Livin mRNA及Bcl-2，p53蛋白在胰腺癌中的表达

目的:探讨凋亡抑制蛋白Livin在胰腺癌组织中的表达及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系。 方法:采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测52例胰腺癌和12例正常胰腺组织中Livin mRNA的表达；用免疫组织化学法检测胰腺癌组织中Bcl-2和p53蛋白的表达。 结果:Livin mRNA在胰腺癌中的表达率为71.2%，明显高于正常胰腺组织（P＜0.01）。Livin基因表达与胰腺癌的分化程度和淋巴结转移有关（P＜0.05）。Livin基因表达与Bcl-2蛋白表达有关，而与p53蛋白无关。 结论:Livin基因在胰腺癌的发生发展中起重要作用；Livin与Bcl-2的异常表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用；Livin基因过表达与抑癌基因p53的失活无关。     

凋亡抑制基因Livin在食管癌中的表达及其与P53、Bcl-2的关系

目的探讨凋亡抑制基因Livin在食管癌组织中的表达及其与P53和Bcl-2表达的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）结合银染技术检测36例食管癌组织和18例癌旁正常组织中Livin mRNA的表达，采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶（S—P）法检测食管癌组织中Livin、P53和Bcl-2蛋白的表达。结果RT—PCR检测结果显示：Livin mRNA在食管癌组织中的阳性表达较癌旁正常组织明显增强，两种异构体基本同时表达。免疫组织化学检测结果显示：Livin蛋白在食管癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织（P〈0.01）。癌组织侵及食管外膜的Livin阳性表达率高于癌组织侵及食管肌层者（P〈0.05）；有淋巴结转移者的Livin阳性表达率高于无淋巴结转移者（P〈0.05）。Livin蛋白表达与P53蛋白表达无关（x^2=1．00，P=0．505），与Bcl-2蛋白表达有关（x^2=10．60，P=0．003）。结论Livin在食管癌组织中异常表达，有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。凋亡相关基因Bcl-2与Livin基因的异常表达可能在食管癌癌变中起协调作用。     

人胰腺癌组织中Livin和IGF-2的表达及临床意义

目的：探讨人胰腺癌组织中凋亡抑制蛋白Livin表达情况及其与各临床病理因素的关系，以及与胰岛素样生长因子-2（Insulin-likegrowth factor－2，IGF－2）表达的相关性。方法：应用免疫组织化学SP法检测56例胰腺癌组织中Livin与IGF－2的表达。结果：胰腺癌组织中34例Livin表达阳性，阳性率为60．7％；35例IGF-2表达阳性，阳性率为62．5％；胰腺癌组织Livin、IGF－2的表达阳性率均高于非肿瘤胰腺组织（P〈0．05）。Livin和IGF－2的表达与肿瘤组织学分级、临床病理分期及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。相关性检验示Livin的表达与IGF－2之间有相关性（P〈0．01）。结论：人胰腺癌组织中Livin与IGF-2表达均上调；IGF－2与Livin相互作用共同参与人胰腺癌的发生、发展。     

Survivin基因在胰腺癌组织中的表达及与bcl-2和p53蛋白表达的关系

目的探讨Survivin基因在胰腺癌中的表达及与bcl 2、p5 3蛋白表达的相互关系。方法用RT PCR法检测 4 9例胰腺癌、5例慢性胰腺炎和 12例正常胰腺组织中SurvivinmRNA的表达 ,免疫组织化学法检测胰腺癌中bcl 2、p5 3蛋白表达。结果SurvivinmRNA在胰腺癌中表达率为76 % ,在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达 (P <0 0 5 )。Survivin基因表达与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。Survivin基因表达与bcl 2蛋白表达不相关 ,与p5 3蛋白表达显著相关。结论Survivin基因在胰腺癌中过度表达 ,提示该基因对胰腺癌发生和发展起重要作用 ;抑癌基因p5 3的失活与Survivin基因的表达可能在胰腺癌的发生中起协同作用。     

