滋补脾阴方药分析

《素问·阴阳应象大论》云：＂阴阳者,万物之能始也。＂五脏皆有阴阳,脾脏未能例外。在生理上,有脾阴、脾阳之分;在病理上,有脾阳虚、脾阴虚之别。脾胃学说临床上一般侧重脾阳、胃阴,而无脾中之阴。虽然脾阴之说在长期的医疗实践中,特别是温病学派的发展,曾赋予不少新的内容,但对脾阴的证候特点、病机及其治疗方药,尚缺乏较完整的认识。     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内树突棘变化影响的研究

目的：通过对病证结合脾阴虚痴呆大鼠模型脑内不同区域树突棘变化的观察,探讨滋补脾阴方药（ZBPYR）对脑内树突棘变化的作用和影响。方法：采用经典方法建造脾阴虚模型,凝集态β-淀粉样蛋白1-40（β-Amyloid 1-40,Aβ1-40）定位注射到海马,建立脾阴虚痴呆模型,并应用ZBPYR干预。使用高尔基（Golgi）染色法,对动物模型脑内不同区域的树突棘进行染色,观察数量和形态。结果：脾阴虚痴呆组的海马各区和皮质的树突棘密度比脾阴虚组有所减少;与痴呆组和脾阴虚痴呆组比较,脾阴虚痴呆+ZBPYR组的大鼠海马各区和皮质的树突棘密度有所增加;与空白对照组比较,在痴呆组模型大鼠的脑内海马不同区域和皮质的树突棘密度下降。结论：脾阴虚痴呆大鼠不同脑区树突棘密度有不同程度减少,ZBPYR对学习记忆障碍的改善可能与维持不同脑区树突棘密度相关。     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内NMDA受体mRNA表达的影响

目的：观察滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA表达的影响。方法：运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区的表达状况作相应的检测。结果：痴呆组以及脾阴虚痴呆组大鼠NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区表达均明显减弱下调（P<0.05）;ZBPYR治疗组NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA均明显上调（P<0.05）。结论：使用ZBPYR治疗的大鼠NMDAR mRNA的表达水平在各脑区均明显上调,这表明ZBPYR以提升NMDAR mRNA的方式,使得NMDAR蛋白的含量显著增多,而发挥其抗痴呆作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激影响的研究

目的:探讨滋补脾阴方药(ZiBu PiYin Recipe,ZBPYR)对脾阴虚糖尿病大鼠海马内质网应激相关分子表达的影响。方法:高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ)注射建立2型糖尿病模型,在此基础上,通过复合因素造模的方法建立脾阴虚糖尿病模型,以水迷宫实验评价模型大鼠是否出现学习记忆障碍,之后观察各组大鼠海马内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)和真核转录因子2的α亚单位(eukaryotic translation initiation factor 2 subunitα,eIF2α)表达的变化。结果:ZBPYR治疗后GRP78 mRNA水平降低(P0.05),GRP78、磷酸化PERK、磷酸化eif2α蛋白水平明显降低(P0.05),与脾阴虚糖尿病组相比,差异有统计学意义。结论:滋补脾阴方药可能是通过影响内质网应激PERK信号传导改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠肠黏膜屏障的调控作用

目的观察脾阴虚状态下肠黏膜屏障的改变及滋补脾阴方药的调控作用。方法将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组(简称C组)6只和模型组(简称M组)14只。采用饮食不节与劳倦过度结合耗伤阴液法建立脾阴虚大鼠模型。脾阴虚造模后将M组随机分为脾阴虚组(简称S组)和滋补脾阴方药组(简称Z组)。每周收集粪便进行16S rRNA测序。采用qPCR技术检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1 mRNA水平;Western Blot法检测空肠Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达;ELISA法检测肠道炎症因子水平。结果在门水平上,S组较C组厚壁菌门比例增加(P<0.05),拟杆菌门下降(P<0.05),Z组较S组厚壁菌门减少(P<0.01),拟杆菌门增加(P<0.01);在属水平上,S组较C组乳杆菌属和Paraprevotella属比例升高(P<0.05,P<0.01),瘤胃球菌属和粘放线菌属下降(P<0.01,P<0.05);Z组比较于S组乳杆菌属比例明显减少(P<0.0001),瘤胃球菌属和粘放线菌属增加(P<...     

