辅助性T细胞亚群的分化调节

ＴＨ１细胞促进细胞免疫,ＴＨ２细胞促进体液免疫,维持ＴＨ１细胞与ＴＨ２细胞之间的平衡有重要的生理意义。正常情况下,机体主要通过ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ及ＩＬ－１２调节ＴＨ１细胞和ＴＨ２细胞之间的平衡。ＣＤ２８分子、Ｂ７分子、Ｔ细胞受体、ＩＬ－１０以及抗原递呈细胞等因素也与调节。     

类风湿关节炎T细胞亚群4-1BB的表达与其分泌TH1/TH2细胞因子的关系

目的探讨体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)T淋巴细胞上共刺激分子4-1BB的表达,及与其分泌T_H1/T_H2细胞因子的关系。方法应用流式细胞术检测体外培养的30例RA患者和20例正常对照者T细胞活化前后4-1BB的表达,并且应用ELISA方法检测培养上清液中IFN-γ、IL-4水平。结果RA患者CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组(表达百分率分别为18.56%±4.08%和10.33%±2.13%;1.24%±0.12%和0.87%±0.09%,P<0.01),经抗CD3单抗体外刺激后CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前(表达百分率为33.21%±4.29%和21.35%±8.12%,P<0.01)。RA患者CD4~ T/CD8~ T比值明显升高,而且与4- 1BB~ CD4~ T细胞数呈正相关关系(r=0.84,P<0.01),RA患者T淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、IL-4均高于正常对照组(P<0.05),经抗CD3单抗体外刺激后上清液中IFN-γ及Ib-4均明显高于活化前,以IFN-γ升高最为显著(P<0.01)。而且抗CD3单抗刺激前后4-1BB~ CD4~ T细胞数与培养上清液中IFN-γ水平均呈正相关关系(r=0.721,r=0.487,P<0.05)。结论类风湿关节炎患者T细胞表达的4-1BB在类风湿关节炎的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4~ T细胞活化,促使T_H1细胞因子分泌,参与关节炎症和免疫损伤。     

CD4~ T细胞的抗瘤作用

CD4 T细胞在机体抗瘤免疫反应中的作用越来越受到重视,CD4 T细胞不仅可以分泌大量的细胞因子和辅助CD8 T细胞杀伤肿瘤细胞,而且CD4 T细胞在肿瘤免疫中具有免疫记忆和直接杀伤肿瘤细胞的功能,因而在机体的抗瘤免疫反应中起重要作用。过继转输CD4 T细胞是肿瘤过继免疫治疗的一个新方案。     

Th17细胞分化的调节

Th17细胞是一群分泌IL-17的CD4+T细胞,它在分化发育及功能上不同于Th1细胞和Th2细胞。目前认为Th17细胞与自身免疫性疾病的发生发展密切相关,Th17细胞在病灶部位高表达,并与疾病的严重程度相一致。研究发现:CD4+CD25+Treg和Th17细胞的分化均需要TGF-β,并通过IL-6决定两者的分化比例,CD4+CD25+Treg和Th17细胞的动态平衡在机体免疫防御、免疫自稳中起着重要作用;RORγt是Th17细胞分化的关键转录因子,RORγt的表达依赖于IL-6和TGF-β;IL-23及其受体能上调Th17细胞的表达,而IL-12、IFN-γ、IL-4、T-bet抑制其表达。对Th17细胞的深入研究将有助于我们对自身免疫性疾病发病机制的深入了解。     

抗原特异性初始CD4+T细胞的体内分化及特性

为了探讨抗原特异性CD4+T细胞在体内的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织器官的分布。将CFSE标记的抗原特异性初始CD4+T细胞静脉被动输给小鼠后,进行免疫,3d后处死小鼠取其脾脏、淋巴结和肺组织,分离单个核细胞,利用流式细胞计数仪在单个细胞水平上,观察细胞的分裂、表型、Th1细胞因子的产生和组织分布。结果显示在没有抗原刺激的情况下,未见初始CD4+T细胞分裂,其主要分布于淋巴结和脾脏。当受到抗原刺激后,CD4+T细胞分裂1～5次,主要分布于脾脏和肺组织,CD25的表达增加,CD62L的表达随着细胞分裂次数的增加而减少。IL-12促进CD25的表达和细胞的分裂。促进Th1细胞的分化和IFN-γ的表达。研究的结果提示,在体内,当CD4+T细胞活化后,主要分布于脾和非淋巴组织发挥其免疫效应。     

