脊髓损伤后炎症性细胞因子表达的变化及甲基强的松龙的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后,甲基强的松龙(MP)对炎症性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达及运动功能恢复的影响。方法 采用改良 Allen氏法建立大鼠脊髓(T9、T10)中度损伤模型,56只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、SCI组(n=24)、生理盐水组(n=14)和 MP组(n=14),分别于损伤后 1 h、4 h、12 h、24 h、72 h和7 d取材,利用半定量RT PCR方法观察损伤段脊髓组织中上述 3 种细胞因子 mRNA表达的变化规律;于 SCI后30 min经尾静脉给予MP(30 mg/kg),利用半定量RT-PCR方法检测 SCI后 4 h时 MP对各炎症性细胞因子 mRNA表达的影响;利用BBB评分检测MP对大鼠SCI后运动功能恢复的影响。结果 假手术组动物脊髓组织中炎症性细胞因子mRNA仅有微弱表达。SCI后1h,各炎症性细胞因子mRNA表达明显升高,其中 IL-1β,IL-6表达于损伤后 12 h达峰值,TNF-α于损伤后 4 h达峰值,至损伤后72 h仍高于假手术组( P <0.05)。SCI后4 h时,MP组大鼠 IL-1β和TNF-αmRNA的表达明显受到抑制,但MP并未对运动功能的恢复产生有益的影响。结论 MP可明显抑制SCI后的炎症反应。     

亚低温对急性脊髓损伤后炎症性细胞因子表达的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后亚低温对炎症性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达及运动功能恢复的影响.方法 采用改良Allen法建立大鼠脊髓 (T9、T10)中度损伤模型,56只SD大鼠随机分为假手术组(n=4)、SCI组(n=24)、常温组(n=14)和亚低温组(n=14),分别于损伤后1 h、4 h、12 h、24 h、72 h和7 d取材,利用半定量 RT-PCR方法观察损伤段脊髓组织中上述三种细胞因子mRNA 表达的变化规律;于SCI后即刻行亚低温治疗4 h,利用半定量 RT-PCR方法检测SCI后4 h时亚低温对各炎症性细胞因子mRNA表达的影响;利用 Tarlor评分检测亚低温对大鼠SCI后运动功能恢复的影响.结果 假手术组动物脊髓组织中炎症性细胞因子mRNA仅有微弱表达.SCI后1 h时,各炎症性细胞因子mRNA表达明显升高,其中IL-1β和IL-6表达于损伤后12 h达峰值,TNF-α于损伤后4 h达峰值,至损伤后72 h仍高于假手术组(P<0.05).SCI后4 h时,亚低温组大鼠IL-1β和 TNF-α mRNA 的表达明显受到抑制,但亚低温对运动功能的恢复产生显著的有益影响.结论 亚低温可明显抑制SCI后的炎症反应,对运动功能的恢复产生显著的有益影响.     

夹脊、督脉电针对大鼠脊髓损伤前炎性细胞因子表达的影响

目的:观察夹脊、督脉不同配穴的电针对脊髓损伤(SCI)后的大鼠前炎性细胞因子表达的影响.方法:SD大鼠32只随机分为4是:假模组(n=8)、模型对照组(n=8)、夹脊电针组(n=8)、督脉电针组(n=8).夹脊电针组、督脉电针组于SCI后0.5h和4h分别在夹脊与督脉的穴位进行1次电针治疗.SCI后8h,每组8只大鼠行Western-blot检测脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白含量的表达.结果:假模组、夹脊电针组、督脉电针组IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白含量均低于模型对照组,差异有显著性意义(P＜0.05).夹脊电针组、督脉电针组之间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:夹脊、督脉电针可以通过抑制SCI后IL-1β、IL-6、TNF-α3种前炎性细胞因子的表达,抑制SCI急性期的炎症反应来保护脊髓,减轻损伤的发生,起到神经保护作用.     