滋补脾阴方药对老龄大鼠脑线粒体膜ATP酶活性的影响

目的：研究脑力智宝对神经系胞缺氧损伤的影响。方法：采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,研究脑力智宝连二亚硫酸钠引起PC12细胞缺氧损伤的影响。结果：脑力智宝可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率。结论：脑力智宝提取物及其含药血清对缺氧引起的PC12细胞损伤具有保护作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内NMDA受体mRNA表达的影响＊

目的：观察滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA表达的影响。方法：运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区的表达状况作相应的检测。结果：痴呆组以及脾阴虚痴呆组大鼠NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区表达均明显减弱下调（P<0.05）;ZBPYR治疗组NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA均明显上调（P<0.05）。结论：使用ZBPYR治疗的大鼠NMDAR mRNA的表达水平在各脑区均明显上调,这表明ZBPYR以提升NMDAR mRNA的方式,使得NMDAR蛋白的含量显著增多,而发挥其抗痴呆作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马胰岛素抵抗影响的实验研究

目的探讨滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠海马胰岛素信号通路改变的保护作用及其可能的机制。方法高脂饮食加注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病模型。脾阴虚模型参照经典的复合因素造模法建立。行为学测试大鼠学习记忆能力。Western blot检测海马IRE1α、JNK、IRS-1蛋白表达情况。结果脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆能力与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。滋补脾阴方药治疗后学习记忆能力改善。脾阴虚糖尿病大鼠海马中磷酸化IRS-1、JNK及IRE1α蛋白表达增强(P<0.05),滋补脾阴方药治疗后表达减弱。结论滋补脾阴方药可显著改善脾阴虚糖尿病大鼠学习记忆障碍。其作用可能与改善内质网应激来调节胰岛素信号通路有关。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠下丘脑胰岛素信号的调控作用

目的：通过观察胰岛素信号通路中关键分子的变化,进一步探讨脾阴虚糖尿病认知功能障碍的发病机制及滋补脾阴方药的作用机制,以期为糖尿病认知功能障碍的治疗提供新思路和新线索。方法：将大鼠随机分为空白对照组（Cont）,糖尿病组（DM）,脾阴虚组（pi）,脾阴虚糖尿病组（piDM）,滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）5 组。采用Western blotting 的方法观察下丘脑中胰岛素受体底物1（IRS-1）丝氨酸磷酸化水平及蛋白激酶C（PKC/Akt）丝氨酸磷酸化水平,以判定胰岛素信号传导是否出现障碍。结果：DM 组、pi组、piDM 组p-IRS-1ser 表达较Cont 组增加（P<0.05）,DM 组、piDM 组p-Akt 表达减弱（P<0.05）。ZBPYR 组p-IRS-1ser 较DM 组、piDM 组减弱（P<0.05）,p-Akt 表达较DM 组、piDM 组增加（P<0.05）。结论：DM 组、pi组、piDM 组大鼠下丘脑中胰岛素信号未正常向下传导,可能发生了胰岛素信号转导障碍。ZBPYR 具有纠正胰岛素信号转导障碍的作用。     

滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠胃肠激素、水液代谢及能量代谢的影响

目的:观察滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠胃肠激素、水液代谢及线粒体能量代谢的影响.方法:将SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组(C组)、脾阴虚组(S组)和滋补脾阴方药干预组(Z组),利用饮食失常兼过劳结合燥热耗伤阴液法建立脾阴虚大鼠模型.采用ELISA法检测胃窦组织中胆囊收缩素(CCK)和空肠组织中血管活性肠肽(VIP...     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

滋补脾阴方药对脾阴虚证模型大鼠胃肠激素及胃肠免疫功能的影响

目的:观察滋补脾阴方药对脾阴虚大鼠胃肠激素及胃肠免疫功能的影响.方法:将18只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组和滋补脾阴方药组,每组6只,除正常对照组外,其余各组采用饮食不节、过度劳倦、温里药伤阴的方法构建脾阴虚证大鼠模型,连续给予相应药物2周.采用ELISA法检测大鼠血清血管活性肠肽(vasoactiv...     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠海马蛋白质组影响的研究

