免疫吸附特异性清除循环肿瘤坏死因子—α对内毒素休克时一氧化氮？…

目的 观察免疫吸附特异性清除循环肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）对内毒素休克时一氧化氮（ＮＯ）的生成及其作用的影响。方法 利用新西兰白兔内毒素休克模型,观察经抗ＴＮＦα－单克隆抗体亲和免疫吸附血液灌注重对血压、血浆ＮＴＦ－α活性、ＮＯ２含量、脏器ＮＯ合酶（ＮＯＳ）活性及肝、肾功能等的影响,结果 免疫吸附治疗后,血浆ＴＮＦ－α水平迅速下降,２小时即为４４±１０Ｕ／ｍｌ,低血压状态明显改善,ＮＯ的生成与释     

视黄酸对肿瘤坏死因子α诱导肺泡上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549增殖凋亡的影响与视黄酸(RA)对其调控作用。方法用不同浓度的TNF-α、1μmol/LRA和10μg/LTNF-α+1μmol/LRA处理肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞24h和48h后MTT法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。用10μg/LTNF-α处理24h或48h后继续培养,用台盼蓝染色计算24、48和72h活细胞数。结果分别用0、0.1、1、5、10μg/L浓度的TNF-α培养A549细胞24h和48h测定细胞增殖数(%):24h分别为95.0%、90.0%、79.6%、72.4%和59.6%,方差分析结果F值为18.04,P<0.01;48h分别为93.2%、82.7%、61.5%、50.3%和44.7%,F值为40.61,P<0.01。用10μg/LTNF-α处理A549细胞24h,其对细胞的增殖抑制作用可逆转,但处理48h后的A549细胞增殖抑制作用不能逆转。用TNF-α和视黄酸培养A549细胞12、24与48h后,凋亡的细胞数(%)TNF-α组分别为14.3%±3.2%、18.6%±2.9%和43.4%±3.5%,与对照组(6.3%±1.2%,8.2%±1.3%和26.1%±2.5%)比较差异有统计学意义;视黄酸加TNF-α组为4.8%±1.1%,5.2%±1.3%和16.4%±2.3%,明显少于TNF-α组。结论视黄酸通过抑制TNF-α对肺泡Ⅱ型上皮细胞的破坏,可以达到减轻肺泡上皮细胞损伤,保护肺表面活性物质的作用。     

肿瘤坏死因子α和一氧化氮合酶在脓毒症大鼠心功能中的作用初探

目的初步探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）和一氧化氮合酶（NOS）在脓毒症大鼠心功能中的作用。方法制作脓毒症大鼠模型,监测血流动力学,测定大鼠心肌组织中TNF-α和一氧化氮（NO）浓度,检测各型NOS的活性。结果大鼠心肌组织中TNF-α含量2h时达高峰,心肌组织NO 6h时达高峰,与心功能改变时间一致。给予脂多糖（LPS）6h后心脏中cNOS的表达减少;iNOS表达量明显增加。结论脓毒症时,TNF-α和NO发挥重要作用,并且心肌细胞上iNOS表达升高、cNOS表达减少可能在心功能降低中发挥作用。     

脂多糖对人肺泡上皮细胞一氧化氮分泌的影响

目的探讨脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导人肺泡上皮细胞（A549）一氧化氮（Nitric oxide，NO）分泌的影响。方法对A549给予不同浓度的LPS，分别收集其培养上清液，用硝酸还原法检测NO浓度。结果不同浓度LPS诱导A549，NO分泌量高于未经LPS诱导的对照组，且具有浓度、时间依赖性。结论LPS诱导A549NO的分泌，提示LPS具有诱导肺泡上皮细胞急性炎症和氧化应激的作用。     

递增浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞分泌IL-8水平变化

目的观察不同浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞(A549细胞)存活率和分泌IL-8水平变化。方法A549细胞分为对照组和实验组,分别采用不同浓度TNF-α攻击,培养24h后测定各组细胞存活率、上清IL-8水平。结果不同浓度TNF-α攻击均能明显抑制A549细胞生长,其中5000u·ml-1浓度组细胞存活率降为(90.1±1.1)%。TNF-α攻击浓度由100u·ml-1升至1000u·ml-1时,A549细胞分泌IL-8量由9.1±3.5pg·ml-1升至203.7±12.4pg·ml-1,TNF-α攻击浓度超过5000u·ml-1后IL-8分泌量开始下降。结论以100u·ml-1~1000u·ml-1之间浓度的TNF-α进行攻击,A549细胞IL-8分泌量与TNF-α浓度存在剂量-效应关系,反映了急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征状态下肺泡上皮细胞分泌炎性介质情况。     

