牙本质涎磷蛋白在小鼠鼻软骨表达的原位杂交研究

目的 :目的 :检测小鼠发育过程中牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)在鼻软骨的表达状况。方法 :采用原位杂交技术 ,观测Balb/C小鼠出生后 1、3、6、8d鼻软骨中DSPPmRNA的表达。结果 :DSPP在 1-6d小鼠的鼻软骨中均有表达。其中 ,3d时表达最强 ,8d时转为阴性。结论 :DSPP在小鼠鼻软骨中的表达具有时空特异性。     

小鼠牙胚、软骨组织中牙本质涎磷蛋白基因的克隆

目的：从小鼠牙胚、软骨组织中克隆牙本质涎磷蛋白基因（dentin sialophosphoprotein,DSPP)。方法：采用RT-PCR方法,从小鼠牙胚及软骨组织中克隆DSPP基因片段,将所得片段装入载体pGEM-TEasyVector进行序列测定。结果：从两种组织中均获得719bp的特异性片段,序列分析表明,与已发表的DSPP序列99.7%同源。结论：成功地从小鼠牙胚。软骨中克隆到DSPP基因部分序列。结果提示：除牙齿组织外,DSPP还可在软骨中表达,它可能并非是检测成牙本质细胞的特异性指标。     

牙本质涎磷蛋白在小鼠牙胚表达的原位杂交研究

目的 :探讨牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)mRNA在牙齿发育过程中的作用。方法 :采用原位杂交技术 ,观测小鼠牙齿发育各阶段标本中DSPPmRNA的表达。结果 :DSPP在成牙本质细胞的表达始于钟状中期 ,并贯穿以后的各个时期 ;此阶段 ,它还在前成釉细胞及成釉细胞中具有一过性表达。结论 :DSPP在牙胚发育过程中的表达具有时空特异性 ;它可能在牙齿的形成中具有重要作用     

牙本质涎磷蛋白在小鼠体外培养软骨细胞中的表达

目的:探讨牙本质涎磷蛋白(DentinSialophosphoprotein ,DSPP)在体外培养的软骨细胞中的表达。方法:采用免疫组化方法,检测培养的第3代小鼠鼻软骨细胞中DSPP的表达。结果:培养细胞胞浆呈阳性着色。结论:DSPP可在体外培养的软骨细胞中表达。     

牙本质涎磷蛋白在小鼠牙齿发育中的表达

目的：通过检测牙胚发育不同阶段牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｐｒｏｔｉｅｎ,ＤＳＰＰ）的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色技术,上鼠牙齿发育各阶段标本中ＤＳＰＰ的表达。结果：ＤＳＰＰ的蛋白表达始于钟状中期,在内釉细胞和正在极化的成牙本质细胞中表达,牙体组织形成开始,则转至成牙本质细胞下至牙冠硬组织完全形成。此阶段在成釉细胞有反复表达。牙齿萌发时,该蛋     

小鼠牙本质涎磷蛋白成熟蛋白编码区cDNA克隆与部分序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰＰ）成熟蛋白编码区基因。方法 用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰＰ成熟区的基因片段（约３ｋｂｐ）,将所５得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ     

Sonic hedgehog在小鼠胚胎下颌突Meckel's软骨发育过程中的表达

目的:研究Sonic hedgehog(Shh)基因在小鼠胚胎颌面部Meckel's软骨发育不同阶段的表达,探讨Shh基因在下颌骨体发育骨化中的功能.方法:利用原位杂交和免疫组化技术检测Shh基因mRNA在小鼠胚胎11~14.5 dpc (days post coitum) 阶段下颌突Meckel's软骨中的表达情况....     

小鼠牙本质涎磷蛋白5′端非编码区启动子报告基因载体的构建和分析

目的：克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphopmtein，DSPP)基因启动子，构建含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，在小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中分析各种载体中DSPP启动子活性：方法：PCR、报告基因载体构建、瞬时转染和报告基因检测。结果：PCR获得DSPP启动子的3个不同片段，将它们克隆到萤火虫荧光素酶报告基因载体pG13-Enhancer，构建出3种含DSPP启动子不同片段的报告基因载体，将这些报告基因载体瞬时转染至MDPC-23细胞，载体中的启动子具有不同的活性。结论：成功构建了含小鼠DSPP启动子片段的报告基因载体，为以后研究DSPP基因表达调控的分子机制提供了实验工具。     

DSPP基因启动子不同片段启动活性的对比分析

目的：对比分析牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）基因启动子不同片段的启动活性。方法：选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,利用含DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体,采用报告基因方法观察DSPP基因启动子不同片段的启动活性。结果：在MDPC-23细胞中,DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体均不同程度地表现了启动活性,其启动活性有差异（P〈0.01）。结论：DSPP基因启动子不同片段的启动活性有差异,其活性变化反映位于-95bp～54bp、-410bp～-195bp、-1243bp～-791bp、-1447bp～-1243bp、-3519bp～-2475bp区存在潜在的增强子;-195bp～-95bp、-670bp～-410bp、-2475bp～-1447bp区存在潜在的抑制子。进一步明确了DSPP基因启动子的结构,为今后研究DSPP基因的特异性表达奠定基础。     

小鼠牙本质涎磷蛋白基因重组腺病毒载体的构建

目的 应用AdEasy重组腺病毒载体系统,构建携带小鼠牙本质涎磷蛋白编码区基因的复制缺陷型重组腺病毒载体Ad-DSPP.方法 将质粒pTRE2-DSPP中的小鼠DSPP编码序列亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV中构建重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-DSPP,酶切线性化后转入已含有病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌中进行同源重组.筛得的病毒质粒pAd-DSPP经酶切鉴定后,在293细胞中包装成重组腺病毒.荧光显微镜观察绿色荧光表达.扩增并纯化病毒,测定病毒滴度.结果 重组腺病毒质粒经酶切鉴定证实成功构建了携带DSPP基因的重组腺病毒载体,转染293细胞后可出现明显的细胞病变效应,并观察到绿色荧光的表达,DSPP基因测序鉴定与genebank中公布序列一致.重组腺病毒的滴度为:2×109pfu/ml.结论 应用AdEasy系统成功地构建了重组腺病毒载体Ad-DSPP,通过该系统携带的标记基因GFP可直观检测靶细胞转染和外源基因表达的情况,为进一步研究牙本质涎磷蛋白在牙齿发育中的作用奠定了基础.     