SIRT1对大鼠急性脊髓损伤炎症反应的影响

目的 观察大鼠急性脊髓损伤后SIRT1对局部组织炎症反应的影响.方法 采用改良Allen′s法,建立大鼠脊髓钝挫伤模型(T10),100只SD大鼠被随机分成4组:假手术组(n=4,SHAM),模型组(n=32,SCI),白藜芦醇组(n=32,RES),对照剂组(n=32,SOL).脊髓损伤术后立即给予腹腔注射白藜芦醇(RES)100 mg/kg和聚乙二醇硬脂酸酯15(SOL)100 mg/kg,在脊髓损伤后4 h,8 h,24 h,36 h取材,用QT-PCR的方法检测4组中SIRT1的动态表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒)测定脊髓损伤后4 h,8 h,12 h,24 h,36 h各组组织中炎症因子(IL-1β,IL-6,IL-10,TNF-α)水平.结果 RES组SIRT1表达在4 h明显增加,在8 h达到高峰,与其他两组(SCI组,SOL组)比较差异有统计学意义(P<0.01).SCI组大鼠损伤脊髓组织在损伤后4 h各炎症性细胞因子表达即明显升高,其中TNF-α和IL-6于损伤后8 h达峰值,IL-10在观察时间内呈持续性增高,IL-1β在24 h达峰值.SOL组各炎症因子的变化规律与SCI组基本一致,RES组与前两组相比,浓度差异均有统计学意义(P<0.01).结论 SIRT1对大鼠急性脊髓损伤后炎症反应有明显抑制作用.     

富血小板血浆对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性反应的作用

目的了解富血小板血浆(PRP)对脂多糖诱导(LPS)的星形胶质细胞活化、增殖及炎症相关因子释放的影响。方法无菌条件下取10只出生1—3 d SD大鼠乳鼠,处死并取大脑皮质,使用胰酶消化大脑皮质组织,清洗、离心并过滤后得到原代大鼠星形胶质细胞。使用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定所得细胞是否为大鼠星形胶质细胞。建立LPS诱导的星形胶质细胞炎症体外模型,分为5组:空白对照(BC)及LPS、LPS+2.5%PRP、LPS+5%PRP以及LPS+10%PRP组,各LPS组均以终浓度为1μg/mL LPS预处理24 h后,加不同浓度PRP处理24 h。提取各组大鼠星形胶质细胞细胞蛋白,以WB法检测大鼠星形胶质细胞GFAP蛋白含量、CCK-8法检测细胞存活率,Griess法检测细胞NO释放量,ELISA法检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达量。结果 1)GFAP(抗体)标记的阳性细胞数95%,说明所培养的细胞为SD大鼠星形胶质细胞。2)5组GFAP表达水平(灰度值):LPS组(3.49±0.15)较BC组(1.23±0.18)明显增加(P0.05),而3个LPS+(2.5%、5%、10%)PRP组(2.77±0.32、1.83±0.14、1.78±0.24)较LPS组明显降低(P0.05)。3)细胞增殖率(%):LPS(组)诱导12、24、48 h(125.47±5.4、144.72±6.5、151.49±7.1)后较BC组(100±6.2、100±5.2、100±8.0)明显上升(P0.05);而加入2.5%、5%、10%PRP处理12 h(113.04±7.4、94.41±4.2、90.06±2.1)、24 h(108.21±7.9、93.44±7.4、83.59±4.1)和48 h(98.02±9.3、78.22±9.4、70.1±8.4)后较LPS组明显下降(P0.05)。4)5组细胞上清液中的NO含量(μmol/L):LPS组(13.28±0.58)较BC组(3.01±0.15)明显上升(P0.05);而加入2.5%、5%、10%PRP(组)处理(9.98±0.72、7.19±0.91、6.82±0.46)后较LPS组明显降低(P0.05)。5) TNF-α和IL-6表达(ng/L):LPS(组)处理后(TNF-α为4.204±0.04、 IL-6为0.483±0.02)较BC组(TNF-α为1.763±0.05、 IL-6为0.296±0.02)均明显上升(P0.05);而加入2.5%、5%、10%PRP(组)处理后(TNF-α为3.234±0.09、3.496±0.05、3.260±0.17,IL-6为0.403±0.01、0.381±0.01、0.386±0.02)较LPS组均明显下降(P0.05)。结论 PRP能够抑制大鼠模型LPS诱导的星形胶质细胞活化和增殖,有效改善大鼠星形胶质细胞炎症损伤。     

