白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其初步机制研究

目的：探讨不同浓度白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制。方法：观察25、50、100 µmol·L-1白藜芦醇处理的秀丽隐杆线虫野生型N2与daf-2、daf-16突变体的寿命变化。结果：与对照组比较,25、50、100 µmol·L-1白藜芦醇处理均可以显著延长三种秀丽隐杆线虫的寿命。结论：白藜芦醇可以显著延长秀丽隐杆线虫的寿命,其对寿命的影响不依赖于DAF-2/胰岛素样信号传导通路。     

秀丽隐杆线虫在中药抗衰老研究中的应用

中药作为一种毒副作用少的天然物质,在抗衰老研究领域有巨大的潜力。本文就近年来以秀丽隐杆线虫为动物模型,探索中药通过对多种信号通路及衰老相关基因的调控发挥抗衰老作用的研究进行综述,为深入探索中药延缓衰老的生物活性和分子机制提供理论依据和试验参考。     

基于秀丽隐杆线虫的中医药抗衰老研究

衰老以及与衰老相关的疾病是当今社会日趋严重的医学问题和社会问题。秀丽隐杆线虫是一种很好的衰老模式生物,具有寿命短、世代周期短、易于培养与观察等特点。中医药抗衰老有明确疗效,多种中药提取物及中药复方可基于秀丽隐杆线虫模型,调控衰老基因、调节氧化应激水平、抑制Aβ1-42沉积等方面抗衰老及治疗衰老相关疾病。     

秀丽隐杆线虫作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型研究

目的采用秀丽隐杆线虫Ras/有丝分裂原蛋白活化酶(MAPK)信号通路上的过度激活系列突变体研究该模式生物作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型的可行性及其分子机制。方法采用96孔板将索拉菲尼和依托泊苷作用于L1期秀丽隐杆线虫(每孔80~100条),并设空白对照,每个处理设3个重复。培养秀丽隐杆线虫4~5 d后,于倒置生物显微镜下观察秀丽隐杆线虫野生型和突变体数目。与空白对照比较,野生型比例越高,说明药物效果越好。结果索拉菲尼能够剂量依赖性地逆转let-60/ras(gf)和mek/erk(gf)双突变体多阴门表型,对其下游转录因子lin-1(lf)和lin-31(gf)多阴门突变体几乎没有影响;依托泊苷对信号通路上游因子let-60/ras(gf)及下游转录因子突变体lin-31(gf)均有明显的抑制作用,不依赖细胞信号通路。结论秀丽隐杆线虫模型不但能够筛选靶向Ras/MAPK信号通路的抑制剂,还能评价肿瘤细胞毒药物。     

桑葚多糖T3-3分离及秀丽隐杆线虫抗衰老活性研究

[目的]研究桑葚多糖T2提取工艺优化,并对其抗衰老活性进行分析。[方法]以秀丽隐杆线虫为模型,用寿命、移动力分析、吞咽频率、产卵量和肠脂褐质综合评价不同剂量范围的桑葚多糖(T3-3)抗衰老活性。通过正交和优化实验确定最优提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间2 h,提取次数3次,料液比1∶30,提取率最高达8.48%。[结果]抗衰老活性研究表明,150 mg/L的T3-3能增强秀丽隐杆线虫的抗衰老能力。[结论]该提取工艺1)延长了秀丽隐杆线虫的寿命,秀丽隐杆线虫平均寿命延长了10.38%(P0.05),最大寿命延长了28.57%(P0.05),50%存活率对应天数延长了0.91%。2)秀丽隐杆线虫吞咽频率增加,吞咽频率比对照组高18.78%。3)产卵量无统计学差异。4)减少秀丽隐杆线虫肠脂褐质的产生量,比对照组平均荧光强度低11.14%(P0.05),实验末期,对照组的平均荧光强度增大了12.47%。     

