大黄附子汤对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4／核转录因子-κB的影响

目的 探讨大黄附子汤治疗重症急性胰腺炎-急性肺损伤(SAP-ALI)的作用机制.方法 将128只SD大鼠随机分为假手术组、SAP-ALI组、大黄附子汤组和血必净组,每组再按处死时间点分为术后3、6、12、24 h 4个亚组,每个亚组8只.假手术组开腹后翻动胰腺数次,行空肠造瘘;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入牛磺胆酸钠1 ml/kg制模,行空肠造瘘;大黄附子汤组和血必净组于制模后0.5 h经空肠造瘘管分别注入大黄附子汤或血必净注射液2 ml,其他两组注入等量生理盐水.各组在处死大鼠前从心脏取血,用全自动生化仪检测血清淀粉酶水平,动态比浊法测定血清内毒素含量.处死大鼠后取肺脏,观察肺组织病理学变化、计算肺损伤评分和湿/干重(W/D)比值;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测肺Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-KB p65(NF-KB p65)的表达.结果 SAP-ALI组各时间点血清淀粉酶、内毒素,肺损伤评分及W/D比值较假手术组均明显升高(P均<0.05);大黄附子汤组各指标均显著下降(P均<0.05).Western blotting结果显示,SAP-ALI组TLR4、NF-KB p65表达于术后3 h开始较假手术组升高,12 h达高峰(P均<0.05);大黄附子汤组TLR4于术后3 h、NF-κB p65于术后6 h表达较SAP-ALI组显著降低,12 h达峰值(P均<0.05).结论 TLR4/NF-κB信号转导通路在SAP-ALI早期炎症级联反应中发挥了重要作用;大黄附子汤通过降低血清内毒素水平、降低肺组织TLR4的活化、抑制下游NF-κB p65转导路径,从而减轻SAP-ALI的进程.     

血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4及核转录因子-κB表达的影响

目的 观察血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达和核转录因子-κB(NF-κB)活性的干预作用.方法 将110只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、血必净干预组,后两组再分为染菌后1、6、12、24、48 h亚组,每组10只大鼠.于大鼠左后肢皮下注射创伤弧菌悬液制备创伤弧菌脓毒症模型;血必净组于染菌后0.5 h腹腔注射血必净注射液4 ml/kg.各时间点处死大鼠取肺组织,检测肺组织湿/干重比值(W/D比值)、TLR4 mRNA表达、NF-κB活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 模型组大鼠肺组织W/D比值于染菌后6、12、24、48 h明显高于正常对照组,而血必净组24 h、48 h较模型组明显减小(均P<0.05).模型组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达在染菌后6、12、24 h明显高于正常对照组,而血必净组6 h较模型组明显减少(均P<0.05).模型组大鼠肺组织NF-κB活性在染菌后1、6、12 h明显高于正常对照组,而血必净组1 h、6 h较模型组明显降低,24 h、48 h较模型组明显升高(均P<0.05).模型组大鼠肺组织TNF-α于染菌后1、6、12、24 h明显高于正常对照组,而血必净组12 h较模型组明显降低(均P<0.05).结论 TLR4-NF-κB通路参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤的早期病理生理过程;血必净注射液能抑制TLR4-NF-κB活化,减轻创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤.     

急性百草枯中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核因子-κB表达的变化

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB (NF-κB) mRNA表达的变化,探讨TLR4-NF-κB通路在急性PQ中毒肺损伤中的作用.方法 30只雄性SD大鼠随机分为2组:生理盐水(NS)对照组(6只,NS腹腔注射),PQ染毒组(24只,腹腔注射PQ溶液,20 mg/kg).PQ染毒组分别在染毒后6、24、48 h及72 h麻醉处死,NS对照组于处理后6h处死,进行肺组织HE染色,病理学观察,用实时定量PCR方法检测TLR4和NF-κB的mRNA表达情况,用ELISA方法测定肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清中IL-6含量.结果 PQ染毒组大鼠肺组织病理表现为早期充血水肿明显,大量炎性细胞浸润.与NS对照组相比PQ染毒组肺组织中TLR4和NF-κB mRNA的表达量、TNF-α、IL-6含量在各时间点均有不同程度升高,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠急性PQ中毒后肺组织中TLR4和NF-κBmRNA表达量、TNF-α、IL-6含量明显上调,TLR4-NF-κB通路参与了PQ中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程.     