弹性蛋白酶损伤肺致炎的地鼠血清中一氧化氮和肿瘤坏死 …

目的 观察由弹性蛋白酶损伤肺致炎的地鼠血清中一氧化氮（ＮＯ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的动态变化,并初步探讨两者在炎症中的作用。方法 建立弹性蛋白酶损伤肺致炎金黄地鼠模型,用组化和免疫组化方法检测气道上皮细胞和肺内单核巨噬细胞一氧化氮合酶活性,测定血清中ＮＯ和ＴＮＦ－α的动态变化。结果 弹性蛋白酶损伤肺致炎地鼠气道上皮细胞和肺内单核巨噬细胞ＮＯＳ活性明显加强,在炎症早期血清中ＮＯ和ＴＮＦ－α含量     

TNF-α、sTNFRⅠ对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)和可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFRⅠ)对体外培养的子宫内膜异位症患者(EMs)在位内膜基质细胞的影响,探索EMs生物治疗的靶标。方法:对10例EMs患者的在位子宫内膜组织进行分离纯化、体外培养、鉴定。将基质细胞接种于96孔板中,用不同浓度的TNF-α和sTNFRⅠ处理。用MTT法(溴化钾噻唑基四唑显色法)观察基质细胞的生长情况,并收集细胞上清液,利用ELISA法(双抗体夹心法)检测细胞培养上清液中白介素-8(IL-8)的水平。结果:TNF-α以剂量依赖方式促进EMs基质细胞的增殖,并促进基质细胞表达IL-8(P<0.05);sTNFRⅠ能阻断TNF-α的促增殖作用,但剂量必须很大。结论:TNF-α在EMs的病理生理过程中起了较大的作用,sTNFRⅠ可考虑作为EMs生物治疗的新方向。     

恶性骨肿瘤患者外周血单核细胞体外诱生NO和TNF—α的测定

分离１５例恶性骨肿瘤患者和１２例健康志愿者的外周血单核细胞，经脂多糖诱生培养４８ｈ，收集上清液；用ｒｉｅｓｓ法及测定其一氧化氮（ＮＯ）及肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ＿α）的含量，结果发现，恶性骨肿瘤组ＮＯ和ＴＮＦ－α明显高于正常对照组，且二者呈坑度正相关，提示恶性骨肿瘤患者人活化巨噬细胞产生的ＮＯ和ＴＮＦ－α可能与恶生骨肿瘤的发病机制有关。     

新生儿HIE脐血IL—6,TNF—α与NO变化及临床意义探讨

目的 :探讨新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)脐血 IL- 6、TNF- α与 NO变化的临床意义。方法 :分别用放射免疫法与硝酸盐还原酶两点法检测了 4 0例 HIE患儿及 4 0例正常新生儿脐血 IL- 6、TNF- α与 NO水平。结果 :与正常新生儿比较 ,HIE患儿脐血 IL- 6水平分别为 70 .53± 18.86对 81.80± 2 7.96 pg/ ml(p=0 .0 38) ,TNF- a分别为 1.0 3± 0 .30±对 0 .82± 0 .31ng/ ml(p=0 .0 0 1) ,NO分别为59.17± 2 4 .11对 85.0 5± 31.36 μmol/ L(p=0 .0 0 1) ,而且病情越重改变越明显。结论 :围产期窒息与HIE患儿脐血 IL- 6与 NO水平减低 ,TNF- α水平升高 ,它们可能参与了新生儿缺氧缺血性脑损伤的某些发病过程 ,脐血免疫指标的检测可用于 HIE的早期预测。     

原因不明习惯性流产患者封闭抗体活性与肿瘤坏死因子-α的关系

目的观察原因不明习惯性流产(RSA)患者的封闭抗体效应与辅助性T细胞(Th)1型免疫之间的关系。方法以20例连续发生过3次以上早期自然流产的患者作为观察对象。采用比重离心法从外周血中提取淋巴细胞,以1×106/ml浓度加入含有1%小牛血清的RPMI中。每毫升淋巴细胞悬浮液中加入植物血凝素(PHA)2μg培养72 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测培养液中肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平。采用混合淋巴细胞培养方法检测研究对象的封闭抗体效应(MLR-BE),>22%为阳性,≤22%为阴性。分析TNF-α水平与MLR-BE的关系。结果20例患者TNF-α的平均浓度为(561.0±522.9)pg/ml,平均MLR-BE为(-6.5±37.6)%(阴性14例、阳性6例)。MLR-BE阴性患者的TNF-α水平为(676.1±585.0)pg/ml,显著高于MLR-BE阳性患者的(292.5±159.5)pg/ml(P<0.05)。TNF-α水平与MLR-BE不相关(R2=0.015,P>0.05)。结论MLR-BE可能影响母体Th1/Th2的平衡,从而导致习惯性流产的发生。     

