肼苯哒嗪对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231雌激素受体α去甲基化的影响

目的探讨肼苯哒嗪对雌激素受体（ER）α阴性人乳腺癌细胞株MDA—MB-231ERα基因启动子区CpG岛DNA甲基化的影响。方法体外细胞培养,按药物浓度分为4组：分别用0、5、10、20μmol／L的肼苯哒嗪作用ERa阴性人乳腺癌细胞株MDA—MB-231细胞96h;按药物作用时间分为4组：分别于0、72、96、120h10μmol／L肼苯哒嗪作用ERn阴性人乳腺癌细胞株MDA—MB-231细胞,倒置光学显微镜下观察肼苯哒嗪对细胞生长的影响。各组提取MDA—MB-231细胞总RNA,用RT-PCR及图像分析检测肼苯哒嗪对MDA—MB-231细胞ERamRNA表达的影响;提取MDA—MB-231细胞基因组DNA,纯化、修饰后用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测乳腺癌细胞株MDA-MB-231ERa基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态。结果与对照组比较,5、10、20μmol／L肼苯哒嗪组ER／β-actin光密度积分值比值均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）;72、96、120h10μmol／L肼苯哒嗪组ER／β-actin光密度积分值比值均明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。5μmol／L肼苯哒嗪作用120h后ERa基因呈部分去甲基化状态,而经10μmol／L肼苯哒嗪作用120h后的ERα基因呈完全去甲基化状态。结论肼苯哒嗪可以逆转ERα阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231ERα基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态,使沉默基因重新表达。     

肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞及RUNX-3基因的影响

目的:观察肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞增殖作用的影响,探讨肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞中抑癌基因RUNX-3的转录调节作用及其对细胞生长和凋亡的影响.方法:应用不同浓度(0,10,20,40,80,160μmol/L)的肼苯哒嗪,于不同作用时间(24,48,72,96 h)处理人大肠癌Lovo细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肼苯哒嗪作用下Lovo细胞的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用RT-PCR法检测肼苯哒嗪对RUNX-3mRNA表达的影响.结果:①不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞生存率差异有统计学意义(P<0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24-96 h)的细胞生存率无统计学意义(P>0.05);②RUNX-3 mRNA在大肠癌Lo-vo细胞中的表达随浓度的增加而增强.结论:肼苯哒嗪有抑制人大肠癌Lovo细胞生长的作用,抑制作用呈浓度依赖性;可以促进RUNX-3 mRNA的表达,从而促进大肠癌Lovo细胞的凋亡.     

APC基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的观察结肠腺瘤性息肉病（APC）基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的作用及临床意义。方法59例上皮性卵巢癌组织原发灶，32例相应的盆、腹腔转移灶，12例癌旁卵巢组织及30例正常卵巢组织，采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）法检测APC基因启动予区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆、腹腔转移灶中存在APC基因启动子区异常甲基化，发生率分别为32．2％、40．6％，显著高于正常卵巢组织（P〈0．01）。12例癌旁卵巢组织中1例检测到APC基因启动子区甲基化，30例正常卵巢组织未检测到。APC基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期（P〈0．05），在高分化癌中低于低分化癌（P〈0．05）。结论APC基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关，并可能与上皮性卵巢癌临床分期及分化程度有关。     

甲基多巴联合肼苯哒嗪治疗妊娠期高血压疾病的临床效果观察

目的 观察甲基多巴联合肼苯哒嗪治疗妊娠期高血压疾病的临床疗效.方法 对90例妊娠期高血压疾病孕妇的临床资料进行回顾性分析,按治疗方法不同将其分为对照组42例和观察组48例.对照组单纯给予肼苯哒嗪治疗,观察组在应用肼苯哒嗪基础上给予口服甲基多巴治疗,对比分析两组患者的临床疗效.结果 经治疗,观察组患者总有效率明显高于对照组(P＜0.05);同时观察组患者的自然分娩率也明显高于对照组(P＜0.05).结论 甲基多巴联合肼苯哒嗪控制妊娠期高血压疾病孕妇血压效果良好,副反应较小,值得临床推广.     

