清肺口服液诱生IL—2作用的研究

目的；观察清肺口服液对机体免疫功能的影响。方法：采用依赖细胞株法，分别检测了清肺口服液单独诱生IL-2和协同PHA诱生IL-2的作用。结果：清肺口服液有明显协同PHA诱导单个淋巴细胞产生IL-2，以及单独诱导单个淋巴细胞产生IL-2的作用。结论：提示清肺口服液有一定的调节机体免疫力的作用。     

清肺口服液在小鼠体内诱生干扰素的研究

以VSV－L929细胞为检测系统,采用CPE法发现清肺口服液在 小鼠体内具有诱生干扰素的作用,诱生作用在24小时达到高峰,效价最高为128．0u/ml,并证明其符合γ－干扰素（INF－γ）的性质。表明清肺口服液的抗病毒作用与其能诱生干扰素有关。     

开肺化痰解毒法治疗小儿病毒性肺炎的研究

研究开肺化痰解毒法治疗小儿病毒性肺炎痰热壅肺证的疗效及作用机理。用清肺口服液与病毒唑进行临床对照试验。同时 ,做清肺口服液的体内、体外抗病毒试验 ,诱生干扰素、白细胞介素 Ⅱ (IL Ⅱ )等试验。结果 ,清肺口服液临床疗效优于病毒唑。清肺口服液具有体内、体外抗病毒作用 ,诱生γ 干扰素、IL Ⅱ等作用。开肺化痰解毒法治疗小儿病毒性肺炎有显著疗效 ,其疗效机理在于祛邪与扶正祛邪的整体调节作用     

清肺口服液对Hep-2细胞感染呼吸道合胞病毒后IL-6、IL-8调控的研究

目的探讨清肺口服液对人喉癌上皮细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）表达的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组人喉癌细胞IL-6、IL-8表达变化。结果 48h及72h后病毒模型组IL-6、IL-8的表达明显高于清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）,有显著差异,空白血清组（Ⅱ、Ⅲ）与病毒模型组无显著差异。清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异;72h后各组IL-6、IL-8的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后IL-6、IL-8的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒肺炎患儿血清IL-8、ICAM-1表达水平的影响

目的:探讨清肺口服液对呼吸道合胞病毒肺炎患儿血清白介素-8(IL-8)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA),测量8例RSV肺炎患儿治疗前后血清中IL-8、ICAM-1水平。结果:清肺口服液治疗后患儿血清中IL-8水平比治疗前显著下降,而血清中ICAM-1水平比治疗前显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:清肺口服液可显著降低RSV肺炎患儿血清中IL-8水平,升高ICAM-1水平,可能与清肺口服液的免疫调节作用有关。     

清肺止咳口服液治疗咳嗽的实验研究

目的：观察清肺止咳口服液对小鼠止咳、祛痰、抗炎的作用。方法：分别采用氨水引咳法、酚红排泄法、二甲苯致耳廓肿胀法观察清肺止咳口服液对实验小鼠止咳、祛痰、抗炎作用。结果：清肺止咳口服液能够明显延长小鼠咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,增加小鼠气管内酚红排泄量。结论：清肺止咳口服液具有显著的止咳、祛痰、抗炎作用。     

清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制

目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制。方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组。其中空白组给予含2%FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预。应用噻唑蓝(tetrazolium salt colorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平。结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P0.01)。加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P0.01)。结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关。     

呼吸道合胞病毒肺炎患儿应用清肺口服液前后炎症因子水平变化及意义

目的:探讨呼吸道合胞病毒肺炎患儿应用清肺口服液前后炎症因子水平变化及意义。方法:选取15例呼吸道合胞病毒肺炎患儿为研究对象,分别采集15例患儿应用清肺口服液治疗前后的静脉血,收集血清,采用离心分离法将血清分离,冻存于-70°C,并采用酶联免疫吸附实验法分别检测患儿治疗前后血清中IL-6、IL-8及TNF-α质量浓度,比较治疗前后炎症因子水平变化。结果:经清肺口服液治疗后,患儿血清中IL-6、IL-8及TNF-α质量浓度均较治疗前明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:清肺口服液能够有效降低呼吸道合胞病毒肺炎患儿血清中炎性因子的浓度,对抑制病毒毒性作用和病毒对正常免疫细胞的损害具有重要意义。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。     

清肺口服液对RSV肺炎患儿血清中IL-6及TNF-α表达水平的影响

目的探讨清肺口服液如何通过调节细胞因子而起到抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用机理。方法留取RSV肺炎住院患儿经清肺口服液治疗前后血样标本各8份,每份标本2 mL。离心分离血清,-70℃冻存,采用酶联免疫吸附分析法分别测定细胞上清液中IL-6及TNF-α的含量。结果 RSV肺炎患儿经清肺口服液治疗后血清中IL-6及TNF-α的质量浓度均较治疗前改善,其变化均有统计学意义。结论清肺口服液能有效降低RSV肺炎患儿血清中IL-6及TNF-α的质量浓度,减轻RSV对正常免疫细胞的损害,抑制其毒性作用。     

