多房棘球蚴感染小鼠辅助Th17细胞,转录因子RORγτ及相关细胞因子的实验研究

目的探讨多房棘球蚴感染小鼠脾脏细胞中辅助性T细胞17比例,转录因子RORγτ和IL-17因子的表达及其意义。方法选用6~8周龄BALB/c小鼠共30只,随机分为多房棘球蚴感染组(Em)、多房棘球蚴感染阿苯达唑治疗组(Em+Albendazole,Em+ABZ)和健康对照组(healthy controls,HC),每组10只。通过腹腔注射法建立泡型包虫病小鼠模型。Em+ABZ治疗组给予灌胃阿苯达唑治疗(100μl/d,35d)通过流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中辅助性T17细胞(CD4+IL-17+Th17细胞/CD4+T细胞)比例,采用实时荧光定量PCR检测脾脏细胞中维甲酸孤独受体(retinoid acid orphan receptor-γτ,RORγτ)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-17水平。结果 CD4+IL-17+Th17细胞/CD4+T细胞比例,Em组为(2.10±1.00)%,与HC组(0.85±0.71)%比较,差异有统计学意义(F=3.07,t=2.66,P<0.01)。Em+ABZ组为(1.54±1.19)%,与HC组和Em组比较,差异无统计学意义(F=3.07,P>0.05);脾脏细胞RORγτmRNA在Em组中的表达(6.1×10-4±5.8×10-4)高于在Em+ABZ组(6.0×10-4±3.5×10-4)和HC组(3.4×10-4±2.4×10-4)中的表达,但差异无统计学意义(F=0.66,P>0.05)。Em+ABZ组与HC组比较,差异亦无统计学意义(F=0.66,P>0.05)。脾脏细胞培养上清液中IL-17A,Em组为(10.71±1.85)ng/ml,明显高于Em+ABZ组[(5.58±3.56)ng/ml]和HC组[(7.31±1.22)ng/ml],差异有统计学意义(F=9.82,t1=3.12,t2=5.57,P<0.01)。Em+ABZ组与HC组比较差异无统计学意义(F=9.82,t=0.84,P>0.05)。结论 Th17细胞参与BALB/c小鼠多房棘球蚴感染免疫和炎性应答过程,阿苯达唑治疗能够减轻免疫损伤和炎症反应。Th17细胞及IL-17A可能是潜在的多房棘球蚴病新的分子免疫干预靶点。     

刺槐素对小鼠骨髓巨噬细胞AIM2炎症小体活化的抑制作用

目的 探讨刺槐素对脂多糖（LPS）和双链DNA模拟物poly(dA:dT)共诱导的小鼠骨髓巨噬细胞（BMDMs）黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症小体活化的影响。方法 在小鼠股骨中分离并培养BMDMs，将其分为对照组、LPS组、LPS+poly(dA:dT)组和LPS+poly(dA:dT)+刺槐素组。对照组将BMDMs继续在完全培养基中培养3 h;LPS组将BMDMs在加入含50 ng/mL LPS的完全培养基中培养3 h;LPS组+poly(dA:dT)组将BMDMs在加入含50 ng/mL LPS的完全培养基中培养3 h，再加入poly(dA:dT) 10μmol/L作用0.5 h;LPS+poly(dA:dT)+刺槐素组将BMDMs在加入含50 ng/mL LPS的完全培养基中培养3 h，然后加入刺槐素10μmol/L作用0.5 h，最后加入poly(dA:dT) 10μmol/L作用0.5 h。采用Western blotting法检测细胞裂解液pro-Caspase-1、pro-白细胞介素（IL）-1β和上清液Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达量，ELISA法检测细...     

