解毒消癥饮诱导胃癌细胞凋亡相关基因表达的研究

目的：探讨中药复方解毒消癥饮对人胃癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将人胃癌细胞株BGC-823分成空白对照组及药物干预低、中、高剂量组,分别加入空白对照血清和相应剂量的解毒消癥饮大鼠含药血清,培养24h、48h和72h;免疫荧光染色法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas及Fas-L的表达,应用激光共聚焦显微镜观察并做半定量分析;另行电镜制样、观察。结果：胃癌细胞经解毒消癥饮含药血清干预后,Bax、Fas表达明显增加（P〈0.05）,且随药物浓度增加该趋势更加明显,Fas-L则随药物浓度的增加表达明显减弱（P〈0.05）;Bcl-2表达量无明显变化。电镜见胃癌细胞出现早期凋亡现象,主要为细胞核异染色质边聚;线粒体嵴消失、基质深染。结论：解毒消癥饮可能通过调控胃癌细胞Bax、Fas及Fas-L等基因,从而促进细胞凋亡,并降低细胞免疫逃逸的功能。     

软坚消瘿汤对甲状腺细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的观察软坚消瘿汤对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠甲状腺凋亡蛋白Bcl-2/Bax和细胞凋亡的影响,从细胞凋亡角度探讨其作用机制。方法运用甲状腺球蛋白与弗氏佐剂混合免疫注射法,联合饮用高碘水模拟大鼠实验性自身免疫性甲状腺炎。免疫组化染色法检测大鼠甲状腺细胞Bcl-2/Bax变化,原位末端标记技术检测细胞凋亡。结果软坚消瘿汤能显著降低Bax表达,增加甲状腺细胞Bcl-2表达,减少甲状腺细胞凋亡。结论软坚消瘿汤可能通过降低滤泡上皮细胞Bax表达,提高Bcl-2表达从而减轻甲状腺细胞凋亡。     

蔡氏扶正消癥汤对胃癌细胞体外生长及细胞黏附分子的影响

目的:探讨蔡氏扶正消癥汤对人胃癌细胞SGC-7901体外生长及细胞黏附分子的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-y1]-2,5dipheny1tetrazolium bromide,MTT)还原法检测蔡氏扶正消癥汤对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞膜表面E-Cadherin,CD44,CD44V6和CD54的表达。结果:蔡氏扶正消癥生药能抑制SGC-7901的增殖。在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72h内药物作用时间越长,抑制作用越明显。蔡氏扶正消癥汤作用48h后,SGC-7901细胞膜表面的E-Cadherin表达增高,CD44、CD44V6和CD54表达减少。结论:蔡氏扶正消癥汤能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外增殖,同时能增加E-Cadherin的表达,减少其CD44,CD44V6和CD54的表达,阻止其对邻近正常组织的浸润及远处转移,从而发挥抗癌作用。     

建中补肾消癥汤对UUO小鼠肾间质纤维化细胞凋亡的保护作用研究

目的 通过细胞凋亡途径探讨建中补肾消癥汤对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法 采用UUO小鼠模型,以建中补肾消癥汤不同剂量干预、尿毒清颗粒阳性药对照,造模后第3天开始灌胃,于造模后的第14、21、28天每组随机抽取5只进行取材。采用全自动生化分析仪进行小鼠血清Scr、BUN检测,HE染色观察小鼠肾组织病理形态变化,TUNEL染色观察小鼠肾小管上皮细胞(RTECs)凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测小鼠梗阻侧肾组织中Bcl-2、Bax和Apaf-1的表达情况。结果 与同时期UUO模型组相比,在第28天各治疗组均能够明显降低UUO小鼠Scr、BUN浓度(P<0.05,P<0.01);HE染色显示,建中补肾消癥汤能够改善UUO小鼠肾脏组织纤维化程度;TUNEL染色显示,在第28天,中药高、中剂量和尿毒清组RTECs凋亡数量均显著减少(P<0.01);Western blot和RT-PCR结果一致,中药高剂量组与UUO模型组相比,Bcl-2表达明显增加(P<0.01,P<0.05),Bax和Apaf-1表达显著下降...     