乌司他丁对脂多糖诱导的大鼠肺组织Toll样受体4信号通路表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脓毒性大鼠肺损伤的保护机制.方法 选健康清洁级SD大鼠30只,随机(随机数字法)分为生理盐水对照组10只、脂多糖(LPS)组10只、脂多糖+乌司他丁(LPS+ UTI)组10只.注药24 h后取肺组织观察形态学改变,分别应用RT-PCR或Western blot 及ELISA方法测定肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB (NF-κB)及肿瘤坏死因子TNF-α mRNA及蛋白表达.结果 脂多糖导致大鼠肺组织损伤,乌司他丁可下调肺组织TLR4 mRNA (t=3.563,P=0.032)、TNF-α mRNA(t=5.147,P=0.028)及TLR4蛋白(t=2.692,P=0.041)、NF-κB蛋白(t=2.459,P=0.024)、TNF-α蛋白(t=3.336,P=0.037)表达,并减轻肺损伤.结论 乌司他丁对脂多糖致肺损伤具有一定保护作用,其机制之一可能与抑制TLR4-NF-κB信号途径转导有关.     

Toll样受体4与急性肺损伤关系的研究进展

急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是一种复杂的临床综合征,发病率和病死率很高,目前发病机制仍不完全明确,大量研究表明细胞因子的过度表达及其相互作用是发生ALI/ARDS的根本原因.Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)在病原体的识别和激活天然免疫方面发挥着非常重要作用,激活TLRs不仅可以诱导天然免疫应答,而且有利于特异性免疫反应的发生,是天然免疫与获得性免疫之间的桥梁.尤其是研究比较深入的Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),调节炎症反应中细胞因子网络,在ALI/ARDS的发生发展过程中有十分重要的作用.     