冠心病外周血IL-7表达变化对机体免疫应答的影响及可能机制

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)外周血白细胞介素(IL)-7表达变化对机体免疫应答的影响及可能机制。方法选取稳定型心绞痛患者44例、不稳定型心绞痛患者78例、急性心肌梗死患者42例;另取体检的健康人群40例为正常对照组。流式细胞术检测T细胞表面黏蛋白结构域的分子(Tim)3水平,酶联免疫吸附试验检测血清IL-7水平。体外培养外周血单核细胞,重组IL-7刺激12 h后检测T细胞表面Tim3水平;通过Western印迹法检测IL-7信号通路相关分子的表达水平。结果稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD4^+T细胞的比例明显高于正常对照组,急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD4^+T细胞的比例明显高于稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组(P<0.05)。不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD8+T细胞的比例明显高于正常对照组,急性心肌梗死组外周血Tim3阳性细胞占CD8+T细胞的比例明显高于稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组(P<0.05)。急性心肌梗死组血清IL-7水平明显高于正常对照组(P<0.01);稳定型心绞痛组和不稳定型心绞痛组血清IL-7水平与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);血清IL-7浓度与Tim3+CD4^+T、CD8+T细胞比例均无相关性。急性心肌梗死组重组IL-7刺激12 h的CD4^+T细胞表面Tim3表达水平较未刺激者明显升高(P<0.05)。正常对照组、急性心肌梗死组重组IL-7刺激12 h的CD8^+T细胞表面Tim3表达水平较未刺激者明显升高(P<0.05)。重组IL-7刺激后p-STAT-5蛋白相对表达量明显高于未刺激的细胞(P<0.01);重组IL-7刺激后SOCS3蛋白相对表达量明显高于未刺激的细胞(P<0.05)。结论IL-7可上调Tim3表达,在冠心病发生、发展中发挥抑制炎症应答的作用。     

多房棘球蚴感染对小鼠肝脾淋巴细胞及其亚群的影响

目的探讨多房棘球蚴感染对C57BL/6小鼠肝和脾淋巴细胞及其亚群的影响。方法 32只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只,对照组、低数量组(50个原头节/鼠)、中数量组(500个原头节/鼠)、高数量组(2 000个原头节/鼠),实验组取200μl含不同数量多房棘球蚴原头节的混悬液,采用门静脉注射法建立多房棘球蚴感染小鼠模型,对照组注射等量生理盐水。感染后4周,每组各取4只小鼠,取肝脏组织,常规Masson染色,观察病理变化。剩余4只小鼠取肝脏和脾脏,制备肝、脾细胞悬液,流式细胞术检测肝、脾CD3^+T细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD4^+CD69^+T细胞、CD8^+CD69^+T细胞绝对数以及初始型CD4^+T (CD4^+Tn)细胞、效应记忆性CD4^+T (CD4^+Tem)细胞、初始型CD8^+T (CD8^+Tn)细胞、效应记忆性CD8^+T(CD8^+Tem)细胞和中心记忆性CD8^+T(CD8^+Tcm)细胞比例的变化。检测数据采用Flow-Jo软件分析,并做流式图。采用Graphad Prism 7.0软件进行作图和统计学分析。结果感染后4周,对照组小鼠肝无明显变化,低、中数量组小鼠肝组织出现急性炎症反应减弱,部分病灶炎性反应逐渐转变为纤维化修复,形成小肉芽肿结节,呈点状或灶状坏死。高数量组小鼠肝内出现小囊泡,可见生发层结构,周围大量炎性细胞浸润。小鼠肝CD3^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(4.10±0.04)×10^5、(3.81±0.14)×10^5、(3.02±0.12)×10^5、(2.98±0.03)×10^5,高数量组高于其他3组(P<0.05或0.01)。小鼠脾CD3^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(16.01±0.40)×10^5、(11.03±1.21)×10^5、(10.10±1.01)×10^5、(9.71±0.90)×10^5,高数量组高于其他3组(P<0.01)。小鼠肝CD4^+T、CD8^+T细胞和脾B细胞、CD8^+T绝对数高数量组高于其他3组(P<0.05或0.01)。小鼠肝CD4^+CD69^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(3.23±0.10)×10^4、(1.98±0.11)×10^4、(1.51±0.26)×10^4、(1.19±0.21)×10^4,高数量组高于其他组(P<0.05)。小鼠脾CD4^+CD69^+T细胞绝对数高、中、低数量组和对照组分别为(10.10±0.41)×10^4、(8.91±0.80)×10^4、(8.20±0.41)×10^4、(6.81±0.50)×10^4,高数量组高于对照组(P<0.01)。肝、脾CD8^+CD69^+T细胞绝对数高数量组高于其他3组(P<0.05或0.01)。小鼠肝CD4^+Tn细胞比例高、中、低数量组和对照组分别为(15.52±1.51)%、(19.3±2.09)%、(20.66±1.28)%、(23.62±2.84)%,对照组高于其他组(P<0.05或0.01)。肝、脾CD8^+Tn细胞比例对照组高于其他组(P<0.05或0.01)。肝、脾CD8^+Tcm细胞比例高数量组高于对照组(P<0.05)。结论高数量多房棘球蚴感染C57BL/6小鼠,肝区域以CD4^+T细胞和CD8^+T细胞募集为主,而脾以B细胞和CD8^+T细胞募集为主。     

