化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用

目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用。方法 40只大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35 mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,将造模成功的36只大鼠按随机数字表法分为模型组、化瘀通络组和厄贝沙坦组,每组12只。另取10只正常大鼠作为正常组。化瘀通络组和厄贝沙坦组分别给予化瘀通络中药和厄贝沙坦灌胃,同时正常组和模型组等量蒸馏水灌胃。采用ELISA法检测不同时间点各组大鼠24 h尿蛋白定量;连续干预16周后分别检测各组大鼠体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW)、肾脏指数(kidney index,KI)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA);光镜和电镜下观察肾组织病理形态学变化;采用Western blot和Real-time PCR法检测肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显升高(P0.01),造模后大鼠BW减轻,KI、FBG、SCr、BUN和UA水平均升高(P0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显降低,且化瘀通络组24 h尿蛋白定量较厄贝沙坦组减少更明显(P0.05,P0.01);造模后化瘀通络组和厄贝沙坦组BUN水平降低(P0.05,P0.01)。(2)肾脏病理显示:模型组肾脏结构紊乱,基底膜明显增厚,系膜重度增生,足突广泛融合;化瘀通络组和厄贝沙坦组肾脏病理改变均有不同程度减轻。(3)Western blot和Real-Time PCR显示:与正常组比较,模型组大鼠肾组织podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均降低(P0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均升高(P0.01);化瘀通络组podocin、CD2AP蛋白和CD2AP mRNA表达均明显高于厄贝沙坦组,差异有统计学意义(P0.05)。结论化瘀通络中药可以降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白,保护肾功能,改善肾脏病理改变,其机制可能与上调裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达有关。     

Notch通路在糖尿病肾病大鼠的表达及化瘀通络中药的干预作用

目的探讨Notch通路在糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的表达以及化瘀通络中药对其的干预作用。方法 60只SD雄性大鼠,随机取10只为对照组,其余大鼠给予高糖高脂饲料喂养联合ip小剂量链脲佐菌素(STZ)制备DN模型。成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、化瘀通络中药组,厄贝沙坦组、化瘀通络中药组均ig给药,于16周末检测大鼠24 h尿蛋白定量,Real-time PCR法检测Notch1、Jagged1和Hey1 m RNA的表达,免疫组化及Western blotting法检测Notch1、Jagged1和Hey1蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量及Notch1、Jagged1、Hey1 m RNA和蛋白的表达量明显升高(P0.01)。与模型组比较,化瘀通络中药组及厄贝沙坦组大鼠24 h尿蛋白定量及Notch1、Jagged1、Hey1m RNA和蛋白的表达量降低(P0.01)。结论化瘀通络中药可以减少DN大鼠24 h尿蛋白定量,且能够抑制DN大鼠肾脏Notch通路中Notch1、Jagged1和Hey1的高表达,该作用可能是其减少蛋白尿排泄的主要途径之一。     

Wnt/β-catenin通路在糖尿病肾病大鼠的表达及化瘀通络中药的干预作用

目的探讨Wnt/β-catenin通路在糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的表达及化瘀通络中药对其的干预作用。方法 60只大鼠中选取10只为对照组,其余大鼠给予高糖高脂饲料喂养联合ip小剂量链脲佐菌素(STZ)制备DN模型。成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、化瘀通络中药组,各组ig给药,20周末检测24 h尿蛋白定量,RT-PCR法检测Wnt4、β-catenin m RNA表达,免疫组化及Western blotting法检测Wnt4、β-catenin蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量及Wnt4、β-catenin m RNA和蛋白的表达量明显升高(P0.01)。与模型组比较,中药组及厄贝沙坦组24 h尿蛋白定量及Wnt4、β-catenin m RNA和蛋白的表达量明显降低(P0.05、0.01)。结论化瘀通络中药可减少DN大鼠尿蛋白,且能够抑制大鼠肾脏存在的Wnt/β-catenin通路高表达,该作用可能是其减少蛋白尿排泄的主要途径之一。     

