巢式RT-PCR定量检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA

目的:探讨肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA的表达含量 。方法:应用巢式RT-PCR定量检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA 。结果:17例AFP（+）癌旁组织内AFPmRNA表达强阳性（+++）,其癌旁组织内AFPmRNA表达呈中度阳性（++）。15例AFP（-）肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA表达弱阳性（+） 。结论:AFP（+）肝癌组织过量表达AFPmRNA基因,正常肝组织仅微弱表达AFPmRNA。     

肝癌组织、外周血淋巴细胞和癌旁组织MRP1的表达对评估原发性肝癌预后的价值比较

目的 探讨检测肝癌组织、外周血淋巴细胞及癌旁组织的MRP1(多药耐药基因1相关糖蛋白)表达水平在评估以手术为主辅以化疗的原发性肝癌患者复发或转移及生存期中的临床应用价值.方法 用流式细胞术同时检测26例初诊原发性肝癌患者外周血淋巴细胞、癌组织和癌旁组织MRP1表达水平,术后对患者进行追踪随访,了解其复发或转移及生存情况,分析三者MRP1的表达与复发或转移及生存期生存率间的关系.结果 初次就诊的原发性肝癌患者中,MRP1阳性率分别是肝癌组织61.5%,其次是外周血淋巴细胞53.8%、癌旁组织50.0%,但三者间并差异无统计学意义(P>0.05).外周血淋巴细胞和癌组织的MRP1阴性组和阳性组二者复发或转移率均差异无统计学意义(P>0.05),癌旁组织的MRP1阴性组和阳性组间复发或转移率差异有统计学意义(P<0.05).外周血淋巴细胞、肝癌组织及癌旁组织MRP1阴性表达组的中位生存期均明显长于MRP1阳性表达组、生存率均明显高于阳性组.结论 检测癌旁组织MRP1对于评估肿瘤转移复发具有重要临床意义;外周血淋巴细胞、肝癌组织及癌旁组织MRP1表达的检测可以用于评估肝癌术后生存期、生存率;外周血淋巴细胞MRP1表达的检测具有推广应用价值.     

抑癌基因PTEN与MMP-9在肝癌组织中表达与侵袭关系研究

目的探讨抑癌基因PTEN与MMP-9在肝细胞性肝癌(HCC)中表达意义及两者与肝癌侵袭性的关系。方法采用免疫组化(SP法)检测67例HCC及癌旁组织中PTEN与MMP-9表达,并分析两者与肝癌临床病理特征、侵袭性的关系。结果HCC中PTEN表达强度明显弱于癌旁组织,而MMP-9阳性表达强度明显高于癌旁组织,且两者间呈负相关;肝癌组织分化程度、侵袭性与PTEN表达呈负相关,而与MMP-9表达呈正相关。结论PTEN、MMP-9的表达一定程度上反映HCC分化和侵袭性强弱;PTEN缺失可引起MMP-9表达增加,在HCC侵袭、转移中发挥作用。     

肝细胞性肝癌中E-cadherin和nm23-h1的表达与转移的关系

目的　探讨E -cadherin和nm2 3 -h1表达与肝细胞性肝癌 (HCC)侵袭转移的关系。方法　应用免疫组化技术S -P法 ,检测 40例癌组织和癌旁组织中E -cadherin和nm2 3 -h1的表达水平 (用平均吸光度表示 ) ,结合肿瘤的侵袭转移能力、Edmondson分级进行分析。结果　 40例肝癌组织中E -cadherin和nm2 3 -h1的表达强度均弱于癌旁组织中的表达 ;E -cadherin和nm2 3-h1的表达强度与肿瘤的分化程度、侵袭转移能力密切相关 ;对E -cadherin和nm 2 3 -h1在癌旁和癌组织、有侵袭转移组中的表达进行相关性分析 ,均具有明显正相关。结论　E -cadherin和nm2 3 -h1的表达水平能反映HCC的分化程度和侵袭转移能力 ;两种蛋白的表达水平之间呈明显正相关 ;联合检测两种蛋白在肿瘤组织中的表达 ,对临床判断HCC的预后有一定的指导意义     