Flt3L刺激体外培养小鼠骨髓源CD8α~+树突状细胞及其成熟状态分析

目的建立体外快速制备大量具有免疫活性的小鼠骨髓来源不成熟CD8α+DCs方法。方法实验分2组。Flt3L组:将小鼠骨髓前体细胞用含终浓度为100ng/ml Flt3L的BMDC培养基混悬后接种于细胞培养皿中,每平皿10ml,37℃培养至第7d收集细胞;GM-CSF+IL-4组:将骨髓前体细胞用含终浓度为20ng/ml GM-CSF、5ng/ml IL-4的BMDC培养基混悬后接种于细胞培养皿中,每平皿10ml,分别于37℃培养第3d和第5d半量换液,培养第7d收集细胞,采用磁选法分离CD11c+BMDCs,用流式细胞仪检测。结果 Flt3L刺激组CD11c+BMDCs得率为(95.07±0.09)%,GM-CSF+IL-4刺激组为(83.97±0.43)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Flt3L刺激组CD11c+CD8α+BMDCs得率为(9.83±0.33)%,GM-CSF+IL-4刺激组刺激组为(4.06±0.17)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Flt3L刺激组CD11c+CD8α+BMDCs表面几乎不表达CD40、CD80、CD86,仅低表达MHCI、MHCII,处于未成熟阶段。结论采用Flt3L刺激小鼠骨髓前体细胞的方法可获得大量未成熟的CD11c+CD8α+BMDCs,方法简单,得率较高,为开展CD8α+DCs相关基础和临床研究奠定了基础。     

Treg/Th17细胞在不同时期慢性阻塞性肺疾病患者中的改变及意义探讨

目的 探讨CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞(Treg细胞)、Th17细胞特异性分泌因子IL-17在COPD急性加重期(AECOPD)及COPD稳定期中的改变及临床意义.方法 选取住院AECOPD患者26例,随访COPD稳定期患者20例,健康对照患者15例.流式细胞仪检测患者外周血CD4+ CD25+ CD1271.wTreg细胞比例、ELISA检测外周血IL-17浓度.结果 ①AECOPD组患者外周血Treg细胞比例较COPD稳定期组、对照组均明显升高[分别为(10.319±2.154)％,(6.406±1.498)％,(6.307±1.626)％;P＜0.05],COPD稳定期组患者Treg细胞比例高于对照组但差异无统计学意义;②A ECO PD组及COPD稳定期组外周血IL-17水平较对照组明显升高[分别为(0.813±0.233) ng/L,(o.547±0.157) ng/L,(0.408±0.169) ng/L;P＜0.001],AECOPD组IL-17水平高于COPD稳定期组(P＜0.01),COPD稳定期组IL-17水平高于对照组(P=0.046);③各组Treg细胞、IL-17水平与各指标之间未见相关性.结论 Treg细胞、IL-17在AECOPD及COPD稳定期中的水平异常说明在COPD的不同时期存在着不同的炎症,Treg/Th17细胞失衡可能导致COPD的免疫紊乱和慢性炎症持续.     

