重组人粒细胞集落刺激因子干预后自体骨髓移植对骨折愈合的影响

背景：自体骨髓经皮移植促进骨折愈合已经成为临床一种治疗手段,其中骨髓间充质干细胞在局部微环境下所起到的作用已经得到共识。但是如何提高其在移植骨髓中的含量仍是目前面临的难题。已经有研究报道重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)可动员外周骨髓间充质干细胞快速增殖。 目的：探讨rhG-CSF干预的自体骨髓移植对兔桡骨骨折愈合的促进作用。 方法：制备桡骨中段3 mm宽骨折模型白兔56只,随机分为4组,每组14只。术后1 h,rhG-CSF组,自体骨髓组与PBS对照组均在白兔背部皮下注射rhG-CSF,1次/d,连续5 d。模型组皮下注射相应体积的生理盐水。术后5 d,自体骨髓组抽取自体骨髓经皮回植骨折部位,PBS对照组在骨折处注射相应体积的生理盐水。术后14,28 d取材进行影像学、组织学、组织形态计量学检测与分析。 结果与结论：rhG-CSF,自体骨髓,PBS对照组新生血管、骨小梁形成、4种骨痂记分、外骨痂厚度均优于模型组,尤以自体骨髓组效果最显著(P < 0.01或P < 0.05)。说明rhG-CSF干预能够促进骨折愈合,结合自体骨髓移植促进骨折愈合的效果更佳。     

自体骨髓来源成骨细胞移植治疗骨折延迟愈合

观察自体成骨细胞培养后移植治疗骨折延迟愈合及不愈合的可行性。选择2006-04/2007-10本科收治的骨折患者12例，男8例，女4例，骨折延迟愈合9例，骨折不愈合3例；胫骨4例，股骨7例，指骨1例。抽取患者自体红骨髓，体外诱导及培养成骨细胞，在X射线透视下定位穿刺将细胞注射至骨折断端局部，定期复查X射线平片，观察骨折愈合情况及副反应。12例患者中11例得到随访。4例治愈，平均愈合时间为成骨细胞移植后6.8个月；6例有效，有效率90.9%；1例无效。移植后未出现注射部位红、肿、热、痛等感染现象。     

经皮骨膜下注射成骨细胞治疗骨折延迟愈合与骨不连26例

26例患者中骨折延迟愈合14例，骨不连12例，均行骨膜下及骨折间隙注射成骨细胞治疗。从患者自身髂后上棘抽取骨髓组织，经体外诱导、培养、扩增为成骨细胞，按无菌操作术在X射线定位下于骨折延迟愈合或骨不连病变部位骨膜下及骨折间隙注射浓度为1×105 cells/mL的成骨细胞5~8 mL，注射后4，6，10，14周定期摄X射线片观察病变部位骨痂生长情况。所有病例随访3~12个月，平均5.3个月。复查X射线片见4周有骨痂形成，6周骨痂包绕骨折断端，10周骨折线模糊，14周骨折线消失。所有患者骨折均愈合，平均愈合时间为12.1周。提示经皮骨膜下注射成骨细胞治疗骨折延迟愈合与骨不连是一种有效的修复方法。     

自体骨髓移植复合人工骨治疗骨缺损

背景：到目前为止,国内人工骨联合自体骨髓移植治疗新鲜骨折、骨缺损方面的基础与临床研究尚未见报道。 目的：分析自体骨髓移植复合人工骨修复四肢粉碎性骨折骨缺损的作用途径。 方法：42例四肢骨缺损患者按治疗方法分为3组,均采用内固定方法修复骨折骨缺损。复合组采用自体骨髓移植复合人工骨,人工骨移植组仅作单纯的人工骨移植,自体骨髓移植组仅将单纯的自体骨髓注射入骨缺损处。所有患者均行骨特异性碱性磷酸酶活性检测和影像学随访,观察骨痂形成及骨折愈合情况。 结果与结论：在内固定后第3,4,6周,复合组伤肢骨痂形成率、骨特异性碱性磷酸酶活性均显著高于人工骨移植组及自体骨髓移植组(P < 0.01)。提示自体骨髓移植复合人工骨较单纯的人工骨移植或自体骨髓移植更能促进早期骨痂反应,加速骨折后骨缺损愈合,缩短骨愈合时间及住院时间。     

