｌ＾－１范围内，ＩＬ－１α可诱导培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖，当用５０ｐｇ·ｍｌ＾－１ＩＬ－１α与该平滑肌细胞共孵育２４ｈ时，刺激作用最强，增殖率达２９．１％。欧芹素乙、异欧芹素乙，６－（α，α－苯基乙酰哌嗪基苯基）－４，５－二氢－５－甲基－３（２Ｈ）哒嗪酮在浓度为１０＾－６～１０＾－４ｍｏｌ·Ｌ＾－１时，可剂     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

血小板衍生生长因子诱导人血管平滑肌细胞增殖时钙调素的变化

目的:观察血小板衍生生长因子(PDGF)对培养的人血管平滑肌细胞增殖及钙调素含量变化的作用.方法:应用3H-TdR掺入法和磷酸二酯酶法,观察不同浓度(1、10、20、30、40 ng/ml)PDGF-BB对培养的人血管平滑肌细胞DNA合成和钙调素含量变化的影响及其时间效应.结果:不同浓度PDGF-BB作用后,处于静止状态的人血管平滑肌细胞DNA的合成增加,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 ng/ml浓度时DNA的合成达到高峰(P＜0.01).平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后,细胞内钙调素含量逐渐增加,在9 h时出现一个短暂的高峰,随后逐渐下降;不同浓度PDGF-BB作用后,钙调素含量增加,并呈现出明显的浓度依赖关系,30 ng/ml浓度时作用最为显著(P＜0.01).结论:PDGF可促进培养的人血管平滑肌细胞增殖,该作用可能与增加钙调素含量有关.     

血小板衍生性生长因子对低氧培养内皮细胞增殖的影响

目的　观察低氧条件下血小板衍生性生长因子 (PDGF)对于培养人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖的影响。方法　流式细胞仪分析细胞周期各时相分布 ,氚 -亮氨酸 (3 H -Leu)掺入实验评价蛋白质合成 ,免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)水平。结果　低氧可显著减少S期及G2 /M期细胞数 ,使停留于G0 /G1 期HUVEC细胞数增加 ,降低HUVEC3 H -Leu的掺入量及PCHA水平。低浓度的PDGF(5ng/ml)对低氧条件培养的HUVEC细胞周期时相分布、3 H -Leu的掺入量及PCNA水平影响不明显 ;高浓度PDGF(1 0ng、2 0ng)加速HUVEC由G1 期S期的转换 ,显著增加低氧培养HUVEC3 H -Leu掺入量 ,PCNA水平 ,此作用呈剂量依赖性。结论　PDGF能够拮抗低氧所致的培养HUVEC增生能力的下降 ,但低浓度PDGF(5ng/ml)作用不显著 ,剂量越大 ,拮抗作用愈显著。     

左旋咪唑对实验性过敏性脑脊髓炎大鼠脊髓IL—1、IL—2及IL—6mRNA表达的影响

目的了解左旋咪唑(LMS)对实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内白细胞介素(IL)-1、IL-2及IL-6mRNA表达的影响,为探讨LMS性白质脑病的发病机制提供实验依据。方法用豚鼠全脊髓匀浆免疫wistar大鼠建立EAE模型,EAE+LMS组大鼠分别于免疫后0、24、48hipLMS10mg/kg;大鼠免疫后第16天处死,采用RT-PCR的方法检测大鼠脊髓内IL-1α、IL-1β、IL-2和IL-6mRNA表达的相对量。结果和正常对照组相比,EAE组大鼠脊髓内IL-1α(P＜0.05)、IL-1β(P＜0.05)、IL-2(P＜0.01)和IL-6(P＜0.05)mRNA的表达量均明显升高。EAE+LMS组大鼠脊髓内IL-1α、IL-1β、IL-2和IL-6mRNA的表达量和EAE组相比则分别升高131％(P＜0.05)、121％(P＜0.05)、95％(P＜0.05)和28％(P＞0.05)。结论LMS能明显促进EAE大鼠脊髓内IL-1α、IL-2β、IL-2mRNA的表达,提示该作用可能是LMS促发EAE的机制之一。     

牛血小板衍生生长因子的提取及其生物活性研究

从新鲜牛血中提取出部分纯化的血小板衍生生长因子(PDGF),对其生物活性进行了观察。收集新鲜牛血小板,用加热100℃处理和CM—SephadexC—50离子交换层析法提取出PDGF,并用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析,发现PDGF有四种主要成分,分子量分别为70、30、27和15KD。植入兔角膜后见该PDGF可刺激毛细血管生长和成纤维细胞增殖,是一种耐热、耐酸、易被胰蛋白酶破坏、灭活的阳离子多肽。     

