HER-2/neu在新辅助化疗乳腺癌中的表达及其意义分析

目的：检测并分析HER－2／neu在新辅助职乳腺癌组织中的表达，探讨新辅助化疗患者中HER－2/neu的临床意义。方法：采用免疫组织化学法分别检测HER－2／neu在165例新辅助化疗及73例未化学乳腺癌组织中的表达状况，统计分析HER－2/neu表达与化疗、病理类型及腋淋巴结转移情况的关系。结果：新辅助化疗组HER－2／neu表达低于未化疗组（29．7％比43．8％，P＜0．05）；浸润性非特殊型乳腺部HER-2/neu阳性表达明显高于浸润性特殊型（粘液腺癌0／4），但浸润性非特殊型乳腺癌之间HER－2／neu表达差异无显著性意义；腋淋巴结转移组HER-2/neu表达明显高于腋淋巴结阴性组（40．1％比25．0％，P＜0．05）。结论：HER-2/neu可能成为在新辅助化疗乳腺癌患者优于淋巴结状况的一个评价肿瘤生物学行为、预测治疗效果指导综合治疗方案制定以及判断预后的重要标志。     

乳腺癌患者外周血CK19 mRNA表达及不同化疗方案对其影响

目的以CK19（cytokeratin-19）mRNA为基因标志检测不同乳腺癌患者外周血肿瘤细胞,检测化疗前后外周血有核细胞CK19 mRNA表达量的改变及其与临床病理因素的关系,比较不同化疗方案下外周血有核细胞CK19 mRNA表达量的变化。方法采用实时定量RT—PCR方法检测217例乳腺癌患者外周血CK19 mRNA表达（17例导管内癌、176例浸润性导管癌和24例乳腺癌远处转移）。217患者中有67例完成了化疗全过程常规取血和查血,对这些患者的化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数的改变及其与临床病理因素的关系进行分析。化疗方案为CEF方案（CEF组23例）、TEC方案（TEC组28例）和TP方案（TP组16例）,3组均行化疗6个周期,21d为1个周期。由于217例患者拷贝数改变值在各组中的分布均不符合正态分布,统计学分析采用非参数秩和检验。结果在导管内癌组、浸润性导管癌组和乳腺癌转移组3组间,外周血CK19 mRNA拷贝数差异有统计学意义（P=0．048）,乳腺癌远处转移组外周血CK19 mRNA拷贝中位数高于导管内癌组和浸润性导管癌组（P〈0．050）。67例患者中,化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变在临床分期组间差异有统计学意义（P=0．041）,临床Ⅳ期患者化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变的中位数高于Ⅰ～Ⅲ期患者（P〈0．050）。PCNA阳性患者化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变的中位数高于PCNA阴性患者,两组间差异有统计学意义（P=0．032）。肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、ER、PR、以及HER-2亚组间化疗前后外周血CK19 mRNA拷贝数改变的差异均无统计学意义（P〉0．050）。3组患者化疗后外周血CK19 mRNA拷贝数均有改变,3组间差异有统计学意义（P=0．011）。结论乳腺癌患者外周血CK19 mRNA表达可以提示转移风险,TEC方案较TP和CEF方案对外周血CK19 mRNA表达量改变的影响更显著,因此可以通过检测?     

乳腺癌新辅助化疗前后外周血中微转移癌细胞的变化及其临床意义的研究

目的：观察乳腺癌患者新辅助化疗前后外周血微转移的变化，并探讨其临床意义。方法：44例乳腺癌患者首先经半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测外周血CK-20 mRNA为阳性表达，给予CEF方案行新辅助化疗后，再次检测外周血CK-20 mRNA的表达，并评价化疗对肿瘤的疗效。结果：新辅助化疗后14例（31．8％）乳腺癌患者外周血CK-20 mRNA表达转为阴性，21例（47．7％）表达下降，9例（20．5％）未见明显变化，与化疗前相比差异有统计学意义，P=0．006；化疗疗效临床完全缓解3例（6．8％），部分缓解34例（77．3％），疾病稳定7例（15．9％），无疾病进展病例；CK-20表达下降与新辅助化疗疗效显著相关，r=0．942。结论：新辅助化疗可明显降低乳腺癌患者外周血微转移的发生，并可作为化疗疗效判定的早期预测指标。     