PCDH10基因甲基化与宫颈癌的研究进展

PCDH10基因是原钙粘蛋白细胞粘附分子家族的成员之一,是一种重要的抑癌基因.DNA甲基化是抑癌基因失活的机制,PCDH10基因甲基化及其在子宫颈癌癌变中的作用机制还不清楚.现对宫颈癌中PCDH10基因甲基化的相关研究内容进行综述.     

肼苯哒嗪联合硝酸异山梨酯对心力衰竭大鼠内皮功能及氧化应激水平的影响

 目的探讨肼苯哒嗪（HYD）联合硝酸异山梨酯（ISDN）对心力衰竭大鼠内皮功能及氧化应激水平的影响。方法利用阿霉素诱导大鼠心力衰竭模型,成模后分为安慰剂对照组（给予生理盐水）、培哚普利（2 mg·kg-1·d-1）+比索洛尔（5 mg·kg-1·d-1）组及培哚普利（2 mg·kg-1·d-1）+比索洛尔（5 mg·kg-1·d-1）+HYD（7.2 mg·kg-1·d-1）+ISDN（6 mg·kg-1·d-1）组。药物干预6 周后,取心肌组织测定心肌组织内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和内皮素1（ET-1）的表达,同时测定丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果HYD+ISDN并不能增加心肌组织eNOS 含量,对心肌组织内eNOS及ET-1 的表达均无显著响;HYD+ISDN 可显著降低心肌组织MDA含量,同时使心肌组织SOD 活性增高。结论HYD+ISDN 可改善心力衰竭大鼠体内氧化应激状态。     

APC基因甲基化与上消化道肿瘤发病风险关联的Meta分析

目的：探讨腺瘤性结肠息肉病（adenomatous polyposis coli,APC）基因甲基化与上消化道肿瘤发病风险的关联。方法：系统检索PubMed、Web of Science、Embase、CNKI等数据库,英文检索词为“APC”“methylation”“esophageal cancer/esophagus cancer”“gastric cancer/stomach cancer”,中文检索词为APC、甲基化、食管癌、胃癌,同时辅以人工检索参考文献。检索范围为2000年1月—2018年2月。应用固定效应模型或随机效应模型计算合并OR值及其95%CI。结果：入选研究共17项,病例组共1 201例,对照组共959例,数据表现为异质性。APC甲基化与上消化道肿瘤发病关联强度较高（OR=13.24,95%CI：6.42~27.33,P < 0.001）。同时APC甲基化与TNM分期也存在关联（OR=3.95,95%CI：1.46~10.66,P=0.007）。结论：APC基因甲基化与上消化道肿瘤发病关联程度明显,应用于上消化道肿瘤早期诊断价值较大。     

天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及APC基因去甲基化

目的:研究天花粉蛋白(TCS)抗宫颈癌作用机制。方法:MTT还原法检测TCS对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用,流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞周期及凋亡率的影响,MSP检测TCS作用前后APC基因启动子甲基化状态。结果:TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,有剂量依赖性;80 mg/LTCS处理HeLa细胞48 h后,APC基因启动子出现去甲基化。结论:TCS对HeLa细胞有明显抑制作用,抑制机理与将HeLa细胞阻滞于S期、诱导细胞凋亡及APC基因启动子出现去甲基化有关,TCS有良好的抗宫颈癌临床应用前景。     

紫杉醇对Caski细胞增殖及APC、DKK-3基因表达的影响

目的 研究紫杉醇对Caski细胞增殖及APC、DKK-3基因表达的影响。 方法 用MTT法、RT-PCR法及甲基化特异性PCR分别检测紫杉醇对人宫颈癌Caski细胞株增殖的影响、APC与DKK-3 mRNA 表达水平、APC与DKK-3启动子甲基化水平。 结果 ≥1 μmol/L紫杉醇能明显抑制人宫颈癌Caski细胞株的增殖 （P<0.05）;从5 μmol/L开始,随着紫杉醇给药剂量的增大,Caski细胞APC、DKK-3 mRNA表达水平明显增加 （P<0.05）,而Caski细胞APC 、DKK-3启动子甲基化水平显著降低 （P<0.05）。 结论 紫杉醇能呈剂量依赖性的抑制Caski 细胞的增殖并上调APC、DKK-3 mRNA的表达,这可能与其诱导APC、DKK-3启动子的去甲基化有关。     

