重症监护病房耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌6种耐药基因检测

目的 研究医院重症监护病房(intensive care unit,ICU)患者感染鲍曼不动杆菌的耐药性及耐药基因,以指导临床合理用药,控制ICU病房感染暴发流行。方法 采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定药敏系统对细菌进行鉴定及药敏试验,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检测6种常见碳青霉烯酶耐药基因(blaIMP、blaVIM、blaNDM、blaOXA-23、blaOXA-24和blaOXA-58)。结果 38株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌对15种临床常用青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类及β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物全部耐药,对头孢哌酮/舒巴坦、米诺环素的耐药率分别为92.1%和81.6%,仅对替加环素保持较高敏感性,敏感率为94.7%。38株CRAB中携带blaOXA-23基因共36株(94.7%),未检出blaIMP、blaVIM、blaNDM、blaOXA-24和blaOXA-58基因。结论 我院ICU分离耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药广泛,携带blaOXA-23基因是可能该院ICU耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因。临床医生应合理使用抗菌药物,加强细菌耐药性监测,防止耐药菌株的产生和进一步传播。     

安徽地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌分子流行病学研究

目的 研究安徽地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)的耐药性、碳青 霉烯酶基因型及分子流行病学研究,为控制医院感染提供理论依据。方法 收集安徽地区43家三级医院2015年9月和2016年9月 CRAB非重复菌株312株,从中挑选出两年内均有CRAB的医院12家,菌株147株。对挑选出的147株CRAB采用琼脂稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC);PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因;采用多位点序列分型技 术(multilocus sequence typing, MLST)进行分子分型,使用eBURST软件分析菌株亲缘性。结果 147株临床分离的CRAB均为多 重耐药菌株,对16种抗菌药物耐药性均较高,其中对替加环素和米诺环素耐药性较低,分别为9.27%和54.26%。147株CRAB中 有134株携带blaOXA-23基因,1株携带blaOXA-24 基因,4株携带blaIMP基因,全部携带blaOXA-51基因,其余碳青霉稀类耐药基因均未检 出。147株CRAB分为26个ST基因型,其中13个ST分型属于CC92克隆群,ST195有48株,为安徽地区最常见ST型,另外新发现 15个ST基因型。结论 本研究中安徽地区147株CRAB对临床常用抗生素耐药性严重,除替加环素和米诺环素外,耐药率均在 76%以上。blaOXA-51是位于染色体上的固有基因,检出率为100%;blaOXA-23 是安徽地区最主要的碳青霉烯酶基因型,检出率为 91.15%。CC92为安徽地区最主要克隆群,与世界流行克隆群一致。本研究所测147株菌株间存在进化间关系,提示可能存在水 平传播趋势。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶基因的检测

目的 研究本院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)中碳青霉烯酶基因流行状况,为治疗和控制其感染提供参考依据。方法 收集抚州市第一人民医院2015—2016年间临床分离的CRAB非重复株,Vitek-2 Compact型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定和药敏实验,改良Hodge试验进行碳青霉烯酶初筛,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶,采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因。结果 69株CRAB对替加环素耐药率为1.4%,复方磺胺甲噁唑耐药率81.2%,其他抗生素耐药率均在90%以上,全部表现为多重耐药。改良Hodge试验阳性55株(80.0%),EDTA协同试验未检出阳性菌株。基因扩增KPC酶基因38株(55%),OXA-23酶基因68株(98.6%),OXA-51酶基因69株(100%),未检测出IMP-1、VIM-1、NDM-1、SIM-1、OXA-24和OXA-58等酶基因。结论 本院69株CRAB耐药性非常严重,OXA-23和OXA-51型酶基因是其携带的主要碳青霉烯酶基因。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药性与毒力基因的相关性分析