清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用

目的探讨清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞表型转化即上皮-间质细胞转分化的作用。方法将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、糖尿病肾病组、清热益气化瘀通络组、厄贝沙坦组,每组10只。除正常组大鼠外,其余组大鼠均采用腹腔注射链脲佐菌素方法制作DN模型。造模成功后,清热益气化瘀通络组和厄贝沙坦组给予相应药物灌胃,正常组和糖尿病肾病组给予等量生理盐水灌胃,均连续12周。灌胃结束后,检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白定量,应用实时定量RT-PCR法检测肾皮质中Wilms肿瘤抑制因子(WT1)、钙黏蛋白(P-Cadherin)、结蛋白(desmin)mRNA表达情况。结果实验结束时,各造模组的血糖水平均明显高于正常组(P均0.05),但各造模组间血糖水平比较差异均无统计学意义(P均0.05);各造模组的24 h尿蛋白定量也均明显高于正常组(P均0.05),但厄贝沙坦组和清热益气化瘀通络组24 h尿蛋白定量均明显低于糖尿病肾病组(P均0.05),且清热益气化瘀通络组明显低于厄贝沙坦组(P均0.05)。WT1 mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)结果显示从高到低依次为正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组、糖尿病肾病组,但4组间比较差异均无统计学意义(P均0.05);正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组P-Cadherin mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)均明显高于糖尿病肾病组(P均0.05),desmin mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)均明显低于糖尿病肾病组(P均0.05),但3组间比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论清热益气化瘀通络方可增加足细胞P-Cadherin表达而降低desmin表达,具有拮抗糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用。     

化瘀通络方对糖尿病大鼠肾组织血管内皮生长因子表达的影响

目的?探讨化瘀通络方对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其对肾组织血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法?将SD大鼠随机分为正常组（10只）、模型组（8只）、中药组（8只）、西药组（8只），应用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病模型，中、西药组分别给予化瘀通络方（每日0.904 g/kg）及厄贝沙坦（每日24 mg/kg）干预16周后，测定体重（BW）、右肾指数（RKI）、糖化血红蛋白（HbA1c）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）、血清白蛋白（ALB）、血肌酐（SCr），光镜和电镜下观察肾组织形态学改变，免疫组化、实时荧光定量PCR法观察肾组织VEGF蛋白及mRNA表达。结果?与正常组比较，模型组RKI、HbA1c、24 h-UTP、肾小球基底膜厚度、VEGF表达明显升高，BW、ALB明显降低（P<0.05）；与模型组比较，中、西药组RKI、24 h-UTP、肾小球基底膜厚度、VEGF表达明显减少（P>0.05）；两治疗组之间比较各指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论?化瘀通络方可不依赖于血糖控制而延缓早期糖尿病肾病进展，效果与应用厄贝沙坦相似，其机制可能与抑制肾脏血管内皮生长因子的过度表达有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的分析化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路相关因子表达的影响。方法糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常对照组、模型组、中药组和厄贝沙坦组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃16周检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24hUTP),肾组织行光镜、电镜观察,Real-time PCR检测肾脏TGF-β_1、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组各项指标均有差异(P0.05);与模型组比较,两治疗组Scr、BUN、24hUTP及TGF-β_1、Smad2 mRNA表达水平明显下降(P0.05),Smad7 mRNA表达水平明显上升(P0.05),病理损伤明显减轻;与厄贝沙坦组比较,中药组24hUTP明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾皮质血管紧张素转化酶2-血管紧张素（1-7）-Mas轴的影响

目的观察化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾皮质血管紧张素转化酶2-血管紧张素（1-7）-Mas［ACE2-Ang-（1-7）-Mas］轴的影响。方法将89只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组（C组,22只）、高糖高脂对照组（H组,10只）和1%链尿佐菌素（streptozotocin, STZ）注射组（57只）。STZ注射组以高糖高脂饲料联合腹腔注射STZ制备糖尿病模型（50只）,再分为模型组（M组,24只）、厄贝沙坦组（I组,13只）和化瘀通络中药组（Z组,13只）。I组和Z组大鼠分别给予厄贝沙坦和化瘀通络中药混悬液灌胃,共16周,其余各组给予等体积饮用水。检测各组大鼠4个时间点的血糖和24 h尿蛋白定量,分别采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）、免疫组化法、蛋白印迹（Western blot）方法检测不同时间点各组肾皮质ACE2、Mas蛋白的表达变化,第16周末对各组肾皮质2种蛋白表达进行定量分析。结果与C组比较,H、M组血糖均升高,且M组高于H组（P〈0.01）。不同时间点24 h尿蛋白与C组比较,M组升高,且M组高于H组（P〈0.05）。与M组比较,I组8周末和Z组8、16周末均降低（P〈0.05）,且第16周末Z组优于I组 （P〈0.05）。与C、H两组比较,M组第16周末肾皮质ACE2 mRNA的表达降低（P〈0.01）;与M组比较,Z组表达升高（P〈0.01）。与C组比较,M组第16周末Mas mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;与H组比较,M组表达降低（P〈0.05）;与M组比较,Z组表达升高（P〈0.05）,且高于I组（P〈0.05）。M组ACE2、Mas蛋白表达的定量随时间呈递减趋势。第16周末ACE2、Mas蛋白的表达定量,与C组比较,M组两者表达均降低（P〈0.05）;与M组比较,Z组ACE2的表达和I、Z两组Mas的表达均升高 （P〈0.05）。结论化瘀通络中药可能通过上调ACE2、Mas mRNA及其蛋白的表达,促进ACE2-Ang-（1-7）-Mas轴发挥作用,降低尿蛋白,对糖尿病肾病大鼠起到肾保护的作用。     