清肺口服液对RSV感染小鼠Treg/Th17及IL-2和IL-17水平的影响

目的观察清肺口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠Treg/Th17细胞平衡的影响及对白介素-2(IL-2)和白介素-17(IL-17)表达的影响。方法将50只BABL/c小鼠按随机数字法分为空白组、模型组、清肺低剂量组(1.33 g/mL)、清肺高剂量组(4 g/mL)、利巴韦林组,每组10只。用RSV(Long株)滴鼻48 h后,经口灌胃分别给予相应药物及等量0.9%氯化钠注射液刺激,24 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-2、IL-17的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞中Treg、Th17细胞的表达含量。结果与空白组相比,模型组的Treg/Th17及IL-2的水平下降(P0.01),IL-17的水平升高(P0.01);与模型组相比,各给药组的Treg/Th17升高(P0.05),IL-2水平升高(P0.01),IL-17的水平下降(P0.01);与利巴韦林组相比,清肺组IL-2水平升高(P0.01),清肺高剂量组Treg/Th17升高(P0.05),IL-17的水平下降(P0.01),清肺低剂量组Treg/Th17下降(P0.01),IL-17的水平升高(P0.01)。结论清肺口服液可以调节Treg/TH17细胞的平衡,并上调RSV感染小鼠IL-2的表达水平及下调IL-17的水平,从而发挥其抗RSV的作用。     

从TH1/TH2细胞平衡角度探讨清肺口服液对感染RSV小鼠内T-bet、GATA3水平的影响

目的:从TH1/TH2细胞平衡角度观察清肺口服液对感染RSV肺炎小鼠肺组织内T-bet、GATA3及IL-12的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将45只BABL/c小鼠随机分为5组,正常对照组,模型组,利巴韦林组,清肺(3.4 g/mL)组,清肺(10.2 g/mL)组。每组9只,用RSV(Long株)病毒予小鼠滴鼻造模,病毒激发24 h后,分给药72 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,及肺细胞中RT-PCR检测T-bet和GATA3蛋白表达水平,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞IL-4和INF-γ表达含量。结果:小鼠模型组与各给药组小鼠肺组织均有T-bet和IL-12(P<0.05,P<0.01)显著升高,GATA3显著降低。结论:清肺口服液具有调节TH1/TH2平衡,并对于感染rsv小鼠体内T-bet及IL-12细胞因子具有明显提升作用,而对GATA3则有明显抑制效果,从而进一步证明了清肺口服液治疗RSV病毒性肺炎有效性。     

清肺口服液多途径给药体外抗腺病毒3I 7b作用研究

目的：探讨清肺口服液体外抗腺病毒3I、7b作用及作用环节。方法：用100TCID50腺病毒3I、7b攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞造成腺病毒感染模型，分别在感染前、感染时、感染后加入清肺口服液含药血清，同时设空白血清组、病毒唑组及正常细胞对照组，MTT法比较结果。结果：含药血清各组OD值显著大于病毒组及空白血清组，与病毒唑组无显著性差异。结论：清肺口服液具有多环节体外抗腺病毒作用。     

清肺口服液含药血清对RSV感染人支气管上皮细胞STAT5和IL-10的影响

目的:探讨清肺口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:建立RSV感染的16HBE细胞模型,随机分为正常细胞组、空白组、模型组、清肺口服液含药血清低剂量组和高剂量组,采用Real-time RT-PCR、Western blot和免疫荧光法分别检测细胞中STAT5和IL-10的表达水平以及RSV在细胞中的相对表达。结果:与正常细胞组和空白组相比,模型组STAT5 mRNA和IL-10蛋白水平降低(P0.05),RSV荧光强度较高(P0.01);与模型组比较,含药血清组低剂量组STAT5水平升高(P0.05),含药血清组IL-10水平升高(P0.05),含药血清组RSV荧光强度降低(P0.01)。结论:清肺口服液对STAT5和IL-10有一定的调控作用,可能是其抗RSV感染的内在机制。     

清肺口服液在组织培养上对腺病毒3I、3Ⅱ型致细胞病变作用研究

目的：观察腺病毒3I、3Ⅱ两个不同基因型在细胞培养上对清肺口服液的敏感性。方法：用组织培养体外抗病毒实验方法观察细胞病变抑制率。结果：清肺口服液和含药血清均能抑制病毒感染后细胞病变。结论：清肺口服液和含清肺口服液的血清能抑制腺病毒3I、3Ⅱ型感染后的细胞病变。     

