碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2的研究

目的 研究铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2与碳青霉烯类抗生素耐药的关系.方法 琼脂稀释法测定14种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC.PCR扩增oprD2编码基因并进行序列分析.十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的变化,比较敏感株和耐药株外膜蛋白的差异,统计分析采用均数t检验.结果 141株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南药敏试验结果显示具3种模式,以亚胺培南和美罗培南同时耐药(IMPRMEMR)为主,占66.7%;亚胺培南耐药和美罗培南敏感(IMPRMEMS)占32.6%;亚胺培南敏感和美罗培南耐药(IMPSMEMR)仅占0.7%.PCR扩增141株耐药株oprD2编码基因结果136株耐药株oprD2编码基因发生显著变异,变异位点呈现多样性.其中34株细菌的oprD2编码基因存在大片段缺失,6株的oprD2编码基因中有插入片段,96株有小片段缺失或不同位置的多个点突变.另4株产金属酶菌株及1株亚胺培南敏感(美罗培南耐药)株的oprD2编码基因未发现异常.对其中16株碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌进行SDS-PAGE分析,结果显示10株IPMRMEMR和5株IPMRMEMS铜绿假单胞菌外膜蛋白均存在分子量46 000 u处的OprD2蛋白减少,而1株IMPSMEMR株OprD2蛋白带未见异常.结论 oprD2编码基因的缺失或突变可能是导致外膜蛋白OprD2缺失或减少的分子基础,并是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素尤其是亚胺培南耐药的主要机制之一.     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制——耐药株外膜蛋白OprD2缺失

目的：研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法：以亚胺培南为代表,应用十二烷酸磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)外膜蛋白图谱、凝胶分光光度扫描分析方法,分别研究临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株和亚胺培南敏感株。结果：耐药组OprD2相对含量显低于敏感组。结论：OprD2的缺失是铜绿假单胞菌对以亚胺培南为代表碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

41株铜绿假单胞菌耐药分析

目的：了解41株铜绿假单胞菌的耐药情况。方法：对临床分离的41株铜绿假单胞菌用细菌分析鉴定仪（ATB）鉴定,并进行体外药物敏感试验。结果：41株铜绿假单胞菌中,6株为耐亚胺培南菌株,占总菌株数14.6%,耐美罗西林的菌株数达50.0%,左旋氧氟沙星耐药达31.7%,替卡西林/棒酸耐药高达63.0%。结论：亚胺培南是治疗铜绿假单胞菌引起感染的可靠药物之一,而随着耐亚胺培南菌株的增加,应了解铜绿假单胞菌的耐药机制,加强耐药监测,以便为临床提供可靠的依据,指导临床合理用药。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药的关系

目的制备铜绿假单胞菌(PA)的外膜蛋白(Opr)D_2多克隆抗体,探讨OprD_2缺失与亚胺培南耐药的关系。方法常规酚-氯仿法提取PA的基因组DNA,PCR扩增OprD_2基因,构建原核表达质粒pRSET-OprD_2,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达目的蛋白,胶回收后制备兔多克隆抗体,应用该抗体检测临床分离的32株PA OprD_2的表达情况。结果成功构建了OprD_2原核表达载体,制备了特异性好的OprD_2多克隆抗体。蛋白印迹法检测27株临床分离的耐亚胺培南PA,20株(74.1%)OprD_2表达缺失,5株(18.5%)OprD_2表达明显减少,2株(7.4%)OprD_2表达正常。结论临床分离的PA OprD_2表达的缺失或减少是PA对亚胺培南耐药的主要机制之一。     

铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药关系的研究

目的研究广西地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2（OprD2）的表达与亚胺培南耐药之间的关系。方法采用SDS-PAGE电泳法对提取出的106株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的外膜蛋白进行电泳,并利用水杨酸盐抑制实验确定OprD2的位置,通过凝胶成像系统成像并将其与敏感株比较进行分析。结果 106株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌中有99株细菌缺失OprD2。结论 OprD2缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因之一。     

