LINC00672对微小RNA-629-3p的靶向调控作用及胶质瘤细胞迁移侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 672(LINC00672)对微小RNA-629-3p(miR-629-3p)的靶向作用及胶质瘤细胞迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测胶质瘤细胞(U118、U87和U251)以及人星形胶质细胞NHAs的LINC00672和miR-629-3p水平,经DIANA Tools在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LINC00672和miR-629-3p间的靶向关系。将U251细胞分为4组:空白对照组、阴性对照组(转染pcDNA)、LINC00672过表达组(转染pcDNA-LINC00672)和共过表达组(转染pcDNA-LINC00672+miR-629-3p模拟物mimics)。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测经转染处理后各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力。qPCR与Western blotting检测EMT相关指标[E-钙黏蛋白(E-Cad)、N-钙黏蛋白(N-Cad)和纤维黏连蛋白(FN)]以及细胞周期依赖蛋白激酶2(CDK2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。结果与NHAs细胞相比,胶质瘤细胞的LINC00672水平降低,而miR-629-3p水平升高(P<0.05);LINC00672能够靶向负调控miR-629-3p。LINC00672过表达组U251细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数较阴性对照组均明显降低(P<0.05);而共过表达组U251细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数较LINC00672过表达组升高(P<0.05)且与阴性对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,LINC00672过表达组U251细胞的E-Cad水平升高,而CDK2、MMP-9、N-Cad和FN水平降低(P<0.05);与LINC00672过表达组相比,共过表达组U251细胞的E-Cad水平降低,而CDK2、MMP-9、N-Cad和FN水平升高(P<0.05);空白对照组与阴性对照组U251细胞上述指标水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LINC00672通过靶向调控miR-629-3p来抑制胶质瘤U251细胞的增殖、迁移侵袭和EMT过程,在胶质瘤中发挥抑瘤作用。     

长链非编码RNA HAGLROS调控miR-26b/JAK2/STAT3通路对肝癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) HAGLR互补链lncRNA(HAGLROS)能否通过微小RNA-26b(miR-26b)/Janus激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3)轴来调控肝癌增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)。方法 通过实时荧光定量PCR(q PCR)检测正常肝细胞系LO2和肝癌细胞(Hep3B、MHCC-LM3、Huh7、SMMC-7721)的HAGLROS和miR-26b水平。用双荧光素酶报告实验鉴定HAGLROS与miR-26b的相互作用。分别转染HAGLROS干扰序列si-HAGLROS和miR-26b抑制剂(inhibitor)至SMMC-7721细胞。挽救实验通过转染miR-26b inhibitor同时干扰HAGLROS表达。将SMMC-7721细胞分为si-NC组、si-HAGLROS组、miR-26b inhibitor组和si-HAGLROS+miR-26b inhibitor组。分别利用MTT法、划痕实验和Transwell实验检测SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭情况。通过检测E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N...     

肺癌A549细胞上皮-间质转化及其对微小RNA表达的影响

目的 探讨肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)对微小RNA(miRNA)表达的影响.方法 采用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺癌A549细胞发生EMT,应用相差显微镜观察A549细胞形态学变化,采用Western blot法检测EMT相关标记蛋白表达的变化,应用miRNA芯片检测EMT前后miRNA表达的变化,应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCT)验证芯片结果的可靠性.结果 肺癌A549细胞发生EMT后,细胞形态拉长,细胞间连接变得疏松.肺癌A549细胞发生EMT后,上皮标记蛋白E-钙黏附素(E-cadherin)表达降低,而间质标记波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)表达上调.miRNA芯片获得51个miRNA在诱导前后有统计学意义(P＜0.05),且表达差异在2倍以上.18个表达上调,33个表达下调,其中mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了92.8%和86.5%;荧光定量RT-PCR检测mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了73.1%和56.6%.结论 EMT可影响肺癌A549细胞中miRNA的表达变化,miRNA可能通过EMT调节肺癌侵袭转移.

Abstract：

Objective To investigate the effect of epithelial-mesenchymal transition (EMT) on the expression of microRNAs (miRNAs) in lung cancer A549 cells. Methods Transforming growth factor beta1 (TGF-β1) in different concentrations was used to induce EMT in lung cancer A549 cells. The morphological changes were observed under phase-contrnst microscope. The changes of EMT-related proteins were analyzed by Western blot. The changes of miRNAs expression after EMT were detected by microRNA (miRNA) array. Real time quantitative RT-PCR was applied to verify the reliability of miRNA array results.Results The lung cancer A549 cells became elongated and the cell-cell junction became loose after EMT.The epithelial protein marker E-cadherin was down-regulated and the mesenchymal protein markers vimentin and fibronectin up-regulated. There were 51 miRNAs showing statistically significunt changes of expression more than double (P ＜ 0. 05 ) after EMT. Among them 18 were up-regulated and 33 down-regulated. Of them, mir-33a was down-regulated by 92.8% and mir-193a-3p by 86.5%. Real time quantitative RT-PCR showed that mir-33a was down-regulated by 73.1% and mir-193a-3p by 56.6%. Conclusion Epithelial-mesenchymal trnsition has effects on the expression of miRNAs, and miRNAs may regulate the invasion and metastasis of lung cancer cells via EMT.     