APC基因在宫颈癌及其癌前病变中的表达及相关性

目的:探讨APC基因在HPV16感染的宫颈癌及其癌前病变中的表达情况及相关性.方法:将接受手术的33例宫颈癌患者和28例宫颈上皮内瘤变(CINⅢ)患者分为宫颈癌组和CINⅢ组,同期手术的31例子宫肌瘤或子宫腺肌症患者作为对照组;3组患者术前均行宫颈细胞凯普导流杂交人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA)检测HPV16,计算HPV16 DNA阳性表达率;RT-PCR及免疫组化方法检测APC mRNA及APC蛋白的表达,分析宫颈癌及CINⅢ组中HPV16 DNA阳性率与APC mRNA及蛋白表达的相关性.结果:宫颈癌组与CIN Ⅲ组的HPV16 DNA阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组APC mRNA及蛋白的阳性表达率低于照组,差异有统计学意义(P ＜0.05);CINⅢ组APC mRNA表达率与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);宫颈癌及CINⅢ组中HPV16 DNA阳性率与APC mRNA及蛋白的表达呈负相关性(r=-0.573,-0.616;r=-0.573,-0.654;P＜0.05).结论:APC基因与HPV16可能共同参与了宫颈由正常至CIN进而发展为宫鳞癌的恶性转变过程.     

Zebularine 调控卵巢癌细胞hMLH1基因再表达

 目的探讨去甲基化药物Zebularine（Zeb）对体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因甲基化状态的
影响及表达调控作用。方法应用不同浓度的Zeb（50 μmol/L,100 μmol/L,200 μmol/L）处理体外培养的卵巢癌细胞A2780/
cp70 后,甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）法检测用药前后细胞中hMLH1基因的甲基化状态,RT-PCR 法及
Western-blot 法检测用药前后细胞中hMLH1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果hMLH1基因在卵巢癌细胞A2780/cp70 中
呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性。经过Zeb 处理后,hMLH1基因呈去甲基化状态,其mRNA及蛋白重新表
达。结论异常甲基化是卵巢癌细胞A2780/cp70 hMLH1基因失活的原因,去甲基化药物Zeb 能使hMLH1基因去甲基化从而
调控其重新表达。     

5-Aza-CdR体外诱导人肺癌细胞株p16基因去甲基化

目的观察人肺癌细胞株H719p16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导H719细胞株高甲基化失活的pl6基因重新表达的可能性。方法MSP法检测体外培养的人肺癌细胞株p16基因启动子区甲基化状态,并应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人肺癌细胞株H719,MSP法检测用药后细胞中p16基因的甲基化状态,并用RT-PCR方法及Western Blot方法检测用药前后细胞中p16基因mRNA和蛋白水平变化。结果p16基因在人肺癌细胞株H719中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,并且其mRNA及蛋白恢复表达。结论启动子区异常甲基化是人肺癌细胞株p16基因失活的可能原因,5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态。     

APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达

目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.     