TRAIL受体在胰腺癌中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体在胰腺癌中的表达及意义。方法 应用半定量RT～PCR法检测TRAIL受体（死亡受体DR4、DR5和诱骗受体DcR1、DcR2）mRNA在胰腺癌组织及正常胰腺组织中的表达。结果 死亡受体DR4和DR5在所有胰腺癌组织和正常胰腺组织中均有表达，且在胰腺癌组织中的表达明显强于在正常胰腺组织中的表达（P〈0．01）。诱骗受体DcR1和DcR2在所有正常胰腺组织中均有表达，而在胰腺癌组织中仅有18例表达DcR1，有20例表达DcR2；诱骗受体DcR1和DcR2的表达水平在胰腺癌和正常胰腺组织中差异无统计学意义（P〉0．05）。胰腺癌组织中DR5的表达与肿瘤的分化程度和临床分期有关，分化程度越低，DR5的表达量越低，Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR5的表达显著低于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0．05）。DR4、DcR1及DcR2在胰腺癌组织中的表达与肿瘤的分化程度和临床分期无关（P〉0．05）。结论 ①胰腺癌组织中普遍存在TRAIL受体的表达，并存在受体类型的表达差异，TRAIL基因受体在胰腺癌凋亡的调控机理中可能发挥重要作用。②胰腺癌组织中DR5的表达与肿瘤的分化程度及恶性程度相关；死亡受体DR4及诱骗受体DcR1和DcR2不能作为判断胰腺癌分化程度及恶性程度的指标。     

错配修复基因启动子甲基化与胰腺癌发生的关系

目的通过对胰腺癌错配修复基因启动子甲基化及蛋白表达的检测与微卫星不稳定性的分析，探讨胰腺癌发病的分子机制。方法从35例胰腺癌病人的正常胰腺组织、癌组织中提取DNA；MSP法检测hMLH1及hMSH2基因启动子甲基化状态；SSCP法检测标本中微卫星不稳定性发生情况；免疫组化法检测错配修复基因hMLH1及hMSH2在胰腺癌中的表达情况。结果35例胰腺癌中hMLH1启动子甲基化发生率为60％（21／35），正常组织中未发现甲基化，两者之间有统计学差异（P〈0.05）；而对于hMSH2仅有1例胰腺癌出现启动子甲基化；35例胰腺癌中微卫星高度不稳定7例，低度不稳定14例，稳定11例，正常组织中没有出现微卫星不稳定，两者之间有统计学差异（P〈0.05）；在微卫星不稳定的21例胰腺癌组织中有19例（90％）出现hMLH1启动子甲基化现象，微卫星稳定的ll例胰腺癌组织中仅有2例（6％）出现hMLH1启动子甲基化。hMLH1启动子甲基化在微卫星不稳定胰腺癌组织中常为缺失表达或低表达，在微卫星稳定胰腺癌组织中呈正常表达。hMSH2无论在MSI-H或MSI-L胰腺癌与正常胰腺组织中均无缺失表达，仅部分低表达。结论胰腺癌组织中错配修复基因的缺陷主要是hMLH1启动子甲基化，与胰腺癌微卫星不稳定性及蛋白表达缺失有关，在胰腺癌发生过程中起重要作用，是胰腺癌发生的重要机制之一。     

甲基化CpG结合域蛋白1在胰腺癌组织中的表达和意义

目的：检测甲基化CpG结合域蛋白I（MBD1）蛋白在胰腺癌组织中的表达，并探讨其临床意义。方法：应用S-P免疫组织化学法检测38例胰腺癌、17例胰腺癌旁组织、8例胰腺良性肿瘤、3例慢性胰腺炎和6例正常胰腺组织中MBD1蛋白的表达。结果：MBD1在胰腺癌组织、正常胰腺组织、胰腺良性肿瘤、胰腺癌旁组织中的表达阳性率分别是76．32％（29/38）、16．67％（1／6）、25．0％（2／8）、29．41％（5／17），3例慢性胰腺炎标本中未见表达；胰腺癌阳性表达率明显高于正常胰腺、慢性炎症、良性肿瘤和癌旁对照组织（P〈0．05）。MBD1表达水平的高低与病人的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和TNM分期无显著性差异（P〉0．05）；而与淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者胰腺癌组织MBD1的表达阳性率为92．31％（24／26），高于无淋巴结转移者的41．67％（5／12）（P〈0．01）。结论：胰腺癌中MBD1呈高水平表达，并与胰腺癌的高转移侵袭活性有关，其机制可能与MBD1介导抑制多个甲基化相关抑癌基因的表达有关。MBD1的转录调控机制有待进一步研究。     