Cbfαl对小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子转录调控作用的研究

目的研究Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子转录活性的影响。方法确定Cbfa1瞬时转染的最高表达时间点后,将含牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的真核表达载体与PCMV5-Cbfαl共转染MDPC-23细胞,分析Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子的转录调控作用。结果MDPC-23细胞转染PCMV5-Cbfαl后,Cbfαl在48h时表达量最高。Cbfa1表达对各段启动子都有激活作用。结论Cbfαl对牙本质涎磷蛋白基因启动子有转录激活的调控作用。     

小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)特异性启动子的克隆和序列分析

目的 :获得小鼠牙本质涎磷蛋白 (DSPP)编码序列上游约 1.6kb的特异性启动子。方法 :按Mac Dougall报道设计一对引物 ,提取小鼠胚胎干细胞基因组DNA作为模板 ,PCR获得大小约为 1.6kb的DNA片段 ,将该片段克隆并进行序列分析。结果 :所得到的片段是DSPP的特异性启动子 ,其序列与文献报道有一定差异 ,但转录因子的结合位点均未发生突变。结论 :成功获得小鼠DSPP的特异性启动子 ,为进一步的研究打下基础。     

小鼠鼻软骨细胞的培养

目的 天空小鼠鼻软骨细胞体外培养方法及形态特征。方法 取Balb/c小鼠子鼠的鼻中隔软骨,随机分为4组分别消化4h,8h,12h及16h,观察体外培养软骨细胞的生长状况,并用Ⅱ型胶原抗体进行细胞来源鉴定。结果 经Ⅱ型胶原酶孵育消化4h的组织,细胞量少,生长缓慢,无法进行正常传代。而消化8h的软骨组织、细胞于1d后即开始贴壁、伸展,9d第一次传代,传代细胞生长稳定,形态多样,Ⅱ型胶原抗休染色体阳性。消化2h及16h的细胞几乎不贴壁。结论 采用酶消化法可获得体外培养的小鼠鼻软骨细胞,消化时间以8h为佳。     

Autogenous transplantation of the nasal septum cartilage in the rat

Increase in size of autotransplanted cartilagenous nasal septum was investigated in rats. The implants were inserted at birth and removed, measured and processed for histological examination after varying lengths of time. In all cases, the implants had increased in size and the growth activity was greatest in the first 2 weeks. Histologically the transplants had the same general appearance as septal cartilage from control animals, and no difference was observed in metachromasia between the autografts and septal cartilage from the control animals. The results support the view that the cartilagenous nasal septum has its own growth potential.     

牙本质涎磷蛋白的研究进展

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白.关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入.本文就近年来关于牙本质涎磷蛋白的研究现状作一综述.     

Condylar cartilage in the muscular dystrophic mouse

The adaptability of condylar cartilage has been demonstrated previously after experimentally created functional alteration. This study was undertaken to examine the morphology of condylar cartilage in animals affected with a progressive muscular disease. Muscular dystrophic male mice (genotype: dy/dy, dy/+ x dy/+, Jackson Laboratory, Maine) and corresponding unaffected control mice were decapitated at ages 3, 6, 9, and 12 weeks, and their heads processed for histology. The cellular morphology of the condylar cartilage in the youngest age group was similar in dystrophic and control mice: the cartilage was a hypertrophic type. At ages 6 and 9 weeks, the maturational progression toward the nonhypertrophic form was observed in the dystrophic and control groups, the latter having flatter condylar heads. Differences were still evident at age 12 weeks. These observations were supported by measurements of the ratios of the mean cartilage thickness to condylar width (c/w), mean condylar height to width (h/w), and mean cartilage thickness to condylar height (c/h). This study supports the hypothesis that the adaptive nature of condylar cartilage may be regulated by the force levels to which the condyle is subjected.     

Diced cartilage grafts wrapped in AlloDerm for dorsal nasal augmentation

Dorsal nasal augmentation is commonly performed for various aesthetic deficiencies and/or reconstructive defects such as the saddle nose deformity. However, the optimal technique for volume augmentation has yet to be identified. The senior author (F.P.) has since developed a new modified technique using wrapped diced cartilage within an AlloDerm. This novel construct provides the plastic surgeon a smooth, convenient, pliable option with similar operative times as compared with other popular techniques. In summary, this technique has been proven to be successful in achieving attractive, safe, and acceptable outcomes in nasal dorsal configuration and overall patient satisfaction.     

The rate of reparative dentine formation in transplanted mouse molar teeth.

Similar rates of reparative dentine matrix formation were observed during the formation of cellular dentine, irregular and regular secondary dentine during repair of transplanted teeth. Primary dentinogenesis in molar teeth in situ occurred at a similar rate. These observations indicated that dentinogenesis is an identical process carried out at identical rates irrespective of the morphology of the end product or the stimulus for its formation.