Hp感染胃溃疡合并2型糖尿病患者外周血中T淋巴细胞亚群的水平变化及意义研究

选取2017.8~2018.6期间67例溃疡糖尿病组,63例溃疡组,49例对照组,结果三组T细胞亚群水平存在显著差异,且溃疡糖尿病组CD4^+、CD8^+、CD3^+、CD4/CD8水平低于其他两组,P<0.05;三组C反应蛋白(CRP)、白介素-17(IL-17)水平存在显著差异,且溃疡糖尿病组高于其他两组,P<0.05。结论GU并T2DM者行T淋巴细胞亚群检测,CD4^+、CD3^+、CD8^+、CD4/CD8水平降低,CRP、IL-17显著升高。     

急性胰腺炎患者外周血CD14^+CD16^+单核细胞表达B7-H2的临床意义

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是常见的急腹症,不同类型预后不同.AP的免疫应答和失衡免疫与其严重程度有关,炎症因子和相关免疫细胞在AP发病机制中至关重要,因而寻找炎症细胞和新炎症免疫因子对精准治疗AP具有重要意义.目的探讨AP患者外周血CD14^+CD16^+单核细胞表达B7-H2的临床意义.方法A P患者63例[轻度A P(m i l dA P,M A P)25例、中度AP(moderately severe AP,MSAP)20例、重度AP(severe AP,SAP)18例],对照组为健康体检者20例,采用流式细胞仪检测CD14^+CD16^+细胞亚群上B7-H2表达情况,评价其与胰腺炎严重程度关联性及临床意义.结果AP患者发病24hCD14^+CD16^+细胞B7-H2出现异常高表达,显著高于健康对照组(t=11.10,P<0.001);A P各组B 7-H 2在C D 14^+C D 16^+细胞膜上表达明显高于CD14^+C D16^-细胞膜上表达(P<0.01);SAP组CD14^+C D 16^+和CD14^+C D 16^-细胞B7-H2表达(373.30±89.72和78.62±13.05)最高,M S A P组(279.55±76.95/44.92±12.44)其次,均高于M A P组(181.15±35.75/23.32±4.28),各组两两比较差异有显著性(P<0.01);MAP组、MSAP组发病24 h、48 h、72hCD14^+CD16^+和CD14^+CD16^-单核细胞膜B7-H2动态表达差异无显著性(P>0.05),然而,SAP组无论C D14^+C D16^+还是CD14^+C D16^-细胞膜B7-H2表达24h、48h、72h均呈明显上升趋势,差异有显著性(P<0.05).结论CD14^+CD16^+和CD14^+CD16^-单核细胞膜B7-H2在AP患者体内高表达,与AP严重程度密切相关,且SAP呈动态升高变化;同时B7-H2在AP患者CD14^+CD16^+单核细胞膜表达较CD14^+CD16^-单核细胞明显升高,为进一步认识AP免疫应答和失衡提供了新的线索,为AP精准靶向治疗提供参考.     

