转染CTGF基因对乳腺癌细胞MMP－2及TIMP－2表达的影响

目的: 通过研究结缔组织生长因子（CTGF）基因对人乳腺癌MCF-7细胞株基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）表达的影响,深入探讨CTGF在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法: 采用脂质体介导法,将CTGF基因瞬时转染体外培养的人MCF-7细胞,并用免疫荧光、RT-PCR和蛋白质印迹法检测其转染成功与否;再采用蛋白质印迹法检测转基因MCF-7 MMP-2及TIMP-2表达改变。结果: 与对照组相比,转染CTGF基因的MCF-7,其CTGF mRNA和蛋白表达均显著增高,MMP-2蛋白表达水平显著增高,而TIMP-2蛋白表达水平显著降低。 结论: CTGF可能通过增加乳腺癌细胞MMP-2表达及抑制TIMP-2的生成而起到促进乳腺癌侵袭和转移的作用。     

α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌增殖、生长和侵袭的影响及其作用机制

目的 探讨α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌增殖、生长和侵袭的影响及其作用机制。方法 采用细胞增殖实验（MTS 法）研究α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌细胞体外增殖的影响;采用裸鼠皮下移植瘤模型研究α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌体内生长的影响;采用Transwell 实验研究α- 倒捻子素对MCF-7乳腺癌细胞侵袭的影响;采用免疫组织化学法研究α- 倒捻子素对MCF-7 乳腺癌皮下移植瘤组织中翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）、基质金属蛋白酶MMP-2 及MMP-9 蛋白表达的情况;采用Western blot 研究α- 倒捻子素对MCF-7 细胞中Erk、P38、MMP-2 及MMP-9 蛋白表达的影响。结果 体外增殖实验结果显示,α- 倒捻子素能够抑制MCF-7 乳腺癌细胞的增殖,且具有浓度和时间依赖性;α- 倒捻子素能够剂量依赖性地抑制MCF-7 乳腺癌的体内生长;α- 倒捻子素能够抑制MCF-7 乳腺癌细胞的侵袭;免疫组织化学结果显示,α- 倒捻子素能够下调TCTP、MMP-2 及MMP-9 的蛋白表达;Western blot 结果显示,α- 倒捻子素能够抑制调控肿瘤细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达,如磷酸化的Erk、磷酸化的P38、MMP-2 及MMP-9。结论 α- 倒捻子素能够抑制MCF-7 乳腺癌增殖、生长及侵袭,其机制可能与抑制调控肿瘤细胞增殖及侵袭相关蛋白的表达有关。     

HPV16E6和E7对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及其机制

目的探讨HPV16E6、E7和E6/E7同时稳定高表达对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及其机制。方法利用脂质体介导将HPV16E6、E7和全长E6/E7转染MCF-7细胞,利用Western blot检测转染后E6和E7的表达。采用Transwell实验检测MCF-7细胞侵袭能力的变化,RT-PCR法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA的表达情况。结果在MCF-7-E6细胞克隆中,克隆1表达水平最高;MCF-7-E7细胞克隆中,克隆4表达水平最高;MCF-7-E6/E7细胞克隆中,克隆4表达水平最高。与MCF-7亲本和MCF-7-vect细胞比较,MCF-7-E6和MCF-7-E6/E7细胞穿过小室底膜的细胞数均显著增加(P<0.01)。在MCF-7-E6、MCF-7-E7和MCF-7-E6/E7细胞中MMP-2mRNA表达均显著增加。结论 HPV16E6和E7促进MCF-7细胞体外侵袭能力的机制之一可能是通过诱导MMP-2的表达。     

Nanog表达上调促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖和侵袭

目的：观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（-）-Nanog,利用免疫荧光观察Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7中Nanog的定位。利用平皿克隆分离法获得Nanog高表达的乳腺癌细胞系MCF-7。应用克隆形成实验、Transwell迁移和侵袭实验观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。结果：Nanog在MCF-7细胞中定位于核,Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力显著增强。结论：Nanog能够促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力。     

中链酰基辅酶A脱氢酶增强乳腺癌细胞的侵袭和转移能力

目的探讨中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及潜在作用机制。方法采用大型癌 症基因组数据库分析ACADM在乳腺癌组织及正常组织中表达量。上调及沉默乳腺癌细胞（MCF-7及T47D）中ACADM的表 达,进行体外功能实验（噻唑蓝增殖实验、EdU实验、Transwell小室实验、Boyden体外侵袭实验）,探究ACADM对乳腺癌细胞体 外增殖、迁移及侵袭能力的影响,通过Western blot检测相关信号通路蛋白表达量,建立裸鼠尾静脉转移模型验证ACADM功 能,利用苏木精-伊红染色法诊断肿瘤组织。结果Oncomine样本集提示ACADM的表达水平在乳腺癌组中显著高于正常乳腺 组（P<0.05）,过表达ACADM可提高乳腺癌细胞（MCF-7、T47D）的迁移和侵袭能力且促进了乳腺癌细胞上皮-间质转化过程,而 沉默ACADM后乳腺癌细胞迁移和侵袭能力下降,动物实验进一步验证了ACADM能促进乳腺癌细胞侵袭及迁移能力。结论 ACADM可促进乳腺癌细胞上皮-间质转化过程并提高其迁移、侵袭能力,在乳腺癌中扮演促癌基因的角色。     