摘要：目的 探讨耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药性与毒力基因的相关性。方法 收集2018年11月至2019年11月安徽医 科大学第一附属医院173株非重复的鲍曼不动杆菌菌株,分析其对碳青霉烯类抗生素的耐药性。采用PCR检测耐药相关基因 (blaOXA-23、blaOXA-51、blaKPC、blaOXA-24、blaIMP、blaOXA-58、blaVIM和blaSIM)和毒力基因(cusE、bap、abaI和bfmS)。分析鲍曼不 动杆菌耐药性与毒力基因的关系。结果 经筛选后有84株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌对哌拉西林/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡 肟、头孢噻肟、头孢曲松、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、复方磺胺甲恶唑、米诺环素、替加环 素、亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为95.23%、94.04%、94.04%、96.42%、95.23%、95.23%、84.52%、96.42%、76.19%、 79.76%、97.61%、57.14%、0、100.00%和100.00%;其中检测出带有耐药基因blaOXA-23有76株;带有耐药基因blaOXA-51有84株, 未检测出blaKPC、blaOXA-24、blaIMP、blaOXA-58、blaVIM、blaSIM基因;不同毒力基因的鲍曼不动杆菌均具有较高的耐药性,其中 含有毒力基因abaI和bfmS的鲍曼不动杆菌与不含abaI和bfmS基因的耐药性比较存在明显差异(P<0.05)。结论 本院鲍曼不动杆菌 对碳青霉烯类抗生素耐药严重,主要携带blaOXA-23和blaOXA-51耐药基因。耐药性与毒力基因abaI和bfmS密切相关。     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌流行特征及耐药基因分析

目的调查分析我院2009年医院内获得性鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药性,研究耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的克隆流行情况以及碳青霉烯酶基因型。方法用琼脂稀释法进行药敏试验,按CLSI（2009）标准判断细菌耐药性,并用PFGE法对2009年的102株对碳青霉烯耐药菌进行同源性分析,多重PCR扩增碳青霉烯酶基因bla_OXA-51like,bla_OXA-24like,bla_OXA-58like。结果药敏试验结果显示鲍曼不动杆菌对米诺环素、替加环素、多粘菌素B耐药率较低,对碳青霉烯耐药高。PFGE结果显示我院存在A/B/C克隆株流行,主要分布于呼吸科以及ICU等病房,时间上呈散发流行。102株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌产OXA-23型碳青霉烯酶率为71.6%,产OXA-51型碳青霉烯酶率为84.3%,另外仅2株检出OXA-24型碳青霉烯酶,3株检出（）XA-58型碳青霉烯酶。结论我院在呼吸科以及ICU等病房存在A/B/C克隆株流行,碳青霉烯酶基因型以OXA-23、OXA-51型为主,由于对多种抗菌药物尤其是碳青霉烯类抗生素耐药性的增强和克隆株的流行,应积极采取有效措施预防和控制鲍曼不动杆菌感染。     

该基因的整合和鲍曼不动杆菌基因可变区盒式结构分析检测

目的:了解整合酶基因在天津地区多重耐药鲍曼不动杆菌株中的分布和流行情况,分析整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系。方法:收集天津地区3家医院55株多重耐药鲍曼不动杆菌,以K-B法进行抗生素敏感试验,用PCR方法检测整合酶基因,结合以往检测的耐药基因,采用聚类法对55株多重耐药鲍曼不动杆菌进行菌株亲缘性分析。结果:55株多重耐药鲍曼不动杆菌共检出47株含有Ⅰ类整合酶基因,其中有23株检出可变区结构,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因,可变区所携带的aacA4和aadA1基因盒是引起鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药的主要原因。55株多重耐药鲍曼不动杆菌共含有3个克隆株。结论:天津地区多重耐药鲍曼不动杆菌中主要存在Ⅰ类整合子,聚类分析方法可对所有菌株分型。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的 研究鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法 对临床分离的3株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌，采用KB纸片扩散法（CLSI／NCCLS2004年标准）进行药敏试验，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR方法检测TEM、SHV、PER、VEB、AmpC、IMP、VIM、OXA-23和OXA-24等9种耐药基因型，PCR阳性产物进行基因测序，结果在GenBank基因库中比对分析。结果 3株鲍曼不动杆菌为多重耐药菌株，三维试验均产生ESBLs，1株产生AmpC酶，耐药基因型检测3株TEM阳性，2株PER阳性，2株AmpC酶阳性及SHV、VEB和IMP、VIM、OXA-24型等均为阴性；3株OXA-23型均阳性；另外27株对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌IMP、VIM，OXA-23和OXA-24型检测结果均阴性。结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带TEM、PER、非诱导AmpC酶、OXA-23型碳青霉烯酶基因，产生OXA-23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。     