体外冲击波治疗骨折延迟愈合及骨不连：动物实验及临床病例随访

背景：体外冲击波技术是利用液电能量转换及传递原理,造成不同密度组织之间产生能量梯度差及扭拉力,从而达到治疗目的,它用于治疗泌尿系、消化系结石已成为十分成熟的技术。而将其用于骨组织,治疗骨不连、骨折延迟愈合的报道很少。 目的：通过动物实验及临床验证试验,观察体外冲击波治疗骨不连及骨折延迟愈合的疗效果。 方法：采用冲击波通过体外聚焦作用于骨组织,了解体外冲击波对骨膜组织代谢的影响,通过动物实验,观察骨膜组织体外培养H3-TdR掺入放射性自显影结果。临床验证部分通过体外冲击波治疗骨不连16例及骨折延迟愈合16例,观察其冲击治疗后的随访结果。 结果与结论：动物实验结果表明,冲击1,2周实验侧骨膜组织H3-TdR标记率明显高于对照侧(P < 0.05~0.01),说明实验侧骨膜成骨有丝分裂明显增强,骨膜成骨作用增强。临床验证结果表明,治疗后16周,16例延迟愈合均愈合;16例骨不连患者中13例愈合,另3例也有明显骨痂形成。所有病例冲击治疗后均无不良事件发生。提示冲击波治疗各种类型的骨不连及骨折延迟愈合效果可靠。     

自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩34例分析

目的：观察自体骨髓间质干细胞移植治疗多系统萎缩患者的临床疗效和安全性。方法选择2010-01-2012-07江西省人民医院神经内科收治的多系统萎缩患者34例,其中橄榄脑桥小脑萎缩26例,纹状体黑质变性8例。患者在粒细胞集落刺激因子进行骨髓干细胞动员后,采集骨髓液并分离骨髓间质干细胞,通过蛛网膜下腔移植治疗,骨髓间质干细胞数量（5.0～10.0）×107,1次/周,共治疗2次。采用世界神经病联合会国际合作共济失调评分量表（IC A RS ）、统一多系统萎缩评估量表（UMSARS）及改良的Barthel指数（MBI）为指标评估疗效,并观察患者的不良反应。结果34例患者均进入结果分析,中途无脱落。患者移植1、3个月后ICARS、UMSARS与入院时比较评分降低,MBI升高（均 P＜0.05）。患者移植12个月后ICARS、UMSARS、MBI与入院时比较差异无统计学意义（均 P＞0.05）。其中术后7例低热和4例低颅压性头痛,对症处理后症状完全消失。结论自体骨髓干细胞移植不良反应轻,可一定程度改善多系统萎缩患者的临床症状,提高患者生活质量,但疗效不持久。     

自体骨髓干细胞移植治疗严重慢性下肢缺血性疾病15例★

严重慢性下肢缺血患者其下肢远端没有良好的流出道，故无法接受手术搭桥。植入自体骨髓干细胞移植后缺血下肢可形成新生血管，建立侧支循环，改善肢体血供，以达到细胞性血管搭桥目的。选择2006-06/2007-02沈阳市第七人民医院内分泌科住院确诊的严重慢性下肢缺血性疾病患者15例，患肢均有不同程度的静息痛、缺血性溃疡或趾端坏疽，踝臂指数0~0.5，CTA及彩超证明为周围动脉闭塞性病变，病变远端流出道差，患者对本实验知情同意且自愿接受自体骨髓干细胞移植术，排除并发严重的心、肺、脑等脏器功能不全不能耐受手术者，实验经医院医学伦理委员会批准。于双髂后上棘穿刺采集自体骨髓血，每例采集骨髓血100~300 mL，羟乙基淀粉及Ficoll液分离，配置成干细胞混悬液50 mL，单个核细胞计数为（2.05~9.36）×108。椎管内麻醉，沿下肢动脉走行给予缺血下肢肌肉及足部局部注射移植自体骨髓干细胞混悬液，术后给予常规药物治疗。移植后12周患者肢体疼痛、患肢冷感明显减轻，皮肤温度升高，间歇跛行距离延长（t=-5.328~6.373，P < 0.01）；踝臂指数略微升高（P > 0.05）；肾功能不全者血肌酐略微降低（P > 0.05）。9例缺血性足溃疡患者的足部创面于术后3~12周基本愈合；2例趾端坏疽患者在干细胞移植术中进行坏疽部位截趾，术后4周完全愈合。术后均未出现异常症状或体征，随访6个月无不良反应发生。提示自体骨髓干细胞移植术能够增加严重慢性缺血患肢的血流灌注，明显改善肢体疼痛、冷感、间歇跛行等指标，且不会加重并发肾功能不全患者的肾功能损伤，安全有效。     