外周血辅助性T细胞亚群与肺结核严重性及疗效的关系

目的:探讨外周血的Th1和Th2细胞与肺结核病变严重程度及疗效的关系。方法:应用细胞内细胞因子的检测方法对62例肺结核患者外周血的Th1和Th2细胞亚群进行检测,根据患者治疗前影像学肺部病灶累及程度及治疗前后影像学变化进行分组比较,30例健康者作为对照。结果:治疗前肺结核组的Th1细胞计数和Th2细胞计数均明显低于健康对照组(P0.01,t检验)。治疗前多叶受累组的Th1细胞计数较局限组低(P0.05,t检验);治疗后病灶吸收明显组的Th1细胞计数均恢复至健康水平(P0.05,t检验);病灶吸收不明显组的Th1细胞计数仍低于健康水平(P0.01,t检验);治疗后无论病灶吸收明显组或病灶吸收不明显组的Th2细胞计数均仍低于健康组(P0.05,t检验)。结论:推测结核病的发生和进展可能与Th1细胞低下有关,非Th2型免疫反应增强所致,成功的抗结核治疗后,Th1细胞随之恢复。     

073 NKT细胞

NK T细胞(Natural Killer T cell,自然杀伤T细胞)是在鼠和人中发现的独特的T细胞群.它们除了表达T细胞的标志外,也能表达NK细胞的一些标志.NK T细胞的活化具有CD1限制性.它们通过产生细胞因子IL-4/IFN-γ的作用而成为先天性免疫和获得性免疫中发挥关键作用的一类调节性细胞,且为抗感染的第一线防御功能的一部分.本文拟就有关方面作一综述.     

人类T_H亚群的研究进展

本文对人类ＴＨ１ 及ＴＨ２ 亚群的发现过程作了简单回顾，并将其近年的最新进展及与疾病的关系等问题加以综述。     

IFN-α磷酸化STAT1和STAT4诱导人NK细胞产生IFN-γ并增强其杀伤活性

目的研究IFN-α对CD56+NK细胞的细胞因子分泌、杀伤功能和细胞内信号传导的作用。方法分离健康人PBMC分别与培养液、IFN-α和IL-12培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析IFN-α诱导IFN-γ产生的细胞亚群以及该细胞亚群对肿瘤细胞的杀伤作用和信号传导机制。结果经IFN-α刺激后,PBMC能产生低剂量的IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,IFN-α诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。IFN-α促进NK细胞的杀伤功能。促进STAT1和STAT4磷酸化。结论 IFN-α通过磷酸化STAT1和STAT4,增加NK细胞IFN-γ分泌和增强杀伤功能。     

鞭毛蛋白与IL-12协同诱导人NK细胞产生IFN-γ机制的探讨

目的:探讨细菌鞭毛蛋白(flagellin)与IL-12协同诱导人NK细胞产生IFN-γ的作用和机制。方法:自正常人静脉血中分离PBMCs,分别与培养液(medium)、flagellin、IL-12或flagellin+IL-12共同培养。三天后,利用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测培养上清中IFN-γ的水平。收集初次培养组细胞,洗去刺激后进行二次培养,检测IFN-γ的产生。利用流式细胞仪检测NK细胞上IL-12Rβ1和TLR5的表达情况。结果:一次培养的结果表明,flagellin或IL-12单独刺激PBMCs可诱导较低水平IFN-γ的产生。共同刺激下,可协同诱导高水平IFN-γ产生。二次培养结果表明,不同剂量IL-12的刺激flagellin初次培养组细胞,IFN-γ的产生呈剂量依赖性的增加;IL-12初次刺激组细胞在flagellin的二次刺激下,IFN-γ的产生亦呈剂量依赖性增加。流式结果表明,flagellin可上调NK细胞IL-12Rβ1的表达。IL-12可上调NK细胞TLR5的表达。结论:flagellin通过上调NK细胞IL-12Rβ1的表达,IL-12通过促进NK细胞TLR5的表达,从而协同诱导IFN-γ的产生。     