3种胃癌细胞株中GSTP1基因表达及其启动子区甲基化状态的研究

目的研究候选基因GSTP1在胃癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨胃癌细胞株GSTP1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot技术分别检测GSTP1在人胃癌细胞株MGC803、BGC823和SGC7901中的mRNA和蛋白表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)法检测启动子区域甲基化状态。分别用不同浓度的去甲基化药物5-氮杂胞苷处理GSTP1基因启动子区高甲基化状态细胞后,再检测GSTP1基因蛋白表达水平。结果人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中GSTP1 mRNA和蛋白呈阳性表达,MGC803中mRNA和蛋白呈阴性表达;BGC823和SGC7901细胞GSTP1基因启动子区域未发生甲基化,而MGC803细胞启动子区呈高甲基化状态;经5-氮杂胞苷药物干预后,MGC803细胞的GSTP1蛋白表达明显增强。结论胃癌MGC803细胞株中GSTP1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关。     

三氧化二砷对不同宫颈癌细胞株作用的实验研究

目的 研究不同浓度三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)在体外对宫颈鳞癌SiHa和宫颈腺癌Hela细胞株的生物学效应,初步探讨As2O3对宫颈癌细胞株增殖、凋亡的作用及其机制.方法 将不同浓度As2O3与宫颈癌Hela和SiHa细胞株共同培养,通过ATP生物发光法检测体外肿瘤细胞增值情况.采用 HE染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法进行凋亡检测,并用细胞免疫组织化学方法检测凋亡中相关基因Fas/FasL表达的变化.结果 ① As2O3能够有效抑制SiHa和Hela细胞株增殖(P＜0.05);②2.500 0 μmol/L和5.000 0 μmol/L浓度As2O3作用SiHa和Hela细胞株48 h可以观察到细胞出现典型的凋亡变化;③与对照组相比,2.500 0 μmol/L和5.000 0 μmol/L浓度的As2O3作用SiHa和Hela细胞株48 h后,细胞免疫组化显示Fas蛋白表达均明显上调(P<0.05),5.000 0 μmol/L浓度的As2O3诱导Hela细胞株凋亡过程同时伴FasL蛋白表达明显上调(P<0.05).结论 As2O3一定浓度范围内能够有效抑制两种宫颈癌细胞株增殖和诱导宫颈癌细胞凋亡;As2O3能诱导宫颈癌细胞发生凋亡,其机制与Fas基因的表达上调有关.     

人肺癌组织细胞中HIN-1基因甲基化分析

目的:HIN-1(High in normal-1)是新近鉴定的一个抑癌基因,在乳腺癌细胞中,HIN-1启动子区的高甲基化导致其表达沉默。本研究拟探讨肺癌组织和6种肺癌细胞株中抑癌基因HIN-1启动子区内的甲基化修饰水平。方法:甲基化特异性PCR(MSP)和Biosulfite(亚硫酸氢钠)测序法鉴定样品中HIN-1启动子内CpG甲基化状态,RT-PCR法检测5-aza-dc处理前后HIN-1在细胞内的表达水平。结果:在60例肺癌样本中,HIN-1启动子甲基化阳性样本为35例(阳性率58.3%),而5例正常肺组织样品均为阴性反应。采用RT-PCR法分析了肺癌细胞株H157,H358,H1299,A549,H727,DMS53内HIN-1基因的表达水平,发现前4种细胞株内HIN-1表达水平极低,也是在这4种肺癌细胞中,HIN-1基因启动子呈高甲基化状态。用去甲基化试剂5-aza-dc处理上述4种细胞96h后,所有这4种细胞内均出现HIN-1基因的重新活化。结论:抑癌基因HIN-1启动子高甲基化导致的HIN-1表达抑制可能是肺癌发生发展的重要因素。     

白血病细胞系中WT1基因启动子区域DNA甲基化的研究

目的应用基于聚合酶链反应(PCR)的实验方法,研究白血病细胞系中WT1基因启动子区域的DNA甲基化水平及其与WT1基因表达的关系.方法采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术,检测HL-60、Jurkat及KG-1等白血病细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态;以5-杂氮脱氧胞嘧啶(5-aza-CdR)对启动子区域DNA高甲基化的U937细胞系进行去甲基化处理后,观察WT1基因表达水平的改变.结果 HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1水平高表达,而Jurkat和U937细胞表达水平极低,同时检测到这两个细胞系存在WT1基因启动子区域DNA高甲基化;经去甲基化处理后,U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者升高.结论 WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一.