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

3，4- 二羟基苯甲酸甲酯延缓秀丽线虫衰老的作用及作用机制研究

目的：本实验室前期工作发现3,4- 二羟基苯甲酸甲酯（methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB）具有神经保护、抗细胞氧化损伤及延长秀丽线虫寿命的作用。本论文以秀丽线虫（Caenorhabditis elegans,C.elegans）为模型动物,研究MDHB 给药前后对秀丽线虫寿命、应激能力等相关指标的影响,旨在进一步探明MDHB 延缓线虫衰老的作用及相关机制。方法：本文以秀丽线虫为模型动物测定MDHB 对秀丽线虫寿命、运动能力、生殖能力及抗压能力的影响。本实验主要考察了抑菌性、热量限制途径和daf-2/daf-16 参与的胰岛素/ 胰岛素样生长因子信号通路,通过CRISPR-CAS 9、特定基因突变、荧光显微镜分析、荧光酶标仪及Real-Time PCR 等方法进一步研究MDHB 延缓秀丽线虫衰老的作用及分子机制。结果：首先,本论文观察MDHB 对秀丽线虫寿命的影响,结果表明160 mg·L-1 MDHB 能显著延长野生型秀丽线虫寿命19%,高于阳性药白藜芦醇。此外,MDHB 给药后延长eat-2 突变株寿命,对于daf-2 和daf-2;daf-16 缺失突变体MDHB给药后抗衰老作用消失,对于daf-16 缺失突变株,MDHB 给药后寿命仍延长,但低于MDHB 对野生型秀丽线虫的延寿作用。表明热量限制并非MDHB 抗衰老的首要机制,MDHB 可能主要通过daf-2/daf-16 参与的胰岛素/ 胰岛素样生长因子通路延缓线虫衰老。其次,本文考察了压力胁迫下,MDHB 对野生型线虫和突变株线虫的影响,MDHB 给药后提高野生型线虫生存率,对daf-16缺失突变株线虫无延寿作用;MDHB 还能降低线虫体内活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平,提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,表明MDHB 可提高抗氧化损伤能力从而延长线虫寿命。最后,Real-Time PCR 结果显示 MDHB 处理后线虫体内daf-2 下调,daf-16 转录活性上调;使用GFP 融合共表达株线虫观察MDHB 对daf-16 入核状态和sod-3 及hsp-16.2 表达水平的影响,结果显示MDHB 促进线虫daf-16 入核,影响一系列与压力应激和寿命相关的生理活动,如活化daf-16 靶基因sod-3 和hsp-16.2。表明MDHB 激活daf-16/FOXO 信号通路及其下游靶基因,提高线虫抗氧化损伤和抗热压能力,从而延缓线虫衰老。结论：MDHB 可能通过调控daf-2/daf-16 参与的胰岛素/ 胰岛素样生长因子通路提高线虫抗压能力从而延长秀丽线虫寿命。     

龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老作用研究

【目的】探讨龟鹿二仙胶对秀丽隐杆线虫体内抗衰老的作用及机制。【方法】以秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）为模型生物,观察不同浓度龟鹿二仙胶（0.5、2.5、5.0 mg/mL）对线虫健康寿命、行动力、生殖能力、吞咽频率、应激能力和体内活性氧自由基（ROS）、脂褐质水平及抗氧化酶活性的影响。【结果】龟鹿二仙胶能显著提高线虫行动能力、吞咽能力,延长其平均寿命,并对氧化损伤有显著改善作用。此外,不同浓度的龟鹿二仙胶均能显著提高线虫体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH）活性,降低机体内丙二醛（MDA）含量和脂褐质的堆积水平。【结论】龟鹿二仙胶可能是通过减缓细胞氧化损伤,进而起到延长秀丽隐杆线虫寿命的作用。     

半枝莲总黄酮对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞衰老的影响

目的 研究半枝莲总黄酮(HF)对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响,并探讨可能的作用机制.方法 将不同浓度的HF(30、50 mg/L)分别放于NGM和DMEM培养基中,研究对线虫的寿命、生殖能力、氧化应激、抗氧化酶活力、相关基因表达以及对HUVECs的抗氧化酶活力和相关基因表达的影响.结果 HF能显著延长线虫的平均寿命和最大寿命,对其生殖能力没有损害,子代数目无统计学差异,35℃急性热应激下的平均生存时间显著延长;同时,HF均能提高秀丽线虫和人HUVECs中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活性,并上调两种细胞中抗衰老基因daf-16、sir-2.1的表达.结论 HF可能通过提高抗氧化酶活力和抗氧化基因的表达水平,能够延缓线虫衰老及急性热应激下的应激能力同时不损害生殖能力,并保护内皮细胞免受损伤.     

