分光光度法测定蝉拟青霉多糖的含量

目的:建立一种蝉拟青霉多糖的含量测定方法。方法:应用分光光度法测定蝉拟青霉多糖的含量。结果:测定波长485 nm,在0.005-0.230 mg·ml-1范围内多糖浓度与吸收度有良好的线形关系,回归方程A=8.130C+0.033,r2= 0.996,平均回收率为97.99%±3.96%,RSD=4.04%。蝉拟青霉菌丝体的多糖含量为1.92%。结论:该方法操作简便,重复性好,显色稳定,可用于蝉拟青霉多糖的含量测定。     

蝉拟青霉多糖的提取纯化工艺研究

目的：确定蝉拟青霉多糖的最佳提取纯化工艺。方法：用苯酚—硫酸紫外分光光度法测定蝉拟青霉多糖含量，采用正交实验设计，以多糖含量为指标，优化蝉拟青霉多糖水提取和醇沉淀工艺。结果：蝉拟青霉多糖水提取最佳条件：加水量1：7，提取时间1h，提取次数3次；醇沉淀最佳条件：水提液浓度0.15g生药/mL，醇浓度60%，醇沉时间72h。结论：优化的蝉拟青霉多糖水提醇沉工艺简便、合理、可行。     

金蝉花菌种的分离和培养

目的:探讨金蝉花真菌分离及液体发酵培养。方法:从孢子分离真菌,并采用液体培养基观察菌丝生长状况。结果:分离得到的菌种为拟青霉属蝉拟青霉,液体培养基表面覆盖菌丝,且出现了白色菌落带。结论:从金蝉花孢子分离得到蝉拟青霉,可以用液体培养基培养。     

蝉花真菌的分离及液体发酵培养

目的:探讨蝉花真菌分离及液体发酵培养。方法:从蝉花僵虫体、子座芽、孢子分离真菌,并采用三种液体培养基考察菌丝收率。结果:分离得到的蝉花真菌经鉴定为拟青霉属的蝉拟青霉。在含蚕蛹粉、鸡蛋等动物性成分的液体培养基中培养4天,菌丝收率135 g/L。结论:从蝉花分离得到的蝉拟青霉,可用液体发酵培养。     

蝉拟青霉多糖对老年大鼠免疫功能的调节作用

目的:研究蝉拟青霉水提物多糖对老龄大鼠免疫功能的调节作用。方法:以生理盐水处理的10~12周龄SD青年大鼠、18月龄SD老龄大鼠为对照组,实验组以不同剂量蝉拟青霉水提物多糖(50,100,200 mg.kg-1.d^-1)处理老龄大鼠3周,观察对照组、实验组大鼠腹腔、肺泡巨噬细胞对葡萄球菌的吞噬作用;以MTT法检测大鼠脾组织细胞分别在刀豆蛋白A(ConA),磷酸脂多糖(LPS)诱导下的淋巴细胞增殖活性;同时检测大鼠脾组织细胞内酸性磷酸酶(ACP),乳酸脱氢酶(LDH),精氨酸酶(ARG)等酶活力,并于透射电镜下观察大鼠脾组织超微结构。结果:与青年组比较,老龄组大鼠巨噬细胞的噬菌能力及脾组织淋巴细胞的增殖反应显著降低(P<0.01),脾细胞内ACP,LDH,ARG等酶活力也显著低下(P<0.01)。各种剂量蝉拟青霉多糖作用3周后老龄大鼠的这些指标均有改善,脾组织超微结构显示线粒体、内质网结构明显且数量增多。结论:蝉拟青霉水提物多糖能提高老龄大鼠腹腔、肺泡巨噬细胞吞噬功能和脾细胞免疫功能及增殖反应能力,使老龄大鼠低下的免疫功能得以改善,可能具有一定的抗衰老作用。     

古尼拟青霉胞外多糖的免疫抑制活性

目的:研究古尼拟青霉胞外多糖的生物活性.方法:分别采用MTT法、中性红比色法测定古尼拟青霉胞外多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞(PMΦ)吞噬功能以及细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性的影响.结果:古尼拟青霉胞外多糖在10 μg/ml剂量时能明显抑制小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能以及细胞毒T淋巴细胞的活性.结论:古尼拟青霉胞外多糖具有免疫抑制的生物活性,在免疫抑制类药物开发方面展现了良好的应用前景.     

