冰片逆转小细胞肺癌顺铂耐药的研究

摘 要：［目的］ 评价冰片对小细胞肺癌（SCLC）顺铂（DDP）耐药的逆转作用及其对P糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）和小凹蛋白-1 (Caveolin-1)表达的影响。［方法］ 利用前期建立的SCLC DDP耐药细胞株LTEP-P/DDP,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测冰片和/或DDP的抗肿瘤活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western blotting检测P-gp和Caveolin-1的表达。［结果］冰片联合DDP对LTEP-P/DDP-0.75 细胞的增殖抑制作用较单用DDP显著性增加（P<0.05）,耐药逆转指数为2.246。LTEP-P/DDP-0.75细胞经冰片联合DDP处理细胞后,较单用DDP处理组的G0/G1期和S期降低,G2/M期升高,差异有显著性（P<0.05）。冰片和DDP联合处理后,LTEP-P/DDP-0.75细胞凋亡显著性上升（P<0.05）,LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1相比LTEP-P细胞显著性上升（P<0.05）,冰片或DDP单独用药组Caveolin-1显著性变化,冰片联合联合DDP组相比对照组能显著性降低LTEP-P/DDP-0.75细胞Caveolin-1表达（P<0.05）,而对P-gp无显著性抑制作用。［结论］ 冰片能在一定程度上逆转LTEP-P/DDP-0.75对DDP的耐药,其作用可能与抑制Caveolin-1表达有关。     

卵巢癌对顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌的发病率在女性生殖器恶性肿瘤中占第三位，但其患者死亡率却居首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。据报道：Ⅲ和Ⅳ期的卵巢癌患者采用联合化疗．其完全缓解率可达60％-80％。但在实际临床应用中却并非如此。近30年来卵巢癌患者的5年生存率一直徘徊于30％-50％之间。其主要原因就是卵巢癌对化疗药物产生了耐爱性。约75％-80％的卵巢上皮癌开始对化疗有反应．其余则表现为原发耐药．最终所有化疗患者至少80％出现耐药。因此，耐药的产生直接影响化疗效果及生存率。如何尽早发现耐药度克服耐药是急需解决的问题。     

沉默CXCR4的表达逆转肺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨沉默CXCR4对肺癌细胞顺铂耐药的影响,并研究其分子作用机制。方法:利用RT-qPCR测定肺癌耐药（A549/DDP）及药物敏感细胞株（A549）中CXCR4 mRNA的表达水平;利用LipofectamineTM 2000将siRNA-CXCR4转染至肺癌耐药细胞株中,RT-qPCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证siRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率;利用CCK-8法检测沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的增殖活性;利用流式细胞仪测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的凋亡率;利用MTT法测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性;利用Western blot实验测定沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR实验结果显示,肺癌耐药细胞株A549/DDP中CXCR4 mRNA的表达量显著高于药物敏感细胞株（P＜0.01）;体外转染siRNA-CXCR4可明显下调A549/DDP细胞株中CXCR4的表达（P＜0.001）;CCK-8实验结果显示,沉默CXCR4的表达抑制了A549/DDP细胞的增殖活性（P＜0.01）;流式细胞仪实验结果显示,沉默CXCR4的表达促进了A549/DDP细胞凋亡（P＜0.01）;MTT实验结果显示,沉默CXCR4的表达增加了A549/DDP细胞对顺铂的敏感性（P＜0.01）;Western blot实验结果显示,沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默CXCR4的表达抑制肺癌耐药细胞增殖、促进凋亡,逆转肺癌细胞顺铂耐药,CXCR4正向调控CYP1B1的表达,可能是CXCR4逆转肺癌细胞顺铂耐药的作用机制。     

胃癌顺铂耐药机制的研究进展

顺铂是目前胃癌患者化疗及胃癌体外药敏实验最常选用的经典药物之一.其抗肿瘤的毒性和有效性得到肯定.但近年来顺铂耐药性的产生,降低了顺铂的实际疗效,甚至导致胃癌化疗的失败,因此限制了顺铂的临床应用.体内外研究发现肿瘤耐药的机制很复杂,现就以下几方面做一综述.     