自体骨髓干细胞治疗肝硬化基础研究与临床应用现状*

背景：活体肝移植仍面临很多问题：如供体的匮乏、移植后的免疫排异反应及其高额的费用等,因此使其在临床上的开展受到限制。 目的：说明自体骨髓干细胞移植可以分化成熟肝细胞而替代受损的肝脏组织发挥功能,从而改善患者症状,提高患者生活质量。 方法：利用计算机在PubMed、CNKI、万方数据库和维普数据库中检索2000-01/2010-12关于自体骨髓干细胞移植相关文章,在标题和摘要中用“骨髓干细胞;自体骨髓干细胞移植;肝硬化”或“Bone marrow stem cell,autologous bone marrow stem cell,hepatic cirrhosis”为检索词进行检索。选择与骨髓干细胞移植相关的文章内容,同一领域文献选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到235篇文献,根据纳入标准选择20篇文章进行综述。 结果与结论：通过对自体骨髓干细胞移植从基础研究及临床研究方面的最新进展的了解,说明自体骨髓干细胞移植在对肝硬化的治疗方面前景广阔。     

骨密度与骨折合并颅脑损伤患者骨折愈合的评价

背景：颅脑损伤患者下肢骨折愈合过程中,骨折周围新生骨形成加速现象在临床上较为常见。这种快速形成的骨痂或异位骨化是否是颅脑损伤合并下肢骨折患者的常见并发症,至今仍有争论。 目的：利用骨密度检测来评估创伤性脑损伤对股骨干骨折愈合的影响。 方法：纳入创伤性脑损伤合并股骨干骨折患者和单纯股骨干骨折患者各25例,以切开复位后钢板螺钉内固定。术后第6,12周行X射线测量骨痂体积。术后1,3,5周利用双能X射线骨密度测定仪测定两组患者骨折区骨密度值。 结果与结论：单纯股骨干骨折患者术后第12周较第6周骨痂体积明显增加。合并颅脑损伤患者术后第6,12周骨痂体积均有明显增加,且大于单纯骨折组骨痂体积。在第1,3,5周时骨折区骨密度值逐渐增大,并且高于同时间点单纯骨折组骨折区骨密度值。说明创伤性脑损伤可增加股骨干骨折愈合时的骨痂体积,提高骨折区骨密度值,缩短骨折愈合时间。     

自体髂骨复合骨形态发生蛋白与自体髂骨移植治疗骨折不连接的比较

目的：对比观察自体髂骨复合骨形态发生蛋白移植及单纯自体髂骨移植两种方法治疗骨不连接的临床效果。 方法：骨不连接患者40例,男24例,女16 例,年龄19~56岁,随机分为两组,实验组20例,对照组20例。实验组行自体髂骨复合骨形态发生蛋白后移植于骨折端;对照组单纯行自体髂骨移植于骨折端。术后随访11~20个月。 结果：40例骨不连接患者均进入结果分析。术后X射线片显示所有骨折均获得愈合,实验组骨折临床愈合时间(10.0±3.0)周(8~16周),对照组骨折临床愈合时间(13.0±3.8)周(8~20周),两组比较差异有显著性意义(t=2.26,P < 0.05)。 结论：自体髂骨复合骨形态发生蛋白治疗骨不连接临床效果优于单纯自体髂骨移植,具有良好的成骨诱导活性,可缩短骨折愈合期,疗效安全、可靠,是治疗骨不连接较好的方法。     

外固定架联合经皮自体骨髓移植治疗四肢长骨骨不连32例

回顾性分析1998-10/2003-09潍坊市益都中心医院骨科收治的骨不连患者32例,作为实验组。其中男27例,女5例,年龄15~58岁。首先清理骨折端组织,畅通骨髓腔,然后应用单臂外固定架固定骨折,固定3周后行自体骨髓移植,应用骨穿针在X射线透视下定位穿针,自髂后上棘抽取红骨髓注入骨不连部位,20~30 mL/次,共3次,每次间隔2周。另选1993-08/1998-09潍坊市益都中心医院骨科收治的骨不连患者31例作为对照组,其中男23例,女8例,年龄17~68岁。应用常规方法切开植骨内固定治疗。对患者进行定期随访,观察骨愈合情况及并发症。复查时间分别为术后3,6,9,12个月。实验组32例患者中随访28例,骨不连愈合25例,愈合时间为3~9个月。对照组31例患者中随访27例,22例骨不连愈合,愈合时间为6~12月。在术后3个月,6个月和9个月时,两组患者骨不连的愈合率相比,差异有显著性意义(P < 0.05)。实验组1例发生针道感染,经换药后痊愈;2例患者发生螺纹针松动现象,消毒后再扭紧即可;无固定架断裂和骨筋膜室综合征发生;桡神经损伤1例,保守治疗恢复;骨髓穿刺及移植部位无感染、皮肤坏死和明显异位骨化发生。对照组4例患者发生切口感染,1例钢板断裂,1例桡神经损伤。提示外固定架联合经皮自体骨髓移植治疗骨不连与切开植骨内固定治疗骨不连相比,能加速骨不连的愈合,缩短愈合时间。     

