MicroRNA在6种肿瘤细胞中的表达差异

目的: 利用生物芯片技术分析6种不同器官肿瘤细胞中microRNA（miRNA）的表达差异。方法：将210个与已知人类和小鼠miRNA互补的序列（206个miRNA，4个阳性对照）作为探针，点于玻片上制备寡核苷酸芯片。提取肿瘤细胞HeLa（人宫颈癌上皮细胞）、MCF7（人乳腺癌细胞）、A549（人     

Rac亚家族在胃肠道肿瘤细胞系中的表达及活性

目的：观察Rac亚家族成员在胃肠道肿瘤细胞发生、发展中的作用。方法：利用半定量RT-PER方法：检测12种胃肠道肿瘤细胞系中Rac1、Rat2、：Rat3 mRNA的表达;利用配体结合沉淀法检测5种胃癌细胞系中Rac1的活性。结果：与正常胃黏膜组织和肠上皮细胞系相比,大多数胃肠道肿瘤细胞系中均有Rac1、Rat3 mRNA表达的增高,同时Rac1蛋白的活性在胃癌细胞系中明显升高。结论：Rac亚家族中Rac1、Rat3 mRNA的高表达以及Rac1的异常激活可能与胃肠道肿瘤的发生发展相关。     

基因表达谱芯片筛选宫颈癌放疗抵抗差异表达基因

目的 探讨基因表达谱芯片筛选宫颈癌放疗残留癌组织与放疗前宫颈癌组织的差异表达基因。方法 收集接受根治性放疗的宫颈癌患者3例,分别获取放疗至50 Gy残留癌组织和放疗前癌组织,通过基因表达谱芯片筛选出放疗前后的差异表达基因,应用荧光定量PCR对部分基因进行验证。结果 基因表达谱芯片检测显示,放疗后残留癌组织表达上调3倍以上的基因有111个,表达下调3倍以上基因有127个。这些基因主要涉及DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞粘附、细胞凋亡及自噬、细胞能量代谢、血管生成以及细胞信号转导等功能。荧光定量PCR证实CXCL12、CD74、FGF7、COL14A1、ATM和CD44基因在放疗后表达明显上调（P＜0.05）,而PRC1、RAD54L基因在放疗后表达明显下调（P＜0.05）。结论 基因表达谱芯片能筛选出宫颈癌放疗抵抗差异表达基因,为放疗敏感性的研究提供参考。     

Fas在6种泌尿生殖系统肿瘤细胞系中的表达

背景与目的：在肿瘤细胞中Fas蛋白的表达是研究治疗肿瘤及判断愈后的重要基础,本研究检测Fas在泌尿生殖系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法：采用流式细胞直接免疫荧光法、Western blot和Nortern杂交对6种泌尿生殖恶性肿瘤细胞系[膀胱癌（T24,EJ,BIU-87）、肾癌（GRC-1,RCC-949）、前列腺癌（PC-3M)和一种原代培养正常肾间质成纤维细胞Fas分子的表达进行了检测。结果：直接免疫荧光流式细胞术检测细胞表面Fas在6种泌尿生殖恶性肿瘤细胞系均有表达,阳性率波动于16.51%-49.13%,但与原代培养的正常肾间质成纤维细胞（阳性率77.98%)相比,其阳性细胞百分率较低,细胞表面特异性免疫荧光强度较弱;6种泌尿生殖肿瘤细胞系Fas蛋白的表达均可用Western blot法检测到一条分子量约48kDa的清晰条带,但表达强度不同,以BIU-87细胞最弱,而T24细胞最明显;只有在BIU-87细胞系中未能用Northern杂交检测到Fas mRNA的表达,其它细胞系均有不同程度的表达,以PC-3M、T24细胞系较强、GRC-1、RCC-949细胞系次之,EJ细胞仅有微弱表达,正常肾间质成纤维细胞RFb表达较强的Fas mRNA。结论：Fas广泛表达于泌尿生殖系恶性肿瘤培养细胞和正常细胞中,但在肿瘤中的表达情况明显低于正常细胞,这可能是泌尿生殖系统恶性肿瘤的产生和进展的重要原因之一。     