非小细胞肺癌顺铂耐药相关基因生物信息学研究

目的：通过分析非小细胞肺癌顺铂敏感株及耐药株的基因芯片表达数据,筛选差异基因及关键通路,构建蛋白相互作用网络,探讨关键集群功能。方法:从GEO数据库获得基因芯片表达数据,利用GEO2R工具筛选差异基因,通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络,经DAVID富集得到相关特征基因与信号通路信息。结果：通过芯片分析共获得481个差异表达基因,相比于敏感细胞株,顺铂获得性耐药细胞株中有418个上调基因和63个下调基因。差异基因功能主要富集在piRNA代谢、DNA甲基化修饰、细胞有丝分裂及细胞周期进程等信号通路。蛋白复合物预测得到主要功能集群6个,分别与细胞趋化性、细胞角化性、piRNA代谢过程、细胞因子受体相互作用、细胞因子分泌调节及染色质沉默相关生物进程相关。结论:本研究利用生物信息学方法,发现顺铂耐药细胞株特征基因及信号通路,其中SAA1、KRT5、TDRD9、BCL2A1、CSF1R和HIST1H1A等显著上调基因及其功能集团可能是非小细胞肺癌顺铂耐药的潜在分子机制,为临床精准治疗提供新的理论依据。     

LINC01426通过EZH2调节非小细胞肺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01426对非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂(DDP)耐药的影响,并研究其潜在机制。方法:体外培养A549细胞和抗DDP细胞株A549/DDP,逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中LINC01426、zeste增强子同源物2(EZH2)mRNA表达;LINC01426和EZH2之间的相互作用通过RNA-蛋白质相互作用预测(RIP-seq)、RNA免疫沉淀(RIP)、RT-qPCR和染色质免疫沉淀(ChIP)测定进行验证。将A549/DDP细胞分为对照组(Control组)、si-NC组、si-LINC01426组、si-LINC01426+pc-NC组、si-LINC01426+pc-EZH2组,转染培养48 h,用RT-qPCR检测各组细胞中LINC01426、EZH2 mRNA、PTEN mRNA表达,CCK-8检测细胞对DDP的敏感性,集落形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western blot)分析细胞中EZH2、PTEN、AKT、p-AKT蛋白表达。裸鼠移植瘤模型验证LINC01426是否...     

宫颈癌顺铂耐药研究进展

顺铂（DDP）作为第一个被发现的金属抗癌药物,是目前最有潜力和应用最广泛的抗肿瘤药物。顺铂在宫颈癌的治疗中尤为重要,目前已被推荐为同步放化疗的首选药物。但随着广泛的使用,顺铂的耐药性逐渐显露出来,并成为限制临床疗效和部分患者肿瘤治疗进展的主要原因之一。顺铂的耐药机制复杂,发生环节较多,但具体耐药机制尚不明确,目前按照顺铂耐药发生的环节可分为:①顺铂在血液循环过程中产生耐药;②顺铂通过细胞膜的流入或流出产生耐药;③顺铂在胞质中产生耐药;④顺铂与DNA结合后产生耐药。本文综述了宫颈癌顺铂耐药可能发生的四个环节及克服耐药常用的手段,为提高顺铂对宫颈癌的疗效提供依据。     

顺铂对人肺癌SPCA-1细胞端粒酶活性的影响

目的 观察顺铂(DDP)对人肺癌SPCA-1细胞端粒酶活性的影响。方法 不同浓度的DDP处理体外培养的人肺癌SPCA-1细胞72h，非放射性标记的改良TRAP法测定端粒酶活性，MTT法测定细胞增殖抑制，透射电镜、流式细胞仪观察细胞凋亡。结果 DDP可抑制SPCA-1细胞端粒酶活性，随DDP浓度增大，端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示DDP抑制SPCA-1细胞增殖且抑制率有浓度依赖性。透射电镜可观察到典型的细胞凋亡形态学，流式细胞仪结果表明DDP诱导SPCA-1细胞凋亡在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论 端粒酶活性的抑制可能是DDP发挥抗肺癌活性的作用机制之一，端粒酶活性可作为评价DDP抗肺癌化疗效果的指标之一。     

DNA损伤修复与肺癌顺铂耐药机制的研究进展

肺癌是目前世界上致死率最高的恶性肿瘤,化疗是治疗的主要手段之一,肺癌的化疗是以铂类为基础的联合化疗,其中,顺铂是有效并广泛应用的一线药物,但是由于耐药问题的存在使其疗效不尽如人意。顺铂是一种细胞周期非特异性细胞毒药物,其主要作用靶点是DNA,因此DNA损伤修复功能的异常是顺铂耐药的主要机制之一。本文主要综述了与肺癌顺铂耐药相关的DNA损伤修复异常,包括核苷酸切除修复异常、碱基错配修复异常、DNA双链断裂损伤修复异常及跨损伤修复。     

HS3ST1对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及顺铂耐药的作用机制研究

目的:研究HS3ST1对肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭及顺铂耐药的影响.方法:利用慢病毒感染并构建HS3ST1过表达细胞株;利用Western blot、RT-PCT检测HS3ST1的表达;利用CCK8实验、Transwell迁移实验和细胞毒性实验检测HS3ST1对A549细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂耐药的影响;利用W...     