健脾消癥方诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用研究

目的:探讨健脾消癥方对肝癌细胞HepG2凋亡的影响及机制。方法:MTT法观察健脾消癥方对肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721增殖的影响,Hochest 33342染色、透射电镜观察健脾消癥方对HepG2细胞超微结构的改变作用,DCFH-DA探针法观察健脾消癥方对HepG2活性氧水平的影响,Western blot检测健脾消癥方对HepG2的凋亡相关半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9表达的影响。结果:健脾消癥方作用HepG2 48h后,细胞形态及超微结构出现典型的凋亡特点,细胞内活性氧浓度升高,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调。结论:健脾消癥方对HepG2有较好的诱导凋亡的作用,其作用机制可能与其增加细胞活性氧(ROS)水平及下调Caspase-3、Caspase-9蛋白有关。     

补虚消癥汤对大鼠肾小球系膜细胞MMPs及TIMPs表达的影响

目的：观察补虚消癥汤对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMPs）及基质金属蛋白酶组织抑制剂（Tissue Inhibitor of metalloproteinase,TIMPs）表达的影响,探讨补虚消癥汤对肾小球硬化的防治作用。方法：（1）应用血清药理学方法,制取中药的药理血清。（2）采用肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor,TNF-α）作为刺激因子,诱导大鼠肾小球系膜细胞,使其发生增殖。（3）应用实时荧光定量PCR法、酶联免疫吸附ELISA法观察各组间MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2mRNA表达的情况。结果：1）补虚消癥汤能有效提升MMP-2/TIMP-2的比值,与对照组比较差异,高、中浓度组有统计学意义（P〈0.05）;2）补虚消癥汤能有效提升MMP-9/TIMP-1的比值,与对照组比较差异,均有统计学意义（P〈0.05）。结论：补虚消癥汤能通过影响MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2等的表达,改善MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1平衡,从而使细胞外基膜降解增加,缓解肾小球损伤。     

清热消癥方对高糖刺激下HK-2细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的 探讨清热消癥方对高糖刺激下HK-2细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法以人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞为干预对象,采用CCK-8法检测细胞活力对高糖模型造模条件和清热消癥方最佳干预浓度进行筛选;采用Western blot法对海藻糖干预浓度进行筛选。将HK-2细胞分为对照组、模型组、清热消癥方组、海藻糖组、清热消癥方+海藻糖组,分别予含有24.4 mmol/L甘露醇的完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖+200μg/mL清热消癥方培养基、30 mmol/L高糖+50 mmol/L海藻糖培养基、30 mmol/L高糖+50 mmol/L海藻糖+200μg/mL清热消癥方培养基培养48 h。采用Western blot法和Immunofluorescence法检测HK-2细胞自噬相关蛋白表达情况。结果 与对照组比较,模型组p62蛋白相对表达量和阳性表达平均荧光强度均明显升高(P均<0.05),溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,清热消癥方组自噬相关蛋白7(Atg...     

逐瘀消癥方治疗子宫肌瘤疗效及对患者细胞凋亡蛋白和雌、孕激素受体表达的影响

目的:探讨逐瘀消癥方治疗子宫肌瘤的疗效及对患者细胞凋亡蛋白和雌、孕激素受体的影响。方法:将98例子宫肌瘤患者按照随机数字表法分为两组各49例,对照组予以米非司酮片口服治疗,治疗组在对照组用药基础上应用逐瘀消癥方,疗程均为12周。比较两组治疗前后子宫体积、肌瘤大小、子宫动脉血流动力学指标;并比较两组血清性激素、细胞凋亡蛋白和雌、孕激素受体水平与两组临床疗效。结果:治疗组治疗后子宫和瘤体均小于对照组(P<0.05);子宫动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)高于对照组(P<0.05),收缩期峰值流速(PSV)低于对照组(P<0.05);血清黄体生成素(LH)、卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E₂)、孕酮(P)、Bcl-2、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)水平均低于对照组(P<0.05),Bax水平高于对照组(P<0.05),临床疗效优于对照组(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:逐瘀消癥方可降低性激素水平,改善子宫血流动力指标,有助于缩小肌瘤体积和子宫体积,其机制可能与调节细胞凋亡蛋白和雌、孕激素受体有关。     

