T细胞疫苗对HCV的清除作用

1 材料和方法 1.1 材料 雌性BALB/c小鼠(H-2d) 5～6 wk龄; P815细胞(H-2d,仅表达MHC Ⅰ类抗原,不表达MHCⅡ类抗原);SP2/0(H-2d)细胞;表达丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白的质粒载体pcDNA-C、pcDNA-CE1、pcDNA-CE1E2[1];腺病毒表达载体pAd.HCV-C、pAd.HCV-CE1、pAd.HCV-CE1E2[2];Na51CrO4;抗CD8 单克隆抗体;小鼠抗HCV C单克隆抗体;重组鼠源性IL-2;2-巯基乙醇等.     

T细胞疫苗的作用及其机理

Ｔ细胞疫苗（Ｔ Ｃｅｌｌ Ｖａｃｃｉｎｅ， ＴＣＶ）是指用化学或物理方法灭活的致病性Ｔ细胞。其失去致病能力，但保持了活化致病性Ｔ细胞的免疫特征。研究证明，把引起自身免疫性疾病的自身反应性Ｔ细胞或导致同种移植排斥反应的同种反应性Ｔ细胞制备成ＴＣＶ，免疫动物后能够诱导机体产生针对致病性Ｔ细胞的免疫应答。可以消除或减轻这些细胞的致病作用或反应能力，表现为对自身免疫性疾病的防治作用和诱导同种移植物质延长存活。对ＴＣＶ的研究国内外文献主要集中在自身免疫性疾病和同种移植排斥反应这两方面，本文将围绕着这两方面对…     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

免疫共刺激分子增强自噬小体疫苗诱导的T细胞应答

自噬小体疫苗DRibble被证实可以有效诱导小鼠和人T细胞应答,为了进一步增强DRibble疫苗诱导人T细胞应答的能力,本研究将免疫共刺激分子OX40、CD80和对照质粒分别转染至表达CMV pp65蛋白的LT3-pp65细胞系中,制备3种类型的DRibble疫苗为:Ctrl/pp65 DRibble、OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble。通过ELISA法检测不同DRibble疫苗诱导树突状细胞表达IL-12的水平,结果显示,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导树突状细胞表达IL-12的水平显著高于Ctrl/pp65 DRibble。进一步将3种DRibble疫苗分别刺激树突状细胞后与扩增的CMV特异性T细胞共培养,通过流式细胞术检测表达IFN-γ的T细胞占总T细胞的百分比。实验结果显示,与Ctrl/pp65 DRibble相比,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导CD8⁺ T细胞表达IFN-γ的能力显著增高,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导CD4⁺ T细胞表达IFN-γ的水平也显著高于Ctrl/pp65 DRibble。实验证明免疫共刺激分子OX40和CD80修饰均可以加强DRibble疫苗体外诱导人T细胞应答的能力。     

记忆性T细胞和HIV疫苗

HIV疫苗被认为是预防艾滋病的最有效工具。以前研制的HIV疫苗，大多数能诱导机体产生记忆性B淋巴细胞和持久的抗体，但并不能保护机体免受HIV的感染。记忆性T细胞的研究给研究HIV疫苗提供了新思路。本文着重描述了记忆性T细胞的分群、分化、形成和维持的一般规律及其在HIV疫苗研制中的意义。     