阿片类药物对肝癌患者血清中调节性T细胞表达变化及中药干预

[目的]探究阿片类药物对肝癌患者血清中调节性T细胞表达变化的影响以及小半夏加茯苓汤的干预作用。[方法]收录肝癌患者68例,采用流式细胞仪检测其外周血调节性T细胞的表达水平,并比较使用阿片类药物前后1周T细胞的表达变化;根据患者意愿于阿片类使用1周后开始给予小半夏加茯苓汤干预一周后观察T细胞的表达变化。[结果]肝细胞癌组外周血中辅助性T细胞CD4^+T(CD3^+CD4^+)、抑制性T细胞CD8^+T(CD3^+CD8^+)、调节性T细胞(CD4^+CD25^+)较健康对照组明显减少(P<0.05);肝细胞癌组外周血中NK细胞(CD3-CD16^+CD56^+)较健康对照组明显增加(P<0.05),服用阿片组外周血中CD4^+T、CD8^+T、CD4^+CD25^+较肝癌对照组明显减少(P<0.05);NK细胞较肝癌对照组明显增加(P<0.05);中药干预组明显升高阿片组外周血中CD4^+T、CD8^+T、CD4^+CD25^+,明显降低NK细胞数,差异有统计学意义(P<0.05)[结论]阿片类药物对肝癌患者血清中调节性T细胞功能有明显抑制作用,小半夏加茯苓颗粒能较好的缓解其抑制作用,值得临床推广。     

姜黄素对NOD糖尿病小鼠Th1细胞和CD4^+Treg细胞的作用

目的研究姜黄素对Th1细胞和CD4^+Treg细胞的作用,探讨姜黄素对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的治疗作用。方法将10周龄雌性NOD小鼠分为对照组和姜黄素组,分别用溶剂或姜黄素灌胃。第14周时测血糖。第20周时,流式细胞术分析外周血Th1细胞和CD4^+Treg细胞,分析胸腺CD4^+ CD8^-T细胞、CD8+CD4^-T细胞及CD4^+Treg细胞;分选脾CD4^+Treg细胞用于检测其抑制功能。结果姜黄素组血糖正常比例高于对照组。姜黄素组Th1细胞比例显著低于对照组(P<0.05),CD4^+Treg细胞比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05),CD4^+Treg/Th1显著高于对照组(P<0.05)。姜黄素组胸腺CD4^+CD8^-T细胞、CD8^+CD4^-T细胞及CD4^+Treg细胞比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05),胸腺总细胞数显著高于对照组(P<0.05)。姜黄素组CD4^+Treg细胞的抑制功能明显高于对照组(P<0.05)。结论姜黄素降低NOD小鼠外周Th1细胞、增加CD4^+Treg细胞抑制功能、缓解胸腺退化,延缓了NOD小鼠的高血糖症状。     

外源性细胞因子对柯萨奇病毒性心肌炎小鼠脾Th17细胞的影响

目的:观察转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-6和IL-23对柯萨奇病毒性心肌炎(VMC)小鼠脾中Th17细胞分化增殖的影响。方法:以6周龄雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒液建立VMC模型,1周后磁珠分离脾脏CD4+T淋巴细胞,分成对照组、TGF-β+IL-6组和TGF-β+IL-6+IL-23组进行体外培养。5d后应用流式细胞术测定刺激后Th17细胞的百分比;逆转录-聚合酶链式反应测定细胞中IL-17mRNA的表达;ELISA测定细胞培养上清液IL-17的水平。结果:与对照组比较,TGF-β+IL-6组Th17细胞数稍增加[(1.64±0.43)%∶(1.96±0.35)%],IL-17mRNA表达水平及细胞培养上清液IL-17浓度稍增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。而TGF-β+IL-6+IL-23组Th17细胞数显著增加(4.08±0.77)%、IL-17mRNA表达水平及细胞培养上清液IL-17浓度均明显高于前2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外源性TGF-β联合IL-6对VMC小鼠脾中已分化的Th17细胞无增殖作用,而添加外源性IL-23则能显著增加Th17细胞数及其效应分子IL-17的表达。     

消痔灵注射液介导TGF-β1/Smad信号治疗放射性直肠炎出血的分子机制研究

目的 研究消痔灵注射液介导转化生长因子 β1(TGF-β1)/Smad信号治疗放射性直肠炎(RP)出血的分子机制.方法 40只SPF级大鼠分为对照组、模型组、消痔灵组、TGF-β1组、TGF-β1联合消痔灵组各8只,对照组采用蛋白质含量20％的标准饲料喂养,其他四组6 MV X射线固定照射,制作RP大鼠模型,消痔灵组在...     