增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)在肝细胞肝癌的发生发展中的作用及作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测PCNA在肝细胞癌、相应癌旁组织和正常肝组织中mRNA和蛋白质的表达,正常肝组织、癌旁组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为20.0％、46.2％和85.7％;结合患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移等临床病理学资料进行统计学分析,其表达与组织分化程度和淋巴结转移呈明显相关(P＜0.05).结果 PCNA在正常肝组织、癌旁组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为20.0％、46.2％和85.7％,在肝细胞癌中的阳性表达率显著高于正常肝组织和癌旁肝组织(P＜0.05);RT-PCR检测结果也证实PCNA mRNA在肝细胞癌中的表达明显高于正常肝组织和癌旁肝组织(P＜0.05).PCNA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小等因素无明显相关(P＞0.05),与组织分化程度和淋巴结转移呈明显相关(P＜0.05).结论 PCNA在肝细胞癌组织中的表达高于正常肝组织和癌旁肝组织,并且与肿瘤的恶性程度密切相关.     

EphA7基因在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌中EphA7 mRNA的表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR法检测EphA7 mRNA在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理因素之间的关系.结果 40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphA7 mRNA的表达.实时荧光定量PCR分析显示EphA7 mRNA在肝癌组织(20.0711±32.0232)中的表达显著高于癌旁肝组织(4.5184±9.4738,P＜0.05)和正常肝组织(4.1764±4.7193,P＜0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).EphA7 mRNA的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关(P＜0.05).结论 EphA7的过表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥作用.     

PKM2和YAP在人肝癌组织中的表达及其相关性分析

目的探讨丙酮酸激酶M2(PKM2)和yes相关蛋白(YAP)在肝癌组织中的表达及其意义,并探索肝癌组织中PKM2蛋白和YAP蛋白表达的相关性。方法回顾性收集2010年4月至2013年10月期间于中国医科大学附属第四医院行手术切除的120例肝癌及其癌旁组织标本,采用SP免疫组织化学染色方法检测120例肝癌组织及癌旁组织PKM2和YAP蛋白的表达,并分析肝癌组织中PKM2蛋白和YAP蛋白表达与临床病理学特征的关系。其中,50例肝癌及癌旁组织标本具备手术时立即取材的新鲜冰冻组织标本,置液氮冷却后送-70°C冷冻冰箱内保存。采用Western blot与实时荧光定量PCR方法分别检测50例肝癌组织及癌旁组织中PKM2、YAP蛋白及其RNA的相对表达水平。结果 1免疫组化染色结果显示:肝癌组织中PKM2蛋白的表达阳性率为67.50%(81/120),YAP蛋白的表达阳性率为71.67%(86/120),均高于癌旁组织〔PKM2蛋白:20.83%(25/120);YAP蛋白:29.17%(35/120)〕,差异均有统计学意义(P0.050)。2肝癌组织中,PKM2蛋白和YAP蛋白的表达呈正相关(r=0.519,P0.001)。3肝癌组织中PKM2蛋白的表达与肿瘤直径、TNM分期、肿瘤分化程度及甲胎蛋白(AFP)水平均相关(P0.050),YAP蛋白的表达与肿瘤分化程度和AFP水平均有关(P0.050)。4 Western blot结果显示,肝癌组织中PKM2蛋白和YAP蛋白的表达水平分别为1.25±0.11和1.08±0.10,癌旁组织分别为0.38±0.01和0.41±0.02,肝癌组织中PKM2蛋白和YAP蛋白的表达水平均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P0.050)。5实时荧光定量PCR结果表明,以癌旁组织作为基准(即为1),肝癌组织中PKM2 m RNA和YAP m RNA的表达水平分别为11.38±0.35和19.96±0.48,均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P0.050)。结论 PKM2蛋白和YAP蛋白与肝癌的发生相关,并均与肝癌的分化程度密切相关。     