高迁移率族蛋白B1 / Toll样受体4信号通路在脓毒症大鼠致急性肺损伤中的作用研究

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1） / Toll样受体4（TLR4）信号通路对脓毒症导致的急性肺损伤大鼠的影响。 方法将60只清洁级雄性Sprague Dawley大鼠分为假手术组、脓毒症组和实验组,每组各20只。假手术组大鼠麻醉后开腹翻动肠道,随即关腹;脓毒症组和实验组行盲肠结扎穿孔（CLP）术后0.5 h于尾静脉分别注射等渗NaCl溶液（4 mL / kg）及抗HMGB1单克隆抗体（2 mg / kg）。各组分别取10只用于观察大鼠CLP建模后7 d存活情况,其余大鼠于造模后24 h处死并留取肺组织标本。计算各组大鼠的肺损伤Smith评分,并比较各组大鼠HMGB1和TLR4阳性蛋白在肺组织中的表达水平。采用酶联免疫吸附测定检测各组大鼠肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、HMGB1和TLR4水平,计算每个巨噬细胞内微球蛋白数以比较各组大鼠肺泡巨噬细胞（AM）的吞噬功能,并采用Western-blotting法测定AM内HMGB1、TLR4蛋白表达水平。 结果假手术组大鼠建模后7 d全部存活,脓毒症组大鼠仅3只存活,实验组大鼠5只存活。各组大鼠间存活情况的比较,差异有统计学意义（ χ² = 10.833,P = 0.004）;且假手术组大鼠的存活情况明显优于脓毒症组与实验组大鼠（P均< 0.017）,而脓毒症组与实验组大鼠间存活情况比较,差异无统计学意义（P = 0.120）。假手术组、脓毒症组及实验组大鼠间肺组织损伤评分[（2.20 ± 0.27）、（8.20 ± 1.27）、（4.25 ± 2.21）分,F = 56.432,P < 0.001],肺组织HMGB1阳性蛋白[（10.4 ± 1.5）、（34.4 ± 5.0）、（26.6 ± 6.9）,F = 35.203,P = 0.003]、TLR4阳性蛋白[（10.6 ± 2.1）、（48.0 ± 5.8）、（38.2 ± 5.3）,F = 103.414,P = 0.002],BALF中TNF-α[（19 ± 4）、（45 ± 4）、（35 ± 4）μg / L,F = 2.749,P < 0.001]、IL-6[（56 ± 19）、（86 ± 15）、（70 ± 19）μg / L,F = 4.648,P = 0.001]、HMGB1[（41 ± 18）、（70 ± 15）、（56 ± 12）μg / L,F = 7.254,P = 0.002]、TLR4[（20.9 ± 1.8）、（51.2 ± 1.6）、（49.8 ± 2.6）μg / L,F = 3.978,P = 0.035],AM的吞噬功能[（21.8 ± 2.7）、（3.1 ± 1.9）、（12.6 ± 2.2）个,F = 32.821,P = 0.001]及AM中HMGB1蛋白[（11 ± 3）、（40 ± 15）、（24 ± 13）,F = 7.253,P < 0.001]、TLR4蛋白[（0.9 ± 0.4）、（1.2 ± 0.6）、（1.1 ± 0.4）,F = 3.984,P = 0.028]的比较,差异均有统计学意义。进一步两两比较发现,脓毒症组与实验组大鼠肺组织损伤评分,肺组织HMGB1阳性蛋白、TLR阳性蛋白表达水平,BALF中TNF-α、IL-6、HMGB1水平及AM中HMGB1蛋白表达水平均明显高于假手术组大鼠,且脓毒症组大鼠更高（P均< 0.05）;脓毒症组及实验组大鼠AM的吞噬功能均显著低于假手术组,且脓毒症组更低（P均< 0.05）;脓毒症组及实验组大鼠BALF中TLR4水平及AM中TLR4蛋白表达水平均显著高于假手术组（P均< 0.05）,但脓毒症组与实验组间上述指标的比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）。 结论通过抑制HMGB1 / TLR4信号通路可以缓解脓毒症致肺损伤大鼠肺组织的炎症损伤,抑制炎症介质过度释放,并增强AM的细胞吞噬功能。     

异丙酚后处理对急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚后处理对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、ALI组及异丙酚后处理组3组,每组10只.经股静脉泵入8 mg/kg LPS 30 min诱导ALI模型,对照组给予等量生理盐水.异丙酚后处理组于制模后股静脉推注20 mg/kg异丙酚,再以40 mg· kg-1·h-1微量泵匀速泵入维持1h.于给药结束后6h处死大鼠,取肺脏测定湿/干重(W/D)比值,计算肺通透性指数(LPI),用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织TLR4 mRNA表达.结果 与对照组比较,ALI组肺W/D比值、LPI、TLR4 mRNA表达及BALF中TNF-α水平(ng/L)均明显升高[肺W/D比值:5.30±0.28比4.21 ±0.14,LPI(×10-3):8.7±2.2比3.3±2.0,TLR4 mRNA:2.451±0.028比0.998±0.021,TNF-α:643.46±62.31比120.43±12.65,均P＜0.05];而异丙酚后处理组肺W/D比值、LPI、TLR4 mRNA表达及BALF中TNF-α水平均较ALI组明显降低[肺W/D比值:4.68±0.19比5.30±0.28,LPI(×10-3):5.8±2.0比8.7±2.2,TLR4 mRNA:1.126±0.025比2.451±0.028,TNF-α:290.53±32.01比643.46±62.31,均P＜ 0.05],但仍显著高于对照组(均P＜0.05).结论 异丙酚后处理能明显改善LPS诱导的ALI,其作用机制可能是通过下调TLR4 mRNA表达,从而抑制“瀑布样”炎症反应.     