寒冷胁迫可降低秀丽隐杆线虫的寿命和活动能力：通过介导脂代谢紊乱和应激反应异常

目的 探究秀丽隐杆线虫成虫在低温环境下的脂代谢、应激反应变化。方法 将同步化后的野生型及基因修饰型秀丽隐杆线虫成虫随机分为对照组和实验组,分别在20℃适宜条件和4℃低温暴露培养,观察其生存率、活动能力,评估非冷冻性极端低温对秀丽隐杆线虫成虫的寿命和活动能力影响;通过油红O染色和脂代谢相关基因表达检测,评价低温状态下秀丽隐杆线虫成虫脂代谢变化;通过线粒体荧光染色,应激相关基因、蛋白,抗氧化相关基因、蛋白的表达水平变化评估低温对秀丽隐杆线虫应激水平的影响。结果 4℃低温环境显著降低秀丽隐杆线虫成虫寿命（P<0.0001）和活动能力（P<0.0001）;同时,降低虫体脂质累积（P<0.05）,降低脂肪酸合成和代谢相关基因fat-5,fat-6,fat-7,fasn-1,nhr-49,acs-2,aco-1表达(P<0.01）;低温增强了热休克蛋白hsp-70,hsp-16.2表达(P<0.05）,但是降低了线虫线粒体数目（P<0.0001）和线粒体未折叠蛋白反应相关蛋白atfs-1的表达(P<0.05）,降低了抗氧化酶sod-2,sod-3,gpx-...     

胰岛素样生长因子-2对婴幼儿血管瘤干细胞增殖及脂肪分化的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-2( IGF-2)对婴幼儿血管瘤干细胞(HemSCs)增殖及向脂肪分化的影响.方法 搜集3例增生期草莓状婴幼儿血管瘤术后组织,采用胶原酶消化分离后CD133免疫磁珠吸附得到血管瘤干细胞. CCK-8法检测不同浓度IGF-2对HemSCs增殖的影响,Western blot检测空白对照组及 IGF-2 组(100 ng/ml)、IGF-2 +OSI-906 组(IGF-2: 100 ng/ml; OSI-906: IGF-1R受体抑制剂1 μmol/L)、IGF-2+LY294002 组(LY294002: PI3K 抑制剂10 μmol/L)、LY294002组( 10 μmol/L)各组细胞中脂肪转化因子 C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、adiponectin、p-AKT及total AKT的表达.结果 IGF-2在体外对HemSCs增殖有明显促进作用( P＜0. 05);Western blot法显示,与 IGF-2 +OSI-906 组、IGF-2+LY294002 组、 LY294002 组及空白对照组比较, IGF-2 组C/EBPα、C/EBPβ、 PPARγ、 adiponectin 表达量增加( P ＜0. 05);与IGF-2+OSI-906组、IGF-2+LY294002组及空白对照组比较, IGF-2 组 p-AKT 表达量增加( P ＜0. 05).结论 IGF-2可能通过 IGF-1R/PI3K/AKT通路影响 HemSCs的脂肪转化过程.     

2型糖尿病患者血清IGF-1、IGFBP-3及胰岛素水平的变化与结直肠癌关系的研究

目的研究结直肠癌（CRC）和/或2型糖尿病（T2DM）患者胰岛素样生长因子1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）及胰岛素（Ins）水平,并探讨其与结直肠癌发病的关系。方法结直肠癌合并2型糖尿病患者24例为C＆D组,2型糖尿病患者排除结直肠癌31例为DM组,结直肠癌患者排除2型糖尿病28例为CRC组,健康自愿者28人为正常对照组（NC组）。检测各组收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FPG）、餐后血糖（PPG）、空腹胰岛素（Fins）、糖化血红蛋白（HbA1C）、甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）;采用酶联免疫吸附法检测胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP3）水平,同时计算体质指数（BMI）、腰臀比（WHR）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IRI）及IGF-1/IGFBP-3比值。结果 C＆D组FPG、PPG、HbA1C、Fins及HOMA-IRI与CRC组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。C＆D组PPG、TC及HOMA-IRI与DM组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。C＆D组IGF-1和IGF-1/IGFBP-3与DM组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。多元线性逐步回归分析显示,TC、PPG、IGF-1/IGFBP-3及HOMA-IRI对结直肠癌有影响。结论 CRC患者存在IGF-1和IGF-1/IGFBP-3水平变化;高胆固醇血症、餐后血糖升高和胰岛素抵抗可能参与CRC的发生。     

rsa基因通过mbk-2调控秀丽隐杆线虫胚胎发育

目的使用秀丽隐杆线虫作为模式生物,观察rsa基因对mbk-2突变型线虫胚胎发育和虫卵孵化的影响,初步探讨mbk-2的在胚胎发育中的作用及机制。 方法以RNAi技术定向干扰mbk-2突变型线虫rsa基因的表达,并对rsa沉默后线虫的虫卵孵化水平及胚胎发育情况进行分析,检测其在线虫生长发育、生殖能力等方面的变化。 结果与L4440喂养的mbk-2基因突变组相比,rsa-1和rsa-2RNAi细菌处理mbk-2基因突变组虫卵未孵化率显著升高,达到41.8%和49.2%（P＜0.05）,且rsa-2处理组显著高于rsa-1组（P＜0.05）;rsa-1和rsa-2 RNAi细菌处理的N2野生型线虫虫卵未孵化率分别为3.9%和5.7%,显著低于rsa-1和rsa-2 RNAi细菌处理的mbk-2突变型线虫（P＜0.05）。 rsa-2 RNAi处理mbk-2突变型线虫组,线虫胚胎发育异常显著增加。 结论mbk-2是线虫发育的一个重要因子,rsa是mbk-2的重要修饰基因,两者相互作用调节线虫的胚胎发育和虫卵孵化。     