CD146与VEGF在人肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的 该研究旨在观察人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中CD146与VEGF的表达及其关系,探讨它们在HCC中与血管生成的关系及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测60例HCC癌组织及癌旁肝组织中CD146、VEGF的表达情况,用CD34标记免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD),分析它们的表达与临床病理指标的关系.结果 CD146、VEGF在癌组织中的阳性率分别为66.67%和63.33%,而在癌旁组织中的阳性率分别为30%和33.33%,癌组织与癌旁组织比较差异有显著性(P＜0.05).癌组织的MVD为54.92±8.55/200倍视野,癌旁组织的MVD为21.36±6.63/200倍视野,两者差异有显著性(P＜0.05).与癌旁组织相比,癌组织中CD146、VEGF表达及MVD明显增加.CD146在人肝癌组织中的表达与临床分期、门静脉癌栓及肝外转移明显有关,而与术后复发、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平及肿瘤分化程度无明显关系.VEGF在人肝癌组织中的表达与术后复发、肝外转移、临床分期、门静脉癌栓、肿瘤直径相关,而与肿瘤个数、血清AFP水平及肿瘤分化程度无明显关系.在癌组织中MVD与CD146、VEGF的表达呈正相关,CD146与VEGF亦呈正相关.结论 肝癌组织中CD146及VEGF高表达,与肿瘤血管形成和转移密切相关,分析它们的表达有助于综合判断HCC的预后.     

Chemerin在肝细胞肝癌中的表达及其预后价值

目的 探讨Chemerin在肝细胞癌组织及人肝癌细胞株中的表达及预后价值.方法 采用免疫组化SABC法检测Chemerin蛋白在正常肝组织、肝癌及癌旁配对组织中的表达情况;采用RT-PCR方法检测肝癌组织、人肝癌细胞株以及永生化肝细胞株LO2中Chemerin mRNA的表达情况.结果 Chemerin在肝癌组织中、癌旁配对组织中、正常肝组织中表达阳性率分别为56.67％、90.00％、100％,差别具有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,Chemerin mRNA在癌旁配对组织中的表达高于相应的肝癌组织(P＜0.05).细胞检测结果发现,Chemerin mRNA在永生化的人肝细胞株LO2中高表达;在人肝癌细胞株中低表达.Chemerin蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、HBsAg状态、甲胎蛋白(AFP)水平无关,而与淋巴结转移、门静脉癌栓、肝癌分化程度以及TNM分期相关.结论 Chemerin的表达下调可能在肝癌的发生发展及侵袭转移中起重要作用,提示其可能是影响肝癌患者预后的分子标志.     

Ku80基因在人原发性肝癌组织中的表达及其生物学意义

目的 探讨Ku80基因在人原发性肝癌的表达及其表达水平与肝癌的生物学特征的关系.方法 采用免疫组织、细胞化学技术及Westem blot技术,检测40例在同济医院肝脏外科中心行手术切除的原发性肝细胞癌患者的肝癌组织及癌旁组织、肝癌细胞系HepG2细胞及正常肝细胞系L02细胞中Ku80的表达,分析Ku80表达水平与肝癌、肝癌的分化程度及转移特性的关系.结果 Ku80在肝癌组织中的表达明显低于在癌旁肝组织中的表达,分别为14.95%和43.78%,差异有统计学意义(P<0.01);Ku80在低分化肝和中、高分化肝癌组织中的表达率分别为16.05%和13.85%,差异无统计学意义(P>0.05);伴有门静脉癌栓和不伴有门静脉癌栓的肝癌组织中Ku80的表达率分别为14.81%和16.31%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Ku80基因在人原发性肝细胞癌组织中表达显著下调,表明Ku80表达下调与原发性肝细胞癌的发生密切相关,但与肝癌的分化程度、转移特征无明显相关.     

巢式逆转录多聚酶链反应检测循环性肝癌细胞及其临床意义

目的应用巢式逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测血液中播散的循环性肝癌细胞并探讨其意义。方法抽取９３例肝癌患者及３７例对照组患者（１５例肝炎后肝硬变患者,１２例慢性肝炎患者,１０例健康人）周围静脉血液各５ｍｌ,应用巢式ＲＴＰＣＲ检测其周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ。结果共有５０个肝癌血液标本被检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中无一例血液中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ,ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期（ＴＮＭ）、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显联系（Ｐ＜００５）。２１例伴有肝外远处转移的原发性肝癌血液标本均被检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（１００％）,没有远处转移的７２例肝癌血液标本中２９例检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（４０３％）。结论ＡＦＰｍＲＮＡ可以作为肝癌细胞血液转移的标志,也可作为肝癌远处转移的预测性指标之一。     