T辅助细胞在疫苗研制中的作用

发展感染性疾病疫苗之关键挑战在于利用确定的抗原以刺激产生能引起保护作用的合适的免疫反应。肽类疫苗的运用得到了极大的关注，其意义在于，已知不同的多表位构成单一结构以诱导出所希望的免疫反应所表现出的灵活性。这一般比利用减毒的活疫苗要安全并且相对而言比制造亚单位疫苗要容易。然而，多肽疫苗的发展面临巨大挑战。这一方法在诱导遗传背景复杂的人群免疫反应方面受到限制，这与主要组织相溶性复合物(MHC)多态性有关。因同样的理由，肽类免疫应答常因缺乏适当的辅助T淋巴细胞(HIL)而引导出不充分的细胞毒素T淋巴细胞(CTL)和抗体反应。另一个运用线性肽链结构的可能缺点是：为了引导出合适抗体反应，表面免疫球蛋白受体簇对于激活静息的B细胞就成为必须因素。由WHC多肽性引起的问题可由运用不加区别的T细胞表位来解决。从麻疹病毒F蛋白(氨基酸288到302)中得到的不加区别的T细胞表位和鼠的确定结合在多种MHC分子上的辅助T细胞表位(v1EB，aa191-209)已被定性并且被用于能极大激发免疫应答的结构中，以克服单一限制型免疫应答的缺陷。合成的，非自然Pan DR表位(PADRE)具有退化的结合几种通常HLA—DR的能力，能以绝对效价和抗体反应质量两种形式来增强激发短肽链的免疫应答。另外，一些所谓的从流感病毒血凝素(HA)来的“不加区别的”T细胞表位，恶性疟疟原虫红细胞前期抗原和分枝杆菌蛋白被报道能激发广泛的免疫应答。为了不加区别地结合于几种同型和同种异型的MHCⅡ类分子，这些肽类应显示出部重叠MHC结合形式或应利用保存于配体中的固定位点和应缺失等位基因特异性固定残基，以防止结合于其它Ⅱ类分子。了解MHCⅡ类分子对肽链的不加区别及特异性识别的生物物理学基础将为在疫苗设计中突破遗传限制的策略提供分子水平的依据。     

T细胞疫苗在临床肾移植中的应用

目的 探讨T细胞疫苗(TCV)的抗排斥作用及其在临床肾移植中应用的可行性。方法 采取经供者抗原(外周血白细胞1致敏的肾移植受者的淋巴细胞在体外经过活化、扩增和灭活，制备T淋巴细胞疫苗，然后将其回注于自身，观察排斥反应发生情况。结果 6例患者中，1例患者在输注TCV时出现发热反应。6例患者均未观察到急性排斥反应的发生．淋巴细胞毒及混合淋巴细胞反应在注射TCV前后无明显变化，PHA刺激的淋巴细胞增殖反应在注射TCV后得到增强。结论 T细胞疫苗应用于临床器官移植防治排斥反应，无明显副作用，在技术路线上是可行的。     

T细胞疫苗免疫诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用探讨

目的　探讨供体抗原特异性T细胞疫苗诱导大鼠肝移植免疫耐受的作用。方法　分别用LOU/C大鼠脾细胞和LEW大鼠脾细胞免疫BN大鼠 ,获取被免疫BN大鼠的脾细胞制备成针对LOU/C大鼠的T细胞疫苗 (LCTCV)和针对LEW大鼠的T细胞疫苗 (LTCV)。分别用制备的T细胞疫苗免疫正常的BN大鼠 (0 .2ml/次 ,1次 /周 ,连续 3次 ) ,于第 3次免疫后第 5天以被疫苗免疫BN大鼠作为受体 ,以LOU/C大鼠作为供体进行原位肝移植 ,设单纯移植组作为对照。观察移植后大鼠的平均存活时间 (MST) ,并对肝移植物进行组织病理学观察 ;于移植后第 7天以受体BN大鼠的脾细胞作为反应细胞 ,以LOU/C大鼠的脾细胞作为刺激细胞进行单向混合淋巴细胞反应 (MLR)。结果　单纯移植组MST为 (8.4 3± 1.99)d ,　LTCV免疫组为 (11.2 9± 1.98)d ,与单纯移植组比较P <0 .0 5 ,LCTCV免疫组为 (17.4 3± 4 .12 )d ,与LTCV免疫组比较P <0 .0 1;观察移植后第 7天组织病理学改变 :单纯移植组呈明显的急性排斥反应病理征象 ,　LTCV免疫组仅出现轻度的炎性细胞浸润和细胞水肿 ,　LCTCV免疫组肝移植物结构基本正常 ,未发现明显的病理损害 ;MLR结果表明 :单纯移植组每分钟脉冲数值为(16 0 0 2± 2 330 ) /min、在LTCV免疫组为 (10 0 2 2± 1348) /min ;比单纯移植组明显     

T细胞疫苗在自身免疫性疾病中的应用

自身免疫性疾病的发生与体内自身反应性T细胞异常活化有关。T细胞疫苗是治疗自身免疫性疾病的一种新方法。用亚致病量的自身反应性T细胞接种自身免疫病患者,可减轻自身免疫反应,这可能是通过激活抗克隆型T细胞以抑制患者的自身反应性T细胞实现的。T细胞疫苗在许多动物实验及临床应用证明,是可行有效及安全的。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞免疫抑制及其在疫苗免疫保护中作用的研究进展