目的:从蛋白质组水平探索脾阴虚痴呆的本质以及滋补脾阴的方药(ZBPYR)作用靶点。方法:采用饮食不节、劳倦过度、耗伤阴液的复合因素综合考虑的方法建立脾阴虚的大鼠模型。并于双侧海马定位注射聚合态β-淀粉样蛋白1-40,应用ZBPYR干预。通过双向凝胶电泳比较各组大鼠海马蛋白质组表达图谱的不同;由MALDI-TOF-MS鉴定表达差异的蛋白。结果:与空白对照组相比,脾阴虚痴呆组有9个蛋白表达差异点;脾阴虚痴呆+ZBPYR组有2个差异点。经质谱鉴定显示脾阴虚痴呆组大鼠海马蛋白中AnnexinⅢ表达上调,Tubulin beta chain 15、Dihydropyrimidinase-like 2和Guanine nucleotide-binding protein beta-1 subunit表达下降,ZBPYR干预后这些蛋白点的表达与空白对照组比较无明显差异。结论:脾阴虚痴呆大鼠海马的病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程,AnnexinⅢ、Tubulin beta chain 15等分子参与了脾阴虚痴呆大鼠的海马病变;ZBPYR可能通过对海马的差异表达蛋白的调控而达到治疗目的。     

滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠皮质线粒体功能障碍预防作用机制

目的：探讨滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠皮质线粒体功能障碍的预防作用机制。方法：SD大鼠随机分为空白对照组（Con）,糖尿病组（DM）,滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR1）和滋补脾阴方药预防组（ZBPYR2）。水迷宫测试大鼠学习记忆能力;透射电镜观察皮质线粒体超微结构、数量变化;Western Blot检测Cyto C表达。结果：①DM组较Con组学习记忆能力下降（P<0.05）;ZBPYR1组学习记忆能力较DM组改善（P<0.05）,ZBPYR2组较DM组改善较为明显（P<0.01）。②DM组皮质线粒体数量较Con组减少（P<0.05）,线粒体形态发生肿胀、变形、嵴走向紊乱、模糊甚至溶解;ZBPYR干预后上述结果得到改善,且ZBPYR2组较DM组线粒体数量增多（P<0.05）。③DM组胞浆中Cyto C较Con组增强（P<0.01）,ZBPYR干预后Cyto C表达减弱。结论：ZBPYR调节皮质区线粒体形态、数量的变化,阻止线粒体中Cyto C向胞浆中释放,提高糖尿病大鼠认知功能。     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠海马蛋白质组影响的研究

目的:从蛋白质组水平探索脾阴虚痴呆的本质以及滋补脾阴的方药(ZBPYR)作用靶点.方法:采用饮食不节、劳倦过度、耗伤阴液的复合因素综合考虑的方法建立脾阴虚的大鼠模型.并于双侧海马定位注射聚合态β-淀粉样蛋白1-40,应用ZBPYR干预.通过双向凝胶电泳比较各组大鼠海马蛋白质组表达图谱的不同;由MALDI-TOF-MS鉴定表达差异的蛋白.结果:与空白对照组相比,脾阴虚痴呆组有9个蛋白表达差异点;脾阴虚痴呆+ZBPYR组有2个差异点.经质谱鉴定显示脾阴虚痴呆组大鼠海马蛋白中Annexin Ⅲ表达上调,Tubulin beta chain 15、Dihydropyrimidinase-like 2和Guanine nucleotide-binding protein beta-1 subunit表达下降,ZBPYR干预后这些蛋白点的表达与空白对照组比较无明显差异.结论:脾阴虚痴呆大鼠海马的病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程,AnnexinⅢ、Tubulin beta chain 15等分子参与了脾阴虚痴呆大鼠的海马病变;ZBPYR可能通过对海马的差异表达蛋白的调控而达到治疗目的.     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑组织内质网应激影响的研究

目的:观察滋补脾阴方药(ZBPYR)对脾阴虚痴呆大鼠不同脑区内质网应激的影响.方法:通过证病结合的方法建立脾阴虚痴呆大鼠模型,以免疫组化方法检测各组大鼠海马(CA1、CA3、DG区)、大脑皮质中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78( GRP78)、凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达变化.结...     