基于PDTX模型研究原发性肺癌顺铂耐药与ERCC1IGFBP5 表达水平的关系*

目的：构建PDTX（patient-derived tumor xenografts）肺癌模型,探索ERCC1、IGFBP 5 的表达水平与原发性肺癌顺铂耐药的关系。方法：取新鲜切除的84例肺癌组织移植于裸鼠（BALB/c）的皮下,构建PDTX 模型,分析一代成瘤率与临床病理参数关系。三代移植瘤接受顺铂化疗,采用免疫组织化学方法检测敏感组和耐药组ERCC1、IGFBP 5 的表达情况。结果：移植瘤一代成瘤率32.14%（27/ 84）,二代成瘤率88.89%（24/ 27）,三代成瘤率95.83%（23/ 24）,能否一代成瘤与肿瘤的大小、分化、分级、病理类型相关;此模型移植瘤在传代中能够保持亲代肿瘤的结构特征。ERCC1 在耐药组表达高于敏感组,而IGFBP 5 在耐药组表达低于敏感组。结论：构建了肺癌组织块移植瘤模型,其能够保持亲代癌种的结构特征,是研究肺癌发生和探索肿瘤耐药机制的理想模型。原发性肺癌顺铂耐药性与ERCC1、IGFBP 5 的表达水平相关。     

shRNA下调BAG-1表达降低肺癌A549细胞对顺铂的耐药性

目的：通过载体介导的shRNA下调BAG-1基因（Bcl-2 associated athanogene-1)表达,探讨其对肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药性的影响。方法：构建靶向BAG-1的shRNA干扰载体pGCsi-BAG-1,稳定转染A549细胞。实验组使用稳定转染pGCsi-BAG-1的细胞株（BAG-1-shRNA）,阴性对照组使用无关序列质粒转染的细胞株（SC-shRNA）,对照组使用未转染的亲本A549细胞株（Control）。Western blotting检测pGCsi-BAG-1转染对A549细胞BAG-1、Bcl-2表达的影响。MTT法、流式细胞术分别检测pGCsi-BAG-1转染对DDP处理后A549细胞的增殖和凋亡的影响。结果：成功构建稳定干扰BAG-1表达的A549细胞株,BAG-1-shRNA组细胞中BAG-1和Bcl-2蛋白表达显著低于SC-shRNA组和对照组（均P<0.05）。随DDP(25~40 μg/ml)浓度增加,各组细胞增殖抑制率也随之升高,DDP浓度为2.5 μg/ml时,BAG-1-shRNA组A549细胞的增殖抑制率即显著高于SC-shRNA组和对照组\[（22.26±4.89）% vs （10.07±3.82）%,（8.12±4.09）%,均P<0.05\]。与SC-shRNA组和对照组相比,DDP(2.5 μg/ml)处理24 h后,BAG-1-shRNA组凋亡率显著升高\[（37.8 4±3.62）％ vs （16.80±281）％、（17.10±3.11）％,P<0.05\]。结论：下调BAG-1表达可抑制DDP作用下的A549细胞的增殖并促进其凋亡。     

卡铂,顺铂合用治疗肺癌的临床观察

目的：卡铂、顺铂合用治疗肺癌临床疗效观察。方法：１２２例Ⅲ～Ⅳ期肺癌病人随机分为三组，行联合化疗，每４周重复一疗程。结果：ＤＤＰ＋ＶＰ１６４０例，ＣＲ＋ＰＲ１８例，有效率４５．００％，Ⅱ度以上呕吐发生率８７．５０％，Ⅱ度以上白细胞下降率３７．５０％；ＣＢＰ＋ＶＰ－１６４０例，有效率４５．００％，Ⅱ度以上白细胞下降率９０．００％；１／２ＤＤＰ＋１／２ＤＤＰ＋ＶＰ－１６４２例，ＣＲ＋ＰＲ１６例，有效率     

RNAi与顺铂肿瘤耐药研究进展

顺铂是一种以二价铂与2个氯原子和2个氨分子结合的重金属络合物,自1978年第1次由FDA批准用于治疗睾丸癌和膀胱癌以来,已经应用于许多实体肿瘤的治疗,但肿瘤对顺铂耐药性的产生严重影响了其疗效[1].虽然目前已经研发出了第3代的铂类药物,但顺铂仍然是铂类药物中应用最广、最有效的抗肿瘤药物.因此探讨肿瘤对顺铂耐药机制是克服耐药,提高疗效的关键.近年来RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)已应用于表观遗传学领域的研究[2],利用RNAi研究顺铂耐药的分子机制及探讨逆转肿瘤细胞顺铂耐药的方法也随之成为研究的热点,本文作者对RNAi与肿瘤顺铂耐药的最新研究进行综述.     