Toll样受体4在急性肺损伤中的作用

目的观察Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因突变型小鼠与野生型小鼠内毒素攻击致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的差异,分析TLR4在ALI中的作用。方法采用TLR4基因突变小鼠(C3H/HeJ品系,TLR4~(-/-)及野生型小鼠(CBA品系,TLR4~( / )),用内毒素攻击复制小鼠ALI模型,用显微病理及肺干湿重比(W/D)分析肺损伤程度,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,探讨损伤差异的可能机制。结果用1,5 mg·kg~(-1)LPS溶液经尾静脉注射复制ALI模型,结果示TLR4突变小鼠肺组织大体及显微病理损伤较野生型小鼠减轻,同时肺组织水肿(W/D)亦较野生小鼠减轻,尤其是在大剂量(5mg·kg~(-1))时,差异有显著性[(4．08±0．1)vs．(4．55±0．2),n=10,t=12．71,P＜0．01]。突变小鼠肺组织PMN浸润水平较野生型低[MPO：1 mg·kg~(-1)组,(20．73±4．58)vs．(39．97±3．66),n=10,t=13．43,P＜0．01];5 mg·kg~(-1)组,[(24．0±3．94)vs．(48．5±4．07),n=10,t=15．33,P＜0．01],且两者均较假手术组高。结论TLR4可能通过介导中性粒细胞肺内聚集而导致ALI的发生发展。     

甘草酸二铵对急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体及核因子κB表达的影响

目的 观察甘草酸二铵(GL)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核因子κB(NF-κB)、糖皮质激素受体(GR)表达的调控作用及对血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响.方法 将24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组和GL干预组,每组8只.ALI模型组、GL干预组分别给予内毒素(LPS)5 mg/kg尾静脉注射;IPS注射前1 h,GL干预组给予GL 20 mg/kg静脉注射.观察4 h后各组大鼠肺组织病理,测定肺湿干比(W/D)、PaO_2,并采用逆转录-PCR反应检测肺组织NF-κB mRNA,GR mRNA的表达,western blot法测定肺组织Nf-κB及GR蛋白的表达,ELISA法测定血清TNF-α,IL-10质量浓度.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,各组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 (1)ALI模型组TNF-α为(153.68±20.42)ng/L,明显高于生理盐水组(43.96±7.57)ng/L(P<0.01)和GL干预组(87.23±7.52)ng/L(P<0.01).ALI模型组IL-10为(42.48±6.81)ug/L,明显高于生理盐水组(24.72±8.03)ng/L(P<0.01),但低于GL干预组水平(58.33±9.62)ug/L(P<0.05).(2)ALI模型组NF-κBmRNA和蛋白的表达水平[分别为(3.414±0.521),(254.7±16.4)]明显高于生理盐水组[分别为(0.432±0.085),(45.6±7.3)](P<0.01),而GRmRNA和蛋白的表达[分别为(0.152±0.025),(11.5±2.3)]则明显低于生理盐水组[分别为(0.434±0.013),(54.6±6.5)](P<0.01);GL干预组NF-κB mRNA和蛋白的表达水平[分别为(1.894±0.272),(133.5±11.7)]明显低于ALI模型组(P<0.01),GR mRNA和蛋白的表达[分别为(0.308±0.033),(28.2±5.6)]则明显高于ALI模型组(P<0.05,P<0.01).(3)ALI模型组肺组织出现充血、水肿、中性粒细胞浸润,GL干预组肺部炎症较ALI模型组减轻.结论 甘草酸二铵可能通过下调NF-κB的表达,同时提高GR的表达,进而调节炎症因子TNF-α及抗炎介质IL-10的表达,从而起到减轻ALI的作用.     