直肠腺癌组织中microRNA差异表达谱分析

目的 研究直肠癌及正常直肠黏膜中微小RNA（miRNA）表达谱差异,寻找并验证具有差异表达的miRNA。方法 提取3例直肠癌患者的癌组织及其对应远端正常直肠黏膜中的miRNA,采用微阵列芯片分析,获得直肠癌 miRNA表达谱。另取 15例直肠癌患者手术切除标本的癌组织及正常黏膜组织,采用实时定量RT-PCR法对其中具有表达差异的 hsa-miR-187*和hsa-miR-224进行进一步验证。结果 共筛选出70个直肠癌相关的差异表达miRNA,其中33个表达上调,37个表达下调。其中肿瘤/正常倍数小于0.5的有22个,肿瘤/正常倍数大于4的有17个。在另外15对验证样本中证实hsamiR-187*在直肠癌中表达下调（P<0.001）,hsa-miR-224表达上调（P<0.001）。结论 直肠癌和正常直肠黏膜相比有其特异的miRNA表达谱, miRNA在直肠癌的发生中可能起到重要作用。     

中间微丝蛋白和癌胚抗原在不同淋巴结肿瘤细胞中的选择性表达

 本文作者采用过氧化物酶标单克隆抗体免疫细胞化学技术, 对41例淋巴结肿瘤细针吸取细胞的中间微丝蛋白和癌胚抗原表达进行了研究。 结果表明, 不同组织起源的淋巴结肿瘤细具有各异的中间微丝蛋白和癌胚抗原表达, 转移癌细胞Keratin阳性, Vimentin存在于间叶起源的肿瘤细胞, 而癌胚抗原则是单层上皮组织起源肿瘤细胞的标志, 其选择性表达具有很高的敏感性和特异性, 在临床上有助于细胞学的监别诊断。     

不同转移潜能骨肉瘤细胞差异表达基因的筛查

目的: 研究不同转移潜能骨肉瘤细胞差异表达的基因,筛选骨肉瘤转移相关的基因。方法: 分别提取低转移骨肉瘤细胞株M6和高转移骨肉瘤细胞株M8细胞总RNA,采用cDNA基因芯片筛查M6和M8细胞差异表达的基因,杂交信号用Generation Ⅲ array扫描,结果用Imagequant 5.0软件分析。选择基因芯片筛选到的典型差异表达基因用实时定量PCR进行验证。结果: M6和M8骨肉瘤细胞株差异表达的基因共有330个,其中与低转移组（M6）相比,在高转移组（M8）中显著性上调表达的基因有178个,下调表达的基因有152个。其中发生非常显著性上调表达的基因43个,发生非常显著性下调表达的基因49个。差异基因主要包括与细胞增殖相关的基因,提示与M8细胞增殖受抑相关;其次是与基因表达调控及信号转导相关的基因,提示这些基因和肿瘤转移有关联性。结论: 基因芯片方法对于筛选骨肉瘤转移相关基因有独特的优势,MG63细胞M8亚株中筛查到显著性上调的基因43个,显著性下调的基因49个,与骨肉瘤的转移有关。     

肝细胞癌Wnt信号通路差异表达基因的筛选及意义

目的 检测肝细胞癌（HCC）中Wnt信号传导通路相关基因的差异表达情况,探讨HCC与该信号通路的关系。方法 采用Affymetrix U133 Plus2.0基因芯片检测93例HCC及其配对癌旁组织中78个Wnt信号通路相关基因的mRNA表达差异。结果 与癌旁肝组织相比,HCC组织中TCF19、MMP-12、DKK1、Bcl-9、SFRP4、MMP-1、PYGO2、FZD6、MMP-9、Wnt6共10个基因表达上调,而SFRP1、TCF21、SFRP5、FZD1、Wnt2共5个基因表达下调。其中,TCF19表达上调倍数最多,达9.61倍（P=1.07×10-26）。TCF19表达与FZD1、FZD6、Bcl 9、Wnt6、MMP 1和MMP 12表达呈正相关（均P＜0.05）。TCF19表达与肿瘤数目（P=0.017）和分化程度（P=0.046）有关。结论 HCC中存在Wnt信号通路多基因异常表达。下游转录因子TCF19高表达可能是Wnt信号通路激活的关键终末效应,其在HCC中的生物学和病理学意义有待进一步研究。     

基因芯片在乳腺癌研究中的应用与进展

乳腺癌的发生和发展是一个多因素、多阶段相互作用的复杂过程.利用基因芯片技术可以检测乳腺癌组织的基因表达谱,现综述基因芯片技术在乳腺癌的发生学、生物学特性及预后等方面的应用与新进展.     