脾阴虚痴呆证病结合模型建立及滋补脾阴方药干预的实验研究

目的：为有效模拟临床，建立脾阴虚痴呆证病结合大鼠模型，并观察滋补脾阴（Zi-Bu-Pi-Yin，ZBPY）方药对其影响。方法：采用经典方法建立脾阴虚模型，随后将凝集态β-淀粉样蛋白1-40（β-Amyloid 1-40，Aβ1-40）定位注射到双侧海马，应用ZBPY方药干预，观察各组体征变化。通过跳台仪和Morris水迷宫进行行为学测试，比较各组学习记忆能力的改变。结果：脾阴虚组和脾阴虚痴呆组表现出饮水量增加（P〈0．01），肛温升高（P〈0．01）等阴虚内热征象；痴呆组和脾阴虚痴呆组学习记忆力降低（P〈0．05）；脾阴虚痴呆＋ZBPY组阴虚表现和学习记忆力均有所改善（P〈0．05）。结论：本研究在完善阿尔茨海默病的证病结合模型方面作了尝试，观察了证、病、证病结合模型在体征和行为学方面的变化；ZBPY方药对脾阴虚痴呆大鼠的阴虚表现及学习记忆能力均有一定改善作用。     

滋补脾阴方药调节下丘脑中自噬及内质网应激改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍机制研究

目的：探讨滋补脾阴方药（ZBPYR）调节自噬及内质网应激（ERS）改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍的作用机制。方法：将大鼠随机分为空白对照组（cont）,糖尿病组（DM）,脾阴虚组（pi）,脾阴虚糖尿病组（piDM）,脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）。Western Blot观察微管相关蛋白1A/1B轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、抑制物阻抗性酯酶1α亚基（IRE1α）、c-Jun氨基端激酶（JNK）的蛋白表达。结果：DM组、pi组、piDM组LC3Ⅱ较cont组降低（P<0.05）,ZBPYR组LC3Ⅱ较DM组、piDM组增加（P<0.05）。与cont组比较,DM组、piDM组p-IRE1α、pi组、piDM组p-JNK1均有所增加（P<0.05）,ZBPYR组p-IRE1α、p-JNK1与DM组、piDM组比较有所降低（P<0.05）。结论：ZBPYR调节自噬及ERS改善脾阴虚糖尿病认知功能障碍。     

滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍大鼠海马乳酸及乳酸化修饰的影响

目的:探讨滋补脾阴方药对糖尿病认知功能障碍(DACD)大鼠学习记忆能力及海马中糖酵解产物乳酸及乳酸化修饰(Kla)的影响。方法:18只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、滋补脾阴方药34.6 g/kg组，每组6只。除正常对照组外，其余大鼠以高脂喂养联合链脲佐菌素(STZ)建立DACD模型，大鼠灌胃给予相应药物。行为学实验分析大鼠学习记忆能力；全自动生化分析仪测定血脂含量；ELISA法测定海马中β-淀粉样多肽(Aβ)1-40、Aβ_1-42含量；比色法测定海马乳酸含量；Western blot法测定海马糖酵解过程中的关键酶己糖激酶2(HK2)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、丙酮酸脱氢酶Α(PDHA1)、组蛋白赖氨酸乳酸酰化(Kla)的蛋白表达；通过免疫荧光分析大鼠海马Kla的水平。结果:与正常对照组比较，模型对照组的大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、逃避潜伏期明显增加(P<0.05或P<0.01),血清TG和LDL-c明显升高(P<0.05或P<0.01),海马Aβ_1-40、Aβ_1-4...     

脾阴虚痴呆大鼠不同脑区Snk-SPAR路径及滋补脾阴方药调控作用研究

目的:观察脾阴虚痴呆大鼠不同脑区树突棘相关的Rap-特异性GTPase-活化蛋白和血清诱导激酶mRNA表达的变化及滋补脾阴方药对其调控作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应检测各脑区SPAR、Snk mRNA表达变化。结果:痴呆组和脾阴虚痴呆组大鼠各脑区SPAR mRNA表达明显减弱(P<0.05),Snk mRNA表达呈上调趋势;脾阴虚痴呆+ZBPYR组大鼠各脑区SPAR mRNA表达明显增强(P<0.05),Snk mRNA表达呈下调趋势。结论:ZBPYR能使脾阴虚痴呆组大鼠各脑区SPARmRNA表达增强,Snk mRNA表达下调,提示ZBPYR具有保护并维持突触和树突棘正常形态的作用,这一作用机制可能与Snk-SPAR信号途径传递有关。