细脚拟青霉多糖Ⅰ的化学结构

目的　研究细脚拟青霉多糖 的分离纯化方法、相对分子量、单糖组成及其结合方式。方法　室温下水提取出粗多糖 ,采用 Sephadex G- 10 0柱层析纯化。经过酸全水解 ,利用阴离子交换柱测定单糖的组成。甲基化分析测定单糖的结合方式。IR以及 NMR光谱的研究确定糖苷键的类型。结果　经高效液相色谱检测为均一性组成 ,从以后的 GC- MS及 NMR图谱也获得证明。结论　细脚拟青霉多糖 为α- (1→ 6 )连结的葡聚糖 ,相对分子量为 2 .0 5×10 4u。     

细脚拟青霉多糖Ⅰ的化学结构

目的研究细脚拟青霉多糖I的分离纯化方法、相对分子量、单糖组成及其结合方式.方法室温下水提取出粗多糖,采用Sephadex G-100柱层析纯化.经过酸全水解,利用阴离子交换柱测定单糖的组成.甲基化分析测定单糖的结合方式.IR以及NMR光谱的研究确定糖苷键的类型.结果经高效液相色谱检测为均一性组成,从以后的GC-MS及NMR图谱也获得证明.结论细脚拟青霉多糖I为α-(1→6)连结的葡聚糖,相对分子量为2.05×104u.     

冬虫夏草和中国拟青霉对小鼠脾细胞T细胞亚型和NK细胞活性的影响

经流氏细胞仪分析,冬虫夏草和中国拟青霉水提液可显增加ConA刺激 的小鼠脾细胞L3T4^ 和Lyt2^ T细胞的增殖,增加脾细胞L3T4^ 和Lyt2^＋T细胞的数,L3T4^ /Lyt2^ T 比值降低。用MTT还原法观察,二均可增加小鼠脾细胞NK细胞的活性。此外,冬虫夏草和中国拟青霉均可增加脾重、吞噬细胞数及吞噬细胞百分率。     

壁虎/蝉拟青霉发酵菌质粗提物抗肿瘤研究

目的:探索中药壁虎经蝉拟青霉发酵后菌质粗提物中蛋白质及体外抗肿瘤活性的变化。方法:分别用冻融、超声、Tris-HCl提取壁虎和壁虎/蝉拟青霉菌质抗肿瘤活性成分,通过蛋白质浓度检测、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析壁虎发酵前后蛋白含量与分子量的变化;MTT检测壁虎发酵前后抗HepG2肿瘤细胞活性的变化及不同提取方式抗肿瘤活性的差异。结果:壁虎发酵后菌质3种提取方式所得蛋白质含量均减少约30%,分子量10 kDa的蛋白电泳条带均消失;体外抗HepG2肿瘤细胞增殖活性增加,且超声提取物诱导HepG2肿瘤细胞凋亡的IC_(50)值为10.769 mg·mL~(-1),比发酵前降低了约50%。结论:蝉拟青霉的生长代谢分解了壁虎中的部分蛋白,且壁虎经蝉拟青霉发酵后抗HepG2细胞增殖活性增强。     

我国深层培养虫草菌丝体的药用研究

 本文介绍了我国冬虫夏草菌丝体药用研究概况。其中有4种代表性菌：蝙蝠蛾拟青霉，虫草头孢菌，中国拟青霉和圆柱菌。各菌种药理作用广泛，但不完全相同。有的菌丝制剂已进入临床。这方面研究仍在深入。     

灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物增强免疫作用研究北大核心

目的:考察灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物对正常小鼠免疫功能的影响。方法:480只SPF级Balb/c小鼠,随机分到8个试验中,分别从细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性及生化水平考察灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物对小鼠免疫功能的影响,每个试验随机分为5组,每组12只。分别为:空白对照组、金水宝胶囊组及灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物低、中、高剂量组。每天灌胃给药1次,持续30 d。喂食结束后,检测各指标。结果:细胞免疫方面:二硝基氟苯诱导小鼠DTH耳肿胀法试验结果为阳性,ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验结果为阴性,灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物低、中剂量组CD8^(+)细胞比例降低,CD4^(+)/CD8^(+)升高。体液免疫方面:血清溶血素为阳性结果,抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)为阳性结果。单核-巨噬细胞功能方面:小鼠碳廓清为阴性结果,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞为阳性结果。NK细胞活性检测为阳性结果。灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物中、高剂量组小鼠IgM、IgA、TNF-α水平显著升高,高剂量组IgG显著升高。结论:灵芝蝙蝠蛾拟青霉菌丝体复合物具有增强免疫功能的作用,其机制可能与增强体液免疫作用及部分细胞免疫作用有关。     

蝉拟青霉/黄芪双向发酵菌质化学成分及抗高尿酸血症活性研究

目的：利用蝉拟青霉对黄芪进行发酵处理,探究发酵后所得菌质有效成分含量变化及其抗高尿酸血症活性。方法：采用硫酸-苯酚比色法、NaNO2-Al（NO3）3比色法、酸碱滴定法对黄芪及黄芪发酵菌质中多糖、总黄酮、总酸的含量进行测定;采用氧嗪酸钾盐诱导高尿酸血症（HUA）大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、菌质（150、300 mg·kg-1）组、黄芪（150、300 mg·kg-1）组及苯溴马隆（20 mg·kg-1）组,连续灌胃给药14 d,分别对大鼠血清中的尿酸（UA）、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、丙氨酸转氨酶（ALT）及天冬氨酸转氨酶（AST）水平进行测定。结果：黄芪药材经蝉拟青霉双向发酵后,总多糖的含量显著升高,总黄酮的含量显著降低,总酸的含量变化不明显。与对照组比较,模型组大鼠血清中UA、BUN、TC、TG、ALT和AST水平显著升高（P<0.05,P<0.001）;与模型组比较,黄芪组及黄芪发酵菌质组大鼠血清中UA、BUN、TC、TG、ALT和AST水平显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,且菌质组效果明显优于黄芪组。结论：黄芪经蝉拟青霉发酵后有效成分含量发生较大变化,所得蝉拟青霉/黄芪双向发酵菌质具有良好的抗高尿酸血症作用。     

中国拟青霉的抗氧化作用

中国拟青霉给药3g/kg十四天能够提高鼠肝组织超氧化物歧化酶的含量;离体实验中国拟青霉提高鼠肝匀浆超氧化物岐化酶的含量和抑制脂质过氧化物的生成与天然冬虫夏草相似。此外中国拟青霉尚能提高谷胱甘肽过氧化物酶的含量。     

细脚拟青霉多糖PTPS-1的结构特征和抗肿瘤活性的初步研究

目的分析鉴定细脚拟青霉多糖PTPS-1的理化性质和结构特征,并观察其抗肿瘤活性。方法采用DEAE-纤维素及Sephadex G-100柱色谱分离纯化得到PTPS-1;利用HPLC、GC、IR、部分酸水解及NMR分析PTPS-1的相对分子质量、组成和结构特征;采用CCK-8检测观察PTPS-1对小鼠脾细胞和PTPS-1刺激培养的小鼠腹腔巨噬细胞上清对Sp2/0细胞的增殖活性。结果PTPS-1的纯度为98.977%,平均相对分子质量为1.84×104,由甘露糖和半乳糖组成,二者摩尔比为1.3∶1,糖链结构中主链含有α-(1→6)、α-(1→2)和β-(1→3)连接的糖苷键,支链含有Gal-(1→3)连接。PTPS-1可明显促进小鼠脾细胞的增殖(P<0.01),PTPS-1刺激培养的小鼠腹腔巨噬细胞上清能抑制Sp2/0细胞的增殖(P<0.01)。结论PTPS-1是从细脚拟青霉中分离出的具有免疫调节和抗肿瘤活性的中性杂多糖。     