化疗对乳腺癌患者外周血Th1和Th2类细胞因子基因表达的影响

[目的]探讨化疗对乳腺癌患者Th1和Th2类细胞因子的基因表达的影响。[方法]采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测乳腺癌患者化疗前后外周血单个核细胞（PBMC）Th1和Th2类细胞因子mRNA表达水平的变化。[结果]乳腺癌组IL-2mRNA（4）、IL-12mRNA（5）阳性表达均较正常对照组（10，14）及良性乳腺肿瘤组（11，16）明显减少（P〈0．05）；IL-6mRNA（19）、IL-10mRNA（16）较正常对照组及良性乳腺肿瘤组（8，5）显著增加（P〈0．05）；正常对照组及良性乳腺肿瘤组Th1和Th2类细胞因子mRNA表达无显著性差异fP〉0．051。乳腺癌化疗3个周期后，IL-6mRNA（8／36）和IL-10mRNA（6／38）阳性表达均较化疗前（19／25，16，28）显著降低（P〈0．05）；IL-2mRNA（14／30）和IL-12mRNA（15／29）阳性表达均较化疗前（4，40，5／39）显著升高（P〈0．05）。[结论]化疗可使早期乳腺癌患者Th2类细胞因子的强势表达向Th1类逆转，改善患者的免疫状况。     

乳腺癌PCNA、p53及HER—2的表达与淋巴结转移相关性的临床研究

目的 探讨乳腺癌细胞PCNA、p53及HER－2的表达与淋巴结转移的相互关系。方法 采用S－P法检测89例乳腺癌中的PCNA、p53及HER－2的表达。结果 PCNA、p53及HER－2表达分别为60．7％（54／89）、43．8％（39／89）及39．9％（35／89），与淋巴结转移有明显相关性（P＜0．05）。结论 PCNA、p53及HER－2的表达可能是评估乳腺癌预后的有用指标。     

EGFR／HER1和C—erbB-2／HER2在乳腺癌表达的意义及其相关性

目的：探讨乳腺癌中EGFR和C—erbB-2基因蛋白表达的临床意义。方法：乳腺癌86例，乳腺腺瘤36例，采用免疫组织化学方法，检测EGFR／HER。和C—erbB-2／HER：阳性率，分析它们的相关性。结果：EGFR和C—erbB-2在乳腺癌中的表达高度正相关（r=0、73）。它们在乳腺癌中的阳性率明显高于腺瘤（P〈0．001）。在乳腺癌中EGFR和C—erbB-2的阳性率分别为56．98％（49／86）和70．93％（61／86），差异无显著性（P〉0．05）。在浸润癌和有淋巴结转移组阳性率高于非浸润组和无淋巴结转移组（P〈0．001）。结论：EGFR和C—erbB-2在乳腺癌发生中有协同作用，是预后不良的指标。     

乳腺小黏蛋白在检测乳腺癌患者外周血微转移中的意义

目的探讨乳腺小黏蛋白（small breast epithelial mucin，SBEM）mRNA作为检测乳腺癌患者外周血微转移指标的临床意义。方法用巢式逆转录-聚合酶链反应（Nested—RT—PCR）法检测22例女性胃癌、16例结／直肠癌、107例乳腺癌、40例乳腺纤维腺瘤患者和27例健康志愿者外周血中SBEM—mRNA的表达情况。结果107例乳腺癌患者外周血中SBEM—mRNA有57例表达，阳性率为53．27％，其余对照组中SBEM—mRNA表达均为阴性。两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。SBEM—mRNA的阳性表达与患者的淋巴结转移状况和TNM分期均有相关性（P均〈0．01）；而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型、ER、PR等无相关性（P〉0．05）。结论SBEM—mRNA特异表达于乳腺癌患者的外周血，可能成为检测乳腺癌患者外周血中微转移和判断预后的指标之一。     