益气活血消癥方对良性前列腺增生大鼠细胞凋亡的影响

目的观察益气活血消癥方对良性前列腺增生大鼠细胞凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法将60只8周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、阳性对照组和消癥方低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均予去势加丙酸睾酮注射法复制前列腺增生模型。正常组和模型组大鼠予生理盐水灌胃,消癥方低、中、高剂量组大鼠分别予益气活血消癥方10、20、40 mg/100 g灌胃,阳性对照组大鼠予癃开颗粒混悬液11 mg/100 g灌胃,1次/d,连续30 d。末次给药24 h后,脱颈处死大鼠,取前列腺组织,免疫组化检测大鼠前列腺组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织Bax表达显著降低,Bcl-2表达显著升高;与模型组比较,各给药组大鼠前列腺组织Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低,且消癥方高剂量组效果最优。结论益气活血消癥方可促进大鼠前列腺组织细胞凋亡,其机制与前列腺组织Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低相关,从而改善良性前列腺增生。     

补元聪脑汤对老年性痴呆大鼠行为学及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨补元聪脑汤对老年性痴呆(AD)大鼠认知能力、海马区凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响及其治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法:采用鹅膏蕈氨酸(IBO)+β淀粉样蛋白1-42等量复合注射液法复制AD大鼠模型;并应用Morris水迷宫法进行行为学检测;用免疫组化法测定海马区Bcl-2、Bax阳性神经元数的表达。结果:模型组与正常组相比,认知能力显著下降,海马Bax表达增多,Bcl-2表达减少,充分证明造模的成功;以补元聪脑汤进行中药干预,并设西药脑复康作为药物对照组,中药组和西药组均能显著改善大鼠的认知能力,抑制Bax的表达,上调Bcl-2的表达。结论:补元聪脑汤对AD大鼠脑神经细胞的保护作用可能是通过增强受损海马区神经元Bcl-2蛋白的表达,并减少Bax蛋白的表达。从而改善AD大鼠的学习记忆能力。     

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的：研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌(TCCB)增殖、凋亡的影响及作用机制。方法：用crocin处理后，四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对T24细胞增殖的影响；流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率。建立人膀胱癌T24细胞株裸鼠移植瘤动物模型。随机分为对照组和处理组。50 mmol·L^-1 crocin处理后，观察其对肿瘤的抑制作用；电镜观察肿瘤组织形态改变；SP-免疫组织化学法分析Bcl-2，Bax，survivin，Cyclin D₁蛋白表达。结果：Crocin能明显抑制人膀胱癌T24细胞的生长，并使T24细胞呈明显的G₀/G₁ 期阻滞现象；T24细胞早期凋亡率随crocin作用时间的延长而逐渐增加。Crocin对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用，电镜观察可见细胞凋亡的形态学改变，免疫组化结果显示，经Crocin处理后Bcl-2, survivin,Cyclin D₁的表达下调，而Bax的表达上调。结论：Crocin对人膀胱癌T24细胞株的体内外增殖均具有良好的抑制作用，其机制可能是改变细胞周期分布和诱导细胞凋亡，作用机制与下调Bcl-2, survivin,Cyclin D₁基因表达和上调Bax的基因表达有关。     

吉西他滨对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡及自噬相关蛋白表达的影响

目的观察吉西他滨对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡及自噬相关基因表达的影响。方法将T24细胞分为阳性对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和空白对照组;阳性对照组用10~(-8) mol/L紫杉醇处理,低、中、高剂量实验组以1×10~(-7),1×10~(-8),1×10~(-9) mol/L吉西他滨处理,空白对照组不做任何处理。药物干预24,48 h后采用溴化四唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中自噬相关蛋白表达情况,透射电镜扫描细胞中自噬小体的形成情况。结果与阳性对照组比较,低、中剂量实验组培养24,48 h增殖抑制率(PIR)均明显降低(P均0.05);实验组T24细胞PIR均随着药物浓度的增加和培养时间的延长而增高(P均0.05)。阳性对照组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率均显著高于空白对照组(P均0.05)。随着培养时间的延长,中剂量实验组自噬相关蛋白蛋白表达量呈逐渐升高趋势(P0.05),P62蛋白表达量呈逐渐减低趋势(P0.05)。培养4 h后,中剂量实验组细胞中出现了较多的自噬小体。结论吉西他滨可抑制T24细胞增殖,并促其凋亡,具有一定时间-剂量依赖性;同时其还可诱导细胞自噬的发生。     