全脑放射促进顺铂通过血脑屏障的研究

目的：通过检测顺铂（cis-diamminedichloroplatinum,DDP)在脑脊液中的浓变化，定量观察脑放射促进DDP透过血管屏障的作用。方法：20例非小细胞肺癌（non-smallcelllung cancer,NSCLC)脑转移患者接受脑放射，DDP20mg/m^2分别于脑放射前、脑放射10Gy、20Gy、30Gy及40Gy时静滴，于之后3h采集脑脊液与血标本。10例NSCLC无脑转移者于首次用DDP后3h采集脑脊液与血标本。采用石墨炉原子吸收光谱法检测DDP浓度。结果：脑转移可评价者20例，无脑转移者10例，脑转移者放疗前脑脊液中DDP浓度平均1.02mg/L，明显高于无脑转移者脑脊液中DDP浓度（平均0.33mg/L)；脑转移者全脑放疗10-30Gy，脑脊液中DDP浓度随脑放射剂量的增加而增加，全脑照射30Gy时浓度最高，平均2.36mg/L。结论：DDP可透过脑转移者受损的血脑屏障进入脑脊液中，并可以达到治疗浓度；全脑放射可以促进DDP透过血脑屏障，全脑放疗0-30Gy时DDP进入脑脊液中的浓度随放射剂量的增加而增加，39Gy时浓度最高；DDP可少量通过正常的血脑屏障，但未达有效治疗浓度。     

降低有氧糖酵解增强非小细胞肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性

目的:探究顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞糖代谢的特点及抑制有氧糖酵解对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药细胞的影响及其机制。方法:通过梯度倍增浓度法建立非小细胞肺癌顺铂耐药细胞模型(A549/DDP);酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, Elisa)检测A549/DDP与A549细胞两组葡萄糖消耗量、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;CCK-8法(cell counting kit-8)检测2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose, 2-DG)及顺铂处理后A549/DDP与A549细胞增殖能力的变化;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞葡萄糖消耗量、ATP释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞后对非神经元性烯醇化酶(recombinant enolase 1,ENO1)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)、缺氧诱导因子-α...     

卵巢癌细胞对顺铂耐药机制的研究

目的：探明卵巢癌对顺铂产生耐药的机理。方法：采用顺铂体外诱导法建立卵巢癌耐药细胞株ＨＯ－８９１０/２。ＭＴＴ法测定其耐药倍数和交叉耐药性,原子收法测定细胞内Ｐt浓度,分光光度法测定ＧＳＨ、ＧＳＴ,流式细胞仪分析细胞周期,检测bcl-2和Ｐ－ＧＰ的表达,结果：ＨＯ－８９１０/２耐顺铂是亲代细胞ＨＯ－８９１０的６．６倍,与５－Ｆ Ｕ,ＡＤＲ有交叉耐药性。对照亲代细胞,耐药细胞中ＧＳＨ含量与ＧＳＴ活性明显增高,     

CXCL4对非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其机制探讨

目的:探讨血小板因子4（CXCL4）对人非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其作用机制。方法:体外诱导法建立顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞株H460/DDP,并鉴定其生物学特性。采用CCK-8法分别检测H460及H460/DDP对顺铂的耐药性。qRT-PCR及Western Blot检测亲本细胞株H460及顺铂耐药株H460/DDP中CXCL4的mRNA及蛋白表达水平。通过CCK-8法检测过表达或者敲低CXCL4后亲本细胞株H460或顺铂耐药株H460/DDP对顺铂的敏感性。最后利用Western Blot及qRT-PCR法探讨CXCL4抵抗非小细胞肺癌化疗敏感性的调控机制。结果:成功构建了非小细胞肺癌顺铂耐药株H460/DDP（H460/DDP IC50=55.005 μg/ml）,CCK-8结果提示顺铂耐药株H460/DDP与亲本细胞株H460细胞的增殖速度没有明显差异（P＞0.05）;顺铂耐药株H460/DDP中,CXCL4 mRNA及蛋白水平均显著增高（P＜0.000 1）;在亲本细胞株H460中稳定过表达CXCL4能显著降低其对顺铂的敏感性（P＜0.000 1）,而于顺铂耐药株H460/DDP中敲低CXCL4能显著增加H460/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.000 1）;Western Blot及qRT-PCR结果显示,CXCL4能激活Wnt/β-catenin 信号通路,促进下游基因MYC、CyclinD1、MMP-7、CDK4的表达。结论:CXCL4通过调控Wnt/β-catenin 信号通路促进非小细胞肺癌对顺铂的耐药性。