改良法制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的：检测用低含量胰蛋白酶消化加反复冻融法来制备的脱细胞异种真皮，并观察大鼠皮下移植后的结果。方法：将断层猪皮浸入0．5g／L胰蛋白酶溶液中4℃过夜消化，去除表皮和部分真皮内细胞成分，然后分别行4℃预冷，-70℃冷冻和37℃下融化，如此反复冻融3次。进行大体观察和组织学检测、细菌培养试验、细胞毒性试验。将真皮基质移植于大鼠皮下，术后2，4，6，8周行大体和组织学观察。结果：脱细胞猪真皮基质平整光滑，质地柔软，有弹性，韧性好。镜下观察基底膜存在，胶原结构完整，无细胞存在，无细菌生长，无细胞毒性。大鼠皮下移植后愈合良好，无明显炎症反应。结论：低含量胰蛋白酶消化加反复冻融法制备的脱细胞异种真皮能完全去除细胞成分，且保持胶原结构和基底膜的完整，为一种简便有效的方法。     

异种去细胞真皮基质在体内转归的初步研究

目的 初步研究异种（猪）去细胞真皮基质在体内的转归。方法 经曲通（Triton）X-100、胰蛋白酶处理得到异种（猪）去细胞真皮基质后，将其包埋于SD大鼠皮下，于术后1、2、4、6、8、12、16、20和30周观察异种（猪）去细胞真皮基质的大体形态及组织学变化。结果 制备的异种（猪）去细胞真皮基质去细胞成分，胶原纤维排列有序，基底膜结构完整。大体观察异种（猪）去细胞真皮基质原始形态随时间延长而逐渐模糊．组织学观察异种（猪）去细胞真皮基质1周以炎性细胞浸润为主，以后成纤维细胞、毛细血管逐渐增多，真皮胶原排列逐渐规则、致密。结论 异种（猪）去细胞真皮基质可在体内作为支架长期存在，并可诱导自身成纤维细胞及毛细血管有序长入。     

异种脱细胞真皮基质制备方法的改进

背景:应用液氮进行大张羊脱细胞真皮基质制作时,复温过程中真皮基质易破碎,不易制出大张完整的脱细胞羊真皮基质.目的:探索更好的羊脱细胞真皮基质的制作方法.方法:改变低温条件,变液氮降温为应用-80℃低温冰箱进行异种皮肤的冷冻处理,破坏细胞成分,利用洗脱液振荡洗涤,去除细胞碎片,制备出完整的大张羊脱细胞真皮基质,并对其脱细胞程度和胶原三维支架结构的完整性进行测定.结果与结论:通过-80℃低温冰箱进行反复冻融制备的大张羊脱细胞真皮基质,较为完整,常规病理检查无明显细胞碎片残留;免疫组化检测无明显细胞碎片;电子显微镜检查胶原结构完整.应用改良-80℃低温冰箱和液氮进行反复冻融制作的大张羊脱细胞真皮基质对比,脱细胞程度和其他生物学性能无明显差异,但完整性前者明显优于后者,适合临床应用.     

异种无细胞真皮制备方法比较及在移植中的意义

目的对既往异种无细胞真皮(Acellulardermalmatrix,ADM)制备方法进行改良,以期寻求一种更适合于ADM制作的方法。方法联合物理化学方法,采用猪网状层真皮制备ADM,与两种以酶消化法为主的制备ADM的方法进行组织学比较。结果3种方法制备的ADM均无完整细胞存在,但改良法去除细胞残余成分更为彻底且胶原结构保持更为良好。结论该改良法ADM用于异种移植的最大优势在于无基底膜及真皮乳头层存在,抗原成分进一步降低。     

异种无细胞真皮制备方法比较及在移植中的意义

目的：对既往异种无细胞真皮(Acelhlar dermal matrix，ADM)制备方法进行改良，以期寻求一种更适合于ADM制作的方法。方法：联合物理化学方法，采用猪网状层真皮制备ADM，与两种以酶消化法为主的制备ADM的方法进行组织学比较。结果：3种方法制备的ADM均无完整细胞存在，但改良法去除细胞残余成分更为彻底且胶原结构保持更为良好。结论：该改良法ADM用于异种移植的最大优势在于：无基底膜及真皮乳头层存在，抗原成分进一步降低。     