乳腺癌中MTA1、MMP-9mRNA表达与临床病理研究

目的：探讨MTA1、MMP-9mRNA表达量与乳腺癌淋巴转移的关系及临床意义,初步探讨MTA1、MMP-9mRNA之间的关系。方法：采用免疫组化法对45例侵润性乳腺导管癌中MTA1表达进行检测,原位杂交法对MMP-9mRNA表达进行检测。结果：乳腺癌中MTAI、MMP-9mRNA（肿瘤细胞）、MMP-9mRNA（间质细胞）阳性表达率为71％、49％、58％。MTA1与淋巴结转移相关,与年龄、肿瘤大小、ER、PR、c—erbB-2无相关性;MTA1蛋白定位变化与乳腺癌淋巴结转移相关（P〈0．05）;MMP-9mRNA（肿瘤细胞）与临床病理特征均无相关性;MMP-9mRNA（间质细胞）与淋巴结转移正相关（P〈0．05）,与PR呈负相关（P〈0．05）;MTA1阴性时肿瘤细胞内MMP-9mRNA表达率为38％,MTA1阳性时MMP-9mRNA表达率为50％,无显著性差异。结论：MTA1高表达促进乳腺癌细胞的淋巴结转移,MTA1蛋白定位变化与乳腺癌淋巴结转移相关;MTA1的过度表达可能是导致肿瘤细胞内MMP-9mRNA表达下降的因素。     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。     

纤维粘连蛋白mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义

目的：探讨乳腺癌纤维粘连蛋白（Fibronectin，FN）mRNA表达量与乳腺癌转移的关系及临床意义．方法：采用荧光定量RT—PCR方法，检测30例乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌以及116例乳腺原发癌的FNmRNA表达量，比较30例乳腺原发癌和淋巴结转移癌的FNmRNA表达量，分析FNmRNA表达量与乳腺癌临床病理因素的关系。结果：30例乳腺淋巴结转移癌FNmRNA表达量低于原发癌（P〈0．05）。肿瘤〉5cm的FNmRNA表达量低于肿瘤≤5cm（P〈0．05），临床期的FNmRNA表达量低于Ⅰ期和Ⅱ期（P〈0．05），淋巴结4枚以上阳性FNmRNA表达量低于1～3枚阳性（P〈0．05），雌、孕激素受体阳性的FNmRNA表达量高于雌、孕激素受体阴性。FNmRNA表达量与病理类型、组织学分级、Her-2表达、CA153表达无关：结论：FNmRNA表达量在临床早期及淋巴结转移早期上调．随着肿瘤的进展表达量下调。FNmRNA转录水平的表达与乳腺癌转移有关。     

荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术检测乳腺癌微转移的研究

目的探讨采用实时荧光定量聚合链反应(FQ-PCR)和流式细胞术(FCM),检测乳腺癌患者外周血中CK-19的表达情况及其临床意义。方法用FQ-PCR和FCM方法检测98例Ⅱ～Ⅲ期乳腺癌患者外周血中CK-19的表达情况,另取同期52例乳腺良性肿瘤手术患者作为对照组。结果采用FQ-PCR术和FCM法检测乳腺癌组患者CK-19的阳性率分别为39.8%(39/98)和28.6%(28/98);对照组未检测到CK-19的阳性表达。两种方法及两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。激素受体阳性患者CK-19的阳性率分别为39.6%(21/53)和24.5%(13/53),与阴性患者间差异无统计学意义(P>0.05)。HER-2阳性患者检测CK-19的阳性率分别为42.9%(12/28)和35.7%(10/28),与HER-2阴性患者间差异无统计学意义(P>0.05)。有淋巴结转移者CK-19的阳性率分别为49.1%(28/57)和36.8%(21/57),与无淋巴结转移患者差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期CK-19的阳性率分别为55.6%(22/36)和41.7%(15/36),高于Ⅱ期的30.6%(19/62)和21.0%(13/62),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FQ-PCR检测微转移的敏感性高于FCM。CK-19的表达与淋巴结转移和肿瘤分期有关,与激素受体、HER-2表达无关。     

外周血CK-19mRNA检测对乳腺癌预后的影响

目的:探讨外周血CK-19mRNA对乳腺癌患者预后的影响.方法:对86例初治乳腺癌患者根治手术后的外周血用RT-PCR方法检测了CK-19mRNA的表达,并采用S-P免疫组化法检测了手术标本的c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达情况.结果:手术后患者外周血CK-19mRNA阳性率为52.3%;外周血CK-19mRNA状况与临床分期呈显著相关(P＜0.05),而与肿瘤大小、腋淋巴结转移、c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达均无显著相关(P＞0.05);外周血CK-19mRNA阴性病例与阳性病例相比,无病生存期和总生存期显著延长(P＜0.05).结论:乳腺癌患者术后外周血CK-19mRNA的检测有助于评估预后.     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。     