哈尔滨地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2与亚胺培南耐药关系研究

目的研究哈尔滨地区铜绿假单胞菌外膜蛋白D2(OprD2)含量改变与亚胺培南(IMP)耐药之间关系。方法采用超声破碎方法提取42株对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌OprD2,进行SDS-PAGE电泳,利用水杨酸盐抑制试验确定OprD2的位置,通过凝胶分析软件分析OprD2的相对含量,并与敏感株进行对比分析。结果42株对IMP耐药的铜绿假单胞菌中,OprD2完全缺失的有11株,减少的有17株,与敏感株相比,OprD2的相对含量明显降低。结论哈尔滨地区铜绿假单胞菌OprD2含量的减少或缺失是其对IMP耐药的主要原因之一。     

对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌耐药机制及耐药性的研究

目的了解目前儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2缺失和金属β内酰胺酶（MBI．）产生的情况，及具有不同耐药机制菌株的耐药特点。方法收集2004年1月--2006年12月从我院住院患儿中分离出的75株对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌。用PCR方法进行oprD2基因、金属酶IMP、VIM、SPMT和GIM基因检测。用琼脂稀释法进行药敏试验，按照2006年CLSI推荐标准判断结果。使用WHONET5．3和SPSS13．0软件进行数据分析。结果检测75株对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌中外膜孔蛋白OprD2缺失者50株，占66．7％；产金属酶的46株．占61、3％，其中IMP阳性38株（82．6％），VIM阳性8株（17．4％）。外膜孔蛋白OprD2缺失同时产金属酶的34株，占45．3％，其对口内酰胺类抗生素的耐药率、MIC50和MIC90均高于其他菌株。结论目前从儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2缺失和产生金属酶都十分严重，菌株的耐药性也很高，并且产MBI．菌株存在IMP和VIM2种基因型。     

痰标本铜绿假单胞菌224株5年耐药变迁

目的分析解放军第一一八医院2006～2010年痰标本铜绿假单胞菌检出情况及耐药谱变化,为指导临床控制肺部铜绿假单胞菌感染及合理使用抗菌药物提供参考。方法用自编Excel软件从LIS数据库中采集2006年1月至2010年12月该院住院患者送检痰标本中分离的铜绿假单胞菌共224株。菌株鉴定和药敏试验采用法国生物梅里埃公司的ATB Expression细菌鉴定系统和药敏板条,并用Excel透视图表进行铜绿假单胞菌检出率及耐药分析,率的差异性比较用u检验。结果 5年来该院住院患者送检痰标本778份,共分离检出致病菌571株,其中铜绿假单胞菌224株,占总检出菌的39.2%。亚胺培南耐药株166例,占铜绿假单胞菌的74.1%。按亚胺培南敏感程度分组后,其对常用抗菌药物的耐药率差异有统计学意义(P<0.01)。结论痰标本分离的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率高,耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药率亦明显高于非耐药株。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性

目的：研究铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率及对其他抗菌药物的耐药率。方法：收集2000年1月—2002年12月我院细菌室分离的铜绿假单胞菌，采用琼脂扩散法作敏感试验。结果：2000年分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为20．6％(32／155)，2001年为39．0％(48／123)，2002年为41．3％(95／230)。痰标本分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌最多见，占69．1％(121／175)，其次为尿液、伤口分泌物等。耐亚胺培南铜绿假单胞菌主要分布在外科监护病房，占35．6％(51／143)，其次为呼吸监护病房(33．5％)、外科(12．5％)和呼吸科(6．25％)等。耐亚胺培南铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药，对氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素和环丙沙星的耐药率逐年升高。外科监护病房和呼吸监护病房分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其他抗菌药物的耐药率均较高。结论：铜绿假单胞菌对碳青霉烯类的耐药率逐年增加，并对多种抗菌药耐药，应引起高度重视。     

北京地区五家医院获得性铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究

目的 研究北京地区5家教学医院临床分离的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌(IRPA)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的分子机制.方法 收集2004年6月-2005年12月北京地区5家教学医院临床分离的非重复性213株IRPA,采用琼脂稀释法测定美罗培南、亚胺培南等抗菌药物对这些菌株的MIC值;采用纸片法初筛产金属酶菌株;对金属酶IMP-、VIM-基因以及孔道蛋白OprD2基因进行PCR及序列分析.结果 5家教学医院分离的213株IRPA中84株存在孔道蛋白OprD2缺失,其中有6株还同时产IMP-1型金属酶.另有13株IRPA单独产IMP-1型金属酶,2株单独产VIM-2型金属酶.结论 孔道蛋白OprD2缺失、产金属酶是北京地区铜绿假单胞菌(PA)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的部分机制.     