亚低温对急性脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α表达及运动功能恢复的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后亚低温对肿瘤坏死因子-α (TNF-α)mRNA表达及运动功能恢复的影响,探讨其可能的作用机制.方法 72只SD大鼠随机分为对照组(n=24)、常温组(n=24)和亚低温组(n=24),每组再分为六个亚组,每亚组4只,参照改良Allen法建立大鼠脊髓(T9)中度损伤模型,亚低温组给予亚低温治疗5 h,而对照组不做亚低温处理.分别于损伤后6 h、12 h、24 h、72 h、1周和4周,利用 Tarlov评分检测亚低温对大鼠SCI后运动功能恢复的影响;然后将大鼠处死,利用半定量 RT-PCR方法观察损伤段脊髓组织中TNF-α mRNA表达的变化.结果 亚低温组TNF-α mRNA表达SCI后6~72 h明显少于常温组(P<0.05),而运动功能评分每个时间点都明显高于常温组(P<0.05).结论 亚低温可明显抑制SCI后TNF-α的表达,具有良好的恢复运动功能的作用.     

地稔预干预对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后炎症因子表达的影响

目的 评价地稔预干预对大鼠脊髓缺血再灌注损伤（SCII）后脊髓组织中炎症因子表达的影响。方法 选择雄性SD大鼠72只,按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（SCII组）、地稔干预组（MD组）、甲强龙治疗组（MP组）四组,每组18只。再灌注损伤后6 h、48 h、72 h,比较各组大鼠的后肢运动功能和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、IL-10的表达。结果 与Sham组比较,SCII组在脊髓缺失再灌注损伤后6 h、48 h和72 h,BBB评分降低（t分别=26.78、12.54、11.59,P均<0.05）,TNF-α、IL-6、IL-10表达均明显升高（t分别=20.34、25.86、22.17;26.74、27.66、25.69;12.40、12.96、14.27,P均<0.05）;与SCII组比较,MD组和MP组在48 h及72 h BBB评分降低（t分别=10.25、8.56;15.47、11.62,P均<0.05）,在6 h、48 h和72 h TNF-α、IL-6表达降低,IL-10表达升高（t分别=12.18、...     

大鼠低温爆震伤对肺组织中IL-1β和TNF-α表达的影响

目的:建立大鼠低温爆震伤致肺损伤模型,研究爆震伤后大鼠血清和肺组织中IL-1β和TNF-α表达的变化。方法:将40只大鼠随机分成空白对照组(10只)、低温对照组(10只)及低温实验组(20只),进行爆震伤造模,实验后对大鼠进行状态观察,行苏木精-伊红染色观察肺脏病理变化,采用ELISA方法检测大鼠血清中IL-1β和TNF-α含量,采用荧光定量PCR和Western blot方法测定IL-1β和TNF-α基因和蛋白相对表达量变化,并对其结果进行分析。结果:苏木精-伊红染色结果显示,低温对照组大鼠肺脏有少量炎性细胞,低温实验组大鼠肺组织肺泡壁增厚,有大量的血细胞及炎性细胞产生。血清ELISA结果显示,低温对照组和低温实验组大鼠血清中IL-1β和TNF-α含量高于空白对照组(P0.05)。荧光定量PCR和Western blot结果显示,低温对照组和低温实验组大鼠肺组织中IL-1β和TNF-α基因相对表达量高于空白对照组,且低温实验组大鼠肺组织中IL-1β和TNF-α基因相对表达量高于低温对照组(P0.05);低温对照组和低温实验组肺组织中IL-1β和TNF-α蛋白相对表达量高于空白对照组,且差异有统计学意义(P0.05);与低温对照组比较,低温实验组肺组织中IL-1β和TNF-α蛋白相对表达量较高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:大鼠低温肺爆震伤导致血清中IL-1β和TNF-α含量升高,肺组织中IL-1β和TNF-α基因和蛋白的相对表达量升高,其损伤机制可能是IL-1β和TNF-α表达量升高导致炎症反应的产生。     

电刺激对大鼠脊髓损伤后神经胶质纤维酸性蛋白与白细胞介素-1α表达的影响

目的探讨电刺激对脊髓损伤后神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、白细胞介素-1α(IL-1α)表达的影响。方法健康成年SD大鼠72只随机分为正常组、损伤组、电刺激组。采用Allen’s法将后两组复制为脊髓T9损伤模型。术后对电刺激组大鼠进行电刺激治疗7 d。3组均进行BBB评分,免疫组织化学检测GFAP与IL-1α的表达情况。结果损伤组和电刺激组BBB评分均小于正常组(P<0.05),伤后5 d、7 d,电刺激组较损伤组BBB评分增加(P<0.05)。损伤组、电刺激组GFAP阳性表达均在伤后5 d达到高峰,伤后5 d、7 d,电刺激组GFAP表达低于损伤组(P<0.05);IL-1α阳性表达在伤后7 d内持续上升,伤后5 d、7 d,电刺激组IL-1α表达低于损伤组(P<0.05)。结论电刺激能抑制GFAP与IL-1α的表达,可能有利于减轻炎症反应,减少胶质瘢痕形成。     