微小RNA-133b在胃癌中的表达及意义

目的 研究miR-133b在胃癌细胞、正常胃黏膜上皮永生化细胞、胃癌组织及相应癌旁组织中的表达,探讨miRNA对胃癌发生发展的调控作用。方法 培养7种胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞,并收集56例胃癌患者癌组织及相应癌旁组织,提取细胞及组织中总的Small RNA,采用real-timePCR法检测miR-133b在胃癌细胞及组织中的表达,分析miR-133b的表达与细胞分化程度、临床病理特征的关系。结果 miR-133b在胃癌细胞及组织中均表达下调,差异具有统计学意义。miR-133b的低表达与细胞分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移显著相关。结论 miR-133b在胃癌细胞及胃癌组织中的表达明显下调,可能作为抑癌基因参与胃癌的发生、发展。     

MicroRNA调控上皮间质转化对宫颈癌侵袭转移性影响的研究进展

宫颈癌是全世界常见的女性恶性肿瘤。由于肿瘤转移或复发,特别是对于那些晚期肿瘤患者,宫颈癌的总体预后仍然很差。肿瘤转移约占所有与癌症相关死亡的90％。因此,鉴定转移的原因和潜在标志物对于促进早期诊断,预测预后和制定新的宫颈癌治疗策略具有重要意义。在宫颈癌的发展和恶性进展期间,许多microRNA（miRNA）已被证明能显著失调。越来越多的证据表明,miRNA可以有效调节上皮间质转化（EMT）的过程,miRNA包含控制EMT信号通路和直接靶向EMT转录因子进而调节癌细胞的侵袭和转移性,本文将简要阐明miRNA调控EMT对宫颈癌侵袭转移性的影响。     

微小RNA?301a对肺癌细胞上皮间质转化和Smad4表达的影响

目的探讨微小RNA-301a(miR-301a)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)和SMAD家族成员4(Smad4)表达的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测30对NSCLC组织和癌旁组织的miR-301a和Smad4水平;脂质体法向A549细胞转染miR-301a抑制剂(抑制组)或阴性对照(NC组),另以未行转染的细胞为对照组,采用QPCR、活细胞计数(CCK-8)、划痕实验、Transwell小室实验和Western blotting检测miR-301a水平、增殖活力、划痕愈合率、穿膜细胞数和Smad4水平,QPCR和Western blotting检测EMT相关标志物[上皮型钙黏蛋白(E-cad)、神经型钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)]的水平,生物信息学预测和双荧光素酶报告验证miR-301a和Smad4间的靶向关系。结果NSCLC组织的miR-301a水平为2.157±0.597,高于癌旁组织的1.023±0.229,癌组织的Smad4水平为0.648±0.162,低于癌旁组织的1.159±0.164,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制组的miR-301a水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.166±0.075、(31.518±4.306)%和(89.744±15.060)个,均低于对照组的1.032±0.097、(52.461±6.373)%和(139.339±17.871)个及NC组的0.981±0.089、(54.791±4.528)%和(145.243±19.782)个,而抑制组的Smad4水平为0.712±0.121,高于对照组的0.428±0.163和NC组的0.390±0.096,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。与其余两组相比,抑制组转染24、48 h的增殖活力及Vim和N-cad水平降低,而E-cad水平升高(P<0.05)。Smad4野生型质粒与miR-301a模拟物共转染A549细胞后,荧光素酶活性下降(P<0.05),而Smad4突变型质粒和miR-301a模拟物共转染后,荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论NSCLC中miR-301a高表达且发挥类似癌基因的作用,下调该miRNA水平可抑制增殖和迁移侵袭能力并逆转EMT,可能通过靶向Smad4来发挥作用,有望成为NSCLC诊治的潜在新靶标。     

EB病毒microRNA Bart6-5p表达对鼻咽癌上皮间质转化的影响

 目的 探讨EB病毒microRNA Bart6-5p表达对鼻咽癌细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的影响。方法 采用实时荧光定量PCR检测EB病毒阳性的鼻咽癌细胞株C666-1和淋巴瘤细胞株Akata、Daudi、Raji及Namalwa中microRNA Bart6-5p和Dicer mRNA的表达,在恒定携带EB病毒且microRNA Bart6-5p表达最高的鼻咽癌细胞株C666-1中抑制microRNA Bart6-5p表达后检测Dicer和与鼻咽癌EMT相关分子标志物E-cadherin、Vimentin、ZEB1和ZEB2 mRNA的表达。结果 EB病毒阳性细胞株中microRNA Bart6-5p mRNA表达水平按C666-1、Akata、Daudi、Raji及Namalwa顺序依次递减（P＜0.05）,而Dicer mRNA表达水平则依次递增（P＜0.05）。在恒定携带EB病毒且microRNA Bart6-5p表达最高鼻咽癌细胞株C666-1中抑制microRNA Bart6-5p表达后,Dicer mRNA表达呈升高趋势（P＜0.05）,与鼻咽癌EMT相关分子标志物E-cadherin mRNA表达呈升高趋势（P＜0.05）, Vimentin、ZEB1及ZEB2 mRNA表达则呈下降趋势（P＜0.05）。结论 EB病毒microRNA Bart6-5p可能通过调控Dicer基因表达而进一步影响鼻咽癌的上皮间质转化过程。     

