辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀(SIM)对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin和Bax mRNA表达的变化。结果①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93.12%,IC_(50)为(11.33±0.16)μg/ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G_1-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,Bax mRNA表达逐渐升高。结论SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

辛伐他汀诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨胆固醇合成抑制剂辛伐他汀（SIM）对人神经胶质瘤U251细胞抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其可能的分子机制。方法：用不同浓度的SIM干预U251细胞,四甲基偶氮唑盐（MTY）测定细胞增殖,流式细胞分析检测细胞周期和凋亡率、survivin和Bax蛋白表达,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学改变,半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测survivin和BaxmRNA表达的变化。结果：①SIM能有效抑制U251细胞增殖,培养48h抑制率可达93．12％,IC50为（11．33±0．16）μg／ml。②SIM诱导U251细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G-S期。SIM诱导U251细胞凋亡过程中随作用时间延长,survivin蛋白表达水平逐渐下降,Bax蛋白表达水平逐渐升高。③经SIM处理后,U251细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成。④survivin mRNA表达逐渐降低,BaxmRNA表达逐渐升高。结论：SIM对人神经胶质瘤U251细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,survivin基因表达下降、Bax基因表达升高可能为其分子机制之一。     

miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:分析miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法:采用生物信息学方法对miR-194-3p的表达情况以及预后信息进行统计分析。采用荧光定量PCR检测胃癌细胞系中miR-194-3p的表达情况;采用CCK-8实验、克隆形成实验和流式细胞技术检测miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡能力的影响;Western blot检测过表达miR-194-3p后Caspase3的表达情况。结果:与癌旁组织相比,miR-194-3p在胃癌组织中显著高表达。TCGA预后分析显示,miR-194-3p的高表达与良好的预后相关。与GES-1相比,miR-194-3p在6种胃癌细胞系中均显著低表达。CCK-8和克隆形成实验结果显示,与空载组相比,慢病毒转染过表达miR-194-3p后显著抑制胃癌细胞增殖。流式细胞术显示,miR-194-3p可显著促进胃癌细胞凋亡。Western blot结果显示,Caspase3的表达在miR-194-3p过表达的胃癌细胞中显著增加。结论:miR-194-3p在胃癌细胞中低表达,miR-194-3p的过表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进细胞凋亡。其中miR-194-3p促进凋亡的机制可能是通过Caspase3的凋亡相关通路发挥作用。     

微小RNA-630对U251神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-630(miR-630)对U251神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法 荧光定量PCR(qPCR)检测人脑胶质瘤组织和细胞的miR-630表达水平。采用脂质体转染法向U251细胞转染miR-630模拟物mimics(miR-630 mimics组)及阴性对照序列(miR-NC mimics组),另选取未转染细胞为空白对照(Control)组,经qPCR验证miR-630 mimics显著增强miR-630基因表达后进一步进行功能研究：CCK-8和Hoechst染色法检测细胞增殖变化,采用流式细胞术、qPCR和Western blot分别检测凋亡细胞百分率和凋亡基因表达,qPCR和双荧光素酶报告基因系统分别检测20S蛋白酶体α1亚基(PSMA1)的表达及其与miR-630靶向关系验证。结果 miR-630在胶质瘤组织和细胞表达下调。与Control组和miR-NC mimics组相比,miR-630 mimics组U251细胞增殖能力下降,细胞凋亡增加,抗凋亡基因Bcl-2表达降低,cleaved caspase-3表达增加。过表达miR-630显著降低...     

AA861 对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨5-脂氧合酶抑制剂AA861对胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法:用含有不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)AA861的培养液培养胶质瘤U251细胞,绘制细胞生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;MTT法检测细胞抑制率;AO/EB荧光染色测定细胞凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测AA861干预后细胞内Caspase-3活性变化.结果:生长曲线及MTT法显示AA861对U251细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖效应;在倒置相差显微镜下,AA861诱导细胞发生凋亡形态学变化;AO/EB荧光染色显示细胞凋亡率在不同时间点及不同浓度下差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量和时间依赖效应;Caspase-3活性在不同时间点及不同浓度下差异有统计学意义(P＜0.05),呈剂量和时间依赖效应.结论:AA861能够抑制U251细胞的增殖,并通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡.     