新基因FLJ 39061 在淋巴瘤中的表达及其功能分析

 目的 研究淋巴瘤与反应性增生淋巴结的基因表达差异，并对淋巴瘤高表达基因FLJ39061进行初步分析。方法 将淋巴瘤淋巴结标本和反应性增生淋巴结标本液氮速冻切片，使用激光显微切割技术分离淋巴细胞，提取淋巴细胞中的mRNA与表达谱芯片杂交，通过信号扫描、处理后获得两者的表达差异基因。用生物信息学方法对一奈有显著性差异的新基因FLJ39061进行初步分析。结果 表达谱芯片发现了152备差异表达基因。对淋巴瘤相关基因FLJ39061的性质进行了有效的预测，基本明确了该基因编码蛋白为一核蛋白，很可能是人MAP激酶激活的蛋白激酶2的前体或异构体。结论 FLJ39061可能作为激酶磷酸化底物调节细胞代谢，与淋巴瘤发生有关，可作为治疗靶点做进一步的功能研究。     

microRNA表达与乳腺癌患者临床特征的关系

[目的]探讨Let-7a、miRNA-125b、miRNA-145、miRNA-21和miRNA-155在乳腺癌组织和乳腺良性组织中的差异表达,分析其表达水平与患者临床特征的相关性.[方法]采用ViiATM7实时荧光定量PCR系统对miRNAs的表达水平进行检测.[结果]Let-7a和miRNA145在乳腺癌组织中的表达低于良性组织,差异有统计学意义(P=0.000).Let-7a、miRNA-125、miRNA-155、miRNA-21、miRNA-145的相对表达量在不同临床分期乳腺癌组织中表达差异无统计学意义.乳腺癌组织中let-7a、miRNA-125、miRNA-145的相对表达量在不同的ER、PR、HER-2组中差异均无统计学意义.乳腺癌组织中miRNA-155的相对表达量在不同的PR组(P=0.009)中差异有统计学意义;乳腺癌组织中miRNA-21的相对表达量在不同的PR组(P=0.037)中差异有统计学意义.[结论] miRNA-145和let-7a在乳腺癌组织中表达下调可能与乳腺癌的发生有关.miRNA-155、miRNA-21表达可能与PR有关.     

肺癌侧群细胞microRNA表达谱检测及初步分析

背景与目的 目前研究认为侧群细胞(side population cell,SP cell)富集了肿瘤干细胞,是肿瘤生长和发展的根源;并且SP细胞对放化疗高度耐受,成为肿瘤复发转移的重要因素.为此,我们探讨了肺癌SP细胞与非SP细胞(non-SP)miRNA分子表达谱差异,旨在为进一步研究miRNA在肺癌干细胞中的作用机制打下基础.方法 利用Hoechst 33342染料法,通过流式细胞仪紫外激光分选功能分选出A549细胞中的SP细胞和non-SP细胞,分别采用Trizol一步法提取两者的总RNA,利用miRNA芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 肺癌SP细胞和non-SP细胞miRNA表达谱存在明显差异.与non-SP细胞相比,在SP细胞中上调2倍以上的miRNA有9条,下调2倍以上的miRNA有25条.结论 差异表达的miRNA能参与肺癌干细胞的发生发展过程,为进一步揭示肺癌干细胞发生的分子机制提供了依据.     

受DNA甲基化调控的microRNA在妇科肿瘤中的研究进展

microRNA(miRNA)是一类长约22个核苷酸的非编码小RNA,转录后水平调节基因的表达,在个体发育,细胞的增殖、凋亡、分化中发挥重要的作用.近年来研究发现,DNA甲基化可能是妇科肿瘤中miRNA表达异常的调控机制,包括癌基因miRNA低甲基化活化和抑癌基因miRNA高甲基化失活,从而导致下游靶向基因表达异常,参与妇科肿瘤的发生发展.文章主要就miRNA的DNA甲基化在妇科肿瘤中的研究进展作一综述.     