不同方法制备猪脱细胞真皮基质及创面移植的实验研究

目的比较两种方法制备的猪脱细胞真皮基质分别与自体刃厚皮复合移植修复大鼠全层皮肤缺损的效果。方法使用DispaseⅡ／TritonX-100(中性蛋白酶／曲拉通)和高渗盐水／十二烷基硫酸钠(SDS)两种方法去除猪表皮及真皮中的细胞成分，分别得到猪脱细胞真皮基质Ⅰ和Ⅱ。63只SD大鼠背部全层皮肤缺损分别使用猪脱细胞真皮基质Ⅰ 自体刃厚皮及猪脱细胞真皮基质Ⅱ 自体刃厚皮覆盖，术后观察移植物成活率和植皮区收缩率，同时取移植物进行组织学观察，并与单纯自体刃厚皮移植相比较。结果两种方法制备的猪脱细胞真皮基质分别与自体刃厚皮复合移植的移植物成活率和植皮区收缩率差异无显著性，组织学观察显示复合皮上皮化良好，胶原纤维排列有序，基底膜结构完整。两复合皮组术后第6周移植物成活率与自体刃厚皮组比较差异均无显著性，术后第4周开始两复合皮组移植物收缩率明显降低。结论两种方法制备的异种脱细胞真皮基质与自体皮复合移植都能很好地修复全层皮肤缺损，改善创面愈合质量。     

异体异种脱细胞真皮与自体刃厚皮复合移植的比较

背景:尽管真皮基质的生物模板作用可减少瘢痕形成,改善创面愈合质量已得到共识,但不同种属脱细胞真皮基质作为真皮添充物的成活机制和重建过程等生物学性能是否有差异仍需进一步探讨.目的:对比分析异体及异种脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植的近期效果.设计、时间及地点:随机分组,自身对照观察实验,于2008-01/06在海南省人民医院医学动物实验中心完成.材料:J-1型人脱细胞异体真皮基质由北京桀亚莱福生物技术有限公司提供.小型香猪1只以低含量胰蛋白酶消化加反复冻融法制备制备猪脱细胞真皮基质.方法:选取近交系小型香猪15只,在每头猪脊背两侧制作6 cm×6 cm全层皮肤缺损创面各3处,共6处,按移植物的不同将创面随机分为3组:猪脱细胞真皮基质与猪刃厚自体皮复合移植组与人脱细胞真皮基质与猪刃厚皮复合移植组在脱细胞真皮基质植入后,在其表面重叠覆盖自体刃厚皮,对照组单纯行猪薄皮片移植.主要观察指标:移植后9 d、21 d及3个月各组移植物成活情况、创面收缩率和组织学变化.结果:移植后第9,21天各组移植皮片大部分均成活良好,局部无红肿,3个月时两复合移植组皮肤外观相似,均光滑、柔软、丰满、有弹性,与周围正常组织结合部平坦,对照组创面收缩凹陷明显,皮片薄弱,韧性也较复合移植组差,3组移植物成活率差异无显著性意义(P>0.05),自体刃厚皮移植创面收缩率高于其他两组(P<0.05).移植后8 d,2个复合移植组脱细胞真皮基质引导形成丰富的毛细血管结构,复合皮表皮层形成且分化良好;移植后21 d,已有完整的皮肤结构,真皮层内可见胶原纤维排列规整,表皮-真皮连接区"钉突"结构明显,移植后3个月结构更加接近正常真皮,对照组组织致密,胶原排列紊乱,与瘢痕组织结构相似.结论:与自体皮复合移植时,异体及异种脱细胞真皮基质具有相近的生物学性能,且效果优于单纯刃厚自体皮移植.     

