胃癌发生过程中风险miRNAs筛选及其诊断效能评价的多中心研究

目的 探索胃癌发生过程的风险miRNAs,为上消化道机会性筛查中早期胃癌识别提供依据。方法 纳入2021年6月至2023年8月在广西医科大学附属肿瘤医院、右江民族医学院附属医院、桂林市人民医院3个中心进行上消化道癌机会性筛查的人群。选取健康体检者107例、早期胃癌患者71例、进展期胃癌患者97例。首先采用转录组测序筛选差异表达miRNAs,然后在3组前瞻性人群的血浆样本中通过RT-qPCR验证差异表达的miRNAs,最后采用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评估miRNAs的诊断效能。结果 转录组测序的差异基因分析共筛选出胃癌发生过程中的6个差异表达miRNAs,包括miR-3176、miR-885-5p、miR-203a-3p、miR-452-5p、miR-223-3p、miR-219a-2-3p。RT-qPCR结果显示,miR-452-5p在早期胃癌及进展期胃癌患者中表达上调（均P<0.001）。ROC曲线显示,miR-452-5p诊断早期胃癌和进展期胃癌的曲线下面积（area under the curve,AU...     

LncRNA ZFAS1靶向微小RNA?150?5p对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA ZNFX1反义RNA 1(ZFAS1)靶向调控微小RNA-150-5p(miR-150-5p)表达及对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1及不同胃癌细胞(SGC-7901、HGC-27、MGC-803和BGC-823)的ZFAS1水平。脂质体法向BGC-823细胞转染针对ZFAS1的小干扰RNA片段si-ZFAS1(干扰组)或无关序列si-NC(NC组)并设未转染的细胞为对照组。QPCR、MTT法、Transwell小室实验和划痕实验测定BGC-823细胞的ZFAS1水平、增殖、侵袭和迁移能力的变化,QPCR和Western blotting检测Bcl-2和基质金属蛋白酶(MMP)-9的水平;双荧光素酶报告基因实验验证ZFAS1对miR-150-5p的靶向调控作用。结果胃癌细胞的ZFAS1水平均高于GES-1细胞(P<0.05),后续干扰实验选取ZFAS1水平最高的BGC-823细胞。干扰组的ZFAS1水平为0.269±0.074,低于对照组的1.171±0.263和NC组的1.088±0.142(P<0.05)。与NC组和对照组相比,干扰组BGC-823细胞的增殖活力下降(P<0.05);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(51.509±5.348)%和(145.662±12.328)个,低于NC组的(82.317±7.459)%和(341.342±21.814)个及对照组的(80.770±6.163)%和(339.234±17.255)个(P<0.05);干扰组的Bcl-2和MMP-9水平均低于其余两组(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-150-5p模拟物能够抑制含有其结合位点的ZFAS1野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),不影响ZFAS1突变型质粒的荧光素酶活性(P>0.05)。结论ZFAS1在胃癌细胞中高表达,下调其水平可抑制BGC-823细胞的增殖和迁移侵袭能力并发挥类似癌基因的作用,可能与靶向调控miR-150-5p有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景。     

miR-769-5p在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA-769-5p （miR-769-5p） 在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株中的表达及其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）技术检测miR-769-5p 在5种NSCLC细胞（A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973和GLC-82）中的相对表达量,选择相对表达量最低和最高的细胞株分别转染miR-769-5p mimics／miR-769-5p inhibitor,另设miRNA mimics control／inhibitor control对照组;采用MTS 实验、克隆形成实验及Transwell 小室实验检测miR-769-5p对NSCLC 细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力的影响。结果 miR-769-5p在A549、NCI-H1299、NCI-H157、ANIP-973 及GLC-82细胞中的相对表达量分别为 0.06、0.40、0.09、1.04和2.31。在miR-769-5p表达水平最低的A549细胞中瞬时转染miR-769-5p mimics,在miR-769-5p表达水平最高的GLC-82细胞中瞬时转染miR-769-5p inhibitor。MTS结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的增殖 （P＜0.05）,而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的增殖 （P＜0.05）。平板克隆实验结果显示,与对照组比较,miR-769-5p mimics 能够抑制A549细胞的平板克隆形成数 （124.7±14.7 vs. 399.4±46.0,P＜0.05）;而miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的平板克隆形成数 （555.7±29.7 vs. 366.3±28.7,P＜0.05）。Transwell实验结果显示,与对照组迁移和侵袭跨膜细胞数比较,miR-769-5p mimics能够抑制A549细胞的迁移和侵袭 （94.4±18.1 vs. 157.8±22.9,84.4±15.1 vs. 135.6±16.7,P＜0.05）;miR-769-5p inhibitor能够促进GLC-82细胞的迁移和侵袭 （226.7±40.3 vs. 153.3±38.7,196.7±39.1 vs. 138.9±40.4,P＜0.05）。结论 miR-769-5p可以抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移,可能成为NSCLC的潜在靶点。     