Survivin在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌增殖活性的关系

目的探讨Survivin在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌增殖活性的关系。方法用RT-PCR法检测6 2例胰腺癌、1 2例慢性胰腺炎和1 0例正常胰腺组织中Survivin mRNA的表达;用免疫组织化学法检测胰腺癌中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,并观察两者的关系。结果Survivin mRNA在胰腺癌中表达率为7 4.2%,在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达,前者与后两者差异有显著性(P<0.0 1);与胰腺癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显关系(P>0.0 5)。Survivin的表达与胰腺癌增殖活性有关;Survivin阳性肿瘤具有较高的增殖活性,其PCNA指数为(4 6.4±1 5.2)%,明显高于Survivin表达阴性肿瘤者(2 8.4±1 4.8)%(P<0.0 1)。结论Survivin基因在胰腺癌中过表达,并与胰腺癌的高增殖有关。提示该基因对胰腺癌的发生和发展起重要作用。Survivin基因有望成为胰腺癌诊断和治疗的新靶点。     

胰腺癌组织中类肝素酶的表达及其临床意义

目的 探讨类肝素酶1(heparanasel,Hpal)在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌发生、发展的关系.方法 采用real-time PCR、Western blot法检测37例胰腺癌组织中Hpal基因和蛋白的表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理参数之间的关系.结果 real-time PCR检测结果 显示,Hpal mRNA在胰腺癌中相对表达量为23.53±4.13、在正常胰腺组织中为4.08±2.14、在癌旁组织中为16.93±3.06(P<0.01).Western blot检测结果 显示,Hpal蛋白在正常胰腺组织中的相对表达量为0.36±0.14、在胰腺癌旁组织中为1.21±0.37、在胰腺癌组织中为1.76±0.28(P<0.05).胰腺癌组织中Hpal mRNA与Hpal蛋白表达均高于癌旁组织和正常胰腺组织.胰腺癌组织中Hpal mRNA表达与胰腺癌TNM分期、浸润神经和血管以及淋巴转移有关(P<0.05),但是与组织学分化程度、肿瘤大小无关(P>0.05).结论 胰腺癌组织中Hpal蛋白呈高表达,Hpal蛋白的高表达可能与胰腺癌的发生及发展有关.     

胰腺癌中TFPI-2基因的表达及其意义

目的 探讨人胰腺癌中TFPI-2基因表达及其意义.方法 采用RT-PCR及Westernblot技术,检测TFPI-2基因在50例胰腺癌、35例转移灶、8例正常胰腺组织中的表达,同时用Boy-den小室及裸鼠皮下种植瘤模型检测胰腺癌细胞系Panc-1体内、体外侵袭及转移能力.结果 胰腺癌组织及转移灶中TFPI-2 mRNA及相应蛋白表达水平均低于正常胰腺组织(P<0.05).TFPI-2的表达水平与性别、年龄、肿瘤大小及组织学分级无关,而与临床分期、尤其是有无远处转移及神经侵犯有关.Ⅲ、Ⅳ期胰腺癌组织中TFPI-2表达水平低于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05);无远处转移、无神经侵犯的胰腺癌组织中TFPI-2表达水平高于有远处转移、有神经侵犯的胰腺癌组织(P<0.05).转染基因胰腺癌细胞系Pane-1-TFPI-2体外侵袭能力下降,无明显肌层浸润及肝、肺转移现象.结论 TFPI-2基因表达的降低与胰腺癌侵袭和转移有关,可能参与胰腺癌的侵袭和转移调控.     