益气养阴消癓通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨益气养阴消癓通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38MAPK信号通路的作用.方法:将SD大鼠随机分为6组:单纯肾切组、模型组、厄贝沙坦组、中药低、中、高剂量组,按各组相应药物剂量灌胃.于第6周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(UPro)量及肾功能水平;肾皮质p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平.结果:厄贝沙坦、中药低、中剂量组与模型组比较Upro量显著下降(P<0.05);治疗组与模型组比较,肾功能明显改善(P<0.05),且p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平显著下降(P<0.05).结论:益气养阴消癓通络中药可能通过抑制p38MAPK信号通路表达,发挥对糖尿病肾病大鼠的治疗作用.     

益气化瘀法对糖尿病肾病大鼠PI3K/Akt通路影响的实验研究

目的:研究益气化瘀法对糖尿病肾病大鼠PI3K/Akt通路的影响。方法:选择健康雄性SD大鼠120只进行研究,随机分为单纯肾切除组、模型组、厄贝沙坦组、低剂量益气化瘀汤组、中剂量益气化瘀汤剂组、高剂量益气化瘀汤剂组各20只,通过结扎右侧肾动脉、一次性腹腔注射STZ40mg·kg-1的方式制作糖尿病肾病大鼠模型,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦片15mg/kg/d,模型组给予生理盐水0.5ml,低剂量益气化瘀汤组每天每只0.2ml,中剂量益气化瘀汤组每天每只0.4ml;高剂量益气化瘀汤组每天每只0.6ml。检测血清和尿液中肾功能损伤分子的含量、肾脏组织PI3K、Akt及PTEN表达水平。结果:模型组大鼠血清中中血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、胱抑素(Cys-C)、视黄醇结合蛋白(RBP)含量以及m Alb/Cr均高于单纯肾切除组、厄贝沙坦组、益气化瘀汤剂组(t=8.365~23.146,P0.05);中剂量益气化瘀汤剂组、高剂量益气化瘀汤剂组血清中SCr、BUN、Cys C、RBP含量以及m Alb/Cr均低于厄贝沙坦组、低剂量益气化瘀汤剂组(t=6.547~17.214,P0.05)。模型组大鼠肾脏组织中PI3K、Akt的mRNA含量低于单纯肾切除组、厄贝沙坦组、益气化瘀汤剂组,PTEN含量明显高于单纯肾切除组、厄贝沙坦组、益气化瘀汤剂组,中剂量益气化瘀汤剂组、高剂量益气化瘀汤剂组PI3K、Akt的mRNA、PTEN明显高于厄贝沙坦组、低剂量益气化瘀汤剂组。(t=8.321~21.453,P0.05)。结论:益气化瘀法有助于上调糖尿病肾病小鼠肾组织PTEN表达,抑制PI3K/Akt信号通路活化,减轻或延缓糖尿病肾病小鼠肾纤维化,提高肾功能,且与剂量呈依存关系。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠氧化应激和炎症的干预作用及其机制研究

目的 探讨化瘀通络中药通过抑制Nrf2信号通路对糖尿病肾病大鼠氧化应激和炎症的干预作用.方法 SD大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模组采用高脂饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、化瘀通络中药组和厄贝沙坦组,各组大鼠分别给予饮用水或相应药物灌胃16周.于16周末检测大鼠随机血糖(R...     