miR-17-5p 在肿瘤中作用的研究进展*

微小RNA （microRNA,miRNA ）作为生物体内一种重要的基因调控分子,其异常表达与人类多种疾病密切相关。近年来,miRNA 在多种肿瘤中起着抑癌基因或是致癌基因的作用,因此,miRNA 已成为肿瘤学研究的新方向。miR-17- 5p 作为miR-17～92簇的一员,是近年来疾病研究的热点,多种肿瘤发生发展中均有涉及。本文主要对miR-17- 5p 的基本特征及其在肿瘤中的作用进行综述。      

miR-203a-3p通过靶向PRMT5抑制胃癌细胞增殖

目的:探讨miR-203a-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响.方法:收集胃癌组织标本44例,采用Real-time PCR方法检测胃癌组织标本中miR-203a-3p的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系;生物信息学预测miR-203a-3p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证;免疫组化检测胃癌组织标本中PRMT5的表达情况,分析其表达水平与miR-203a-3p表达的相关性;利用脂质体介导的瞬时转染方法过表达miR-203a-3p或同时过表达miR-203a-3p和PRMT5,并通过CCK-8实验检测胃癌细胞的增殖情况.结果:胃癌组织中miR-203a-3p的表达水平与正常组织对照相比显著降低(P<0.01),并且miR-203a-3p的表达水平与肿瘤细胞的分化程度显著相关;荧光素酶报告基因实验证实miR-203a-3p可以直接结合在PRMT5 3'-UTR上,即PRMT5是miR-203a-3p的直接靶基因;在胃癌组织标本中,PRMT5表达水平显著高于正常组织对照(P<0.01),并且其表达水平与miR-203a-3p表达呈显著负相关(r=-0.4124,P<0.01);过表达miR-203a-3p后,胃癌BGC823细胞的增殖能力显著低于miR-NC对照组(P<0.01),并且,"挽救"实验表明在过表达miR-203a-3p的细胞中同时过表达PRMT5后会部分恢复miR-203a-3p对细胞增殖的抑制(P<0.01).结论:miR-203a-3p可通过下调靶基因PRMT5的表达,进而抑制胃癌细胞增殖.因此,miR-203a-3p可作为胃癌疾病临床治疗的潜在靶点.     

ParT1靶向调控微小RNA⁃17⁃5p对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA前列腺雄激素调控转录物1(ParT1)对微小RNA?17?5p(miR?17?5p)的靶向调控作用及在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的生物学作用.方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测胃癌组织和癌旁组织的ParT1水平.培养胃癌BGC?823细胞,根据转染情况分为对照组(未转染作空白对照)、pc...     

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的：肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因（p53）、蛋白基因产物（PGP9.5）、转录因子（SOX2）、肿瘤相关基因编码蛋白（GAGE7）、解旋酶（GBU4-5）和黑色素瘤抗原（MAGE A1）蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法：回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果：肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋...     

慢性乙型肝炎病毒感染与p16INK4A基因启动子甲基化关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及其在HBV相关肝细胞癌(HCC)形成中的作用。方法选取23例HBV相关HCC癌及癌旁组织、25例慢性乙型肝炎肝穿刺组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测p16INK4A基因启动子的甲基化状态;免疫组化EnVision二步法测定肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测肝组织HBV DNA含量;PCR扩增和直接测序检测HBV x基因变异。结果癌组织p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(47.83%)明显高于癌旁组织(17.39%),慢性乙型肝炎患者p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(36.00%)与癌组织、癌旁组织差异无统计学意义。在癌旁组织和慢性乙型肝炎, p16INK4A基因启动子甲基化者HBx蛋白表达中位数分别为3.000和0.250,明显高于非甲基化者(0.500和0.000),但在癌组织中,HBx蛋白的表达与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。HBsAg、HBcAg、组织HBV DNA含量和x基因突变均与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。结论在癌前病变中,p16INK4A基因启动子甲基化与HBx蛋白高表达有关,HBx蛋白可能通过诱导p16INK4A基因启动子甲基化而使该抑癌基因失活,在HBV相关HCC形成中起重要作用。