荧光定量PCR法扩增MAGE-1、MAGE-3及AFP基因联合检测肝癌病人外周血微小转移

目的探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA联合检测肝癌病人外周血中微小转移的临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测86例原发性肝癌病人肝癌组织和外周血中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果86例原发性肝癌病人肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34．9％（30／86）、60．5％（52／86）和69．8％（60／86）；所有病人肝癌组织至少表达其中一种mRNA。外周血中阳性率分别为14．0％（12／86）、20．1％（18／86）和33．7％（29／86）。52．3％（45／86）的病人外周血至少检测到一种mRNA，较单一AFP mRNA检测阳性率明显提高（P〈0．05）。25例肝炎肝硬化病人及28例健康志愿者中未见阳性。阳性率与肿瘤TNM分期、门脉瘤栓、远处转移有关（P〈0．05）。与肿瘤大小、数目、分化程度、血清AFP水平无关（P〉0．05）。结论MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA联合检测肝癌血行微小转移较单一AFP mRNA检测灵敏度高。     

肝癌病人手术期间不同部位血液AFP mRNA定量检测及其意义探讨

目的 研究肝细胞性肝癌(HCC)病人手术期间不同部位血液甲胎蛋白信使核糖核酸(AFP mRNA)的水平变化，分析其与临床病理学特征和复发转移的关系。方法 18例HCC和6例非HCC肝肿瘤病人，于切除肿瘤前后抽取门静脉、肝静脉和外周静脉血各5m1，肝炎、肝硬化病人各10例取外周血5m1。应用TaqMan实时定量逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)检测AFP mRNA水平。结果 术前外周血AFP mRNA相对HCC的灵敏度为72．2％，特异性为76.9％，准确率为75．0％。HCC病人术后各部位血液AFP mRNA水平明显高于术前相应部位水平。血液AFP mRNA水平与肿瘤大小、分化程度、有无肝内播散、包膜完整性以及血清AFP浓度均无关，而有门静脉癌栓的病人术后肝静脉血AFP mRNA水平明显高于无癌栓者。术后2个月内复发者，术后门静脉和外周静脉血AFP mRNA水平明显高于末复发者。结论 TaqMan实时定量RT—PCR法检测HCC病人血液AFP mRNA有较高的敏感性和特异性。手术可能促进部分HCC细胞和肝细胞脱落入血。动态监测外周血AFP mRNA水平对术后早期复发有预测价值。     

外周血肝癌多药耐药荧光定量检测及意义

目的　评价荧光定量聚合酶链式反应 (FQ PCR)检测原发性肝癌外周血有核细胞多药耐药 (MDR1)基因表达与肝癌细胞MDR1基因表达的相关性 ,建立原发性肝癌外周血MDR1基因临床检测方法。方法　选择 5 5例原发性肝癌病例 ,术前抽血提取有核细胞 ,采用FQ PCR方法检测MDR1基因表达 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和流式细胞技术 (FCM)检测术后肿瘤标本MDR1mRNA和P 糖蛋白 (P gp)表达。结果　 5 5例原发性肝癌病例荧光定量PCR、RT PCR、FCM方法检测MDR1的阳性表达例数分别为 2 5、3 0、3 3 ;3种方法的检测结果明显相关 (P <0 .0 1)。结论　FQ PCR方法检测外周血MDR1基因表达的结果与肝癌细胞MDR1的表达明显相关 ,可用于原发性肝癌病例多药耐药性的临床检测。     

肝癌患者外周血AFP mRNA表达的临床意义

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)患者外周血AFP mRNA表达在血行播散中的意义.方法:抽取30例HCC患者外周静脉血5ml,应用RT-PCR对血中AFP mRNA进行扩增检测,并与各对照组比较.结果:30例HCC患者中,AFP mRNA的阳性率为46.7%(14/30);AFP mRNA的表达阳性率与肝癌TNM分期、肿瘤大小、有无门脉癌栓及有无肝外转移有显著的相关性(P＜0.05),而与血清AFP水平无关(P＞0.05).结论:AFP mRNA是反映原发性肝癌患者血中是否存在肝癌细胞的灵敏指标.     