胰腺癌SOCS-1基因异常甲基化研究

目的：探索人类胰腺癌中SOCS—1基因是否由于异常甲基化而表达抑制；查询此现象在胰腺癌的发生、发展中的意义。方法：采集25例胰腺导管腺癌病人的肿瘤标本及5例对应的正常胰腺组织，运用甲基化特异性PCR反应研究胰腺癌组织中SOCS—1基因CpG岛甲基化状态，同时运用实时定量PCR分析SOCS—1基因的表达。结果：25例胰腺导管腺癌病人中有9例（36％）SOCS—1基因呈CpG岛甲基化，而正常组织则无SOCS—1基因CpG岛甲基化；SOCS—1基因CpG岛甲基化组的SOCS—1基因表达量与无SOCS—1基因CpG岛甲基化组相比，其基因相对表达量明显减少（P〈0．05），证明SOCS—1基因CpG岛甲基化可以抑制SOCS—1基因表达。与病人临床病理特征相结合比较．发现SOCS—1基因CpG岛甲基化与年龄、性别、肿瘤体积、肿瘤分化程度及TNM分期等因素无关。结论：在胰腺导管腺癌中存在SOCS—1基因CpG岛甲基化，且由于CpG岛甲基化而促使基因表达抑制。SOCS—1基因CDG岛甲基化在胰腺癌的发生、发展中可能具有一定的作用。     

核因子κB表达与胰腺癌转移及与MMP-2表达的关系

目的： 探讨核因子κB (NF-κB,p65)在胰腺癌（PC）中的表达与淋巴结转移及MMP-2表达的关系。方法：免疫印迹法检测45例PC(淋巴结转移30例，非转移15例)和9例正常胰腺组织(NP)中p65蛋白的表达；RT-PCR检测MMP-2mRNA的表达。 结果：p65，MMP-2在45例 PC组织中的阳性表达率分别为66.7%（30/45）和57.8%（26/45），在30例转移组织中的阳性表达率分别为83.3%（25/30）和73.3%(22/30)，在非转移组织中的阳性表达率分别为33.3%（5/15）和26.7%（4/15）， p65与MMP-2表达呈明显正相关（r=0.743,P<0.05）。结论：NF-κB异常表达与胰腺癌淋巴结转移有关，并与MMP-2正相关，NF-κB 可能通过对下游基因表达的调控，参与了胰腺癌的转移过程。     

EphA2与E cadherin在胰腺癌中的表达及其意义

目的 探讨EphA2和E-adherin在胰腺癌组织及细胞中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学SP方法，检测56例胰腺癌及23例癌旁非肿瘤胰腺组织中EphA2和E-cadherin的表达，并分析其与临床病理因素的关系。采用RT-PCR方法检测EphA2在胰腺癌细胞株BXPC-3，PC-3及PANC-1中的表达。结果 胰腺癌组织中EphA2阳性和E-cadherin阴件的表达率分别为66．07％和57．14％，均显著高于癌旁非肿瘤胰腺组织（P〈0．05）；EphA2表达与胰腺癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关，E-adherin表达与胰腺癌TNM分期和淋巴结有关。在胰腺癌组织中，EphA2与E-cadherin的表达呈负相关；EphA2在胰腺癌向侵袭力细胞株BXPC-3和PANC-1呈高表达，在低侵袭力细胞PC-3呈低表达。结论 EphA2与E-cadherin的表达和／或功能异常可能共同参与胰腺癌的发生发展与转移；联合检测两种蛋白对于胰腺癌转移潜能的判断具有一定的参考价值。     

胰腺癌中Plk1的表达及其临床意义

为探讨Polo样激酶1(Plk1)在胰腺癌中的表达及其与各临床病理特征和抑癌基因p16的关系、及在胰腺癌发生发展中的作用及临床意义，笔者应用免疫组织化学方法检测60例胰腺癌及其癌旁组织Plk1和p16的表达，并结合临床资料进行分析。结果示， Plk1在胰腺癌及其癌旁组织中的表达率分别为86.7%和6.67%，其表达与组织分化程度、远处转移、淋巴结转移及临床分期无关（P>0.05）；p16在胰腺癌中阳性表达20例（33.3%），Plk1的表达与p16蛋白表达有关（P<0.05）。提示：Plk1在胰腺癌中高表达，与抑癌基因p16相互影响，在胰腺癌的发生发展中起重要作用。     