蝙蝠蛾拟青霉及金水宝胶囊的DNA条形码鉴定

目的:由于传统方法对发酵菌丝体鉴定困难,采用DNA条形码技术对金水宝胶囊原料菌种蝙蝠蛾拟青霉及相关产品进行快速鉴定。方法:采用内转录间隔区(ITS)序列对收集的蝙蝠蛾拟青霉及其易混淆物种共8种168份样品进行条形码鉴定,并基于ITS序列设计蝙蝠蛾拟青霉特异引物对相关产品进行快速鉴定。结果:44份不同来源蝙蝠蛾拟青霉的ITS序列长度均为499 bp,无变异位点。基于ITS序列可对蝙蝠蛾拟青霉及其7种易混伪品进行区别;通过ITS序列设计的蝙蝠蛾拟青霉特异性引物(ITS-BF/ITS-BR)可特异扩增得到长度102 bp的短片段,采用该片段可快速鉴别蝙蝠蛾拟青霉与其他虫草菌,并可区分市场上相关产品。结论:通过ITS序列及特异性引物可以实现蝙蝠蛾拟青霉及其相关产品的快速鉴定,为金水宝胶囊的生产及质量控制提供参考。     

黄芪多糖微波、超声辅助提取研究

黄芪为常用中药，黄芪多糖是黄芪的有效成分之一。研究表明，黄芪多糖具有促进免疫功能、改善心血管功能等多种生物活性^[、2]。目前，黄芪多糖大都采用水煎煮法提取，李红民等^[3-7]探讨了黄芪多糖的微波萃取效果，黄芪多糖的超声萃取尚未见文献报道。微波和超声波是常规液固相萃取中强化传质过程的两种主要手段，本实验在黄芪多糖水浸提法提取的基础上，以多糖得率及粗多糖纯度为目标函数，探讨了黄芪多糖的微波及超声辅助提取效果。     

药用真菌蝉花的研究进展

蝉花是一种传统的药用真菌，除含有与冬虫夏草相似的活性成分外，还具有一些独特的生物活性。现从形态特征、自然分布、人工培养及其所含的活性物质和功能等几个方面评述了药用真菌蝉花的研究现状，且根据当前生物技术的发展趋势，提出了今后研究开发蝉花中一些值得关注的问题，并对其发展前景进行了展望。     

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体研究现状

蝙蝠蛾拟青霉菌丝体是从冬虫夏草样品中分离获得并经过培养和形态学的研究鉴定命名的,是冬虫夏草的常用代用品之一。本文从其概述、培养方法、活性成分及其药理作用和产品开发几个方面对其研究现状进行了整理总结,指出研究中存在的问题,并对研究前景进行展望。     

蝙蝠蛾拟青霉模式菌相关问题的探讨

蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali是中国中医科学院中药研究所于1982年从云南省迪庆州白马雪山采集的冬虫夏草上分离得到一种真菌新种,2008年进行名称合格化发表,明确指定该种原描述使用的82-2菌株的干培养物作为模式标本,并指明保存在中国中医科学院植物标本馆(CHICMM)即(CMMI),至今还保存在该馆内。2015年2月姚一建等在《Taxon》杂志上发表"Neotypification of Paecilomyces hepiali(Hypocreales)"一文要求另立蝙蝠蛾拟青霉新模式菌,该文提出另立蝙蝠蛾拟青霉新模式菌不能成立。