炎性细胞因子在肝缺血-再灌流损伤时心肌组织中的表达

目的探讨大鼠肝缺血-再灌流损伤时TNF-α、IL-1βmRNA在心肌组织中的表达及与心肌细胞凋亡的关系。方法选取健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为6组,每组8只。应用免疫组织化学方法和原位杂交方法分别测定心肌组织中TNF-α、IL-1βmRNA的表达;应用原位细胞凋亡法测定细胞凋亡情况。同时观察心肌HE染色。结果I/R组与假手术组TNF-α在心肌组织中的表达,差异有显著性(P<0.01),I/R1h组明显升高,与I/R组比较差异有显著性(P<0.01),I/R2h组、I/R4h组虽然略有波动,但增加差异无显著性(P>0.05)。IL-1βmRNA自I/R组起表达就明显增多,与I组比较差异有显著性(P<0.01);I/R1h组明显升高,与I/R组比较差异有显著性(P<0.05)。细胞凋亡指数I/R组与假手术组比较明显增加(P<0.01),随着再灌流时间的延长细胞凋亡指数逐渐增加。TNF-α、IL-1βmRNA和细胞凋亡指数间均存在正相关(r=0.94,r=0.91;P<0.05)。HE染色后,见心肌部分横纹不清,有炎性细胞浸润,心肌纤维肿胀,心肌水肿。结论肝缺血-再灌流过程中,心肌组织早期就出现TNF-α和IL-1βmRNA的表达,心肌细胞凋亡指数随着再灌流时间的延长逐渐增加,可能与TNF-α和IL-1βmRNA的表达有关;心肌结构出现了病理改变。     

olomoucine对星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的:观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞(AS)机械损伤后增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),随机分为对照组、划痕组和干预组,划痕组和干预组均继续培养,干预组给予olomoucine干预。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后BrdU表达;利用Westernblot印迹分析损伤后PCNA、p27的表达。结果:划痕损伤刺激12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大、数目增加,BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较对照组增高(P<0.05),p27表达水平较对照组下降(P<0.05);干预组的BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较划痕组明显减少(P<0.05),p27表达上调(P<0.05)。结论:损伤刺激可促使AS发生反应性胶质增生,CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期抑制其反应性增生。     

FOXO3a Inhibits TNF-α- and IL-1β-Induced Astrocyte Proliferation: Implication for Reactive Astrogliosis

反应性星形胶质细胞增生是神经退行性疾病的特征性病理性改变之一。炎性细胞因子,如TNF-α和IL-1β,已被证实在神经退行性疾病中介导反应性星形胶质细胞增生,尽管其分子机制仍不清楚。本研究探讨严重反应性星形胶质细胞增生的一个主要方面——转录因子FOXO3a在星形胶质细胞增生中的作用。本研究通过Ki67和BrdU免疫染色证实TNF-α和IL-1β促进星形胶质细胞增生。本研究进一步发现细胞因子介导的星形胶质细胞增生伴有FOXO3a磷酸化的增加和核表达的下降。颅内注射TNF-α和IL-1β导致星形胶质细胞增生和肥大,这与星形胶质细胞中的Foxo3a核表达下降有关。为了确定Foxo3a在星形胶质细胞增生中的作用,在腺病毒中过表达野生型Foxo3a,引起p27Kip1及Gadd45α上调,且显著抑制细胞因子介导的星形胶质细胞增生。与之相反,负显性型FOXO3a的过表达使p27Kip1降低,下调Cyclin D1,促进星形胶质细胞增生。同样,Foxo3a敲除小鼠中分离的星形胶质细胞表现出更高的增生趋势。颅内注射细胞因子后,Foxo3a敲除小鼠在体内表现出严重的星形胶质细胞增生。综上所述,FOXO3a在促炎因子刺激时对于遏制星形胶质细胞增生发挥重要作用,FOXO3a功能的缺失可能是严重反应性星形胶质细胞增生中星形胶质细胞增生的原因。了解FOXO3a在反应性星形胶质细胞增生中的关键调节作用可能为神经炎症提供一个新的治疗靶点。     