益气养阴消癥通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38 MAPK信号通路的影响

目的:探讨益气养阴消癥通络中药对早期糖尿病大鼠肾组织p38MAPK信号通路的作用。方法:将SD大鼠随机分为6组:单纯肾切组、模型组、厄贝沙坦组、中药低、中、高剂量组,按各组相应药物剂量灌胃。于第6周末检测各组大鼠24 h尿蛋白(UPro)量及肾功能水平;肾皮质p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平。结果:厄贝沙坦、中药低、中剂量组与模型组比较Upro量显著下降(P0.05);治疗组与模型组比较,肾功能明显改善(P0.05),且p38MAPK mRNA,p-p38MAPK蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论:益气养阴消癥通络中药可能通过抑制p38MAPK信号通路表达,发挥对糖尿病肾病大鼠的治疗作用。     

防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠肾组织乙酰肝素酶表达的影响

目的观察防己黄芪汤对阿霉素肾病大鼠肾小球滤过功能的作用,探讨该方减少蛋白尿,治疗肾小球疾病的可能机制。方法尾静脉注射阿霉素法建立阿霉素肾病大鼠模型,成模后,根据24 h尿蛋白定量随机分为模型组、防己黄芪汤高、低剂量治疗组,连续给药5周,分别测定各组大鼠24 h尿蛋白定量及肾组织乙酰肝素酶(HPA)表达。结果模型组大鼠24 h尿蛋白定量和肾组织HPA表达升高明显高于正常组(P0.05);与模型组比较,防己黄芪汤高、低剂量治疗组24 h尿蛋白定量和肾组织HPA表达均明显改善(P0.05)。结论防己黄芪汤减少模型大鼠尿蛋白的作用可能与调节肾组织HPA表达,保护足细胞受损有关。     

益肾通络方对IgA肾病大鼠模型的干预作用

目的:探讨益肾通络方对大鼠IgA肾病模型的影响。方法:将60只大鼠分为对照组、模型组、强的松组、中药中剂量加强的松组、中药大剂量组,治疗16周。采用内毒素脂多糖(LPS)加四氯化碳(CCl4)加牛血清白蛋白(BSA)的复合造模方法,10周造模成功。检测大鼠尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮、肾组织TGF-β1表达及肾组织病理变化。结果:与模型组比较,各治疗组均可减少尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量、保护肾功能,减轻肾组织病理改变,并降低肾组织TGF-β1蛋白表达。结论:益肾通络方对大鼠IgA肾病模型有明显减少血尿、蛋白尿,减轻病理改变,改善肾功能的作用。其机制可能是通过抑制肾脏TGF-β1分泌与表达而发挥作用。     

扶正祛邪方对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1的影响

目的:观察扶正祛邪方对糖尿病肾病大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨扶正祛邪方对糖尿病肾病的保护作用及机制。方法:将80只SD大鼠随机分为正常组10只,造模组70只。造模组大鼠予腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)进行造模,最后成功建立糖尿病肾病模型大鼠48只,按随机数字表进一步分为模型组、扶正祛邪方组、厄贝沙坦组,每组16只。扶正祛邪方组按16.38 g/(kg·d)的剂量灌胃,厄贝沙坦组按13.5 mg/(kg·d)的剂量灌胃,正常组及模型组灌服等量蒸馏水。给药8周后腹主动脉采血测空腹血糖,收集24 h尿液测尿蛋白,HE染色观察肾组织病理学改变,Western blot检测各组肾组织中MCP-1的表达。结果:治疗前,与正常组比较,模型组的空腹血糖、24 h尿蛋白、MCP-1蛋白显著升高,差异均有统计学意义(P0.01),说明模型成立。治疗后,与模型组比较,扶正祛邪方组空腹血糖、24 h尿蛋白、MCP-1蛋白显著降低;厄贝沙坦组24 h尿蛋白、MCP-1显著降低,差异均有统计学意义(P0.01)。治疗后,与治疗前比较,扶正祛邪方组空腹血糖、24 h尿蛋白显著降低;厄贝沙坦组24 h尿蛋白显著降低,差异均有统计学意义(P0.01)。治疗后,与厄贝沙坦组比较,扶正祛邪方组空腹血糖降低的更明显,差异有统计学意义(P0.01)。HE染色显示模型组大鼠肾小球体积增大,部分肾小球基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞可见空泡样变性,扶正祛邪方组及厄贝沙坦组上述病理改变均明显轻于模型组。结论:扶正祛邪方能降低血糖,改善糖尿病肾病的病理学改变,能下调肾脏MCP-1的表达,起到减少尿蛋白排出,延缓DN进展的作用。     