80株铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的检测和研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌的临床特征及耐药机制。方法对2016年1月至2017年9月该院临床分离的80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的科室分布、标本类型及耐药性进行回顾性分析;运用PCR检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药基因blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaSIM、blaSPM、blaGIM、blaOXA-10及膜孔蛋白OprD2基因。结果该院以神经外科送检标本的耐亚胺培南铜绿假单胞菌检出(28.0%)最多,主要分离自呼吸道标本(86.0%)。80株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率最低(7.5%),对复方磺胺甲噁唑的耐药率最高(97.5%)。耐药基因检测结果显示:blaVIM基因阳性1株(1.2%),blaOXA-10基因阳性4株(5.0%),其他耐药基因均未检出;膜孔蛋白OprD2基因缺失67株(83.8%)。结论本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制是膜孔蛋白OprD2基因的缺失。     

75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的检出及药敏分析

目的 探讨碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的耐药性及分布状况.方法 对本院2009年1～8月送检标本中共分离到的946株病原菌,进行细菌培养和药敏试验结果分析.结果 946株病原菌中铜绿假单胞菌有171株,占18.1％,其中碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌75株,其对碳青霉烯类抗生素的耐药率为43.9％.痰标本中检出碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌43株,占57.3％.75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的病区分布以重症监护病房为主,占33.3％.结论 铜绿假单胞菌感染的标本以呼吸道痰液为主,病区分布主要集中在重症监护病房和神经外科等病室.     

胸腔积液分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的分析该院近3年来感染患者胸腔积液培养所分离的铜绿假单胞菌的耐药表型,并检测相关耐药基因,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用法国梅里埃Bact/ALERT 3D120型血培养仪培养胸腔积液标本。西门子MicroScan WalkAway 96微生物鉴定系统和进行药敏试验。亚胺培南-EDTA双纸片法检测金属酶。PCR检测耐药基因(OprD、VIM和IMP)。结果 38株铜绿假单胞菌中14株对亚胺培南耐药,其中有2株为多重耐药株,4株产金属酶。14株耐药株中OprD基因PCR检测发现两株缺失,而IMP、VIM金属酶基因检测结果有2株为阳性。结论胸腔积液分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率较高,耐药机制包括产金属酶(VIM和IMP基因)和OprD缺失。     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

288株铜绿假单胞菌对6种抗菌药的耐药性研究

目的 :研究铜绿假单胞菌对 6种经验用药抗菌药的耐药性。方法 :比较 2 88株铜绿假单胞菌对氨曲南、头孢他啶、亚胺培南、环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林的耐药情况。结果 :药敏报告显示氨曲南、头孢他啶、亚胺培南、环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林的耐药率依次为 18 7%、 2 4 3%、2 7 7%、 4 7 6 %、 5 5 9%、 70 0 % ,后 3者分别与前 3者比较 ,差异均有统计学意义 (均为P <0 0 1)。结论 :氨曲南、头孢他啶、亚胺培南治疗铜绿假单胞菌感染仍有较好的疗效 ,铜绿假单胞菌对环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林耐药较多 ,可选择联合用药     

铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药的机制研究

目的分析159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性,探究体外联合药敏试验对碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌表现不同作用的机制。方法收集来自不同患者的铜绿假单胞菌159株,亚胺培南及美罗培南耐药。采用三维水解试验检测β-内酰胺酶、聚合酶链式反应(PCR)等方法检测多重耐药菌可能存在的耐药机制。结果 159株临床分离的非重复碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌,通过三维实验检测,其中15株产MBL、13株产AmpC酶。体外联合药物敏感试验,加入MC-207,110后约38%的菌株对碳青霉烯类抗生素的MIC下降4个梯度。检测试验菌株,21株携带IMP基因,18株携带ampC基因;检测OprD2通道蛋白,159株中约有48%的菌株OprD2丢失。结论北京友谊医院碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因不是IMP、AmpC水解酶;碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因可能是外排泵及外膜孔道蛋白。     