磷酸化血小板衍生生长因子受体-α在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨磷酸化血小板衍生生长因子受体-α(P-PDGFR-α)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与其发展、转移的关系。方法共525例NSCLC患者纳入研究。运用Envision免疫组织化学法检测各患者组织标本中P-PDGFR-α的表达情况。结果525例患者中,42例P-PDGFR-α呈阳性(阳性率8.0%)。男女患者间及各年龄组患者差异无统计学意义(P>0.05),292例鳞癌患者中21例呈阳性(阳性率7.2%),222例腺癌标本中21例呈阳性(阳性率9.5%),11例腺鳞癌组织中均无阳性表达,三者之间差异均无统计学意义(P>0.05);P-PDGFR-α在低分化NSCLC患者中的表达显著高于高分化及中分化NSCLC的表达(P<0.05);266例手术大标本中,有淋巴结转移的145例患者中26例呈阳性(阳性率18.0%),而无淋巴结转移的121例患者中8例呈阳性(阳性率6.7%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)P-PDGFR-α可能与NSCLC的发展和转移有关;(2)P-PDGFR-α在NSCLC中的表达与年龄、性别、NSCLC病理学类型无关。     

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞内15-羟基前列腺素脱氢酶的经时变化

目的：探讨白细胞介素1β（IL-1β）刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞（rCMEC）15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）活性的经时变化。方法：建立rCMEC培养方法，进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞长至融合状态后，以30ng／ml浓度的IL-1β分别刺激0．5、1、2、4、8、12、24h，以放射免疫法测定各刺激时间点15-PGDH活性。结果：90％以上的培养细胞呈阳性，确定为rCMEC。加入IL-1β刺激后2h，细胞内15-PGDH活性与未刺激组比较有显著性差异（P〈0．05）；12h时达到最大值；24h时有所降低，但与未刺激组比较仍具显著性差异（P〈0．01）。结论：rCMEC经IL-1β刺激后，细胞内15-PGDH活性经历一个逐渐升高，到达峰值后缓慢下降的过程，IL-1β刺激12h内皮细胞15-PGDH活性达峰值。     

烟碱对白细胞介素—1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的增强作用

目的：观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞（Bovine cereral microvascular endothelial cells,BCMEC)表达αvβ3整合素的影响。方法：离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定BCMEC粘附大鼠血单核细胞（MN）的数目;应用ELISA法检测BCMEC对αvβ3整合素的表达量。结果：高浓度烟碱（10^-5mol/L)单独作用于BCMEC2h后,使BCMEC对MN的粘附率从（12.9 0.4)%增至（15.7 0.6)%,且BCMEC也可表达少量的αvβ3整合素;而当烟碱与BCMEC作用2h后,再经白细胞介素-1β（IL-1β）诱导4h,烟碱可浓度依赖性（10^-7～10^-5mol/L)地增强IL-1β的诱导作用,增加BCMEC对MN的粘附率以及E-选择素的表达量;抗αvβ3整合素抗体（αβAIAb)能显著阻断IL-1β诱导BCMEC后对MN的粘附率。结论：烟碱具有增强IL-1β诱导的脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的作用。     

PLC—γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响

目的观察磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）对血小板生长因子（PDGF）介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况（包括细胞内钙离子动员及DNA合成）,并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC－γ1^-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC－γ1 / 值小且峰值出现较晚（P＜0．01）。结论 PLC－γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。     

脑胶质瘤中血小板衍生生长因子和血管内皮生长因子表达的协同效应

目的：研究血小板衍生生长因子（PDGF）和血管内皮生长因子（VEGF）在脑胶质瘤中的表达及相关性,探讨其在人脑胶质瘤发生、发展和侵袭中的意义。方法：采用免疫组织化学S-P法,检测脑胶质瘤60例、正常脑组织10例中PDGF和VEGF的表达。结果：（1）PDGF在胶质瘤60例中表达30例（50．0％1,不同级别胶质瘤间的表达有差异,其表达与胶质瘤病理分级呈正相关（r=0．5807,P〈O．01）;（2）VEGF在胶质瘤中表达34例（56．7％）,不同级别胶质瘤表达与胶质瘤病理分级呈正相关（r=O．5373,P〈0．01）;（3）PDGF与VEGF在脑胶质瘤中的表达呈正相关fr=0．7715,P〈0．01）。结论：PDGF、VEGF的表达水平随着胶质瘤级别的增加而升高,与胶质瘤的病理学分级呈正相关,与胶质瘤进展密切相关,是恶性程度增高标志,两者在胶质瘤发生、发展中起协同作用。     

烟碱对白细胞介素-1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的增强作用

目的观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞(Bovine cerebral microvascular endothelial cells, BCMEC)表达αvβ3整合素的影响。方法离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定BCMEC粘附大鼠血单核细胞(MN)的数目;应用ELISA法检测BCMEC对αvβ3整合素的表达量。结果高浓度烟碱(10-5mol/L)单独作用于BCMEC 2 h 后,使BCMEC对MN的粘附率从(12.9+0.4)% 增至(15.7+0.6)%, 且BCMEC也可表达少量的αvβ3整合素; 而当烟碱与BCMEC作用2 h后,再经白细胞介素-1β (IL-1β) 诱导4 h,烟碱可浓度依赖性(10-7~10-5 mol/L)地增强IL-1β的诱导作用,增加BCMEC对MN的粘附率以及E-选择素的表达量; 抗αvβ3整合素抗体(αβAIAb)能显著阻断IL-1β诱导BCMEC后对MN的粘附率。结论烟碱具有增强IL-1β诱导的脑微血管内皮细胞表达αvβ3整合素的作用。     