IL-12和CpG疫苗佐剂体内对特异性CD4+T细胞免疫应答的影响

目的：观察IL-12和CpG作为疫苗佐剂在体内促进抗原特异性CD4^＋T细胞的分化和IFN-γ的产生异同.方法：自CD4^＋T细胞受体转基因（TCR-Tg）小鼠脾和淋巴结分离CD4^＋T细胞,体外利用CFSE进行标记,然后被动输给相同基因的正常小鼠.经OVA、OVA＋IL-12或OVA＋CpG免疫后,观察抗原特异性CD4^＋T细胞的组织分布,IFN-γ的表达以及与细胞分裂之间的关系.结果：未经OVA抗原免疫的小鼠,抗原特异性CD4^＋T细胞未见有增殖反应.当经OVA抗原免疫后,可见脾和肺组织中细胞增殖;IFN-γ＋细胞在脾脏、淋巴结和肺组织表达的阳性率很低,其范围为0.93%～2.17%.当经OVA＋IL-12免疫后,IL-12促进IFN-γ的表达,阳性率为4.53%～26.79%;而经OVA＋CpG免疫后,CpG只促进淋巴结中IFN-γ的表达（3.84%）.IFN-γ表达的细胞主要为分裂3～5次的细胞.结论：IL-12和CpG作为疫苗佐剂均可促进IFN-γ产生,促进细胞免疫应答.     

Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb抑制由IL-23诱导PBMC IFN-γ的产生

目的：探讨重组人白介素23（IL-23）诱导正常人PBMC IFN-γ的产生，细胞亚群和调节因素。方法：正常人PBMC在不同条件下与IL-23进行培养，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪，分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的细胞亚群。结果：IL-23呈剂量依赖性诱导PBMC IFN-γ产生，并可与IL-2协同诱导IFN-γ的产生。细胞亚群分析的结果表明，IL-23诱导高表达CD56^＊NK细胞产生IFN-γ，对CD4^＊和CD8^＊T细胞无明显作用。Th2细胞因子和抗IL-12受体β1 mAb（IL-12Rβ1）抑制IL-23诱导IFN-γ产生。结论：IL-23可直接作用于CD3^＊CD56^＊NK细胞，诱导产生IFN-γ。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制IL-23诱导IFN-γ产生，提示可以用于由IL-23引起自身免疫病的治疗。     

癫痫患者IFN-r、T细胞亚群及HLA-DR的检测

本文对28例癫痫患者的外周血单个核细胞(PBMCS)进行培养,测定了诱生的IFN-γ水平,同时检测其中17例的T细胞亚群和HLA-DR抗原,对比其相关性,并与对照组比较.结果表明癫痫患者的IFN-γ诱生能力增强,且与病因、病程、脑电图、类型、药物无关;CD8细胞显著升高,CD4/CD8显著低于对照组;HLA-DR抗原异常表达;IFN-γ与HLA-DR之间呈显著正相关,IFN-γ与CD8细胞之间无相关性,提示癫痫患者体内细胞免疫调节网络失衡,活化的淋巴细胞及其产生高水平的IFN-γ通过多种机制参与癫痫的病理过程,进一步从免疫细胞和免疫分子调节水平探讨了癫痫的免疫学发病机制.     

DV2 NGC株感染BALB/C小鼠后IL-4、IFN-γ产生动态的研究

目的 :观察 2型登革病毒NGC株感染BALB C小鼠后其IL 4、IFN γ产生动态 ,研究登革病毒感染的免疫机制。方法 :用不同含量的DV2NGC株经皮下多点注射 ,间接ELISA法测定感染后不同时间各组小鼠血浆IL 4、IFN γ含量。结果 :DV2NGC株感染小鼠产生IL 4和IFN γ动态不同。初次感染早期 ,IL 4水平明显升高 ,而IFN γ处于较低水平 ;再次感染后第 1天 ,IL 4水平达最高峰 ( 4 2 94 6 6 8± 349 0 38pg ml) ,IFN γ则于第 4天和第 11天达较高水平 ,两者的产生彼消此长 ,且产生动态与感染病毒量有关。结论 :DV2NGC株感染早期 ,体液免疫和细胞免疫相互影响 ,体液免疫占主导作用 ,为Th2应答优势。但在登革热感染后期 ,细胞免疫一定程度抑制Th2应答 ,使病情好转     

mTOR调节CD4~+T细胞亚群分化及功能的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)属于磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员,是一种非典型丝氨酸/苏氨酸激酶。mTOR可整合来自营养、能量、生长因子和环境压力对细胞的刺激信号,调节下游蛋白p70S6K和4E-BP1活性而影响细胞生长。CD4+T细胞是一群具有重要免疫调节功能的淋巴细胞,其中不同亚群在机体免疫应答中的作用存在明显差异。近来研究证实,mTOR信号在CD4+T细胞亚群分化发育及功能活性中发挥重要的调节作用。     