四物汤对小鼠骨髓基质细胞凋亡及Bim基因表达的影响

目的:观察四物汤对小鼠骨髓基质细胞OP9细胞凋亡的影响,检测四物汤作用后促凋亡因子Bim的基因表达,探讨四物汤对OP9细胞凋亡的作用及机制。方法:流式细胞术检测四物汤对OP9细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR、western blot检测Bim基因表达。结果:四物汤显著抑制OP9细胞凋亡,显著下调Bim的基因表达(P0.05,P0.01)。结论:四物汤具有抑制OP9细胞凋亡的作用,其机制可能与下调Bim的基因表达有关。     

软坚消瘿汤对自身免疫性甲状腺炎大鼠细胞因子及凋亡蛋白Fas、Fasl表达的影响

目的观察软坚消瘿汤对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠自身抗体、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和凋亡蛋白Fas、Fasl的影响,从细胞因子和凋亡蛋白关系角度探讨其作用机制。方法SPF级SD雌性大鼠60只分为正常组、模型组,模型组运用甲状腺球蛋白与弗氏佐剂混合免疫注射法,联合饮用高碘水模拟大鼠EAT。造模完成后的大鼠分为中药组、雷公藤组、模型组。酶联免疫法检测甲状腺抗体、IL-1及TNF-α水平,免疫组化染色法检测大鼠甲状腺细胞Fas、Fasl变化。结果软坚消瘿汤能显著降低EAT大鼠血清自身抗体、IL-1及TNF-α水平,降低甲状腺细胞Fas、Fasl表达。结论软坚消瘿汤通过降低EAT血清中自身抗体及细胞因子水平,致使凋亡相关蛋白Fas、Fasl表达下降,从而起到减轻甲状腺细胞凋亡作用。     

归脾汤对苯中毒小鼠外周血、骨髓有核细胞及细胞凋亡蛋白Fas、FasL表达的影响

目的:观察归脾汤对苯中毒小鼠外周血、骨髓有核细胞计数及骨髓细胞凋亡蛋白Fas、Fas L表达的影响,初步揭示归脾汤可能减轻苯中毒对小鼠骨髓造血功能损害并提高外周血象的机理。方法:将72只小鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组以及归脾汤大、中、小剂量组,每组12只。除正常对照组外,其余组进行熏苯复制苯中毒模型。造模后,归脾丸大、中、小剂量组分别给予归脾汤溶液8、4、2mg/(kg·d)灌胃;西药组给予利血生1.5mg/(kg·d)和鲨肝醇5mg/(kg·d)混悬液灌胃;正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,均每天1次,连续3周。应用全自动血细胞分析仪、流式细胞仪及SABC检测试剂,分别检测外周血细胞、骨髓有核细胞计数及Fas、Fas L蛋白的表达。结果:归脾丸可明显升高外小鼠周血白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)(P0.05或P0.01),而对血小板作用差别无统计学意义(P0.05);与模型组比较,归脾汤高、低剂量组及西药组骨髓有核细胞计数均明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型组相比,归脾汤大剂量组、西药组能明显降低骨细胞凋亡蛋白Fas、Fas L的表达(P0.05);与西药组相比,归脾汤大剂量组及小剂量组能对Fas、Fas L的影响无统计学意义(P0.05)。结论:归脾汤可改善苯中毒小鼠骨髓造血组织,提高骨髓有核细胞计数以促进骨髓增生,同时也可降低骨细胞凋亡蛋白的表达,达到减轻苯中毒对小鼠骨髓造血功能的损害,改善外周血象。     