青蒿素对 AECOPD 患者外周血中炎症因子及 Th17/Treg 失衡的调控

目的：通过检测青蒿素干预前后慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者外周血中 Th17细胞,Treg 细胞占 CD4+ T 细胞的比例,炎症因子 IL-6、IL-21、转化生长因子β(TGF-β)的含量,初步探讨青蒿素对 COPD 患者外周血中炎症因子和 Th17/Treg 失衡的调控机制。方法随机收集 AECOPD 20例,将其分为1640干预组和青蒿素干预组,收集同一时期肺功能正常健康体检者20例作为对照组,抽取清晨空腹静脉血,采用流式细胞术检测所有实验对象 CD4+ Th17细胞和 Treg 细胞占 CD4+ T 细胞的比例;采用 ELISA 方法检测所有实验对象血清中炎症因子 IL-6、IL-21、TGF-β的水平。结果①CD4+ Th17细胞/CD4+ T 细胞和 Th17/CD4+ Treg 细胞的比例1640干预组高于青蒿素干预组和对照组,青蒿素干预组高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。Treg 细胞/CD4+ T 细胞的比例1640干预组则低于青蒿素干预组和对照组,青蒿素干预组低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。炎症因子 IL-6和 IL-21的水平1640干预组高于青蒿素干预组和对照组;青蒿素干预组高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。④炎症因子 TGF-β的水平1640干预组则低于青蒿素干预组和对照组,青蒿素干预组低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。⑤Th17/Treg 细胞的比值与炎症因子 IL-6(r =0.095,P <0.05),IL-21(r =0.051,P <0.05)的水平呈正相关,与 TGF-β(r =-0.002,P <0.05)的水平呈负相关;炎症因子 TGF-β的水平与炎症因子 IL-6(r =-2.075,P <0.05),IL-21(r =-2.869,P <0.05)的水平呈负相关。结论 AECOPD 患者外周血中存在 Th17/Treg 的失衡,炎症因子 IL-6、IL-21、TGF-β与 Th17/Treg 的失衡密切相关,青蒿素可能能够通过下调 IL-6和 IL-21的表达,上调 TGF-β的表达来调节其失衡。     

晚期血吸虫病肝纤维化患者血清维生素D水平与免疫失衡的关系

目的 探索晚期血吸虫病肝纤维化患者血清维生素D水平与免疫失衡间的关系.方法 选择2016年5月至2018年9月就诊于嘉兴市第一医院血吸虫病科的120例晚期血吸虫病肝纤维化患者作为观察组,选取50例同期该院健康体检者作为对照组,比较两组血清中IgG抗体、IgA抗体、C3补体、C4补体、CD4+细胞比例、CD8+细胞比例、...     

外源性转化生长因子-β对病毒性心肌炎小鼠脾Th17细胞增殖的影响△

目的观察外源性转化生长因子（transforming growth factor,TGF-β）对病毒性心肌炎小鼠脾辅助性T淋巴细胞亚群（Th17）细胞增殖的影响。方法BALB／c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3建立病毒性心肌炎小鼠模型,1周后磁珠分离脾CD4’T淋巴细胞进行体外培养,分别用植物血凝素加TGF．B或单独用植物血凝素进行培养,5d后流式细胞术测定培养后卟17细胞比例、逆转录一聚合酶链反应（PT-PCR）测定培养细胞白细胞介素-17（interleukin-17,IL．17）mRNA的表达、酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定培养上清液中白介素-17的水平。结果与单独用植物血凝素培养组比较,植物血凝素加TGF-β组的Th17细胞比例稍有增加,但差异无统计学意义（2．32％±1．48％孤1．82％±0．17％,P〉0．05）。两组培养细胞白介素-17mRNA及上清液中自介素-17浓度比较,差异也无统计学意义（P均〉0．05）。结论外源性TGF—β对病毒性心肌炎小鼠脾中已分化的Th17细胞无增殖作用。     

