微小RNA-155在脓毒症小鼠肝脏内的表达变化及作用研究

目的 探讨肝组织中微小RNA-155(miR-155)表达在脓毒症小鼠肝损伤中的作用.方法 按随机数字表法将120只BALB/c小鼠分为脓毒症组和正常对照组,每组60只.腹腔注射脂多糖(LPS)20 mg/kg复制脓毒症模型,术后0、2、6、12、24、48 h每组各取10只小鼠的血及肝组织标本.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和肝组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量,并观察肝组织病理改变;用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中miR-155的表达.结果 脓毒症组血清和肝组织匀浆中TNF-α、IL-6、IL-10水平均随制模时间延长呈升高趋势,TNF-α、IL-6达高峰后逐渐降低,但仍高于对照组水平;TNF-α(ng/L)于2h达高峰(血清:1538.46±102.12比64.52±18.44,肝:255.26±41.23比60.21±13.55),IL-6(μg/L)于6h达高峰(血清:875.33±102.37比153.72±20.67,肝:9.22±0.82比3.35±0.36),IL-10(ng/L)于48 h达高峰(血清:520.13±88.52比23.43±3.01,肝:260.12±50.38比16.37±3.71),与正常对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).脓毒症组血清ALT活性(U/L)随制模时间延长逐渐增加,至48 h达高峰(603.26±70.21比45.84±5.64),与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).注射LPS后12h,肝组织结构紊乱,大量炎性细胞浸润,肝细胞水肿、坏死;肝组织中miR-155相对表达量在注射LPS后2h开始升高,12h达高峰,为正常对照组的(72.96±9.34)倍(P＜0.05).结论 MiR-155表达增加在脓毒症肝损伤机制中起重要作用.     

微小RNA-155与脓毒症的调控

脓毒症的发生机制极其复杂.紊乱的固有免疫和适应性免疫均参与发病机制.MicroRNA-155是一个多功能的microRNA,在固有免疫和适应性免疫中发挥重要作用,可成为调控免疫反应、治疗脓毒症的重要靶点.     

微小RNA-214对脓毒症小鼠心肌损伤的作用北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-214（miRNA-214）对脓毒症小鼠心肌损伤的作用。方法清洁级雄性昆明小鼠66只,体质量25～30g,随机（随机数字法）分为4组：假手术组（Sham组,n=18）、脓毒症组（CLP组,n=18）、miRNA-214前体＋脓毒症组（前体组,n=12）、miRNA-214抑制剂＋脓毒症组（抑制剂组,n=12）,其余6只小鼠应用载有miRNA-214前体和抑制剂的腺病毒转染用于空载病对照及miRNA-214转染情况检测。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备小鼠脓毒症模型。Sham组开腹寻找盲肠,不结扎穿孔;前体组、抑制剂组转染后行CLP术。Sham、CLP组小鼠分别于术后6、12、24h时取心肌组织采用实时荧光定量聚合酶链反应法（RT—PCR）测定miRNA-214表达。于术后12、24h时采用酶联免疫法（ELISA）测定各组心肌组织炎症因子和血清心肌酶浓度;术后24h时采用流式细胞技术测定心肌细胞凋亡率,光镜下观察心肌组织病理学结果。采用SPSS13．0统计学软件进行分析,应用单因素方差分析进行组间差异比较。结果（1）与Sham组比较,CLP组术后6、12、24hmiRNA-214表达分别升高2．28倍、1．89倍、1．53倍（F值分别为280．198,82．48,30．65;均P〈0．05）;（2）与CLP组术后12h比较,转染miRNA-214前体小鼠miRNA-214表达水平升高1．86倍,转染抑制剂小鼠miRNA-214表达下降84．5％（F：394．773;P〈0．05）;（3）与CLP组比较,前体组小鼠术后12、24h心肌组织上清液肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）,血清肌钙蛋白（cTnI）及脑钠肽（BNP）水平降低,白介素-10（IL-10）水平升高;反之,抑制剂组各指标水平升高,IL．10水平降低（12hF值分别为72．819,88．851,147．546,65．256,102．72;24hF值分别为50．836,76．167,100．290,60．763,52．580;均P〈0．05）;（4）与CLP组比较,前体组小鼠术后24h心肌细胞凋亡率下降,抑制剂组升高（F=151．076;P〈0．05）;（5）前体组小鼠心肌组织病理学损伤较CLP组、抑制剂组减轻。结论在CLP所致的小鼠心肌损伤中miRNA-214表达增加,且miRNA-214对CLP诱导的心肌损伤有保护作用。     

微小RNA-191抑制巨噬细胞EGR1介导小鼠巨噬细胞对脓毒症的影响

目的 探讨微小RNA-191(miR-191)抑制巨噬细胞早期生长反应蛋白1(EGR1)介导小鼠巨噬细胞对脓毒症的影响.方法 无特定病原级雌性BALB/c小鼠,构建脓毒症模型后分为对照组(n=10)和miR-191组(n=10).对照组经腹腔注射10 mg/kg的0.9％氯化钠溶液,miR-191组经腹腔注射10 mg...     