内异消癥汤对子宫内膜异位症大鼠CD_4~+及CD_8~+ T细胞表达的影响

目的探讨内异消癥汤对子宫内膜异位症模型大鼠CD4+、CD8+T细胞表达的影响。方法将47只大鼠随机分为对照组,模型组和内异消癥汤高、低剂量组,除对照组外均采用大鼠子宫组织自体移植手术制作子宫内膜异位症模型,灌胃给药4周后用免疫组化方法检测大鼠子宫内膜异位移植物局部CD4+、CD8+T细胞表达。结果与模型组相比,低剂量组CD4+表达显著降低(P<0.05),高、低剂量组CD8+的表达强度降低更显著(P<0.01);高、低剂量组的CD4+/CD8+比值较模型组增高,低剂量组比值增高尤为明显;高、低剂量组之间CD4+、CD8+表达比较无显著差异(P>0.05)。结论内异消癥汤能改善大鼠子宫内膜异位移植物局部组织免疫学变化,降低CD4+及CD8+表达,并有提高CD4+/CD8+比值的趋势,可能通过此途径达到治疗效果。     

内异消癥汤对子宫内膜异位症大鼠CD4^＋及CD8^＋ T细胞表达的影响

目的探讨内异消癥汤对子宫内膜异位症模型大鼠CD4^＋、CD8^＋T细胞表达的影响。方法将47只大鼠随机分为对照组,模型组和内异消癥汤高、低剂量组,除对照组外均采用大鼠子宫组织自体移植手术制作子宫内膜异位症模型,灌胃给药4周后用免疫组化方法检测大鼠子宫内膜异位移植物局部CD4^＋、CD8^＋T细胞表达。结果与模型组相比,低剂量组CD4^＋表达显著降低（P〈0.05）,高、低剂量组CD8^＋的表达强度降低更显著（P〈0.01）;高、低剂量组的CD4^＋/CD8^＋比值较模型组增高,低剂量组比值增高尤为明显;高、低剂量组之间CD4^＋、CD8^＋表达比较无显著差异（P〉0.05）。结论内异消癥汤能改善大鼠子宫内膜异位移植物局部组织免疫学变化,降低CD4^＋及CD8^＋表达,并有提高CD4^＋/CD8^＋比值的趋势,可能通过此途径达到治疗效果。     

芦荟大黄素对人膀胱癌细胞T24增殖及凋亡的影响

目的：探讨芦荟大黄素（AE）对人膀胱癌细胞株T24细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法：采用甲基噻唑（MTT）比色法测定AE对体外培养的T24细胞的抑制率,并用作图法计算半数有效抑制浓度（IC5）0;光学显微镜下观察AE作用前后细胞形态学变化;流式细胞技术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测mRNA表达。结果：MTT法测定显示,在5～160μg/mL浓度范围内,AE对膀胱癌T24细胞生长有抑制作用,并呈量-效关系,IC50为31.55μg/mL;光学显微镜下药物IC50剂量（32μg/mL）作用T24细胞后呈现明显的死亡形态变化;流式细胞仪检测显示AE可阻滞T24细胞进入G2/M期;Annexin V-FITC/PI双染法显示早期凋亡细胞数明显增加;R T-PCR法显示myc基因表达下降。结论：AE能抑制人膀胱癌T24细胞生长,并阻断细胞周期和诱导细胞凋亡。其机制可能与myc基因表达下调有关。     

猪苓多糖对膀胱癌T24细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的:探讨中药猪苓多糖(PPS)对膀胱癌 T24细胞的作用。方法:应用细胞计数形态学观察和流式细胞分析技术观察 PPS 对 T24细胞形态、细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:PPS 组细胞数量减少,细胞形态改变,较多细胞伸出伪足。PPS 组凋亡细胞与对照组比较差异无显著性,但细胞周期分布中 S期细胞增加,G_2期细胞减少。结论:PPS 有抑制 T24细胞增殖作用,可能是通过阻止 T24细胞由 S 期进入G_2期所致。     

扶正消癥方药液诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究扶正消方药液对人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,探讨扶正消方药液治疗胃癌的可能作用机理。方法:MTT法检测扶正消方药液对SGC-7091细胞增殖的影响;应用电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:扶正消方药液能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖。在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72小时内药物作用时间越长,抑制作用越明显。流式细胞仪检测在细胞周期G1期前出现低于2倍体的凋亡峰,电镜检测到胃癌细胞SGC-7901发生典型的凋亡形态学改变。结论:扶正消方药液能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外生长,其作用机制可能与抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖和诱导细胞凋亡有关。