胰岛素样生长因子1调节胃平滑肌细胞表达干细胞因子的ERKMAPK通路

目的 探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)调节胃平滑肌细胞(SMC)表达干细胞因子(SCF)的信号传导途径.方法 培养SD大鼠胃SMC,α-肌动蛋白免疫荧光鉴定,Western印迹、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃SMC表达SCF的变化情况:(1)IGF-1作用后;(2)IGF-1受体(IGF-1Rα)抗体阻断IGF-1R后;(3)PD-98059、LY-294002分别抑制丝裂原激活蛋白激酶的激酶(MEK)、磷脂酰激醇3激酶(PI3K)后.结果 在无血清培养条件下,SCF在大鼠胃SMC中少量表达,低剂量IGF-1(5和10μg/L)对SCF表达均无影响(均P>0.05);中、高剂量IGF-1(50、100、150 μg/L)诱导分别使SCF蛋白表达上调达2.79、5.51及5.35倍,mRNA表达上调达1.81、2.54及2.38倍(均P<0.05);且促进SCF合成的最高峰在第16小时(蛋白表达上调达2.36倍,mRNA表达上调达5.51倍,均P<0.05).IGF-1Rot抗体可抑制SCF合成,抑制作用呈浓度依赖性(均P<0.05).分别用PD-98059、LY-294002预处理SMC、再用IGF-1诱导,PD-98059能部分阻断SCF的表达(蛋白抑制率为23%,mRNA抑制率为48%,均P<0.05)、LY-294002对SCF的表达无影响(P>0.05).结论 IGF-1可通过IGF-1R以时间和剂量依赖性方式诱导胃SMC产生SCF,且IGF-1诱导SCF的表达可能依赖于ERKMAPK信号传导通路.     

血、尿 IGF-1、血清 Hcy 在糖尿病肾病中的相互关系及意义

目的：探讨血、尿胰岛素样生长因子-1（ IGF-1）及血清同型半胱氨酸（ Hcy）在糖尿病肾病（ DN）早期诊断及其相互之间存在的关系。方法根据24h尿微量白蛋白排泄率（ UAER）将100例2型DM患者分为3组：正常白蛋白尿组（ B组36例）、微量白蛋白尿组（ C组30例）、大量白蛋白尿组（ D组34例）,同时以35例健康人作为对照组（ A组）,测量各组患者血、尿IGF-1及血清Hcy、UAER等指标,对其中的相关性进行分析。结果①实验组血IGF-1检测较A组明显下降,差异有显著性（P＜0．05）;实验组间B组较C组、D组下降明显,有统计学意义（P＜0．05）;C组与D组间未见明显差异（P＞0．05）。②实验组中尿IGF-1较A组明显增加,差异有显著性（P＜0．05）,且各实验组间差异明显（P＜0．05）,与UAER呈正相关（r＝0．97）。③实验组中血清Hcy测定高于A组,且实验组间存在显著差异（P＜0．05）,与UAER呈正相关（r＝0．82）。④血清IGF-1与血清Hcy存在相关性（r＝0．37）。结论①血清、尿IGF-1联合测定,反映随着肾损伤的加重,血清IGF-1分泌增多,但未至正常范围,推测IGF-1可能与肾损害的发生发展有关。②血清Hcy测定可推断其对肾小球微血管有影响,反映肾损伤严重程度。③血、尿IGF-1联合血Hcy测定早期发现肾损伤有重要意义。     