鲍曼不动杆菌整合酶基因测定及可变区基因盒结构分析

摘要：目的了解整合酶基因在我市多重耐药鲍曼不动杆菌株中分布和流行情况,分析整合子与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系。方法收集我市三家三甲医院55株多重耐药鲍曼不动杆菌,以KB的法进行抗生素敏感试验及用聚合酶链反应方法检测整合酶基因,结合以往检测的耐药基因,采用聚类分析对55株进行菌株亲缘性分析。结果55株多重耐药鲍曼不动杆菌共检出47株含有Ⅰ类整合酶基因,其中有23株检出可变区结构,未检出Ⅱ,Ⅲ类整合酶基因,可变区所携带的aacA4和aadA1基因盒是引起鲍曼不动杆菌对氨基糖甙类抗生素耐药的主要原因。多基因聚类分析结果表明55株多重耐药鲍曼不动杆菌共含有3个克隆株。结论我市多重耐药鲍曼不动杆菌中主要存在本人类整合子,可变区所携带的基因盒aacA4和aadA1是引起鲍曼不动杆菌对氨基糖甙类抗生素耐药的主要原因,聚类分析方法可对所有菌株分型,为流行病学调查,院内感染控制及抗生素应用提供依据。 关键词：鲍曼不动杆菌,整合子;聚类分析     

儿科重症监护病房鲍曼不动杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解是医院儿科重症监护病房（PICU）鲍曼不动杆菌感染分布和产AmpC酶情况及耐药性。方法收集2011年1月至2012年9月医院儿科病房分离的饱曼不动杆菌．采用三维试验检测AmpC酶;用K-B纸片法进行药敏实验。结果儿科病房共检出226株鲍曼不动杆菌,产AmpC酶29株,AmpC酶阳性率为12.83％;其中PICU检出132株,25株产AmpC酶,AmpC酶阳性率18．94％;非PICU检出94株,产AmpC酶4株,AxnpC酶阳性率为4026％。并且PICU感染鲍曼不动杆菌的耐药性明显高于非PICU科室感染。结论P1CU感染鲍曼不动杆菌产AmpC酶的分离率及耐药率都较高,临床应加强耐药监测,根据药敏结果选川抗菌活性相当的㈣类抗生素中低耐药性药物,以减少耐药菌株的产生与蔓延。     

31例鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药分析及基因型研究

目的通过对我院住院患者的31株鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素的药物敏感试验及对碳青霉烯酶基因的分析研究,为临床用药提供参考依据。方法用梅里埃细菌分析仪对细菌鉴定,并对细菌进行药敏试验,同时用碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行基因扩增和基因型的测序分析,再对基因类型与网上GemBank比对,确定编码酶基因的类型。结果 31株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B、丁胺卡那霉素、左旋氧氟沙星的耐药率分别为4%、20%、50%。对哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素的耐药率分别为80%、85%。对本试验研究的其他9种抗菌药物的耐药率均在90%以上。携带OXA-51基因有21株(68%),携带D类碳青霉烯酶OXA-23基因有26株(84%),对OXA-24、OXA-58基因引物PCR扩增结果为阴性,并随机各抽取5株OXA-23基因为阳性菌株进行测序,并通过在网上GemBank对比,结果 OXA-23标准株有99%同源,OXA-51基因阳性的菌株与OXA-51标准株97%同源。结论多粘菌素B、丁胺卡那霉素、左旋氧氟沙星对耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌的敏感性较好,对其他抗生素有较强的耐药性。基因类型上以携带OXA-23型碳青霉烯酶基因为主,应合理地选用抗生素,防止多重耐药现象产生,对控制院感和疾病的疗效有极其重要意义。     