HIF-1α/VEGF-VEGFR2/Nrp-1表达对NSCLC患者Treg增殖的影响

目的分析缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、神经纤毛蛋白-1(Nrp-1)表达对非小细胞肺癌(NSCLC)患者调节性T细胞( regulatory T Cells, Treg)增殖的影响。 方法纳入60例NSCLC患者及20名健康人群,提取外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞学检测核内CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺Treg细胞含量。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PBMC细胞上清液中HIF-1α、VEGF、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-2 (IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。Western blotting方法检测Treg细胞上清液中VEGFR2、Nrp-1蛋白表达水平,Transwell迁移实验检测VEGF对Treg细胞的趋化作用。 结果NSCLC患者外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺Treg细胞比例明显高于健康对照组(P<0.01);与对照相比,NSCLC组患者HIF-1α、VEGF、IL-10、TGF-β的表达水平明显升高(P<0.01),IL-2的表达水平明显降低(P<0.01);Person相关性分析提示NSCLC患者PBMC中Treg含量与PBMC细胞上清液中HIF-1α、IL-10、TGF-β、VEGF表达均呈正相关(r＝0.74;r＝0.73;r＝0.68;r＝0.58,P均<0.01),与IL-2表达呈负相关(r＝-0.59,P<0.01)。NSCLC患者Treg细胞表面VEGFR2、Nrp-1受体表达增加(P<0.01);VEGF对Treg细胞有趋化作用,缺氧状态下趋化作用更为强(P<0.01)。 结论NSCLC微环境缺氧,HIF-1α表达上调,肿瘤细胞和内皮细胞分泌VEGF增多,可通过招募和细胞转化促进Treg增多,其表面受体VEGFR2/Nrp-1表达上升,从而Treg细胞积聚活化,促进IL-2、IL-10、TGF-β细胞因子分泌,进而抑制效应细胞功能,肺癌细胞免疫逃逸,病情进展。     

PAI-1引起2型糖尿病合并NAFLD小鼠肝脏炎性反应和纤维化的机制研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积,炎性反应,纤维化等的影响。方法以C57BL/KSJ-Lepdb雄性小鼠作为T2DM合并NAFLD组(db/db组),同周龄C57BKS db/m雄性小鼠作为对照组(db/m组)。采用苏木素-伊红染色,油红О染色等方法检测小鼠肝组织切片脂质沉积;采用ELISA检测肝组织甘油三酯含量。以小鼠正常肝细胞NCTC1469作为研究对象,分为5组:对照组给予25 mmol/L葡萄糖(NG组)高渗对照组给予25 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇(HMA组)、高糖高脂组给予50mmol/L葡萄糖+0.75 mmol/L棕榈酸(HG+PA组)、高糖高脂+RNA干扰对照组(HG+PA+Si-NC组)用NC siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预,高糖高脂+PAI-1沉默组(HG+PA+Si-PAI-1组)用PAI-1的siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预。采用实时定量PCR和Western印迹方法检测炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β),肝纤维化相关指标转化生长因子-B(TGF-3),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col I)以及PAI-1的表达情况。结果与db/m组相比,db/db组小鼠肝组织中出现明显脂质聚集和纤维组织增生,甘油三酯含量增加,且MCP-1,IL-1β、TGF-β,a-SMA,ColⅠ和PAI-1的mRNA和蛋白水平均明显上调(均P<0.05)。与NC组细胞相比,HG+PA组MCP-1、IL-1β、TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ、PAI-1表达量均明显上调(均P<0.05);与HG+PA组相比,HG+PA+si-PAI-1组PAI-1、MCP-1、IL-β、TGF-β、α-SMA和ColⅠ等表达量均明显下调(均P<0.05)。结论T2DM合并NAFLD小鼠模型肝组织中PAl-1表达明显增加,抑制PAI-1表达可明显改善肝组织炎性反应和纤维化水平。     