血小板衍生生长因子-BB和转化生长因子-β对人牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和转化生长因子-β(TGF-β)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法体外培养人PDL细胞,与不同浓度的PDGF-BB、TGF-β或PDGF-BB+TGF-β作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDL细胞增殖的情况。结果PDGF-BB和TGF-β均明显促进PDL细胞增殖,在1～50ng/ml和5d范围内,呈浓度-时间依赖关系,PDGF-BB最佳效应时间为3d,最佳效应浓度为10ng/ml,其增殖比对照组增加了256.1%(P<0.001),TGF-β最佳效应时间为4d,最佳效应浓度为5ng/ml,比对照组增加了187.7%(P<0.01),在时间上TGF-β的促增殖作用晚于PDGF-BB。PDGF-BB与TGF-β联合应用时,二者有协同作用,可非常显著地促进PDL细胞增殖,其最大效应作用发生在用药后3d,此时与对照组相比增加了326.9%(P<0.001)。结论PDGF-BB、TGF-β可促进人PDL细胞的增殖,二者联合应用有协同效应。     

血小板衍生生长因子对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖作用的研究近况

肺血管结构改建是缺氧性肺动脉高压(PHT)形成的重要基础,主要表现形式是中膜平滑肌的增殖及迁移,其中心环节是平滑肌细胞的增殖,而平滑肌细胞的增殖依赖于多种生长因子的作用,尤其是血小板衍生生长因子(PDGF).[1]本文就PDGF在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用,综述如下.     

血小板源性生长因子和血小板源性内皮细胞生长因子在内皮细胞和血管平滑肌细胞中的作用研究

目的 通过体外转染血小板源性生长因子（PDGF）和血小板源性内皮细胞生长因子（PD-ECGF）质粒,观察两种生长因子对人脐静脉内皮细胞EAHY926和主动脉血管平滑肌细胞T/G HA-VSMC的影响,评估两种生长因子对血管损伤治疗的可行性。方法 构建人pcDNA 3.1（+）空载（空载组）、pcDNA 3.1（+）-PDGF-透明质酸（HA） （PPH组） 和pcDNA 3.1（+）-PD-ECGF-HA （PPEH组）质粒,分别转染入EAHY926和T/G HA-VSMC中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测内源性PD-ECGF和外源性PD-ECGF对EAHY926和T/G HA-VSMC细胞增殖的影响;细胞伤痕实验观察内源性PD-ECGF和外源性PD-ECGF对EAHY926和T/G HA-VSMC细胞迁移速度的影响。结果 MTT法检测3组EAHY926吸光度值比较,差异有统计学意义（F=235.18,P＜0.001）,其中PPH组高于空载组和PPEH组（P＜0.05）;空载组与PPEH组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。MTT法检测3组T/G HA-VSMC吸光度值比较,差异有统计学意义（F=82.89,P＜0.001）,其中PPH组高于空载组（P＜0.05）;PPEH组低于空载组（P＜0.05）。MTT法检测转染PPEH质粒的培养基（L-PPEH）对PPH诱导的EAHY926和T/G HA-VSMC增殖的影响,空载组、PPH组、PPH+L-PPEH组EAHY926吸光度值比较,差异无统计学意义（F=512.89,P=0.183）。空载组、PPH组、PPH+L-PPEH组T/G HA-VSMC吸光度值比较,差异有统计学意义（F=317.40,P＜0.001）;其中PPH组高于空载组和PPH+L-PPEH组（P＜0.05）。细胞伤痕实验证实,转染PPEH质粒的EAHY926、T/G HA-VSMC细胞迁移能力增强;PPEH组EAHY926平均细胞迁移距离百分比（56.1%±2.2%）较空载组（27.8%±3.4%）升高（t=-15.08,P＜0.001）;PPEH组T/G HA-VSMC平均细胞迁移距离百分比（69.1%±2.3%）较空载组（43.6%±5.8%）升高（t=-33.64,P＜0.001）。用转染PPEH质粒的培养基培养EAHY926、T/G HA-VSMC发现,外源性PD-ECGF处理的EAHY926、T/G HA-VSMC细胞迁移能力亦明显增强。结论 通过转染PDGF质粒,模拟血管损伤后内皮细胞和平滑肌细胞受到PDGF和/或PD-ECGF刺激,发现 PDGF能明显上调内皮细胞和血管平滑肌的增殖和迁移。PD-ECGF对血管内皮细胞增殖的效果不明显,但能上调血管内皮细胞和血管平滑肌的迁移速度;同时PD-ECGF能抑制血管内皮细胞的增殖。两种因子同时使用能抑制平滑肌细胞的过度增殖,促进内皮细胞和平滑肌细胞的迁移。两者联合使用可能成为促进经皮冠状动脉介入术（PCI）后损伤血管恢复及预防血管再狭窄的新策略。