经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死40例

选择南昌大学第二附属医院心内科2004-01/2006-12收治的急性前壁心肌梗死患者40例，经皮腔内冠状动脉成形术后立即将提取的骨髓单个核细胞群分3次缓慢注入左冠状动脉前降支，进行骨髓单个核细胞移植。应用超声心动图检测移植前、移植后5 d患者左心室舒张末径、左心室收缩末径和左心室射血分数。移植5 d后左心室舒张末径较移植前缩小(1.20±3.77) mm (P > 0.05)，左心室收缩末径较移植前缩小(4.50±4.52) mm (P < 0.01)，左心室射血分数较移植前提高(10.65±9.83)% (P < 0.01)。冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死能明显改善左心室收缩功能，短期疗效良好。     

Osteogenesis induced by autologous bone marrow cells transplant in the pediatric skull

Background and purpose The ability of cranial bone to repair defects of continuity is limited and it is mostly dependent on the age of the patient. In infancy and in early pediatric age, the scarce thickness of the calvarial bones and the need for a harmonic development of the child’s skull limit the application of most of the surgical procedures usually utilized in older patients. We tested the ability of mononucleated cells, derived from the patient’s bone marrow and transplanted on the site of the cranial bone defect, to increase the rate of mineralization of the autologous osteogenesis to obtain the complete restoration of the skull continuity.Method Four children, aged 26, 28, 37, and 79 months, respectively, affected by a stabilized and persistent cranial bone defect of posttraumatic or postsurgical origin, were treated. A sandwich-shaped shell, made of extrused absorbable polylactic copolymers material, was used to hold in place a freeze-dried mineralized collagen matrix associated with a nonceramic hydroxyapatite scaffold, where autologous bone marrow mononucleated cells were inseminated.Results In all patients, a rapid autologous bone osteogenesis was observed with a clear dimensional reduction of the bone defect few months after the autologous bone marrow cells seeding.Conclusions The preliminary results of this research suggest the use of autologous bone marrow cells to increase the autologous osteogenesis in early pediatric age in cases in which correction of skull bone defects is best realized with autologous bone.     

Immunohistochemistry analysis of bone marrow biopsies in multiple sclerosis patients undergoing autologous haematopoietic stem cells transplantation

Objective

Recently autologous haematopoietic stem cell transplantation (AHSCT) has been introduced for the treatment of severe forms of multiple sclerosis (MS). As little data are available on bone marrow (BM) of MS patients undergoing AHSCT, we investigated the morphological and phenotypic characteristics of MS BM.

Methods

BM biopsies of 14 MS patients screened for AHSCT and 10 control patients were evaluated to assess cellularity, morphology, immunological profile and bone marrow microenvironment. Immunohistochemistry analysis was performed to evaluate the expression of CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, CD45, MMP-9.

Results

8 out of 14 MS (57%) patients showed a reduction of age-related bone marrow cellularity, possibly due to previous immunosuppressive therapies. There were no differences in the T CD3+ lymphocyte expression rate amongst MS and the control patients, the CD4/CD8 ratio (2:1) was maintained as was the rate of B lymphocytes. We found an increased, although not significant, MMP-9 expression (9.2%) in the bone marrow of MS patients, when compared to the control patients (6.3%).

Conclusion

The BM of MS patients showed a reduced cellularity and CD45+ cells content in comparison to the controls. A slightly increased expression of MMP-9 was also shown, possibly confirming an involvement of this compartment in the pathogenesis of the disease.     