中药溃克灵对结肠炎模型大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

免疫调节异常在炎症性肠病（IBD）的发病中起重要作用,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Freg）是一种免疫调节细胞,可维持机体免疫平衡。目的：观察中药溃克灵对结肠炎模型大鼠CD4^＋CD25^＋Treg的影响,探讨其治疗IBD的可能机制。方法：60只Sprague—Dawley大鼠随机分为正常对照组、结肠炎模型组和中药治疗组,采用TNBS诱导结肠炎模型．结肠炎急性期和缓解期分批处死大鼠。以流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD25^＋Treg／CD4^＋T比例,以酶联免疫吸附测定（EUSA）检测血清白细胞介素（IL）－10和转化生长因子（TGF）－β1水平,并行结肠组织学评分。结果：与结肠炎模型组相比,中药治疗组大鼠一般情况和结肠组织学表现显著改善。结肠炎急性期．结肠炎模型组大鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg／CD4CF比例、血清IL-10水平显著低于正常对照组和中药治疗组（P〈0．05）,中药治疗组大鼠结肠组织学评分显著低于结肠炎模型组（P〈0．05）。结肠炎缓解期．结肠炎模型组大鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg／CD4^＋T比例和结肠组织学评分显著高于正常对照组（P〈0．05）。结肠炎急性期和缓解期各组血清TGF—B1均无明显差异。结论：中药溃克灵对大鼠结肠炎有明显的治疗作用,可能与上调CD4^＋CD25^＋Treg、促进抗炎因子IL—10分泌有关。     

The regulatory impact of immune inhibitors on T cells of SD rats

Objective:To observe the regulatory impact of immune inhibitors on T cells in rats.Method:Forty SD rats were selected and randomly divided into experimental group and control group.Rapamycin(SRL)0.4 mg/d to fill the stomach of the former one,saline lavage was used with the latter one for two weeks.Using flow cytometry to detect the two groups of rats with spleen and thymus level of CD4+CD25+T cells;and the spleen cells FoxP3 mRNA expression;Using ELISA method to detect TGF-β,IL-10 levels.Results:The peripheral blood,spleen and thymus of CD4+CD25+T cells accounted for the proportion of mononuclear cells were significantly higher than that of control group(P0.05);FoxP3 mRNA expression quantity also significantly higher than the control group(P0.05);Experimental TGF-βin rats,IL-10 levels are significantly higher than control group(P0.05).Conclusions:Immune inhibitors can regulatory CD4+CD25+foxp3+T cells in rats,a single nuclear cell proportion increase,shows that it can induce rat CD4+CD25+foxp3+regulatory T cells proliferation.     

转化生长因子-β对人Th17细胞增殖的影响

目的探讨转化生长因子（TGF）-β对人Th17细胞的免疫调节作用。方法应用免疫磁珠分离正常人CD4^＋T细胞并随机分为观察组和对照组,均置于含5μg/ml植物凝集素和5 ng/ml人重组IL-2的IMDM培养基中,在此基础上观察组加入100 IU/ml TGF-β,均于37℃、5%CO2孵箱中培养4 d。采用ELISA法检测两组细胞上清中IL-17蛋白水平,流式细胞术检测CD4^＋T细胞内IL-17比例（Th17细胞数量）。结果观察组和对照组CD4^＋T细胞上清中IL-17蛋白水平分别为（6.11±9.20）、（15.07±12.70）pg/ml,观察组低于对照组（P=0.07）;观察组和对照组Th17细胞数量分别为2.45%±0.62%、2.81%±0.44%,观察组明显低于对照组（P〈0.05）。结论 TGF-β在体外能通过抑制人Th17细胞增殖而调节其免疫作用。