血流感染的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分子机制及临床研究

目的 探讨血流感染的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)耐药机制,分析菌株同源性及患者的临床特征,为CRAB的感染控制提供实验依据。方法 采用Bact/Alert 3D全自动血培养系统进行血培养,细菌鉴定和药敏使用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统。对2010年6月-2016年5月临床血流感染患者分离到的27株碳青霉烯类药物(亚胺培南和/或美罗培南MIC≥16μg/mL)耐药的CRAB复苏菌株,重新采用Vitek-MS质谱分析仪鉴定,采用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR法检测B类酶基因(blaNDM、blaIMP和blaVIM)和D类酶基因(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)并测序比对。采用MALDI-TOF分析菌株同源性,并分析患者的临床资料及感染相关信息。结果 血流感染的CRAB绝大多数对常用抗生素耐药。27株CRAB改良Hodge试验均阳性。所有CRAB均未检测到B类酶基因(blaNDM、blaIMP和blaVIM);25株CRAB同时检测到blaOXA-23和blaOXA-51;另2株CRAB则为blaOXA-58阳性。采用Vitek-MS进行同源性分析,细菌分成3大簇(Ⅰ型13株、Ⅱ型12株、Ⅲ型2株)。85.2%(25/27)患者来自重症监护病房或专科的监护病床,原发感染灶以肺部炎症最常见(11例)。所有的患者在血培养出CRAB前的30d内均有抗菌药物使用史,使用频率较高的抗菌药物有：碳青霉烯类、氟喹诺酮类、头霉素类。15例CRAB血流感染患者死亡。结论 厦门地区的CRAB以D类产碳青霉烯酶OXA-23和OXA-51最为多见。CRAB血流感染的原发感染多为肺部炎症。     

米诺环素联合多黏菌素B对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性研究

目的了解鲍曼不动杆菌（ABA）的产酶现状和耐药性及抗菌药物对ABA的体外抗菌活性,为临床治疗ABA提供合理用药的实验室依据。方法从临床感染标本中分离出75株鲍曼不动杆菌,均来自呼吸道标本。常规培养分离细菌,应用VITEK-2全自动细菌鉴定分析仪鉴定细菌。常规药敏试验采用K-B纸片法,最低抑菌浓度（MIC）测定采用琼脂平板倍比稀释法和E-test浓度梯度法,按CLSI规定的标准进行。结果75份标本中产金属β-内酰胺酶（MBLs）的菌株占96．00％,产诱导型AMPC酶的占29．33％,产质粒型AMPC酶的占41．33％。多黏菌素B（PLB）和米诺环素（MNO）对产MBLsABA、产诱导型AMPC酶ABA和产质粒型AMPC酶ABA的抑菌率分别是97．22％、100．00％、100．00％和19．43％、4．55％、6．45％。PLB和MNO联合对ABA的协同作用为57．33％。结论ABA的产酶率和耐药性越来越高,其引起的院内感染临床应高度重视。对多药耐药ABA导致的感染建议应用PLB或联合MNO（或替加环素）及舒巴坦治疗,以有效控制感染和防止耐药株在医院内感染的扩散。     