清肺通络开玄法对RSV诱发幼龄大鼠肺损伤肺组织ERK1/2信号通路的影响

目的 探讨清肺通络开玄法对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发幼龄大鼠肺炎肺组织ERK1/2信号通路的影响。方法 通过10(TCID50) RSV病毒液滴鼻建立RSV肺炎模型。实验设置对照组，模型组，清肺通络开玄法组，清肺通络法组，共四组。清肺通络开玄法组给予黄芩、大黄和大蒜贴膏干预，清肺通络法组给予黄芩和大黄贴膏进行干预。于感染后第5日取材用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达情况，酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-8(IL-8)水平。结果 与对照组比较，模型组RSV大量复制，肺组织切片观察到典型的炎性损伤，ERK1/2磷酸化蛋白的表达水平显著提高(P<0.05),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6、IL-8(P<0.05);与模型组相比，清肺通络开玄法可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P<0.05),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6、IL-8的表达水平(P<0.05);同时清肺通络开玄法比清肺通络法对于ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P<0.05)与...     

清肺口服液对3Ⅰ、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白表达的影响

目的：探讨清肺口服液合药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。方法：以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞，制备清肺口服液合药血清，作用于该细胞，另设正常细胞组，病毒对照组，利巴韦林组，采用ELISA法检测不同组细胞上清液中TNF-α的含量，并进行比较。结果：病毒对照组较正常细胞组之TNF-α含量明显增多，清肺口服液合药血清组可显著降低3Ⅰ、7b型腺病毒攻击后细胞TNF-α的浓度。结论：清肺口服液可低腺病毒感染所致人胚肺成纤维细胞TNF-α蛋白的高表达，这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对腺病毒3I7b型拮抗作用研究

目的：观察清肺口服液在细胞培养上对腺病毒3I7b基因型的拮抗作用。方法：采用组织培养体外抗病毒实验方法,比较不同组之间细胞病变抑制率。结果：含清肺口服液的血清均有抑制病毒感染后细胞病变的作用。结论：含清肺口服液的血清作1：2、1：4、1：9稀释后均能抑制腺病毒3I7b型感染后的细胞病变。     

同仁堂儿童清肺口服液的镇咳、祛痰、平喘作用的实验研究

目的:观察同仁堂儿童清肺口服液的药效学作用。方法:采用小鼠氨水引咳法和豚鼠枸橼酸喷雾法观察儿童清肺口服液的镇咳作用;采用小鼠气管酚红排出法观察其祛痰作用;采用磷酸组胺喷雾法观察平喘作用。结果:儿童清肺口服液大、中、小剂量组均能明显减少氨水诱发的小鼠咳嗽次数和枸橼酸引发的豚鼠咳嗽次数,延长小鼠和豚鼠致咳潜伏期。儿童清肺口服液大、中、小剂量均可使小鼠气管段酚红排泌量明显增加,使磷酸组胺喷雾所致豚鼠哮喘的引喘潜伏期明显延长。结论:儿童清肺口服液具有良好的镇咳、平喘、化痰作用。     

基于网络药理学养阴清肺口服液对肺损伤的保护作用及机制研究

目的:基于网络药理学预测和动物模型验证的方法,探讨养阴清肺口服液对肺损伤保护可能的作用及机制。方法:基于网络药理学预测得到养阴清肺口服液可能作用靶点和通路,然后采用香烟烟雾(CS)联合雾霾暴露诱导小鼠肺损伤炎症模型,养阴清肺口服液预给药干预2周,暴露于香烟烟雾联合雾霾环境,每周5天,共计6周。结束后,测定吸气峰流速(PIF)和呼气峰流速(PEF);对小鼠肺灌洗液中白细胞、中性粒、淋巴等细胞分类计数,检测C-反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的水平。肺组织HE染色观察病理,Western blot检测肺组织NF-κB P65蛋白表达。结果:预测养阴清肺口服液有53个作用靶点,且通过不同成分的多靶点,共享靶点协同和独立靶点作用多维发挥作用;养阴清肺口服液可通过抗炎、抗氧化等途径发挥作用。动物模型验证结果:养阴清肺口服液能够升高PIF和PEF;对白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的增加有明显抑制作用;能够显著降低MDA水平,升高SOD和GSH水平;能够降低C-RP、TNF-α和IL-1β的表达;养阴清肺口服液能明显抑制吸烟小鼠中性粒细胞和巨噬细胞的组织浸润;Western blot检测显示,养阴清肺口服液能抑制NF-κB p65表达。结论:养阴清肺口服液显著减轻烟雾联合雾霾所致的肺损伤,其改善肺功能作用机制与抑制炎症介质的高表达、调节氧化/抗氧化失衡、下调炎症信号通路有关。