IGF-1对海马神经元抑制性突触传递的影响

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对原代培养海马神经元抑制性突触传递的影响并探讨其可能机制。方法采用无血清培养基培养海马神经元,在10~14d时用于实验。电生理实验分为正常对照组和IGF-1处理组(实验前24h加入IGF-1,终浓度为10μmol/L)。细胞免疫化学实验分为正常对照组、IGF-1处理组和MAPKS转导通路抑制剂(PD98059)预处理组(IGF-1处理前1h加入PD98059,终浓度为10μmol/L)。采用全细胞膜片钳记录方法观察IGF-1对抑制性突触后电流(IPSC)的影响,用细胞免疫化学方法观察其对γ-氨基丁酸能细胞数目影响。结果IGF-1能够显著降低IPSC的频率,但与对照组比较其幅度差异无统计学意义;IGF-1能够明显减少GABA阳性细胞数目,应用PD98059后可阻断这种作用。结论IGF-1的上述作用可能参与海马对学习记忆功能的调节过程。     

无生长追赶出生低体重幼鼠生长激素/胰岛素样生长因子1轴抵抗与胰岛素抵抗的相关研究

目的探讨生后无生长追赶的出生低体重（NCU—SGA）幼鼠的胰岛素抵抗对生长激素（GH）抵抗的影响及其受体后信号转导机制。方法以母鼠孕期限制饮食法建立雄性NCU．SGA模型研究：（1）GH和胰岛素抵抗的关系：测定4周龄时24h尿GH排泄率（24hU—GH）,血胰岛素样生长因子（IGF）-1、空腹胰岛素（FINS）、血糖以及肝组织IGF-1mRNA和STATS信号表达;（2）胰岛素抵抗对生长轴的影响：3周龄时注射P13K阻断剂1周后（设溶剂对照组）,测定大鼠体格生长,血IGF-1、FINS水平及肝IGF-1mRNA和STATS信号表达。结果（1）NCU—SGA鼠血清IGF-1浓度、肝IGF-1mRNA表达以及磷酸化与总STAT蛋白表达水平的比率均显著低于健康对照组（C组）,分别为（248±58）ng／ml,（6．1±0．3）拷贝和（61±22）％;C组为（383±62）ng／ml,（6．6±0．4）拷贝和（91±29）％（均P〈0．01）;NCU—SGA组与C组的24hU-GH差异无统计学意义（P〉0．05）;NCU—SGA组FINS及空腹血糖为（24．7±9．6）mU／ml和（5．4±0．3）mmol／L显著高于C组的（9．8±2．8）mmol／L和（4．5±1．7）mmol／L（均P〈0．05）。24hU—GH与FINS显著正相关（r=0．680,P=0．000）。（2）PBK阻断后NCU．SGA鼠胰岛素抵抗加重,体重下降,血清IGF-1及肝IGF-1mRNA为（218±60）ng／ml及（6．1±0．3）拷贝,显著低于溶剂对照组的（286±45）ng／ml及（6．3±0．3）拷贝,均P〈0．05。但两组间肝组织总的及磷酸化STATS信号表达水平差异无统计学意义。结论NCU—SGA幼鼠的胰岛素抵抗与GH抵抗密切相关。生后无追赶与GH受体后JAK2-STATS通路受损所致的GH抵抗有关。胰岛素抵抗可能经非STATS依赖途径加重了GH抵抗及生长障碍。     

Toxicity of Sodium Fluoride to Caenorhabditis elegans

Objective To investigate the toxic effect of sodium fluoride (NaF) on the nematode Caenorhabditis elegans (C.elegans).Methods Adult C.elegans were exposed to different concentrations of NaF (0.038 mmol/L,0.38 mmol/L,and 3.8 mmol/L) for 24 h.To assess the physiological effects of NaF,the brood size,life span,head thrashes,and body bend frequency were examined.Reactive oxygen species (ROS) and cell apoptosis were detected as parameters of biochemical response.The gene expressions were determined by real-time polymerase chain reaction (PCR) to assess the molecular-level response.Results At the physiological level,the brood size of C.elegans exposed to 0.038 mmol/L,0.38 mmol/L,and 3.8 mmol/L concentrations of NaF were reduced by 6％,26％,and 28％ respectively in comparison with the control group.The maximum life spans of C.e/elegans exposed to 0.038 mmol/L,0.38 mmol/L,and 3.8 mmol/L concentrations of NaF were reduced by 3 days and 5 days,respectively.Head thrashes and body bend frequency both decreased with increasing concentrations of NaF.At the biochemical level,the production of ROS and the incidence of cell apoptosis increased with increasing concentrations of NaF(P＜0.05).At the molecular level,different concentrations of NaF exposure raised the expression of stress-related genes,such as hsp16.1,sod-3,ctl-2,dhs-28,gst-1,and cep-1.Conclusion NaF exposure could induce multiple biological toxicities to C.elegans in a concentration-dependent manner.These toxicities may be relevant to the oxidative stress induced by increased ROS production and accumulation in C.elegans.