SYBR Green实时定量POR检测乳腺癌组织OXCR4基因的表达

目的：运用实时定量PCR检测趋化因子受体CXCR4基因在人乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤恶性程度之间的关系。方法：SYBRGreen实时定量PCR方法定量检测CXCR4mRNA在63例乳腺癌（TNM分期：Ⅰ期9例,ⅡA期25例,ⅡB期13例,ⅢA期16例）和20例正常乳腺组织中的表达;采用Kruskal Wallis检验、Mann-Whit—ney检验等分析CXCR4mRNA表达在不同·临床参数间的表达差异。结果：乳腺癌组织CXCR4mRNA表达水平（1．22±0．80）高于正常乳腺组织（0．65±0．59）,P=0．001。CXCR4mRNA在乳腺癌中表达上调与淋巴结转移数目（〉3个）、HER-2表达情况（＋＋＋）密切相关,P值分别为0．013和0．031。但CXCR4 mRNA在不同年龄、绝经情况、组织学分级、病理类型、肿瘤大小以及其他免疫组化指标（ER、PR、p53和Ki67）组间的差异均无统计学意义,P〉0．05。结论：趋化因子受体CXCR4表达可作为预测乳腺癌转移的生物学指标,有望成为乳腺癌治疗的新靶点。     

乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞 MiR -21检测的临床意义

目的：研究乳腺癌患者血浆中的 MiR -21表达水平，初步探讨其在乳腺癌中作为循环肿瘤细胞（cir-culating tumor cells，CTCs）的临床意义。方法：采用基于 SYBR Green I 染料荧光分析的茎环实时定量逆转录聚合酶链式反应（qRT - PCR）分别检测40例乳腺癌患者及15例正常对照者外周血中 MiR -21的表达水平，了解 MiR -21表达与临床病理指标的关系。结果：乳腺癌患者血浆中的 MiR -21表达水平明显高于正常对照者（P ﹤0.01）。MiR -21表达与患者月经状况、肿瘤大小、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人类表皮生长因子受体2（HER -2）表达均无明显关系（P ﹥0.05），与 TNM 分期、淋巴结转移相关（P ﹤0.05）。结论：茎环 qRT - PCR 是一种快速、准确、定量检测 MiR -21的方法，MiR -21是一个能有效辅助乳腺癌诊断和监测 CTCs 的潜在标志物。     

乳腺癌患者辅助化疗前后外周血中ＰＩＰｍＲＮＡ表达变化的研究

目的：通过检测乳腺癌患者辅助化疗前后外周血中泌乳素诱导蛋白（ＰＩＰ）ｍＲＮＡ的表达变化,探讨术后辅助化疗对乳腺癌血液微转移的影响。方法：收集沈阳军区总医院肿瘤科２００６年７月～２００７年９月经术后病理证实的乳腺癌患者５０例,在化疗前及接受２～３周期辅助化疗后应用巢式ＲＴ-ＰＣＲ方法检测这些乳腺癌患者外周血中ＰＩＰｍＲＮＡ的表达。另取乳腺纤维腺瘤１０例、健康志愿者１０例、胃癌５例、结直肠癌５例、食管癌５例、肺癌５例、卵巢癌５例作阴性对照。结果：５０例乳腺癌患者外周血标本中,化疗前１７例ＰＩＰｍＲＮＡ阳性的患者,化疗２～３周期后１３例ＰＩＰｍＲＮＡ转为阴性,转阴率７６.５％（１３／１７）,化疗前ＰＩＰｍＲＮＡ表达阴性的患者在化疗后无１例阳性,化疗前后差异有统计学意义（Ｐ＝０.００１）。而对照组４５例外周血标本中均未检出ＰＩＰｍＲＮＡ的表达。ＰＩＰｍＲＮＡ的阳性表达与淋巴结转移、ＴＮＭ分期有关,而与患者年龄、肿瘤大小、ＥＲ、ＰＲ及Ｃ-ｅｒｂＢ-２等表达无关。结论：乳腺癌患者接受术后辅助化疗能够降低血液ＰＩＰｍＲＮＡ的阳性率,有望减少乳腺癌血液微转移的发生。