微小RNA-155在小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中表达的差异

背景：目前对微小RNA-155在巨噬细胞中的表达和功能的研究还集中在总体单核巨噬细胞水平。目的：了解小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中微小RNA-155表达的差异。方法：用100U/mL干扰素γ和5μg/L脂多糖诱导骨髓细胞来源的巨噬细胞向M1分化,用10μg/L白细胞介素4诱导出M2巨噬细胞。结果与结论：流式细胞检测显示实验诱导的M1和M2巨噬细胞纯度分别达91%和95%。RT-PCR检测显示诱导型一氧化氮合酶mRNA在M1巨噬细胞中高表达,在M2中则基本不表达;而Ⅰ型精氨酸酶、发现于炎症区域1mRNA在M2中高表达,在M1中则表达较低;炎症因子肿瘤坏死因子αmRNA在M1中的表达明显高于M2,相反白细胞介素10mRNA在M2中的表达高于M1（P〈0.05）。实时荧光定量PCR检测显示M1巨噬细胞中微小RNA-155的表达量明显高于M2（P〈0.05）。提示微小RNA-155可作为鉴别M1,M2巨噬细胞的标志。     

MicroRNA对脓毒症炎症因子的调控

在过去的几十年里关于脓毒症的研究取得了巨大的进展,但是脓毒症休克发生后尽管给予很多治疗,其死亡率仍然保持在50%左右.脓毒症的发生机制极其复杂,近年的研究显示其与调节失控的炎症反应有密切的关系.已经证实MicroRNA可以在转录后水平调节生物蛋白质的表达.近年研究发现MicroRNA可以通过转录后水平下调炎症因子以及炎症因子信号通路的受体来控制失衡的炎症反应,有望成为治疗脓毒症的一条更合适的途径.本文就MicroRNA 在脓毒症炎症因子调节失衡中作用的研究近况做一综述.     

大鼠脓毒症模型中丹参素对炎症性肝损伤的作用研究

目的:分析并研究丹参素对脓毒症诱导的大鼠肝损伤的影响.方法:将40只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为4组:假手术组(10只)、脓毒症对照组(10只)、丹参素实验组(10只)和丹参素对照组(10只).对所有动物组均进行剖腹手术,脓毒症对照组及丹参素实验组通过盲肠结扎穿刺(CLP)建立大鼠脓毒症模型.假手术组及...     

微小RNA-122a、微小RNA-133a-3P与脓毒症患者严重程度、预后的关系

目的 分析微小RNA(microRNA,miRNA)-122a、miRNA-133a-3P与脓毒症患者严重程度、预后的关系.方法 选取2019年1月至2020年11月在山东第一医科大学附属莱钢医院住院治疗的脓毒症患者80例,采用急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ将患者分为低分组(<15分)15例、中分组(15～20分)41...     

富含脂质肠内营养支持对脓毒症小鼠全身炎症反应的影响

目的 研究富含脂质肠内营养支持对脓毒症小鼠全身炎症反应影响.方法 采用盲肠结扎和穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症模型.雄性BALB/c小鼠80只,随机(随机数字法)分为假手术组(Sham),脓毒症组(CLP),低脂肠内营养组(lipid low,LL)和高脂肠内营养组(l...     

Trichostatin A improves the inflammatory response and liver injury in septic mice through the FoxO3a/autophagy signaling pathway

BACKGROUND:Sepsis-induced liver injury is a fatal complication of sepsis.Trichostatin A(TSA)regulates inflammation and autophagy in some human diseases,and fork...     

抑制AFP表达对肝癌模型小鼠肝脏损伤修复的影响及相关机制

目的 探讨抑制甲胎蛋白(AFP)表达对肝癌模型小鼠肝脏损伤修复的影响及相关机制.方法 注射Walker-256癌肉瘤细胞株细胞悬液0.1 mL(约2×107个细胞)至小鼠肝脏组织建立移植性肝癌模型.将45只肝癌模型小鼠按随机数字表法分为3组-模型组、对照组与AFP组.AFP组与对照组采用EntransterTM-in ...     