化瘀通络中药通过抑制TGF-β1/ERK通路减轻糖尿病肾病大鼠肾纤维化研究

目的考察化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的治疗作用,并基于转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)信号通路探讨其作用机制。方法随机选取10只SD大鼠作为对照组,其余大鼠ip链脲佐菌素(40mg/kg)联合高脂饲料喂养建立糖尿病模型,糖尿病模型大鼠随机分为模型组和化瘀通络中药组。给予化瘀通络中药第0、4、8、12、16周末,大鼠尾静脉采血检测空腹血糖;给予化瘀通络中药16周后,检测各组大鼠血清中肌酐、尿素氮和尿酸水平;考察各组大鼠肾组织病理变化;采用免疫组化法检测肾组织III型胶原(collagen III,Col-III)和TGF-β1表达;采用qRT-PCR法检测肾组织TGF-β1 mRNA表达;采用Western blotting法检测肾组织c-Raf、磷酸化c-Raf(p-c-Raf)、丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(mitogen-activatedextracellular signal regulated kinase,MEK)、p-MEK、ERK和p-ERK蛋白表达。结果与模型组比较,化瘀通络中药组大鼠血清中肌酐和尿素氮水平显著降低(P0.01),肾组织病理损伤和纤维化减轻,肾组织Col-III和TGF-β1沉积减少,TGF-β1 mRNA表达水平明显降低(P0.05),p-c-Raf、p-MEK和p-ERK蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。结论化瘀通络中药能够减轻糖尿病肾病大鼠肾组织病理损伤,改善肾纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/ERK信号通路相关。     

糖肾平胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其对肾组织单核细胞趋化因子-1蛋白及mRNA表达的影响

目的:探讨糖肾平胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其对肾组织单核细胞趋化因子(MCP-1)蛋白及mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠,50只,按体重均匀分出正常组10只,其余40只,腹腔注射链脲佐菌素造模。将造模成功的大鼠按血糖水平分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平胶囊组,用药12周。每周称量体重;4,8,12周后分笼收集24 h尿液检测24 h尿蛋白定量,处死大鼠行血液生化指标BUN、Scr、TG检测,肾组织行HE、Mallory染色,观察病理形态学改变,采用免疫组化、原位杂交分析肾组织MCP-1蛋白及mRNA的表达。结果:模型组大鼠摄食减少、精神不振、活动迟缓、尿量减少、体重减轻以及肾组织病理改变,而厄贝沙坦组和糖肾平胶囊组均有不同程度的改善,且糖肾平胶囊组优于厄贝沙坦组;正常组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有少量MCP-1蛋白及mRNA表达;模型组则呈强阳性表达。糖肾平胶囊组MCP-1蛋白及mRNA的表达较模型组明显减少(P<0.05)。结论:糖肾平胶囊可能通过对肾组织MCP-1蛋白及mRNA表达下调而发挥治疗和预防糖尿病肾病的作用。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏和AMPK/Nox4信号通路的作用研究

目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用以及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,Nox4)信号通路的干预作用。方法随机选取7只SD大鼠作为对照组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合ip链脲佐菌素(35 mg/kg)建立DN模型,DN大鼠随机分为模型组、化瘀通络中药(4.41 g/kg)组和厄贝沙坦(13.5 mg/kg)组。给予化瘀通络中药16周后,取尿液检测大鼠24h尿蛋白(urinetotalprotein,UTP)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)水平;考察各组大鼠肾组织病理变化;考察各组大鼠肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛水平;采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织8-OHdG和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)蛋白表达;采用qRT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)m RNA表达;采用Western blotting法检测各组大鼠肾组织TGF-β1、AMPKα、磷酸化AMPKα(p-AMPKα)、Nox4蛋白表达。结果与模型组比较,化瘀通络中药组大鼠尿液24 h UTP和8-OHdG水平明显降低(P0.01);肾脏病理损伤缓解,肾组织细胞外基质(extracellular matrix,ECM)堆积减少,肾组织胶原面积明显降低(P0.01);肾组织SOD活性明显升高(P0.05),肾组织丙二醛水平显著下降(P0.01);肾组织8-OHd G和FN表达减少;肾组织TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01);肾组织p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高(P0.05),Nox4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药能够通过作用于AMPK/Nox4信号通路,从而抑制DN大鼠氧化应激、减少ECM大量堆积、降低UTP排泄、保护肾脏。     