未足月胎膜早破孕妇胎盘中Toll样受体4/髓样分化因子/核因子-κB通路表达及临床意义

目的 探究并分析未足月胎膜早破（PPROM）孕妇胎盘中Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子（MyD88）/核因子-κB(NF-κB)通路表达及临床意义。方法 选取2017年6月—2020年6月湖北省妇幼保健院收治的PPROM患者90例,按照是否合并宫内感染将患者分为感染组（32例）和非感染组（58例）,另选同期正常分娩孕妇50名作为对照组。对感染组患者阴道分泌物进行病原菌鉴定,收集PPROM患者临近破膜处胎盘组织和对照组正常胎盘组织,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot法分别检测胎盘组织中TLR4/MyD88/NF-κB通路的mRNA表达和蛋白表达水平,受试者工作特征（ROC）曲线评估TLR4/MyD88/NF-κB通路对于PPROM并发宫内感染的诊断效能,并对影响PPROM并发宫内感染的危险因素进行分析。结果 32例感染患者阴道分泌物中检出78株病原菌,其中革兰阳性菌36株,占46.2%,革兰阴性菌33株,占42.3%,真菌9株,占11.5%。与对照组相比,非感染组和感染组患者胎盘组织中TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA和蛋白水平均显著升...     

Toll样受体4单克隆抗体预处理对脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨预先使用Toll样受体4单克隆抗体(TLR4mAb)对LPS诱发的小鼠脓毒症肺损伤的保护作用.方法 45只健康清洁级雄性BALB/c小鼠以随机数字法分为对照组(C 组)、脓毒症组(S组)、预处理组(P组),每组15只.P组小鼠在造模前1h预先腹腔注射TLR4mAb 5 μg/g.S组、P组均腹腔注射LPS 10 mg/kg以制备脓毒症急性肺损伤模型,C组经腹腔注射等量生理盐水.各组分别于注射后6,12,24h,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-a和IL-6浓度;取肺脏组织,分别检测TLR4 mRNA的表达、肺组织含水量、病理学改变.组内比较采用双因素方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 与C组比较,S组、P组肺组织含水量在12,24h时均显著性升高;与S组比较,P组肺组织含水量在12,24h时均显著性降低.与C组比较,S组、P组血清IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性升高;与S组比较,P组IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性降低.与C组比较,S组、P组TLR4 mRNA在各时点时均显著性升高;与S组比较,P组TLR4mRNA在各时点均显著性降低.与S组比较,P组病理改变程度均明显减弱.结论 预先使用TLR4mAb可以减轻LPS所诱发的急性肺损伤程度,可抑制炎性因子的过度表达;调控TLR4通路可能是治疗脓毒症及其肺损伤的有效靶点.     

前列腺素E1对急性肺损伤肺组织核因子κB表达的干预作用

目的建立急性肺损伤(ALI)大鼠模型,通过观察脂微球前列腺素E1(1ipoPGEl)对肺组织核因子-κB(NF-κB)活化的调控作用和对血清中细胞因子表达的调控作用,探讨PGE1对ALI的保护作用机制。方法雄性SD健康大鼠45只随机分成3组,A组:生理盐水组;B组:LPS模型组;C组:LPS lipoPGE1治疗组。各组分1、2、4h3个时间点各5只观察肺组织变化,测定肺组织NF-κB的表达及血清细胞因子TNFα、IL-12、IL-10浓度。结果治疗组肺组织充血出血情况较模型组明显改善,NF-κB表达显著降低,血清TNF-α、IL-12浓度显著降低,IL-10浓度明显增高。结论前列腺素E1通过下调NFκB的活性,抑制炎症因子的表达从而减轻急性肺损伤。     