Effects of Nephritis No.3 Recipe on Nitric Oxide,Nitric Oxide Synthase Secreted by Cultured Mesangial Cells in Rats and the Gene Expression of Inducible Nitric Oxide Synthase

Objective:To explore the effect of the Nephritis No.3(N-3)recipe on nitric oxide(NO),nitric oxide synthase(NOS)secreted by cultured mesangial cells(MC)and its gene expression of the in-ducible nitric oxide synthase(iNOS).Methods:The drug(nephritis No.3)-containing serum was preparedwith serum pharmacological technique,and then was applied to react on mesangial cells cultured In fetalcalf serum(FCS)and cells cultured in FCS plus lipopolysaccharide.To observe the secretion of NO andNOS and the gene expression of iNOS by means of RT-PCR.Results:Under the two kinds of culture con-ditions,the content of NO and NOS in the groups with drug-containing serum were higher than thosewithout drug-containing serum(P<0.05,P<0.01),and the expression of iNOS mRNA was up-regula-ted too.Conclusion:The N-3 could significantly promote the secretion of NO and NOS and the mRNA ex-pression of iNOS in rats.     

肿瘤坏死因子—α预刺激对培养树突状细胞形态学的影响

目的：研究肿瘤坏死因子（TNF）－α预刺激对树突状细胞形态学的影响，方法：Ficoll密度梯度离心分离健康人外周血，获得单个核细胞，培养基用含有10％胎牛血清的RPMI 1640，分两组进行培养，一组用TNF－α预刺激4h后加入粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素－4（IL－4），每48h再次加入上述3种细胞因子；另一组则在培养初始加入GM－CSF及IL－4，每隔48h再次加入上述2种细胞因子，第5天加入TNF－α，两种中所用细胞因子浓度完全一样，且均于第8天收获细胞，前者记作T－DC，后者记作DC。光镜及扫描电镜观察DC形态学变化及差异，结果：T－DC与DC相比，具有更多，更典型的树突状突起，结论：TNF－α预刺激DC前体细胞4h与TNF－α在培养第5天加入相比，所诱导出的DC的树突状形态更为明显，典型。     

细胞因子在支气管上皮细胞一氧化氮产生中作用的研究

目的 探讨诱导气道上皮细胞NO产生的分子机制。方法 采用培养的人支气管上皮细胞系研究了TNF－α及IL－1β对气道上皮细胞NO终末产物硝酸盐和亚硝酸盐产生的影响。结果 培养的支气管上皮细胞到达单层时加入TNF－α和IL－1β,其硝酸盐及亚硝酸盐水平均较对照组明显增高（P＜0.001）。TNF－α浓度5μg/ml和IL－1β浓度10μg/ml时,刺激气道上皮细胞NO产生达高峰。时间曲线研究发现TNF－α1和L－1β刺激气上皮细胞产生NO的作用随时间增加而增强,在3小时达高峰。结论 研究表明气道上皮细胞是气道内源性NO产生的主要细胞之一,TNF－α和IL－1β在气道上皮细胞NO产生中起重要作用。     

急性脑血管病肿瘤坏死因子-α的临床研究

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在急性脑血管病（ACVD）中的作用及其变化的临床意义。方法：选取95例ACVD患者，并设性别及年龄相匹配的血清对照组（20例）及脑脊液对照组（10例）。应用酶联免疫吸附法（ELISA）于发病后第1、3、7、14d测定血清和脑脊液中TNF-α。结果：①三种脑血管病患者血清TNF-α动态变化存在差异，脑出血和脑梗死组的峰值单间为发病后第3d，而蛛网膜下腔出血（SAH）组为第1d。②脑梗死患者血清TNF-α水平与梗死面积、神经功能缺损程度及病情恶化与否相关。③SAH组于发病后第1d、3d、7d脑脊液TNF-α值高于血清，14d时降至对照组水平并与血清无差异。结论：①脑梗死患者血清TNF-α的动态观察，可为临床预测梗死灶大小、神经功能缺损程度及病情恶化与否提供依据。②发病早期的脑梗死患者若CT未能显示病灶时，血清TNF-α的明显升高有助于临床诊断和治疗。③SAH患者脑脊液中TNF-α水平明显高于血清，进一步提示脑内神经组织可产生TNF-α。脑脊液中TNF-α的持续明显升高可能与SAH后脑血管痉挛有关。④TNF-α参与了ACVD的炎性反应过程，早期抑制TNF产生及抗炎性反应的治疗可能具有潜在的临床价值。     