碳青霉烯类抗生素诱导铜绿假单胞菌外膜蛋白及外排系统突变的机制研究

摘要：目的：探讨临床分离的因外膜蛋白突变导致的铜绿假单胞菌（Pa）碳青霉烯类耐药机制是否与药物诱导相关。 方法：在M-H平板上用亚胺培南（IPM）和美罗培南（MEM）药敏纸片分别诱导3株Pa（Pa标、Pa1和Pa2）。琼脂稀释法测定诱导前后Pa对IPM、MEM、头孢他啶和头孢吡肟4种药物的最低抑菌浓度（MIC）。改良三维试验检测诱导后产碳青霉烯酶变化。SDS-PAGE观察Pa外膜蛋白OprD的改变。PCR扩增oprD基因并进行序列分析。实时荧光定量PCR检测Pa外排系统表达情况。并对诱导耐药菌株进行稳定性分析。 结果：诱导第5天出现对IPM和MEM耐药（MIC≥8 μg/mL）,且MEM诱导株对2种药物敏感性降低速度明显快于IPM诱导株。诱导株未检出耐药酶,外膜蛋白OprD出现缺失或者减少。oprD基因测序发现Pa标(I)、Pa标(M)和Pa1（M）分别在831（TGG→TGA）、1 017（TGG→TGA）和1 014（TGG→TAG）有碱基突变产生终止密码子,Pa2（I）在1 206处有新的碱基插入导致移码突变。外排基因以MexA过度表达为主,同时伴有其他外排系统的过度表达。稳定性分析发现5株诱导株的耐药表型稳定,另1株外排系统表达量呈现持续升高,导致MIC值的右移。 结论：在碳青霉烯类药物环境中,外膜蛋白OprD表达减少和基因的突变以及外排系统的过度表达是引起诱导株对IPM和MEM耐药的主要原因。此型耐药株不仅耐药表型稳定,甚至可能由于某种机制导致脱离药物后MIC值仍持续升高。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析

目的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析研究。方法采用K-B法检测100株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA),并用聚合酶链式反应(PCR)法检测分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关金属酶IMP、VIM基因以及外膜通道蛋白OprD2基因。结果 70株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为多重耐药菌,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高。金属酶IMP基因阳性率为24.29%(17/70),vIM型金属酶基因阳性率为7.14%(5/70),外膜蛋白通道OprD2基因阳性率为68.57%(48/70),其中外膜蛋白通道OprD2基因缺失率为58.33%。结论 IRPA耐药情况严重。外膜蛋白通道OprD2基因缺失突变是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究进展

随着亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗菌药物在临床上的广泛应用，近年来细菌对该类抗菌药物的耐药率正在逐年上升，其中以非发酵菌中的铜绿假单胞菌的耐药率上升尤为显著。目前临床上发现的耐碳青霉烯类的铜绿假单胞菌大多是多重耐药菌株，不但对碳青霉烯类和其他的β内酰胺类耐药，     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌医院感染现状及耐药性分析

目的 探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌（imipenem resistant Pseudomonas aerugirtM，IRPA）医院感染现状及其对临床常用抗苗药物的耐药情况．以指导临床更有效地使用抗生索。方法 按常规方法对163株铜绿假单胞苗进行分离培养。VITEK-Ⅱ全自动细菌鉴定仪进行鉴定，按2005年NCCLS的标准用纸片扩散（K-B）法对临床常用的抗苗药物进行药物敏感性试验。采用whonet5．3及SPSS11．0软件对数据进行统计处理。结果 共分离出IRPA60株，占36．8％（60／163）；主要来源于痰标本占66．7％（40／60），IR-PA在病区的分布中居前3位依次为ICU、呼吸内科和神经内科，IRPA对12种常用抗生索的耐药率除阿米卡星35．0％．庆大霉素45．0％外。对头孢吡肟、哌拉西林等10种抗苗药的耐药率均高于50．0％；除环丙沙星、庆大霉素．IRPA组的耐药率明显高于亚胺培南敏感铜绿假单胞苗（imipenem susceptible Pseu-domonasaeruginosa，ISPA）组，差异有显著性（P〈0．05）。结论 IRPA对大多数临床常用抗生索呈现出多重耐药．且IRPA比ISPA具有更强的耐药性。