Toll样受体4在实验性急性坏死型胰腺炎形成中的介导作用

目的　应用抗内毒素受体 Toll样受体 4 (TLR4 )抗体体内注射观察其对小鼠实验性急性坏死型胰腺炎 (ANP)的影响 ,探讨内毒素信号通路 ,尤其是Toll样受体 4在ANP发生中的介导作用。方法　 1 0只BALB/c小鼠随机分为ANP组和ANPTLR4抗体处理组。ANP模型制备采用腹腔内注射雨蛙肽和脂多糖 (LPS)。TLR4抗体处理组于LPS注射前 1 5min静脉注射TLR4单克隆抗体 ,剂量为 2 0 μg。 1 2h后处死小鼠并收取标本。测定血清淀粉酶和乳酸脱氢酶 (LDH)水平 ;胰腺组织切片行HE染色并作病理评分 ;RT PCR检测胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRNA表达变化 ;免疫组化和westernblot检测胰原组织核因子 -κΒ (NF κΒ)p6 5亚单位蛋白表达的改变 ;酶组织化学方法检测中性粒细胞特异性髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。结果　与ANP模型组相比 ,TLR4抗体处理组血清淀粉酶活性 [1 2 6 1 2± 5 70 6U/Lvs2 341 2± 892 2U/L ,P <0 0 5 ]和LDH活性 [1 92 6± 4 0 0U/Lvs2 5 74± 2 77U/L ,P <0 0 5 ],较ANP模型组显著升高 ;病理评分结果显示 ,TLR4抗体处理组胰腺组织坏死和炎症反应程度明显加重 ;胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRAN表达呈显著上调 ;胰原组织NF κBp6 5亚单位的蛋白表达也呈上调趋势 ;反映中性粒细胞     

阻断toll样受体对脂多糖致急性肺损伤的保护作用

目的：本文旨在探讨阻断toll样受体（TRL4）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法将60只健康雄性清洁级SD大鼠分为正常组、损伤组和阻断组,每组20只。损伤组大鼠采用尾静脉注射LPS（6mg/kg）复制ALI模型;阻断组同时注射TLR4抗体（10mg/mL）;正常组给予等容积生理盐水。3h后处死大鼠,采用凝胶滞留法检测核因子-κB（NF-κB）活性;Westernblot印记分析法检测抑制蛋白（IκB-α）水平;检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α细胞因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平。结果与正常组相比,损伤组和阻断组肺组织湿质量/干质量比值增高,NF-κB活性升高,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平升高（P＜0．05）,而IL-10水平降低（P＜0．05）。而比较损伤组与阻断组发现,阻断组肺组织湿质量/干质量比值降低,NF-κB活性降低,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平明显低于损伤组（P＜0．05）,IL-10水平高于损伤组（P＜0．05）。结论采用抗TLR4单克隆抗体阻断TLR4介导的信号传导可明显降低NF-κB活性和IκB-α、TNF-α、IL-1β水平,同时提高IL-10水平阻断TLR4,对LPS致ALI有一定的保护作用。     

雷公藤氯内酯醇对急性肺损伤核因子-κB的调节功能观察

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)在急性肺损伤(ALI)中的作用及雷公藤氯内酯醇(T4)的调节功能.方法:实验分ALI组、雷公藤T4组、健康对照组.用迁移电泳法(EMSA)检测外周血单核细胞(PBMC)中NF-κB活性;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMC培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL10)含量.结果:与健康对照组比较,ALI组PBMC中NF-κB活性明显增强(P<0.01),PBMC 培养上清中TNF-α、IL-10含量均明显升高(P均<0.01);TNF-α含量随NF-κB活化而增高,两者呈显著正相关(r=0.79,P<0.01).与ALI组比较,雷公藤T4组PBMC中NF-κB活性显著下降(P<0.01);TNF-α、IL10含量亦明显下降(P<0.05和P<0.01).结论:ALI时PBMC中NF-κB明显活化,介导促炎、抗炎介质大量释放,参与ALI发生.雷公藤T4能明显抑制NF-κB活化及促炎介质TNF-α、抗炎介质IL10释放,调节促炎/抗炎反应失衡.     