基于STAT3信号通路探讨艾司洛尔对脓毒症大鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨艾司洛尔(ES)对脓毒症大鼠急性肝损伤的保护作用及相关信号通路。方法48只雄性SPF级大鼠随机分为假手术(Sham)组、盲肠结扎穿孔(CLP+NS)组和艾司洛尔干预(CLP+ES)组(每组16只)。Sham组采用盲肠探查术,CLP+NS组、CLP+ES组采用CLP法建立脓毒症大鼠模型。CLP+ES组经颈内静脉微量泵入ES稀释液6 h,Sham组和CLP+NS组给予等质量生理盐水。术后6 h、24 h各组分别处死8只大鼠。采用HE染色,观察脓毒症大鼠肝组织形态学变化,生化分析仪检测血清肝功能指标,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中炎性细胞因子水平,Western blot检测肝组织中STAT3信号通路标志蛋白的表达。结果CLP+NS组脓毒症大鼠肝组织炎性细胞浸润明显,而CLP+ES组炎性细胞减少,肝细胞坏死程度好转。术后6 h、24 h,CLP+NS组血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和肝组织匀浆中高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)、白细胞介素-6(IL-6)均升高(P<0.05);而CLP+ES组较CLP+NS组均降低(P<0.05)。术后6 h,与CLP+NS组比较,CLP+ES组脓毒症大鼠肝组织中磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)表达水平明显下降(P<0.05),细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)表达明显上升(P<0.05)。术后24 h,CLP+ES组上述蛋白表达与CLP+NS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论艾司洛尔通过抑制STAT3信号通路,抑制炎性细胞因子释放,从而发挥对脓毒症大鼠急性肝损伤的保护作用。     

脓毒症急性肾损伤的血液净化治疗

脓毒症急性肾损伤是危重症患者常见并发症,发病率和死亡率均较高。传统血液净化疗法如高容量血液滤过、多黏菌素B血液吸附、配对血浆滤过吸附、高截留量血液滤过等在脓毒症治疗上虽已取得部分临床疗效,但血液净化治疗脓毒症的机制、时机、剂量、频率等问题尚不明了。本课题组研发的生物反应器和粒细胞吸附等新型血液净化技术对脓毒症的治疗作用在动物实验中已得到初步证实。尽管处于初步研究阶段,但新型血液净化技术为脓毒症的血液净化治疗提供了新思路。     

血管再生在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用

目的 对脓毒症小鼠发生心肌损伤时心肌血管再生和细胞凋亡情况及相关机制的研究.方法 将40只8周左右的雄性C57BL/6小鼠随机(随机数字法)分为两组,实验组(n=20)和对照组(n=20),实验组用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg),对照组给以生理盐水(10mg/kg),6h后超声观察两组小鼠心功能(n=40),后取两组小鼠心脏、肺脏、肾脏组织石蜡包埋切片做HE染色(n=6)观察病理学变化鉴定模型,免疫组化(n=3)PECAM -1、α-SAM染色观察心肌血管再生,心肌细胞凋亡染色(TUNLE) (n=3)观察细胞凋亡情况,提取心脏组织RNA(n=6)通过RT-PCR技术对HIF-1α等血管再生因子进行检测,所得数据处理均采用独立样本t检验.结果 实验组与对照组相比小鼠心脏左室舒张期前壁厚度(t=-4.60,P＜0.05)、左室收缩期前壁厚度增厚(t=-3.24,P＜0.05),左心室舒张期内径减小(t=3.57,P＜0.01),每搏输出量下降(t=5.51,P＜0.01),免疫组化染α-SAM抗体显示实验组心脏新生血管数增加(t=-11.00,P＜0.01),凋亡染色(TUNEL)存在心肌细胞凋亡[实验组比对照组:(191.31±5.41) vs.(52.24±4.32)],RT-PCR显示HIF-1α表达显著增高(t=-8.12,P＜0.05).结论 脓毒症小鼠存在明显心肌血管再生、细胞凋亡及心功能障碍,导致血管再生的通路有低氧诱导因子( HIF -1α)的参与.     