应用巢式RT-PCR联合检测原发性肝癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达

目的 寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移。方法 应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后1周和术后2个月检测37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE-1 mRNA和AFPmRNA的表达，并随访所有病人1年。结果 外周血中MAGE-1 mRNA和AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期相关；肿瘤病期越晚，外周血中微转移灶的检出率越高。1年的随访中，有9例病人出现复发，MAGE-1和(或)AFPmRNA的阳性率为77．8％(7／9)，其中6例外周血中MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA持续阳性，2例由阴性转为阳性。另有10例病人MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA由术前阳性术后转为阴性，随访1年中无复发。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后一项敏感可信的指标。     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫抑制肝癌病人术后复发和转移

目的 研究肿瘤抗原激活的树突状细胞（DC0在肝癌病人体内诱导的抗肿瘤免疫能否抑制肝癌术后复发和转移。方法 分离肝癌根治性切除术后病人外周血DC,以人肝癌细胞系HepG2细胞粗提物激活DC,以粒（巨噬）细胞集落刺激因子（GM－CSF）和白介素－4（IL－4）联合刺激DC,DC回输病人,检测肝癌病人外周血AFP mRNA。结果 在AFP mRNA阳性组织中,治疗组11例中仅1例AFP mRNA仍为阳性,而对照组11例中9例AFP mRNA仍为阳性;在AFP mRNA阴性组中,治疗组13例AFP mRNA仍全部为阴性,而对照组13例中4例AFP mRNA为阴性。结论 肿瘤抗原激活的DC在肝癌病人体诱导的抗肿瘤免疫能够抑制术后肝癌复发和转移。     

肝癌细胞血行播散对术后复发及远处转移的影响

目的 对照研究周围静脉血液中甲胎蛋白(AFP)mRNA阳性及阴性肝癌患者术后肿瘤复发和远处转移情况.方法 应用巢式RT-PCR检测术后24、48 h及1周、4周肝癌患者周围静脉血液中AFP mRNA水平,并术后随访1、2、3年.结果 12例术前及术后1周内血液AFP mRNA持续(+)的肝癌患者中,有7例在术后1年内产生了复发或转移性病灶(7/12,58.3%);所有患者在术后2年内均发生了肝癌复发和远处转移(12/12,2年复发率为100%).而在随访的19例血液AFPmRNA(-)肝癌患者中,有5例(5/19,26.3%)在术后1年内复发,4例在术后第2年复发(9/19,2年复发率为47.3%),1例术后第3年复发(10/19,3年复发率为52.6%),未出现肝外远处器官转移.术后1、2,3年复发率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 术后血液AFP mRNA持续(+)的肝癌患者较AFP mRNA阴性肝癌患者更容易产生复发或转移.     

骨桥蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系及肝癌组织中表达意义

目的 研究不同转移潜能人肝癌细胞系及其肝癌组织中骨桥蛋白(OPN)表达情况,分析OPN表达与肝癌细胞侵袭转移潜能、肝癌术后复发转移的关系.方法 应用细胞免疫组化、半定量RT-PCR、Western Blot和ELISA检测不同转移潜能人肝癌细胞系SMMC-7721、MHCC97-L和HCCLM6 OPN表达情况.应用组织芯片、免疫组化检测200例肝癌组织中OPN表达.结果 OPN表达水平随着肝癌细胞侵袭转移潜能增加逐渐升高.肝癌组织中OPN表达与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、有无包膜、细胞分化以及肝门淋巴结转移无明显相关性.而与肝癌TNM分期、门静脉癌栓和术后复发转移发生有明显相关(P<0.05).术后有复发转移病人的肝癌组织中66%表达OPN,而术后无复发转移病人的肝癌组织中仅37%表达OPN,两者比较差异具有显著性(P<0.05).结论 OPN表达与肝癌细胞细胞系侵袭转移潜能密切相关.肝癌组织中OPN表达可能是预测肝癌术后是否发生复发转移指标.     

原发性肝癌组织VEGF与外周血AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达与外周血液中甲胎蛋白（AFP） mRNA表达在原发性肝细胞癌转移中的意义。方法 ： 用巢式逆转录PCR法检测20例肝癌患者术前外周血液中的AFP mRNA，对其手术切除标本采用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达，结合临床病理资料进行配对分析。结果：（1）20例原发性肝细胞癌中10例VEGF为阳性表达，其表达情况与临床病理参数无明显相关;（2）20例肝癌中13例AFP≥200μg/L ,15例外周血液中AFP mRNA阳性；（3） VEGF阳性的10例病例中有9例在外周血中可检测到AFP mRNA。结论：（1）肝癌组织VEGF和外周血中AFP mRNA检测都可作为判断原发性肝癌有无血行转移倾向的指标，前者较为简单，而后者较为客观准确。(2) 对肝癌高危人群的普查和肝癌术后随访，应用外周血中AFP mRNA的检测方法较血清AFP水平更加敏感。