榄香烯诱导神经胶质瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：榄香烯是从姜科植物莪术中提取的抗肿瘤药物,我们应用榄香烯治疗神经胶质瘤取得了较为显著的疗效,本研究探讨榄香烯的抗胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：^3H-TdR掺入法检测榄香烯对鼠源性C6胶质瘤细胞及人源性SHG-44胶质瘤细胞的体外增殖抑制效应,Hoechst33258／PI荧光染色法观察细胞形态学改变,流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：榄香烯能有效抑制C6／SHG-44胶质瘤细胞的恶性增殖,^3H-TdR掺入法检测榄香烯处理不同时间(1～4天)的IC50,C6细胞为7．33--11．02mg／L,SHC-44细胞为13．29～27．16mg／L。在相同药物浓度下,C6细胞较SHG-44细胞敏感。经榄香烯作用后,C6／SHG-44胶质瘤细胞核固缩、边集,核浆比例减小并见有凋亡小体形成,DNA直方图观察到特征性亚倍体峰(Ap峰),DNA凝胶电泳出现有明显的梯状条带。结论：榄香烯有显著的抗胶质瘤细胞增殖作用,并能诱导胶质瘤细胞凋亡。     

lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p对宫颈癌SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 检测lncRNA SNHG6、miR‐485‐3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR‐485‐3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR‐485‐3p后,MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR‐485‐3p对Wnt/β‐catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果 lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达,在X线照射的SiHa细胞中低表达,miR‐485‐3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达,在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭,增强了其对X线的放疗敏感性,而miR‐485‐3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR‐485‐3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭,降低了放疗敏感性。下调miR‐485‐3p激活了Wnt/β‐catenin通路,促进了SiHa的细胞增殖和侵袭,降低了其对X线的放疗敏感性。结论 过表达lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p激活Wnt/β‐catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。     

lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p对宫颈癌SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 检测lncRNA SNHG6、miR‐485‐3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR‐485‐3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR‐485‐3p后,MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR‐485‐3p对Wnt/β‐catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果 lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达,在X线照射的SiHa细胞中低表达,miR‐485‐3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达,在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭,增强了其对X线的放疗敏感性,而miR‐485‐3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR‐485‐3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭,降低了放疗敏感性。下调miR‐485‐3p激活了Wnt/β‐catenin通路,促进了SiHa的细胞增殖和侵袭,降低了其对X线的放疗敏感性。结论 过表达lncRNA SNHG6靶向miR‐485‐3p激活Wnt/β‐catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。     

SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:在TCGA及PROGgene在线数据库中分析SGPL1在神经胶质瘤临床肿瘤组织及正常神经组织中的表达差异,并分析其表达与神经胶质瘤预后生存的关系;在神经胶质瘤细胞系U251和U87中分别敲降和过表达SGPL1,通过RT-qPCR和Western blot实验分别检测SGPL1的mRNA和蛋白表达水平;用CCK-8法、细胞克隆形成实验检测SGPL1敲降和过表达后细胞增殖变化;通过流式细胞术和caspase3/7酶活性试剂检测分析细胞凋亡变化,Western blot实验检测caspase3、PARP及CyclinD1等凋亡相关蛋白的表达;ELISA检测细胞内S1P含量;RT-qPCR检测S1PR5的表达水平;RNA-seq分析SGPL1在神经胶质瘤细胞中调控的信号通路;Western blot实验检测SGPL1敲降和过表达后Phospho-p38-MAPK、Phospho-ERK、Phospho-STAT3及Phospho-NF-κB(p65)的表达变化。结果:TCGA及PROGgene在线数据库分析表明SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与神经胶质瘤患者的预后生存成负相关。在U251中敲降SGPL1后细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加;在U87细胞中过表达SGPL1后能显著促进细胞的增殖能力。SGPL1表达对S1P信号通路无明显影响;RNA-seq结果表明SGPL1在神经胶质瘤细胞内调控细胞增殖死亡信号通路,SGPL1敲降和过表达可影响p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号的变化。结论:SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与生存预后负相关。在神经胶质瘤细胞内SGPL1可调控p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号通路,其表达可影响神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡,可能是一个潜在的肿瘤标志物和治疗的分子靶点。     

circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

RNAi抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

  目的   构建针对PIAS3的RNAi质粒载体,初步探讨抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。   方法   目的:方法:构建3个RNAi载体,用脂质体法将其转染胶质瘤细胞系CHG-5,通过半定量RT-PCR筛选干扰效率最高的重组RNAi质粒。将该RNAi质粒转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株,用半定量RT-PCR和Western blot检测PIAS3的表达。Annexin V2 FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。   结果   转染干扰质粒的细胞株PIAS3基因和蛋白表达均有减弱。流式细胞仪分析,抑制PIAS3表达能够诱导胶质瘤U251细胞拮抗凋亡（P < 0.01）,同时出现细胞周期改变,表现为G2期细胞比例升高,S期细胞比例降低,具有显著性差异（P < 0.05）。   结论   下调PIAS3基因表达使U251阻滞在G2期,拮抗细胞凋亡。       

p53上调凋亡调控因子增强胶质瘤干细胞对替莫唑胺化疗敏感性的研究

 目的　探讨不同CD133免疫原型的胶质瘤细胞对替莫唑胺（TMZ）耐药性的差异以及p53上调凋亡调控因子（PUMA）改变胶质瘤细胞对TMZ敏感性的影响。方法　利用免疫磁珠细胞分选法筛选出CD+133和CD-133的胶质瘤细胞U87MG,分别传代培养,转染Ad-PUMA,并用TMZ干预。四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测细胞增殖情况及对TMZ的半数抑制浓度（IC50）,流式细胞术观察外源性PUMA、TMZ干预前后CD+133和CD-133细胞的凋亡情况。结果　CD+133免疫磁珠分选出胶质瘤干细胞,CD+133胶质瘤细胞IC50较CD-133胶质瘤细胞高[（200±10）μmol／L比（80±11）μmol／L],转染Ad-PUMA后,两组细胞IC50均降低[（100±8）μmol／L比 （20±7）μmol／L],两组转染前后IC50差异均有统计学意义（P < 0.05）。TMZ联合PUMA组CD+133细胞凋亡率为68.05 %,对照组、TMZ组及PUMA组分别为6.05 %、32.91 %和40.61 %,联合组与其他组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论　PUMA联合TMZ可以促进耐药的胶质瘤干细胞凋亡,从而增强胶质瘤对化疗的敏感性。     

Rab31对神经胶质瘤细胞增殖迁移侵袭的影响及机制研究

目的:研究Rab31对人神经胶质瘤细胞增殖迁移侵袭的影响及相关分子机制.方法:Western blot检测正常人胶质细胞NHA和3株人神经胶质瘤细胞SHG-44、TJ905和LN229中Rab31表达;将3种Rab31沉默siRNA及其对照分别转染至神经胶质瘤SHG-44细胞中,分别记为si-Rab31-1组、si-R...     

HOTAIRM1靶向miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:研究长链非编码RNA HOTAIRM1（lncRNA HOTAIRM1）与微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的靶向关系及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法:荧光定量PCR（qPCR）检测HOTAIRM1和miR-129-5p在人正常脑组织和胶质瘤组织中的表达。建立抑制HOTAIRM1表达细胞株,研究其对U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）、上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）水平。生物学信息预测和双荧光素酶报告基因法分析HOTAIRM1和miR-129-5p之间的靶向关系。共转染si-HOTAIRM1和anti-miR-129-5p,观察抑制miR-129-5p表达对抑制HOTAIRM1表达诱导的U251细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。 结果:HOTAIRM1在胶质瘤组织中的表达明显上调（P<0.05）,miR-129-5p表达下调（P<0.05）。抑制HOTAIRM1表达显著降低U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量（P<0.05）,明显增加U251细胞凋亡率和p21、Bax、E-cadherin蛋白表达量（P<0.05）。miR-129-5p是HOTAIRM1的靶基因。上调或下调HOTAIRM1表达明显调控miR-129-5p表达（P<0.05）。抑制miR-129-5p表达逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞24 h、48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数及Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,并逆转了抑制HOTAIRM1表达对U251细胞p21、E-cadherin、Bax蛋白表达和细胞凋亡率的促进作用。 结论:lncRNA HOTAIRM1通过靶向miR-129-5p影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。