胶质细胞和促炎性细胞因子参与鞘内注射血小板活化因子诱发的触诱发痛和热痛敏

目的:探讨脊髓胶质细胞、促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β以及NF-κB通路在鞘内注射血小板活化因子(PAF)诱发大鼠痛敏中的作用。方法:鞘内置管成功的雄性Sprague-Dawley大鼠64只随机分为6组:人工脑脊液(artificial cerebral spinal fluid,ACSF),对照组(n=16),鞘内注射ACSF 10μl;PAF组(n=16),鞘内注射PAF 10μg,溶解于10μl人工脑脊液;二甲基亚砜(DMSO)对照组(n=8),腹腔注射0.1%DMSO生理盐水2 ml;SC-514(10 mg/kg)组Ⅰ,SC-514(50 mg/kg)组Ⅱ和SC-514(100 mg/kg)组Ⅲ(n=16)。SC-514溶解于2 ml 0.1%DMSO生理盐水。DMSO组和SC-514组在鞘内注射PAF前2 h分别腹腔注射给药。鞘内给药后测机械缩爪阈值和热缩爪潜伏期,5 h后免疫组织化学染色检测腰段脊髓GFAP和OX-42的表达,ELISA检测脊髓TNF-α和IL-1β表达。结果:鞘内注射PAF激活大鼠脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞,GFAP和OX-42标记免疫阳性反应增强,脊髓TNF-α和IL-1β表达增强;IKKβ抑制剂SC-514剂量依赖性减轻PAF诱发的触觉痛敏和热痛敏,并抑制TNF-α和IL-1β的表达增强。结论:鞘内注射PAF诱发大鼠触诱发痛和热痛敏,脊髓胶质细胞和NF-κB通路的激活以及促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β表达增强可能参与其机制。     

芬太尼联合纳洛酮对大鼠疼痛模型镇痛效果及相关机制研究

目的分析芬太尼联合纳洛酮对大鼠疼痛模型镇痛效果及相关机制研究。方法将40只大鼠随机数字表法分成5组:生理盐水组(NS组)、疼痛模型组(CCI组)、芬太尼组(FN组)、纳洛酮组(NL组)、芬太尼+纳洛酮组(FN+NL组),每组8只。通过结扎坐骨神经制备大鼠坐骨神经慢性压迫(CCI)模型。FN组腹腔注射0.5μg/kg芬太尼,NL组腹腔注射10 ng/kg纳洛酮,FN+NL组腹腔注射0.5μg/kg芬太尼+10 ng/kg纳洛酮,1次/d,连续给药7 d。NS组和CCI组给予等体积生理盐水。于规定时间对大鼠体重、机械缩足反应阈值(MWT)、热缩足反应潜伏期(TWL)、内源性阿片样物质、炎性因子、黏附分子CD11b/c、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的含量进行检测。结果与NS组相比,CCI组给药1、3、7 d后大鼠体重、MWT、TWL均显著降低,术后给药30 min、6 h和24 h后的内啡肽(β-EP)、强啡肽(DynA1-13)、亮氨酸脑啡肽(L-EK)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、CD11b/c和GFAP表达量均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CCI组相比,FN组、NL组、FN+NL组大鼠体重、MWT、TWL均显著升高,β-EP、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、CD11b/c和GFAP表达量均显著降低,DynA1-13、L-EK显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与FN组、NL组相比,FN+NL组大鼠体重、MWT、TWL均显著升高,β-EP、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、CD11b/c和GFAP表达量均显著降低,DynA1-13、L-EK显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论纳洛酮能够增强芬太尼的镇痛效果,其机制可能是纳洛酮与芬太尼联合使用,上调了大鼠体内IL-10、内源性阿片样物质的表达,下调了其他炎性因子及CD11b/c、GFAP的表达。     