重组人肿瘤坏死因子α对人脂肪基质细胞体外成骨向分化的影响

目的:探讨一定浓度的重组人肿瘤坏死因子α(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells,hASCs)体外成骨向分化的影响。方法:采用第4代hASCs,根据培养基的不同分为4组:(1)基础培养[DMEM+10%FBS(体积分数)+100 U/mL青霉素+100 mg/L链霉素];(2)基础培养+10μg/L rhTNF-α;(3)成骨向诱导培养(基础培养+100 nmol/L地塞米松+50μmol/L维生素C+10 mmol/Lβ-甘油磷酸);(4)成骨向诱导培养+10μg/L rhTNF-α。各组每3天更换相应培养基。在第3、7、14天和第21天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量检测;在第14和21天进行钙结节染色和矿化沉积定量检测;并用反转录PCR检测成骨向诱导组核心结合因子α1(core-binding factorα1,Cbfa1)、Osterix(Osx)和骨钙素(osteocalcin,OC)等成骨相关基因的表达;在成骨向诱导的第3天,用实时定量PCR检测rhTNF-α对hASCs成骨相关基因表达的影响。结果:对碱性磷酸酶定量检测,在成骨向诱导的第14天(3.527±0.415 vs.2.345±0.354,P0.01)和第21天(3.106±0.105 vs.2.442±0.163,P0.01),10μg/L的rhTNF-α可以促进其表达;同样对于矿化沉积检测,在成骨向诱导的第14天(2.896±0.173 vs.0.679±0.173,P0.01)和第21天(2.231±0.233vs.1.729±0.229,P0.01),10μg/L的rhTNF-α也促进其表达;反转录PCR和实时定量PCR也表明rhTNF-α可以促进Cbfa1,Osx和OC的表达。结论:10μg/L的rhTNF-α可以促进成骨向诱导的hASCs体外成骨向分化,并可以促进成骨相关基因Cbfa1、Osx和OC的表达。     

Role of tumor necrosis factor-alpha in the pathogenesis of atrial fibrillation

Background  Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) is a pleiotropic proinflammatory cytokine and contributes to many kinds of cardiovascular diseases via its receptors (TNFR1/TNFR2). We hypothesize that TNF-α plays a role in the pathogenesis of chronic atrial fibrillation (AF).

Methods  Sixty-seven consecutive patients who were scheduled to have cardiac surgery were enrolled into the study. Thirty-one patients with rheumatic heart disease (RHD) and AF were enrolled as study group (AF group). The sinus rhythm (SR) control groups consisted of 20 patients with RHD and 16 patients with coronary artery disease (CAD). Peripheral blood sample was collected before the operation. About 5 mm3 left atrial tissue was disserted during the operation and was separated into three parts for Western blotting, real time polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry (IHC) analysis.

Results  Compared with the controls (RHD SR and CAD SR), the levels of TNF-α ((14.40±5.45) pg/ml vs. (4.20±3.19) pg/ml vs. (2.68±2.20) pg/ml, P=0.000) and its soluble receptor 1 (sTNFR1) ((1623.9±558.6) pg/ml vs. (1222.3±175.6) pg/ml vs. (1387.5±362.2) pg/ml, P=0.001) in plasma were higher in patients with AF. TNF-α level had positive correlation with the left atrial diameter (LAD) (r=0.642, P=0.000). Western blotting analysis showed that the protein levels of TNF-α (0.618±0.236 vs. 0.234±0.178 vs. 0.180±0.103, P=0.000) were higher in patients with AF. The RT-PCR analysis results demonstrated that the mRNA expression of TNF-α (0.103±0.047 vs. 0.031±0.027 vs. 0.023±0.018, P=0.000) increased in patients with AF. IHC analysis displayed that, comparing to the SR, the expression of TNF-α (0.125±0.025 vs. 0.080±0.027 vs. 0.070±0.023, P=0.000) increased in the AF group. The protein level and mRNA expression of TNF-α also had positive correlation with left atrium diameter (LAD) (r=0.415, P=0.000 and r=0.499, P=0.000).