炎症对上皮间质转化的调控机制

炎症在肿瘤发生发展中发挥重要作用.上皮间质转化（EMT）是肿瘤增殖、侵袭及转移过程中的重要分子机制.越来越多的研究表明,炎症与EMT密切相关.在炎症微环境中,细胞因子和炎症微生物都参与EMT的调控.     

Snail调控肿瘤细胞上皮间质转化的相关信号通路

肿瘤的转移和侵袭是肿瘤患者死亡的主要原因,肿瘤转移和侵袭的过程中涉及多种因素,上皮间质转化（EMT）是促进其中某一环节的关键因素。转录因子Snail作为肿瘤细胞EMT的关键调控因子,起到了重要的作用。通过对Snail调控肿瘤细胞EMT的相关信号通路的研究,有助于我们更好的理解肿瘤的转移及侵袭机制,为寻找有效的靶点提供理论依据。     

FBXW7调控非小细胞肺癌上皮间质转化的作用机制

目的:研究FBXW7在非小细胞肺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)过程中发挥的作用。方法:收集100对非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织,利用免疫组化检测FBXW7在癌组织和癌旁组织中的表达。利用Western blot检测FBXW7在细胞系中的表达及FBXW7对EMT部分标志蛋白的影响。利用Transwell实验检测FBXW7对NSCLC细胞迁移能力的影响。免疫共沉淀实验和泛素化的Western blot验证FBXW7与Snail1的关系。结果:FBXW7在NSCLC组织中的表达明显低于对应癌旁组织中的表达。FBXW7在正常肺上皮细胞中的表达也明显高于4种非小细胞肺癌细胞系中的表达。FBXW7过表达显著抑制A549细胞的迁移能力。FBXW7过表达也明显抑制NSCLC细胞的EMT。机制研究发现,FBXW7可以直接结合并泛素化降解Snail1蛋白,并且Snail1部分逆转FBXW7对NSCLC细胞EMT标志蛋白的影响。结论:FBXW7对NSCLC细胞EMT的调控部分依赖于泛素化降解Snail1蛋白。     

宫颈癌上皮-间质转化的研究进展

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一,严重威胁着妇女的健康,且发病率近几年来趋于年轻化。尽管使用了先进的筛查方法和预防性疫苗,但在治疗方案极为有限和副作用严重的情况下,超过一半的宫颈癌病例被诊断为晚期。如何解决上述问题,需从分子生物学层面来更好的认识宫颈癌。其中上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是近年来研究的热点,EMT是由上皮细胞表型向间质细胞表型转变的可逆的生物学过程,EMT可促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭,进而促进肿瘤的转移,影响患者的预后。本文综合目前的研究进展,将对近年来宫颈癌的EMT相关研究进展作一综述。     

上皮间质转化的表观遗传调控

E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达丧失是上皮间质转化（EMT）的重要标志,许多EMT转录因子结合到E-cadherin启动子区下调其表达,从而调节EMT。表观遗传调控包括DNA甲基化、组蛋白修饰、微小RNA,均参与EMT相关基因表达调控。研究表明,EMT转录因子协同表观遗传调控因子参与E-cadherin表达。靶向EMT表观调控代表着肿瘤新的治疗方向。     

过表达巨噬细胞移动抑制因子对子宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨过表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化 （EMT）的影响.方法 应用基因转染方法将重组质粒pEGFP-N1-MIF转入SiHa细胞,构建过表达MIF的SiHa细胞;用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫细胞化学方法分别检测各组细胞中E-cadherin、vimentin mRNA及蛋白的表达水平.结果 RT-PCR检测结果显示,转染pEGFP-N1-MIF的细胞中MIF mRNA相对表达量升高（F=2950.278,P＜ 0.01）;转染pEGFP-NI-MIF的细胞中vimentin的mRNA高于各对照组,而E-cadherin的mRNA低于各对照组（F值分别为2 135.048,1 893.563,均P＜0.01）;转染pEGFP-N 1-MIF的细胞中vimentin的蛋白表达水平高于各对照组,而E-cadherin的蛋白表达水平低于各对照组（F值分别为2 348.021,1 789.421,均P＜ 0.01）.结论 过表达MIF促进SiHa细胞中vimentin表达,抑制E-cadherin表达,说明过表达MIF促进子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化.     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。