异种脱细胞真皮替代睑板材料重建眼睑的可行性

背景:眼睑后层重建是眼睑重建的重点和难点,其中睑板替代物更是研究的焦点。异种脱细胞真皮作为一种新型的组织工程材料,在国内外烧伤整形领域,正得到广泛的研究和应用。目的:观察异种(猪)脱细胞真皮植入兔眼睑后的组织相容性极其组织病理学变化。方法:剥取健康小白猪全层皮肤20cm×20cm,制备异种(猪)脱细胞真皮基质。同时制备兔睑板全层缺损模型并植入脱细胞真皮基质,观察大体情况,并分别于第1,2,3周取移植交界处眼睑组织光镜下观察组织学的改变。结果与结论:大体观察未见明显排斥反应及眼睑的变形;光镜下1周时可见局部炎症细胞浸润,2周时炎症细胞减少,3周时正常纤维组织长入,逐渐分割代替植入的胶原纤维,炎症反应消失。提示异种脱细胞真皮免疫原性低,并可引导新生胶原的生长,是一种良好的睑板替代物。     

全层皮肤缺损创面移植异种脱细胞真皮基质与薄自体皮重塑基底膜的实验观察

背景异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植修复全层皮肤缺损创面取得了良好的效果,但对移植后基底膜的重塑尚不十分清楚.目的观察异种(猪)脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植模型中基底膜重塑的变化规律.设计随机对照实验研究.地点和材料动物实验在上海市烧伤研究所完成,指标检测在上海第二医科大学细胞生物学教研室完成.清洁级雄性SD大鼠(由中国医学科学院上海实验动物中心提供),体质量200～250 g.干预将SD大鼠随机分为两组,每组42只.所有动物均饲养在层流房间内,恒定的湿度与温度,单笼饲养.A组单纯移植薄自体皮组;B组脱细胞猪真皮基质(江苏启东医疗用品研究所提供)+薄自体皮复合移植.将异种(猪)脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植于大鼠创面,分别于移植后1,2,3,4,8,12,16周留取标本,采用免疫组化、透射电镜等方法.主要观察指标观察基底膜中层粘连蛋白的变化规律及12周时基底膜的超微结构,同时以单纯薄自体皮移植进行对照.结果B组移植后1,2,3,4,8,12,16周,层粘连蛋白的表达分别为88.32±2.72,89.22±2.16,88.84±3.43,93.49 ±4.59,87.57±3.33,95.87±1.84,86.57±2.45,A组分别为78.96±1.68,85.37±5.41,82.49±3.73,84.27±2.69,72.88±3.57,88.19±3.36,82.82±2.86,12周时复合皮移植组基底膜结构清晰连续,而单纯移植薄自体皮组基底膜模糊、不连续.结论异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后,基底膜中层粘连蛋白表达增高,可能有利于复合皮移植后基底膜的重塑,增强表皮和真皮之间的连接,进而改善创面愈合质量.     

人去表皮真皮细胞活性及组织结构特征(英文)

背景:研究证实,去表皮的真皮可以作为真皮替代物,在其上接种角质形成细胞后形成表皮结构.但有关真皮替代物细胞生物活性、组织结构特点及基底膜成分分析的研究报道较少.目的:观察人去表皮真皮细胞活性及组织结构特征.方法:将健康成人皮瓣用56℃PBS溶液处理以去除表皮,用液氮连续冻融处理去除真皮中细胞成分,获得去表皮真皮.以组织块培养法观察去表皮真皮细胞活性.以苏木精染色检测去表皮真皮细胞核,以波形蛋白免疫组化检测去表皮真皮成纤维细胞成分.以PAS染色及Ⅳ型胶原免疫组化检测基底膜及其成分.以VG染色检测去表皮真皮胶原纤维,Weigert染色检测弹力纤维,VG与Weigert双染色检测胶原纤维及弹力纤维,透射及扫描电镜观察去表皮真皮超微结构.结果与结论;用组织块培养方法培养的去表皮真皮2周无细胞生长.苏木精-伊红染色显示去表皮真皮中无细胞核、波形蛋白免疫组化显示去表皮真皮中无波形蛋白表达.VG染色显示去表皮真皮胶原纤维染成玫瑰红色,Weigert染色显示去表皮真皮弹力纤维染成紫黑色,双染色进一步显示胶原纤维与弹力纤维均匀排列.去表皮真皮表面及附属器残留部位PAS反应强阳性,Ⅳ型胶原表达明显.透射及扫描电镜下观察到去表皮真皮中胶原,弹力纤维交错排列,间有孔隙,相互交织成网.去表皮真皮无活细胞成分,真皮基质表面及附属器管腔壁仍保留糖原、Ⅳ型胶原等基底膜成分,真皮基质中富含胶原及弹力纤维,是一种类似在体真皮的三维胶原基质.