封闭Notch信号影响神经干细胞分化的体外研究

目的探讨γ-分泌酶抑制剂N-［N-（3,5-二氟苯乙酰丙烯基）］-s-苯甘氨酸叔丁基酯（DAPT）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导神经干细胞（NSCs）分化的作用及对Notch通路的影响。 方法原代培养来自大鼠前脑组织的NSCs,根据处理措施将NSCs分为溶剂对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β1处理细胞,浓度为5 ng/L）和DAPT干预组（5 ng/L TGF-β1基础上加入1或10 μmol/L DAPT）。细胞培养3、8、24和48 h后,real-time RT-PCR检测Notch信号关键分子Notch1和Jagged1 mRNA的表达;Western Blot检测星形胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及NSCs标志物-巢蛋白（Nestin）的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、GFAP及Nestin的表达。 结果TGF-β1处理后,可加速诱导NSCs的分化。NSCs标记物GFAP的表达呈现时间依赖性,早期并不表达,在8 h后GFAP开始表达,并随时间延长而表达增加。而Nestin早期明显表达,但8 h后表达明显下调,这提示（TGF-β1）作用8 h后可诱导NSCs向星形胶质细胞转化。深入研究显示,Notch1和Jagged1也在TGF-β1作用8 h后表达逐渐升高,这提示TGF-β1介导星形胶质细胞转化过程中,Notch信号可能被激活进而参与了此过程。应用DAPT处理后,GFAP表达在8 h与对照组相比无明显差异,而在48 h后逐渐下降;伴随着Notch1和Jagged1表达的下调,提示DAPT作用后,NSCs向星形胶质细胞转化被抑制,这与Notch信号活性的下降有关。 结论TGF-β1可诱导了NSCs向星形胶质细胞转化,并且具有时间依赖性;其机制可能与Notch信号的活化有关。DAPT的干预可封闭Notch信号,进而抑制TGF-β1介导NSCs向星形胶质细胞分化。     

褪黑素通过NF-κB通路抑制脑室周边白质内星形胶质细胞活化的机制研究

目的:探讨褪黑素（melatonin, MEL）对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的SD幼鼠大脑星形胶质细胞活化及远期焦虑样行为的影响。方法:将新生鼠随机（随机数字法）分为对照组（CON）组、LPS组、LPS+MEL组。LPS组：腹腔注射P1d幼鼠LPS(1 mg/kg)制作脓毒症模型,CON组仅注射等体积生理盐水,LPS+MEL组于建模0.5 h后注射MEL溶液10 mg/kg。在各组注射后不同时间点分为3 d、7 d、28 d三个亚组。免疫荧光染色和Western Blot法检测三组3 d、7 d后胼胝体内GFAP、TNF-α的表达变化;采用旷场实验检测28 d动物焦虑样行为。细胞实验以LPS（1 μg/mL）诱导原代星形胶质细胞为细胞模型, 随机分为对照组、LPS组、LPS+MEL组和LPS+MEL+褪黑素受体抑制剂（Luzindole,LUZ）组, 采用免疫荧光观察各组GFAP、TNF-α表达情况,Western Blot法检测GFAP、TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κBp65蛋白表达,荧光定量PCR检测对照组、LPS组、LPS+MEL组神经营养因子GDNF、BDNF mRNA的表达。计量资料多组间比较采用单因素及双因素方差分析,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与CON组相比,LPS组中央区活动时间、中央路程/总路程比例下降,MEL干预可明显改善LPS组大鼠焦虑样行为;与LPS组相比,MEL组可降低LPS注射后3 d、7 d胼胝体内GFAP、TNF-α的表达（ P<0.05）。与LPS刺激组相比,MEL可降低星形胶质细胞GFAP、TNF-α、p-NF-κBp65的表达上调( P<0.05),该效应可被LUZ所阻断( P<0.05)。此外,与LPS组相比,MEL预处理原代星形胶质细胞可逆转LPS诱发的GDNF、BDNF表达下调( P<0.05)。 结论:褪黑素可改善LPS诱导的脓毒症新生鼠远期焦虑样行为,其作用机制可能是通过NF-κB途径抑制星形胶质细胞活化及炎症反应有关。     