二烯丙基二硫下调p38活性抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭和转移

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对乳腺癌MCF-7 细胞侵袭转移的作用及其机制。方法采用不同浓度（0, 100,200,400 μmol/L）DADS处理MCF-7人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭的作用,划痕愈合实验 观察DADS对细胞迁移的改变,Western blotting 检测细胞中上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白 （Vimentin）和基质金属蛋白MMP-9的表达和p38活性;TGF-β1上调p-p38表达后上述作用的变化。结果Transwell和划痕愈 合实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7 细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting 结果表明DADS可抑制Vimentin 和 MMP-9 的蛋白表达,上调E-cadherin 的表达而下调p38 活性;TGF-β1 可上调p-p38 和MMP-9 表达,明显抵消DADS对MCF-7 细胞的抑制效果。结论DADS可下调p38活性,抑制MCF-7细胞的侵袭转移。     

Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的 建立稳定表达pokemon乳腺癌细胞系,并观察pokemon对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响. 方法 构建表达pokemon慢病毒载体,将Pokemon表达慢病毒载体转染MCF-7细胞,通过Westernblot方法检测稳定性表达pokemon MCF-7细胞中Pokemon-GFP融合蛋白的表达情况,应用Transwell试验及划痕实验观察pokemon的高表达对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响. 结果 成功建立稳定表达pokemon的MCF-7细胞系,pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力. 结论 Pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力.     

RUNX3基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 研究RUNX3基因对乳腺癌细胞迁移及侵袭的影响,并探讨其分子作用机制.方法 分别用RUNX3的真核表达载体pFlag-RUNX3和对照载体pFlag-control转染乳腺癌MDA-MB-231、BT-549细胞,CCK-8细胞增殖实验检测RUNX3基因高表达后对2种乳腺癌细胞增殖的影响;细胞迁移和侵袭实验检测RUNX3基因高表达对2种乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;人类肿瘤转移PCR芯片研究RUNX3基因高表达后乳腺癌细胞中转移相关基因的表达水平; RT-PCR和Western blot方法检测RUNX3基因表达后对2种乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA和蛋白表达的影响;明胶酶谱实验检测RUNX3基因表达后对2种乳腺癌细胞分泌活性MMP-2的影响.结果 在2种乳腺癌细胞中过表达RUNX3能够抑制细胞的迁移和侵袭能力.在84个肿瘤转移相关基因中MMP-2受RUNX3的影响最显著.结论 RUNX3通过MMP-2通路调节乳腺癌细胞的迁移与侵袭.     

靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响

目的：探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1（CDK2AP1）对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒 pGCLV- CDK2AP1- shRNA及重组空病毒pGCLV- GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株 MCF-7/RNAi- NC 和 MCF-7/RNAi- CDK2AP1。采用定量 PCR 法检测两组 MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT- CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwel 实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi- NC和MCF-7/RNAi- CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi- NC细胞组,MCF-7/RNAi- CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。     

厚朴酚葡萄糖苷对人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探索联苯型新木脂素类化合物厚朴酚葡萄糖苷（magnolol-2-O-β-D-glucopyranoside,Mag-glu）对人乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,并对其可能机制进行研究。方法:MTT法检测化合物对MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的影响;细胞划痕实验和Transwell小室法检测化合物对人乳腺癌细胞运动、侵袭和迁移能力的影响;Western blotting法检测化合物对缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和环氧化酶2（COX-2）蛋白表达的影响。结果:Mag-glu具有抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖的作用,且呈现浓度和时间依赖性。划痕实验结果表明,经过不同浓度的Mag-glu处理MDA-MB-231细胞24 h后,细胞水平运动运动能力明显下降（P<0.01）。Transwell结果显示,经过不同浓度的Mag-glu处理细胞24 h和48 h后,细胞迁移和侵袭能力显著下降。Western blotting结果显示,随着Mag-glu浓度的增加,HIF-1α、MMP-9、COX-2的表达均下调。结论:Mag-glu在体外能够抑制人乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能是抑制了HIF-1α信号途径,导致其下游顾客蛋白COX-2和MMP-9的表达下调有关。     

HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：构建造血祖细胞激酶1（HPK1）慢病毒载体,探讨HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用,阐明其可能的机制。方法：通过过表达HPK1的慢病毒感染细胞,获得稳定表达HPK1的细胞系（MCF-7-HPK1和MDA-MB-231-HPK1）,将2个细胞系分别分为3组,即空白组、对照组（空载体组）和过表达组;分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测乳腺癌细胞中HPK1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Transwell法分析细胞的迁移能力,Western blotting法检测caspase 3、PTEN、MMP-9、MMP-2、Ki-67和HPK1蛋白表达水平。结果：与空白组和对照组比较,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞过表达组中HPK1 mRNA和蛋白表达水平升高（P < 0.05）,细胞增殖率明显降低（P < 0.05）,细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）,穿越Matrigel的细胞数明显减少（P < 0.05）,MCF-7细胞周期阻断在G₁期;过表达组细胞中caspase 3、PTEN蛋白表达水平上调（P < 0.05）,MMP-9、MMP-2、Ki-67蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：HPK1过表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖及迁移并诱导凋亡,其可能与caspase 3、PTEN蛋白的表达上调及MMP-9、MMP-2和Ki-67蛋白的表达降低有关。     

内皮素-1对前列腺癌PC3细胞系的侵袭、迁移能力影响

目的探讨内皮素1对前列腺癌PC3细胞系的侵袭、迁移能力的影响,并初步研究其机制。方法体外培养PC3细胞并以内皮素1干预,通过划痕实验、Boydenchamber细胞侵袭和迁移实验测定PC3细胞侵袭、迁移能力;RTPCR和明胶酶谱法分别测定PC3细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9的mRNA表达和蛋白合成、激活的水平。结果与对照组比较,内皮素1组PC3细胞的侵袭、迁移能力显著提高,合成和激活MMP2、MMP9水平显著提高(P<0.05)。结论内皮素1能提高前列腺癌细胞的侵袭、迁移能力,促进MMP2、MMP9合成和激活是其机制之一。     

Osterix在转移性乳腺癌细胞中的表达及对MMP-2、MMP-9和VEGF启动子活性的影响

目的研究Osterix的表达与乳腺癌细胞转移潜能之间的关系以及检测Osterix对MMP-2、MMP-9和VEGF启动子活性的影响。方法利用Western blot检测不同转移潜能的乳腺癌细胞中Osterix的表达。利用荧光素酶报告基因分析的方法检测Osterix对MMP-2、MMP-9和VEGF启动子活性的影响。结果 Osterix在高转移性乳腺癌细胞MDA-MB361和MDA-MB231中高表达,而在非转移性乳腺癌细胞MCF-7中不表达。Osterix能显著上调MMP-2、MMP-9和VEGF启动子的活性。结论 Osterix在转移性乳腺癌细胞中高表达并能显著上调MMP-2、MMP-9和VEGF启动子的活性。Osterix是否介导乳腺癌、前列腺癌等的骨转移需作进一步研究。     

西利马林抑制MCF-7细胞侵袭和MMP-9表达

目的探讨西利马林与紫杉醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖侵袭以及MMP-9表达的影响。方法体外培养MCF-7细胞,并分为空白对照组、紫杉醇组、西利马林组和紫杉醇＋西利马林组。采用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况,反转录PCR检测MMP-9mRNA的表达,小室侵袭实验检测细胞的侵袭力。结果西利马林和紫杉醇均能抑制MCF-7细胞增殖,并能抑制细胞侵袭力和MMP-9mRNA的表达。但两者联合使用时能进一步抑制细胞增殖、侵袭和MMP-9表达。结论西利马林能增强紫杉醇对乳腺癌细胞增殖侵袭的抑制效应,其机制可能与MMP-9表达有关。     

ErbB2在MCF-7细胞中的过度表达意义

目的 研究ErbB2的过度表达是否能促进MCF-7细胞株的生长和侵袭。方法通过逆转病毒，将ErbB2转入MCF-7细胞内，并证实ErbB2被表达并具有生物活性。检验实验组和对照组(AP2)的侵袭力和浸润力。结果ErbB2、MCF细胞中被过度表达并产生效果。在体外，相对于对照组，ErbB2组表现了更强的浸润率和侵袭力。但可以被ErbB2的抵制剂赫塞汀所抵制。结论ErbB2过度表达可以促进细胞的浸润和侵袭。抵制实验则提供了一种新的癌症治疗手术方法。     

胸腺肽对胆囊癌细胞侵袭能力的抑制作用

目的研究胸腺肽（Ta1）对人胆囊癌细胞株（GBC-SD）侵袭能力的影响。方法培养GBC-SD,将其分为对照组、不同浓度的Ta1给药组（100、200、400μg/m1）。经细胞侵袭实验观察Ta1对GBC-SD细胞侵袭能力的影响;MMPs明胶酶谱分析检测细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达变化。结果与对照组比较,随着Ta1给药浓度的升高,各组癌细胞的侵袭能力呈浓度依赖性下降,各组间的差异有统计学意义（P〈0.05）。Ta1不同浓度组胆囊癌细胞MMP-9蛋白表达较对照组明显下降,且随着Ta1浓度的升高,MMP-9蛋白表达逐渐下降。而Ta1对MMP-2蛋白的表达无明显影响。结论 Ta1对GBC-SD侵袭能力具有抑制作用,且随Ta1浓度的升高,GBC-SD侵袭能力逐渐下降,其机制之一可能是降低了胆囊癌细胞MMP-9的蛋白质表达。