调节性T细胞(Treg)通过高表达CD25分子在免疫应答过程中发挥免疫抑制功能,其功能是通过下调自身免疫应答诱导自身免疫耐受和自身免疫性疾病的发生。正常情况下Treg与辅助性T细胞17互相拮抗,保持机体平衡。在感染性疾病和自身免疫性疾病中,通过增加Treg可减缓病情。通过去除Treg联合疫苗免疫的策略,有助于提高抗感染和抗肿瘤的疗效。因此,在疫苗免疫保护中,对Treg免疫抑制功能的研究能够为研制新型疫苗奠定理论基础。     

地塞米松对小鼠免疫系统的抑制作用

目的研究地塞米松对小鼠免疫系统的抑制作用。方法取7—8周龄昆明种小鼠,腹腔注射地塞米松,分别于注射后5、10、15、24和36h时间点取胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结;对照组小鼠腹腔注射生理盐水（即0h组）,HE染色。结果地塞米松组胸腺中凋亡细胞和凋亡小体数量多于对照组;脾脏和淋巴结内亦见凋亡细胞,但较胸腺内少;15h时间点凋亡细胞最多。结论地塞米松可引起胸腺、脾脏和淋巴结细胞的凋亡,对免疫系统有明显的抑制作用。     

Smad4对人胰腺癌细胞HS766T生长抑制的研究

目的 探讨Smad4基因在人胰腺癌细胞中的肿瘤抑制作用。方法 应用分子克隆技术构建Smad4真核表达载体，然后用脂质体法将其导入到Smad4同源缺失的人胰腺癌细胞HS766T中，经G418筛选获得可稳定表达Smad4的人胰腺癌细胞克隆，用细胞计数和噻唑蓝(MTT)法观察细胞生长速度及增值率，流式细胞仪(FCM)检测Smad4表达、细胞凋亡及细胞周期情况。结果 获得了Smad4真核表达质粒pcDNA3．1—Smad4。Smad4导人人胰腺癌HS766T细胞后，肿瘤细胞增值能力明显受到抑制、生长速率显著下降，并出现细胞周期G1期阻滞。结论 Smad4基因具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用，可作为胰腺癌基因治疗的靶基因。     

胸腺肽增强狂犬病疫苗免疫效果的研究

目的　探索胸腺肽作为人用纯化Vero -细胞狂犬病疫苗佐剂的可能性。　方法　分为单针和多针狂犬疫苗免疫方案。单针免疫是用狂犬疫苗 1支加胸腺肽 1针免疫 ;多针免疫按常规五针免疫程序 (即 0、3、7、14、2 8d各注射1针 ) ,加胸腺肽组按三针免疫程序 (即 0、7、2 8d各注射 1针 ) ,实验小白鼠每只均以狂犬病疫苗 0 .2ml与胸腺肽混合后肌肉注射。　结果　单针免疫加入胸腺肽 ( 2mg/只 )后抗体效价高且抗体产生时间早 ,抗体水平显著高于疫苗组 (P <0 .0 1)。而且加入胸腺肽 ( 6mg/只 )后免疫三针可达到五针常规疫苗免疫效果。　结论　胸腺肽作为人用纯化Vero -细胞狂犬病疫苗的佐剂可减少免疫次数。     

狂犬病疫苗细胞免疫作用研究

目的:观察狂犬病暴露后接种狂犬疫苗对机体的细胞免疫作用。方法:狂犬病暴露者接种狂犬病疫苗后,检测狂犬病毒抗体的同时,运用淋巴细胞转化试验检测自发淋巴细胞转化率和狂犬病疫苗剌激后的狂犬病毒淋巴细胞转化率,以后者减前者计算出狂犬病毒特异性淋巴细胞转化率。结果:狂犬病疫苗接种后,抗体效价达到>1∶5的100例中,76例同时产生细胞免疫力(即狂犬病毒特异性淋巴细胞转化率>5%);而抗体效价等于1∶5的4例和未产生抗体的35例中,均未产生细胞免疫力。结论:狂犬病暴露者接种狂犬病疫苗后,并非都能同时产生体液和细胞免疫力,不能产生细胞免疫力者,其总体细胞免疫功能亦偏低。     