机械通气对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4表达的影响

目的 探讨机械通气对大鼠肺泡巨噬细胞（AM）表面Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法 清洁级成年雄性SD大鼠18只，随机分为自主呼吸组（R组，n=6）、小潮气量（VT）机械通气组（M组，n=6）和大VT机械通气组（N组，n=6）。腹腔注射质量分数为20％的乌拉坦8mg／kg麻醉大鼠，行气管插管。机械通气呼吸机参数设定：M组：VT为6ml／kg，N组VT为40ml／kg，吸：呼为1：1，呼气末正压（PEEP）为0，吸入氧浓度（FiO2）为0．21。调整呼吸频率和潮气末二氧化碳分压（PETCO2）维持在35～45mmHg（1mmHg=0．133kPa）。实验3h结束，放血处死大鼠。监测实验开始及实验1、2和3h时动脉血气分析；并测定大鼠肺组织病理形态学积分、湿／干重（W／D）比值及支气管肺泡灌洗液（BALF）中自细胞计数（WBC）和肺蛋白通透性系数。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定AM表面的TLR4mRNA表达，用免疫组化法测定AM表面的TLR4蛋白表达。结果 N组实验1h时存在过度通气，pH升高、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）降低（P均〈0．05），其他指标都在正常范围内。与R组比较，N组肺组织病理形态学积分、W／D比值，BALF中WBC和肺蛋白透性系数以及TLR4蛋白表达和TLR4mRNA表达均显著升高（P均〈0．01）；M组改变差异均无显著性（P均〉0．05）。结论 大VT机械通气导致大鼠肺损伤，并使AM表面TLR4表达明显上调。小VT机械通气可避免上述改变的发生。     

二氧化硫对脓毒症大鼠致肺损伤炎性介质的调节

目的 探索内源性二氧化硫(sulfur dioxide,SO2)对脓毒症大鼠所致急性肺损伤过程炎性介质的调节作用.方法 雄性Sprague Dawley大鼠24只随机(随机数字法)被分入假手术对照组(control组),假手术+SO2组(SO2组),脓毒症组(sepsis组),脓毒症+SO2组(sepsis+ SO2组),每组6只.通过肺组织损伤半定量评分(Index of quantitative assessment,IQA)及肺组织湿干质量比(wet/dry weight ratio,W/D)对肺损伤进行评价.检测血浆SO2、白细胞介素6、8及10(interleukins-6,IL 6、interleukins-8,IL 8、interleukins-10,IL 10)及单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechemotactic protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量.结果 脓毒症大鼠IQA及W/D与对照组相比显著升高(P均＜0.01),给予SO2干预后显著降低(P均＜0.01).血浆SO2含量在脓毒症组(3.17 ±3.44)μmol/L与对照组(5.87 ±1.96)μmol/L下降,给予SO2干预后显著升高(9.78±3.26) μmol/L,P＜0.01;血浆IL 6、IL 8、IL 10及MCP-1、TNF-α含量在脓毒症组分别为(87.08 ±22.03)、(79.82±19.69)、(66.38 ±21.77)、(157.58 ±42.36)及(65.04±19.42) pg/mg,对照组分别为(47.41 ±9.64)、(42.25±8.16)、(31.96±4.63)、(67.65±10.18)及(33.83 ±5.75)相比显著升高(P均＜0.01);给予SO2干预后分别为(66.01±16.52)、(61.52±18.32)、(45.61 ±16.47)、(117.86 ±34.20)及(61.49±15.33) pg/mg降低(IL 6及IL 8,P均＜0.05,IL 10及MCP-1,P均＜0.01).结论 在脓毒症所致肺损伤的发病过程中,内源性SO2可以通过抑制MCP-1、TNF-α进而减轻炎症因子的表达起到保护作用.     

前列腺素E1对急性肺损伤肺组织核因子κB表达的干预作用

目的建立急性肺损伤（ALI）大鼠模型，通过观察脂微球前列腺素E1（lipo—PGEl）对肺组织核因子kB（NF—kB）活化的调控作用和对血清中细胞因子表达的调控作用，探讨PGEl对Au的保护作用机制。方法 雄性SD健康大鼠45只随机分成3组，A组：生理盐水组；B组：LPS模型组；C组：LPS＋lipo-PGEl治疗组。各组分1、2、4h3个时间点各5只观察肺组织变化，测定肺组织NF-kB的表达及血清细胞因子TNF-α、IL-12、IL-10浓度。结果 治疗组肺组织充血出血情况较模型组明显改善，NF-kB表达显著降低，血清TNF—α、IL-12浓度显著降低，IL-10浓度明显增高。结论 前列腺素E1通过下调NF-kB的活性，抑制炎症因子的表达从而减轻急性肺损伤。