肾消通络方对糖尿病肾病大鼠血管细胞黏附分子、结缔组织生长因子及纤维粘连蛋白表达的影响

目的初步探索肾消通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织血管细胞黏附分子(VCAM)、结缔组织生长因子(CTGF)及纤维粘连蛋白(FN)表达的影响。方法将实验动物分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及中药组4组,中药组按生药20g/kg·d进行干预。采用免疫组化法测定肾组织中的VCAM的表达;采用Western blot测定肾组织中CTGF、FN的表达;采用SPSS13.0统计软件进行数据资料分析。结果模型组、厄贝沙坦组、中药组VCAM的表达水平较正常组明显升高;厄贝沙坦组和中药组VCAM的表达水平较模型组有所降低,厄贝沙坦组和中药组之间差异不明显。模型组、厄贝沙坦组、中药组CTGF、FN水平较正常组明显升高(P0.05),中药组、厄贝沙坦组的CTGF、FN水平较模型组明显降低(P0.05),但中药组高于厄贝沙坦组(P0.05)。结论肾消通络方能够降低肾组织中VCAM、CTGF、FN的水平,减少细胞外基质积聚,减轻肾脏纤维化,发挥肾脏保护作用。     

火把花根对糖尿病肾病大鼠肾脏Angptl2和NF-κB表达的影响

目的观察火把花根对糖尿病肾病大鼠肾脏组织中血管生成素样蛋白2(Angptl2)、核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨火把花根治疗糖尿病肾病的机制。方法从40只Wistar雄性大鼠中随机取10只作为正常组,其余大鼠采用腹腔注射STZ方法制备糖尿病肾病模型。将造模成功27只大鼠随机分为安慰剂组、厄贝沙坦组和火把花根组,每组9只。造模成功后4周,灌胃法分别给予等量蒸馏水、厄贝沙坦(50 mg/kg)、火把花根(4 g/kg)干预8周,每周测定尿蛋白水平,灌胃结束后采用光学显微镜和透视电镜观察大鼠肾脏病理组织学变化,免疫组织化学法检测大鼠肾脏组织中Angptl2和NF-κB表达水平。结果从第2周开始,厄贝沙坦组和火把花根组尿蛋白水平均明显下降,均明显低于安慰剂组(P均0.05);第5周火把花根组尿蛋白水平明显低于厄贝沙坦组(P0.05);第7周和第8周,厄贝沙坦组和火把花根组尿蛋白水平比较差异均无统计学意义(P均0.05)。灌胃结束后,安慰剂组肾脏组织中Angptl2和NF-κB表达水平明显高于正常组(P均0.05),而厄贝沙坦组和火把花根组均明显低于安慰剂组(P均0.05),厄贝沙坦组和火把花根组Angptl2表达水平比较差异无统计学意义(P0.05),但火把花根组NF-κB表达水平明显低于厄贝沙坦组(P0.05)。结论火把花根可明显降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白水平,具有治疗糖尿病肾病的作用,该作用可能与其抑制肾脏中Angptl2和NF-κB表达有关。     

三芪口服液对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞及其蛋白表达的影响

目的 观察三芪口服液对实验性糖尿病肾病(DN)模型大鼠足细胞计数及足细胞标志性蛋白PCX及足细胞裂孔膈膜蛋白的影响.方法 SD雄性大鼠,予STZ单次腹腔注射及高脂饲料造模,筛选DN成模大鼠,随机分组,药物干预;6周后采集大鼠尿测尿蛋白,处死大鼠取肾组织以免疫组化方法测定PCX、nephrin的蛋白表达、足细胞计数.结果 三芪口服液组肾小球足细胞数较模型组多(P＜0.05);定量分析结果显示;模型组PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表这均低于三芪口服液组(P＜0.05);Pearson相关分析结果显示,24小时UMA与肾小球足细胞PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表达呈负相关(P＜0.01).结论 益气活血中药复方三芪口服液能够上调肾足细胞裂孔隔膜nephrin、足细胞特异性标志蛋白PCX的蛋白表达,从而改善足细胞的损伤,减少尿蛋白,延缓DN进程.