RON变异体RONA1-70对结肠癌细胞株HT29的抑制作用

目的研究受体型酪氨酸激酶RON的剪切变异体△170对结肠癌细胞株HT29生长和移动浸润能力的抑制作用。方法HT29细胞转染质粒pcDNA3．1-RON△170,建立稳定表达RON△170的HT29-RONA170细胞株;免疫沉淀法检测细胞RON的酪氨酸磷酸化;软琼脂培养法观察RON△170对HT29细胞生长能力的作用;体外跨室趋化运动实验检测RONA170对HT29细胞移动浸润能力的作用。结果成功建立HT29-RONA170细胞株,流式细胞仪胞膜蛋白检测法证明其稳定表达RONA170蛋白;免疫沉淀试验结果显示RONA170能抑制HT29的RON酪氨酸磷酸化;软琼脂生长实验示转染组细胞生长克隆数为33．0±6．0,而未转染组和载体对照组分别为55．7±65和49．3±87（P〈0．01）;体外跨室趋化运动实验结果示转染组穿膜细胞数为231．5±27．6,而未转染组和载体对照组分别为3845±23．3和360．0±156（P〈0.01）。结论受体型酪氨酸激酶RON的变异体RONA170可抑制HT29细胞生长,并显著抑制其移动浸润能力,具有显性抑制变异体特性。     

苦参素对人胃癌细胞系MGC-803增殖的抑制作用

目的:观察苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用.方法:人胃癌细胞系MGC-803接种培养24 h后,实验组分别加入不同浓度苦参素(0.25 g/L、0.5 g/L、1g/L、2g/L、4 g/L),阳性对照组与阴性对照组分别加入氟尿嘧啶(2g/L)和培养液,继续培养12 h,24 h,36 h,48 h,采用MTT法测定苦参素对MGC-803细胞的增殖抑制情况.判定苦参素的剂量与MGC-803细胞增殖活性间的关系,计算细胞抑制率和群体倍增时间.结果:苦参素在0.25～4 g/L范围内,对MGC-803细胞的增殖活性具有抑制作用,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.001),且该作用随剂量增加而增加.与阴性对照组比较,阳性对照组和实验组细胞群体倍增时间增加.结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有明显的增殖抑制作用,且具有时间、剂量效应关系.     

黄芪对肝纤维化的防治作用

目的：观察黄芪的抗肝纤维化作用,初步探讨黄芪抗肝纤维化的机制。方法：设立正常对照组、模型组和黄芪处理组,以四氯化碳（CCl4）皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,黄芪处理组在造模的同时给予皮下注射黄芪注射液。常规HE染色观察肝脏病变,天狼猩红胶原染色、肝组织羟脯氨酸（HYP）含量测定观察肝纤维化程度;产色基质偶氮法鲎试剂定量测定血浆内毒素,赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）;TBA法检测肝组织丙二醛（MDA）水平。结果：黄芪处理组与模型组比较,①肝脏的损伤性改变有所减轻,肝组织HYP及肝纤维化指数（FI）明显降低;②血浆内毒素含量、ALT及肝组织MDA均有不同程度的降低。结论：黄芪可减缓肠源性内毒素血症,可能为防治肝纤维化的作用机制之一。     

572例入园、托儿童乙肝疫苗免疫效果分析

目的了解入园、托儿童乙肝表面抗原携带情况和乙肝疫苗免疫效果,为低龄儿童的乙肝防治提供参考依据。方法运用双抗原夹心时间分辨免疫荧光分析法（IFMA法）测定样本HBsAg和HBsAb浓度值,应用统计软件SAS进行数据分析。结果乙肝表面抗原阳性率为0.69%;乙肝表面抗体阳性率为68.53%,男女差异无统计学意义。随年龄增长;儿童抗-HBs滴度和抗-HBs阳性率下降（P〈0.01）。结论乙肝疫苗免疫效果随免疫年限的增长而渐弱,无性别差异。接种乙肝疫苗后定期应检验接种效果,以便及时加强免疫。