持续静脉泵注利多卡因对脓毒症大鼠急性肺损伤及炎症反应的影响

目的探讨利多卡因对脓毒症大鼠肺损伤及炎症因子表达的影响。 方法采用随机数字表法将60只雄性成年Sprague Dawley大鼠分为假手术组、盲肠结扎穿孔（CLP）组、利多卡因组和乌司他丁组,每组各15只。假手术组大鼠打开腹腔后缝合,其他各组采用CLP法制备脓毒症模型。利多卡因组大鼠在给予10 mg/kg的负荷剂量后,以10 mg·kg^-1·h^-1的剂量通过尾静脉持续泵注利多卡因3h;乌司他丁组大鼠进行CLP的同时,以100 000 U·kg^-1·h^-1的剂量通过尾静脉持续泵注乌司他丁3 h;假手术组和CLP组用等量等渗NaCl溶液代替。于CLP后24 h处死大鼠,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）及高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达水平;实时荧光定量PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达水平;苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠肺组织病理变化。另取40只大鼠（每组10只）用于观察4组大鼠72 h死亡情况。 结果4组大鼠血清中TNF-α、IL-6、HMGB1及HMGB1 mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 189.886、237.952、175.999、179.491,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,与假手术组比较,CLP组、利多卡因组和乌司他丁组血清TNF-α、IL-6、HMGB1及HMGB1 mRNA表达水平均显著升高（P均< 0.05）;与CLP组比较,利多卡因组和乌司他丁组血清TNF-α、IL-6、HMGB1及HMGB1 mRNA表达水平均显著降低（P均< 0.05）;与利多卡因组比较,乌司他丁组IL-6表达水平显著升高（P < 0.05）。HE染色结果显示,假手术组大鼠肺泡大小均匀、结构完整,肺泡上皮细胞形态正常;CLP组大鼠肺泡间隔增厚、间质充血水肿、炎症细胞浸润、肺泡塌陷;而利多卡因组和乌司他丁组病理学改变较CLP组均明显减轻,肺组织轻度水肿,肺泡及肺间质出现少量炎症。四组大鼠死亡构成比（0 /10、9/1、4/6、3/7）比较,差异有统计学意义（χ²=17.500,P < 0.001）。CLP组、利多卡因组和乌司他丁组大鼠死亡构成比均较假手术组显著升高（P均<0.008）;利多卡因组和乌司他丁组大鼠死亡构成比均较CLP组显著降低（P均<0.008）;而利多卡因组和乌司他丁组大鼠死亡构成比比较,差异无统计学意义（P > 0.008）。 结论持续静脉泵注利多卡因可以有效降低脓毒症大鼠炎症因子TNF-α、IL-6及HMGB1的表达,抑制肺组织中HMGB1 mRNA表达量,减轻脓毒症对肺组织的损伤,有效提高动物存活率,其减轻脓毒症炎症反应及肺保护作用疗效与乌司他丁相似。     

N-乙酰半胱氨酸上调细胞FLICE抑制蛋白表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及其机制研究

目的研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）上调细胞FLICE抑制蛋白（c-FLIP）表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的作用。 方法将30只雄性BALB/c小鼠分为假手术组、脓毒症组和NAC组,每组各10只。采用盲肠结扎穿孔术法制备脓毒症小鼠模型,假手术组除不结扎穿刺盲肠外,其余手术步骤相同,NAC组小鼠术后15 min尾静脉注射NAC 100 mg/kg。造模成功后24 h取小鼠肾脏,光镜下观察肾脏组织病理变化;采用实时定量PCR（RT-PCR）法检测c-FLIP mRNA表达;采用Western-blotting法检测c-FLIP蛋白表达;复制上述实验观察96 h内小鼠的生存情况。 结果与假手术组相比,脓毒症组小鼠肾小球萎缩、肾小管上皮细胞变形、肾小管腔内可见大量肾细胞间质和碎片,而NAC组小鼠肾脏组织病变明显减轻。三组间肾脏组织病理学损伤评分、c-FLIP mRNA及蛋白表达比较,差异均有统计学意义（F = 101.400、31.720、20.330,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,CLP组小鼠肾脏组织病理学损伤评分较假手术组显著升高（P < 0.001）,NAC组小鼠肾脏组织病理学损伤评分较CLP组显著降低（P < 0.001）。与假手术组相比,脓毒症组小鼠c-FLIP mRNA及蛋白表达均明显下降（P均< 0.05）,NAC组c-FLIP的蛋白表达有所降低（P < 0.05）;与脓毒症组相比,NAC组小鼠c-FLIP mRNA及蛋白表达均显著上升（P均< 0.05）。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,三组小鼠生存情况比较,差异有统计学意义（χ²= 8.806,P= 0.012）。进一步两两比较发现,脓毒症组及NAC组小鼠的存活数量均较假手术组显著降低（P均< 0.017）,而NAC组小鼠存活数量较脓毒症组明显升高（P < 0.017）。 结论NAC通过上调c-FLIP表达对脓毒症小鼠的急性肾损伤具有显著的保护作用。