褪黑素通过NF-κB通路抑制脑室周边白质内星形胶质细胞活化的机制研究

目的:探讨褪黑素（melatonin, MEL）对脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）诱导的SD幼鼠大脑星形胶质细胞活化及远期焦虑样行为的影响。方法:将新生鼠随机（随机数字法）分为对照组（CON）组、LPS组、LPS+MEL组。LPS组：腹腔注射P1d幼鼠LPS(1 mg/kg)制作脓毒症模型，CON组仅注射等体积生理盐水，LPS+MEL组于建模0.5 h后注射MEL溶液10 mg/kg。在各组注射后不同时间点分为3 d、7 d、28 d三个亚组。免疫荧光染色和Western Blot法检测三组3 d、7 d后胼胝体内GFAP、TNF-α的表达变化；采用旷场实验检测28 d动物焦虑样行为。细胞实验以LPS（1 μg/mL）诱导原代星形胶质细胞为细胞模型, 随机分为对照组、LPS组、LPS+MEL组和LPS+MEL+褪黑素受体抑制剂（Luzindole，LUZ）组, 采用免疫荧光观察各组GFAP、TNF-α表达情况，Western Blot法检测GFAP、TNF-α、p-NF-κBp65、NF-κBp65蛋白表达，荧光定量PCR检测对照组、LPS组、LPS+MEL组神经营养因子GDNF、BDNF mRNA的表达。计量资料多组间比较采用单因素及双因素方差分析，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与CON组相比，LPS组中央区活动时间、中央路程/总路程比例下降，MEL干预可明显改善LPS组大鼠焦虑样行为；与LPS组相比，MEL组可降低LPS注射后3 d、7 d胼胝体内GFAP、TNF-α的表达（ P<0.05）。与LPS刺激组相比，MEL可降低星形胶质细胞GFAP、TNF-α、p-NF-κBp65的表达上调( P<0.05)，该效应可被LUZ所阻断( P<0.05)。此外，与LPS组相比，MEL预处理原代星形胶质细胞可逆转LPS诱发的GDNF、BDNF表达下调( P<0.05)。 结论:褪黑素可改善LPS诱导的脓毒症新生鼠远期焦虑样行为，其作用机制可能是通过NF-κB途径抑制星形胶质细胞活化及炎症反应有关。     

KH型剪切调控蛋白:星形胶质细胞炎性细胞因子生成检测点

中枢神经系统(CNS)慢性炎性反应是许多神经退行性疾病和自身免疫性疾病的主要病理特点之一。作为免疫活性细胞,星形胶质细胞(Ast)在CNS炎性反应过程中发挥了重要作用。它可表达许多细胞因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)等,这些细胞因子可直接或通过募集免疫细胞等途径间接促进炎性反应。检测点的存在可保证这些细胞因子的生成受到严密控制。细胞因子mRNA3’-非翻译区的腺苷酸/尿苷酸富含元件(ARE)由于可调节mRNA稳定性和翻译效率而扮演着主要检测点的角色。KH型剪切调控蛋白(KSRP)是一种RNA结合蛋白,可通过与ARE结合降低mRNA的稳定性。本研究检测了KSRP对Ast细胞因子表达和旁分泌表型的影响。笔者发现了一个包括TNF-α和L-1β在内的炎性介质网络。与同窝出生的对照小鼠相比,KSRP-/-小鼠Ast上述炎性介质的表达在RNA水平增高了2～4倍。而这种KSRP-/-小鼠Ast激活后产生的TNF-α和IL-1β甚至能达到对照组的15倍以上。离体情况下,KSRP-/-Ast条件性培养液有趋化作用且能诱导神经元死亡。令人惊讶的是,笔者发现仅通过特定途径激活Ast后才能观察到部分mRNA半衰期延长。荧光素酶报告系统研究显示KSRP可在转录水平和转录后水平调节细胞因子基因的表达。本研究提示KSRP在促炎介质的调控方面发挥重要作用,因此在CNS炎性和自身免疫性疾病中有广泛意义。     

心肺复苏大鼠脑TNF—α、IL一1、IL一6和MMP9的表达及意义

目的探讨心肺复苏早期大鼠脑组织TNF-α、IL-1、IL-6和MMP9的表达及意义。方法将动物分为假手术组和复苏组,在即刻及3、9、24h和48h时间点分5个时间点处死大鼠后,取样,测定脑组织TNF-α、IL一1、IL-6和MMP9的表达,使用电镜观察脑组织的超微结构。结果假手术组心肺复苏后脑组织TNF—α、IL一1、IL-6、MMP9含量无明显变化,电镜观察脑组织超微结构也无明显变化。复苏组心肺复苏后脑脑组织TNF—α、IL一1、IL-6、MMP9含量明显升高,电镜超微结构观察均发生改变。结论心肺复苏后大鼠脑组织TNF-α、IL-1、IL-6和MMP9动态变化,血脑屏障的损伤与MMP9相关。