Intense T cell depletion followed by autologous bone marrow transplantation for severe multiple sclerosis

BACKGROUND: Certain stem cell transplantation procedures might slow down inflammatory pathology in multiple sclerosis (MS). AIMS: To halt disease progression in aggressive MS by a bone marrow transplantation (BMT) protocol aimed at maximum T cell suppression. METHODS: Autologous BMT was performed in 14 patients with rapid secondary progressive MS (median EDSS score at baseline, 6; median disease duration, five years). To accomplish rigorous T cell ablation, a strong conditioning protocol was chosen--cyclophosphamide, total body irradiation, and antithymocyte globulin. To minimise the possibility of reinfusing mature T cells in the graft, bone marrow, not peripheral blood, was used as the CD34+ stem cell source. RESULTS: Median follow up was 36 months (range, 7-36). Post-transplant haemopoietic recovery was successful in all patients. Early toxicity included Epstein-Barr virus related post-transplantation lymphoproliferative disorder. Longterm effects were development of antithyroid antibodies (three) and myelodysplastic syndrome (one). One patient died of progressive disease five years after transplantation. Treatment failure, defined by EDSS increase sustained for six months or more, was seen in nine patients and stabilisation or improvement in five. Other clinical parameters generally showed the same outcome. No gadolinium enhanced lesions were seen on post-treatment magnetic resonance imaging, in either cerebral or spinal cord scans. However, cerebrospinal fluid oligoclonal bands remained positive in most cases. CONCLUSIONS: This strong immunosuppressive regimen did not prevent clinical progression in patients with aggressive secondary MS. The lack of efficacy, together with some serious side effects, does not favour the use of similar rigorous T cell depleting protocols in the future.     

自体骨髓单核细胞移植对脑梗死的治疗作用

目的 观察自体骨髓单核细胞移植对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠脑梗死体积、血脑屏障破坏程度及行为学评分等的影响,评价骨髓单核细胞移植对脑梗死的治疗价值. 方法 将72只成年雄性SD大鼠按完全随机数字表法分为假手术组、模型组、生理盐水组及骨髓单核细胞移植组,后三组采用线栓法制作MCAO大鼠模型.采用梯度离心法分离大鼠股骨骨髓腔中的单核细胞,并通过流式细胞术检测CD45+细胞比例.将分离得到的自体骨髓单核细胞经颈静脉途径移植到骨髓单核细胞移植组大鼠体内,生理盐水组大鼠给予等体积的生理盐水注射.造模后72 h时伊文氏蓝染色及脑组织含水量检测显示血脑屏障的破坏情况,造模后1d、3d、7d时通过Zea-Longer评分评价大鼠神经功能变化,最后一次Zea-Longer评分结束后TTC染色检测大鼠脑梗死体积. 结果 流式细胞术检测发现骨髓单核细胞中CD45+细胞的比例为91.2％.脑梗死体积、伊文氏蓝含量及脑组织含水量在模型组与生理盐水组中均较高,且相互比较差异无统计学意义(P＞0.05);骨髓单核细胞移植组脑梗死体积、伊文氏蓝含量及脑组织含水量均明显下降,较模型组与生理盐水组差异均有统计学意义(P＜0.05).Zea-Longer评分显示,除假手术组外,其余大鼠均有不同程度的神经功能缺损;造模后7d时骨髓单核细胞移植组神经功能评分明显改善,与模型组及生理盐水组比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 骨髓单核细胞分离过程简单,利用其移植治疗脑梗死可以显著减轻脑损伤程度并促进神经功能恢复,对脑梗死具有很高的治疗价值.     

混合骨髓移植后过继免疫治疗小鼠白血病**☆

背景：急性白血病自体造血干细胞移植后复发率高,异基因造血干细胞移植后移植相关病死率高,混合造血干细胞移植及移植后过继免疫治疗有可能取长补短,提高疗效。 目的：观察自体骨髓混合H-2半相合异体骨髓移植后供体淋巴细胞输注+白细胞介素2治疗对小鼠白血病的疗效。 方法：将Balb/c小鼠经直线加速器照射3 Gy后分为白血病模型组、白血病模型照射组、混合移植组、自体骨髓移植组,均尾静脉注射5×105 K562(GFP+/NeoR+)或K562(GFP-/NeoR-)细胞。7 d后6 Gy照射,自体骨髓移植组移植自体骨髓细胞或联合白细胞介素2治疗;混合移植组移植小鼠自体骨髓细胞混合1/10的H-2半相合异体骨髓细胞后应用白细胞介素2或联合供体淋巴细胞输注治疗。4周后行小鼠外周血及骨髓细胞形态检查,外周血细胞亚群、GFP及NeoR基因测定,肝、脾匀浆细胞GFP和NeoR基因测定。 结果与结论：白血病模型组小鼠因骨髓造血功能衰竭于20 d内全部死亡,白血病模型照射组小鼠因造血功能衰竭于14 d内全部死亡;自体骨髓移植组、混合移植组均有多少不等小鼠无白血病存活超过28 d,且混合骨髓移植后及自体骨髓移植后应用白细胞介素2治疗可提高白血病小鼠长期无病生存率,在此基础上联合供体淋巴细胞输注可更进一步提高白血病小鼠长期无病生存率。