Mdm2基因在胰腺癌中的表达及其意义

为探讨mdm2基因在胰腺癌中的表达及其意义，笔者采用流式细胞仪检测mdm2蛋白的表达。包括胰腺癌组的癌组织68例和对照组的癌旁非肿瘤胰腺组织20例。结果示胰腺癌组mdm2蛋白阳性反应率为（19.57±0.297）%，对照组为（2.332±0.358）%，两组差异有显著性（ P<0.01）。胰腺癌中mdm2基因表达明显增高，提示其在胰腺癌的发病中起作用。     

胚胎发育信号通路Sonic hedgehog在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 研究胚胎发育信号通路Sonic hedgehog(SHH)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组化方法检测胰腺癌组织及癌旁组织中SHH mRNA和蛋白的表达情况.结果 78.9%(30/38)胰腺癌组织中检测到SHH mRNA)18.4%(7/38)癌旁正常组织SHH mRNA阳性.免疫组化结果显示:84.2%(32/38)胰腺癌组织SHH蛋白呈阳性表达;癌旁胰腺组织SHH阳性率为21.1%(8/38).两组差异有显著意义(P<0.01).SHH蛋白表达与年龄、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移状况、组织学类型和肿瘤部位均无关(P>0.05).结论 SHH信号分子在胰腺癌组织中表达增高,SHH信号途径可能在胰腺癌发生发展过程中起重要作用.     

p53对HepG2细胞AMPKβ1基因表达的影响

目的研究p53对HepG2细胞AMPKβ1基因表达的影响,探讨p53通路对细胞生长的调控机制。方法体外培养HepG2细胞,利用依托泊苷（VP-16）对细胞DNA损伤作用引起细胞内p53蛋白的变化,以未处理细胞作对照。采用WesternBlot定量检测细胞内p53蛋白量和半定量RT-PCR检测AMPKβ1 mRNA相对表达量。结果在VP-16处理6h、12h、24h后,细胞内p53蛋白水平显著高于对照组（P〈0．05）,同时AMPKβ1mRNA相对表达量亦显著高于对照组（P〈0．05）。结论细胞内p53蛋白的升高与AMPKβ1mRNA的表达增强呈现一致,AMPKβ1可能是抑癌基因p53影响细胞生长的下游调控基因。     

SST2R与DPC4、p53、Ras基因在胰腺癌中表达的相关性研究

有研究结果表明，DPCA、Ras、p53突变基因是肿瘤血管形成的重要突变基因；人体胰腺癌细胞SST2R基因的表达变化与肿瘤血管形成密切有关的促血管生成因子如转化生长因子（TGF）-β有关。本研究旨在分析它们之间的相关性，探讨SST2R基因表达变化与胰腺肿瘤血管发生机制的关系。     

RNA干扰下调NF-κB p65基因表达诱导胰腺癌细胞株PANC-1的凋亡

目的运用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术下调胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB p65基因表达，并评价其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法利用阳离子脂质体Lipofectamine^TM 2000将化学合成的人NF-κB p65的小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）转染入胰腺癌细胞株PANC-1中。采用RT-PCR法测定细胞内NF-κB p65mRNA的表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变，运用Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测p65基因表达下调对PANC-1细胞凋亡的影响。结果化学合成的人NF-κB p65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB p65mRNA的表达（P〈0．01），同时ELISA结果显示，RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组（P〈0．05）。Hoechst33258核染色、流式细胞仪和透射电子显微镜检测发现下调p65基因表达能够诱导PANC-1细胞的凋亡。结论体外实验初步证明了NF-κB p65基因在胰腺癌细胞凋亡调控方面扮演重要角色．通过沉默其表达可诱导胰腺癌细胞的凋亡．