Conclusions  The results revealed that TNF-α elevated in the plasma and left atrial tissue and had positive correlation with LAD in patients of chronic AF. TNF-α might involve in the pathogenesis of chronic AF.

     

一氧化氮在结肠黏膜上皮细胞氧化损伤中的作用观察

目的探讨一氧化氮（NO）在结肠黏膜上皮细胞氧化损伤中的作用及褪黑素的影响。方法利用FeSO4＋H2O2产生羟自由基损伤结肠黏膜上皮细胞，观察L-精氨酸、L-NAME对模型中NO合成的影响及相应细胞损伤程度的改变，并观察褪黑素对该过程的影响。实验检测指标包括乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、NO和黏液含量。结果模型组大鼠结肠黏膜上皮细胞MDA和LDH水平增高，CAT、GSHPX、SOD和黏液含量减少，NO水平增高与结肠黏膜上皮细胞氧化损伤相关，L-精氨酸和L-NAME通过促进或抑制NO合成，显著加重或减轻这种氧化损伤。褪黑素可逆转羟自由基及NO引起的氧化损伤。结论NO直接参与羟自由基对结肠黏膜上皮细胞的氧化损伤，褪黑素通过直接清除羟自由基和NO及可能形成的过氧化亚硝基阴离子，对大鼠结肠黏膜氧化损伤具有保护作用。     

Gastric mucosal tumor necrosis factor alpha and nitric oxide synthase in patients with Helicobacter pylori infection

Objective To investigate the tumor necrosis factor alpha (TNFα) and nitric oxide synthase (NOS) in gastric mucosa of patients with Helicobacter pylori (Hp) infection.Methods In supernatants of homogenized antral mucosal biopsy specimens taken from 32 Hp positive and 24 Hp negative patients with chronic active gastritis and 12 Hp negative normal controls, TNFα levels and NOS activity were measured by means of radioimmunoassay and the oxidation of oxyhaemoglobin to methaeglobin by nitric oxide was monitored spectrophotometrically. The presence of chronic active gastritis in biopsy specimens was graded using Rauws’ gastritis scores.Results Gastritis scores in specimens of gastritis with and without Hp infection were in a similar spectrum but higher than that in normal controls. TNFα levels and NOS activity were higher significantly in Hp positive gastritis (TNFα 5.42±2.77 fmol/mg pro, NOS 246.8±70.7 pmol · mg pro(-1) · min(-1) ) than those in Hp negative gastritis (TNFα 2.67±2.18 fmol/mg pro, NOS 159.0 ±71.4 pmol · mg pro(-1) · min(-1) ) and normalcontrol specimens (TNFα 2.50±2.00 fmol/mg pro, NOS 122.8±57.6 pmol · mg pro(-1) · min(-1) ,P&lt;0.01, respectively). In Hp positive gastritis, NOS activity showed positive correlations with gastritis scores (n=32; r=0.658, P&lt;0.01) and TNF a levels (r=0.427, P&lt;0.01). Gastritis scores (from 5.3±2.5 to 2.4±1.6, P&lt;0.05), TNFα levels (from 6.02±3.64 fmol/mg pro to 3.21±2.97 fmol/mg pro, P&lt;0.05) and NOS activity (260.7±70.8 pmol · mg pro(-1) · min(-1) to 172.6±81.9 pmol · mg pro(-1) · min(-1) , P&lt;0.01) were markedly decreased in 16 patients after eradication of Hp. NOS activity was further more increased after mucosa incubation with rTNFα (1.0 nmol/L) in vitro for 24 hours, and the effect was inhibited significantly by the arginine analogue L-NMMA but not by the calcium chelating agent EDTA in specimens obtained from 12 Hp positive patients.?/font&gt; Conclusion The results suggest that gastric mucosal TNFα and NOS may contribute to the pathogenesis of Hp associated gastritis. The enhanced NOS activity expressing the inducible isoform in Hp infected gastric mucosa is probably derived from the macrophages, and induced by some cytokines such as TNF α.     

病毒性脑炎患儿脑脊液NO及TNF-α的测定及其意义

目的探讨一氧化氮（NO）在病毒性脑炎发病中的作用及诊断价值。方法采用硝酸还原酶法及双抗体夹心ELISA法，分别测定20例病毒性脑炎（脑炎组）、15例高热惊厥（热惊组）及15例对照组患儿的脑脊液NO及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果脑炎组NO及TNF-α浓度明显高于热惊组及对照组（P〈0．01），热惊组与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论NO确实参与了中枢神经系统的炎症过程；检测脑脊液中NO可以作为鉴别病毒性脑炎与高热惊厥的一项指标。