耐药鲍曼不动杆菌不同年份分离株耐药元件基因比较研究

目的 调查两组相隔7年的鲍曼不动杆菌菌株可能存在的耐药基因状况及菌株间的亲缘关系。方法 分别收集南京医科大学附属淮安第一医院2008年20株鲍曼不动杆菌，2016年20株鲍曼不动杆菌。菌种鉴定为鲍曼不动杆菌种特异mdfA基因与blaOXA-51基因PCR双重检测为阳性方确认为鲍曼不动杆菌。再用PCR方法检测32种β-内酰胺类药物获得性耐药基因、15种氨基糖苷类药物获得性耐药基因、10种可移动遗传元件遗传标记，最后对检测结果作样本聚类分析(UPGMA法)。 结果 2016年分离株对第三代头孢类药物、碳青霉烯类药物、氨基糖苷类药物、喹诺酮药物均为耐药。2008年分离株仅对第三代头孢类药物均为耐药，而对碳青霉烯类药物均为敏感，对喹诺酮药物、氨基糖苷类药物分别有50.00%和60.00%的敏感性。2008和2016年分离株均检出blaADC和blaOXA-51，但blaOXA-2群、blaOXA-23群只有2016年分离株均被检出。2008年分离株对第三代头孢类药物耐药主要与blaADC相关，2016年分离株对第三代头孢类药物、碳青霉烯类药物耐药主要与blaADC、blaOXA-2群和blaOXA-23群相关。2016年分离株均测出aac(2)-Ⅰb、aph(3)-Ⅰ、armA等3种氨基糖苷类药物耐药相关基因，而2008年分离株均无检出。可移动遗传元件遗传标记tnpU、tnp513、IS26和ISaba1等4种也只有2016年分离株被全部检出。菌株亲缘关系分析可见2008和2016年不同年份分离株分成两个独立的簇群(A簇群和B簇群)，2016年分离株聚集性更强相差系数更小。A和B簇群均可分为两个亚簇群。A-1亚簇群有两个克隆播散，A-2、B-1和B2亚簇群各有一个克隆播散。其中2016年分离株B-簇群一个有14株菌构成的大克隆播散。分离株耐药元件检测阳性模式显示，2008年分离株仅携带2~7种耐药元件基因；2016年分离株则携带14种~16种耐药元件基因。结论 多种β-内酰胺类药物耐药基因、氨基糖苷类药物耐药基因和可移动遗传元件是导致鲍曼不动杆菌对抗菌药物耐药的重要原因。在同一家医院的对相隔7年的鲍曼不动杆菌临床分离株进行耐药元件基因检测与分析是国内首次报道。不同年份分离株的耐药性和耐药元件基因携带状况差异明显：2016年分离株比2008年分离株耐药性更强，携带的耐药元件基因更多。2008年和2016年分离株均有克隆播散，提示有医院感染的存在。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

太原地区产质粒介导AmpC酶细菌的耐药性及分子流行病学研究

目的：了解太原地区产质粒介导AmpC β-内酰胺酶革兰阴性菌耐药性及分子流行病学情况。方法：收集太原地区四家医院2004年9月～2006年8月间临床分离的95株产质粒介导AmpC酶革兰阴性菌，K—B纸片扩散法检测耐药性；肠杆菌科基因组内重复一致序列一聚合酶链反应（ERIC—PCR）进行克隆株的DNA分型，确定同源性。结果：95株产质粒AmpC酶菌株对第三代头孢菌素类、头霉素明显耐药，耐药率都在80％以上，对第四代头孢的耐药率为44．2％，对单环菌素、喹诺酮类和氨基糖苷类均有不同程度的耐药，对碳青霉烯类均敏感。ERIC-PCR图谱可以分为25个不同克隆。结论：95株产质粒介导AmpC酶的革兰阴性菌呈多克隆模式，但是不同医院间有很大的相似性。提示中小城市可能更容易整个城市携带耐药质粒的传播和流行。对产AmpC酶细菌感染，首选碳青霉素烯类如亚胺培南，第四代头孢菌素如头孢吡肟有一定疗效。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌由插入序列ISAba1点突变引起的bla_(OXA-23)表达减低

目的研究临床分离的8株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中,与插入序列相关的blaOXA-23 mRNA的表达情况。方法应用双纸片增效法进行金属酶表型筛查并以PCR的方法扩增blaIMP-1、blaIMP-2、blaVIM-2和blaOXA-23 4种β-内酰胺酶基因;实时荧光PCR检测blaOXA-23 mRNA表达量,并以PCR的方法扩增插入序列ISAba1并测序。结果 4株菌金属酶表型筛查为阳性结果,PCR检测8株菌blaOXA-23阳性,2株blaIMP-1阳性、3株blaIMP-2阳性、blaVIM-2基因均为阴性;所有菌株均存在插入序列ISAba1,实时荧光PCR检测显示1株菌blaOXA-23 mRNA表达升高,其余7株菌与对照株比较为表达减低或相近,且这7株菌的插入序列存在点突变现象。结论插入序列ISAba1点突变是引起blaOXA-23碳青霉稀酶活性减低的主要原因。