灵芝多糖通过上调STAT4促进人外周血淋巴细胞中Th1细胞的分化

目的 探讨灵芝多糖(GLP)对外周血淋巴细胞免疫分群的影响及其作用机制.方法 取肿瘤患者和正常人的外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC)后,用不同剂量的GLP(10 ng/ml、50ng/ml和100 ng/ml)刺激后,用流式细胞仪检测DC细胞表面分子(HLA-DR、CD83和CD11c)、Th1细胞、Th2细胞和NK(CD3-CD56+)细胞数;并进一步用免疫磁珠分选出正常人外周血CD4+ Th细胞后用不同浓度GLP刺激24h后,荧光实时定量Q-PCR检测Th1和Th2细胞因子的表达水平,Westernblot分析Th1分化相关的转录因子水平.结果 灵芝多糖可以在体外呈浓度依赖性增加外周血中Th1细胞亚群和DC共刺激分子的表达(P＜0.01),并且增加STAT4的表达和IL-12、IFN-γ和TNF-α的mRNA的表达水平(P＜0.01).结论 灵芝多糖可能通过增加Th细胞STAT4的表达水平,促进其向Th1细胞分化,并增加Th1的分泌细胞因子.     

IL-4、IL-10和抗IL-12受体β1 mAb抑制IL-23诱导正常人记忆T细胞 IFN-γ产生

目的 探讨重组人白介素23（IL-23）是否能够诱导正常人T细胞IFN-γ的产生,作用的靶细胞亚群和调节因素。方法 正常人PBMC在抗CD3（anti-CD3）单克隆抗体或anti-CD3和抗CD28（anti-CD28）单克隆抗体刺激的条件下与IL-23进行培养,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IFN-γ的水平;同时采用流式细胞仪,在单个细胞水平上分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的T细胞亚群。结果 在未经任何刺激的情况下,PBMC产生很低或不产生IFN-γ。IL-23呈剂量依赖方式促进由anti-CD3活化的PBMC IFN-γ产生。细胞亚群分析的结果表明,IL-23诱导记忆CD4^＋和CD8^＋T细胞表达IFN-γ,对活化的CD4^＋T细胞作用较为明显。Th2细胞因子（IL-4、IL-10）和抗IL-12受体β1 mAb（IL-12Rβ1）抑制IL-23诱导T细胞IFN-γ产生。结论 IL-23促进活化的记忆CD4^＋和CD8^＋T细胞IFN-γ的产生。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制由IL-23诱导IFN-γ产生,提示这些细胞因子和抗体对IL-23引起的自身免疫病具有拮抗作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生IL-18、IL-4和IFN-γ的水平

为了研究细胞因子在慢性乙型肝炎中的表达水平变化及诱生活性 ,检测不同临床类型慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ )ＩＬ 18、ＩＬ 4及ＩＦＮ γ的水平并对其意义作初步探讨。1　资料与方法1 1　资料　选择临床确诊的 10 5例慢性乙型肝炎患者 ,分为三组 ,39例轻度组 ,37例中度组 ,2 9例重度组。正常对照组 32例来自健康志愿者。1 2　方法　取研究对象抗凝血 ,常规分离ＰＢＭＣ。调整ＰＢＭＣ浓度 ,一组加入脂多糖 (ＬＰＳ为Ｓｉｇｍａ公司产品 ) ,终浓度为 1μｇ/ｍｌ;另一组不加ＬＰＳ ,调整细胞悬液浓度为10 6/ｍｌ。置入 37℃…     

伤寒沙门氏菌诱导不同分化和活化状态的THP-1细胞产生TNF-α和IL-12的研究

为探讨伤寒沙门氏菌诱导宿主细胞产生细胞因子,以及细胞因子在宿主防御伤寒沙门氏菌感染中的调节作用,我们应用人类单核白血病细胞系—THP1细胞,对伤寒沙门氏菌诱导不同分化和活化状态的THP1细胞产生TNFα和IL12进行了研究。结果表明,伤寒沙门氏菌不能诱导THP1细胞产生TNFα,但可诱导PMA分化的THP1细胞产生TNFα和IL12;TNFγ既可增强伤寒沙门氏菌诱导THP1细胞产生IL12,又可增强伤寒沙门氏菌诱导的PMA分化的THP1细胞产生TNFα和IL12。以上结果提示,TNFα的产生可能与单核细胞的分化状态有关;TNFα和IL12的产生可能存在着不同的诱导机制;IFNγ对TNFα和IL12的产生具有调节作用。