不同级别人胶质瘤组织中miR-10b表达变化的研究

背景与目的:人miR-10b编码基因位于染色体2q31HOXD8基因之间,有研究显示其特异性地高表达于多种肿瘤中,并与肿瘤的侵袭、迁移和远距离转移有关。本研究对不同级别胶质瘤组织及非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平进行检测和比较。方法:采用组织微阵列及锁定寡核苷酸原位杂交技术检测56例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-10b的表达水平。结果:对照脑组织及WHOⅠ~Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级胶质瘤组织中miR-10b阳性标记指数(LI%)分别为36.87±20.63、18.86±14.04、12.13±11.56及4.93±6.45,4组间差异均有显著性(P<0.05~0.001),miR-10b LI%与肿瘤的良恶性分级呈显著负相关(rs=-0.61,P<0.001)。结论:miR-10b的表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关。     

MicroRNA在卵巢癌诊疗中的作用

微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的单链非编码RNA,参与调节体内基因的表达,通过诱导靶mRNA的降解达到沉默的目的.目前大量研究表明多种miRNA与卵巢癌的诊断、预后以及化疗药物耐药中起到重要作用.全文对miRNA在卵巢癌中的多种作用进行总结,为临床找寻新的分子标志物提供科学依据.     

Expression of C-terminal src Kinase in Human Colorectal Cancer Cell Lines

C-terminal src kinase (CSK) is a cytoplasmic protein which decreasesactivities of the Src family protein-tyrosine kinases. We produceda polyclonal antibody specific for CSK and analyzed the expressionof CSK by immunoblotting in two human colorectal normal celllines and eighteen cancer cell lines. CSK was detected in boththe two normal and all the eighteen cancer cell lines. The expressionof CSK obtained from human colorectal cancer cell lines wasgreater than that from human colorectal normal cell lines inmost cases. The elevated expression of CSK in human colorectalcancer cell lines appeared to correspond to the elevated p60^c-src(c-Src) and p62^c-yes (c-Yes) protein-tyrosine kinase activitiesfound in other studies. Thus, CSK may not have an anti-oncogenicrole to play through the negative regulation of Src family kinasesin colorectal carcinogenesis     

Expression of 6 MicroRNAs in Prostate Cancer and Its Significance

OBJECTIVE Numerous microRNAs (miRNAs) are deregulated in human cancers. The experimental evidence supports that miRNAs plays a role in the initiation and progression of human malignancies.The present study was undertaken to evaluate the differential expression of 6 miRNAs as biomarker for early detection of prostate cancer, and then to determine whether the expression profiling of these miRNAs could predict the prognosis of prostate cancer.METHODS The expression profilings of these 6 miRNAs were investigated using the method of locked nucleic acid (LNA)-modified oligonucleotide in situ hybridization (ISH). And the technology of tissue microarray (TMA) was employed using the formalin-fixed, paraffin-embedd (FFPE) specimens taken from 52 patients with prostate carcinoma (PCa) and 38 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH).RESULTS The rates of positive expression for 6 miRNAs (miR-15b, miR-16, let-7g, miR- 96,miR-182 and miR-183) were 26.92%,15.38%o, 15.38%, 67.31%, 61.54% and 71.15% in the specimens of prostate cancer, and 57.89%, 76.32%, 68.42%, 44.74%, 31.58%,47.37% in the tissues of benign prostatic hyperplasia, respectively.The expressions of all 6 miRNAs between the prostate cancer and benign prostatic hyperplasia tissues were significantly different (P < 0.05). The positive rate of these 6 miRNAs was significantly related to the Gleason Grading of prostate cancer (P < 0.01). There was no significant correlation between the expression of these miRNAs and age and the concentration of serum PSA of the patient (P > 0.05). We also found that the expression of miR-15b, miR-96 and miR-182 correlated with clinical stages of tumor (P <0.05). The expression of miR-96 correlated with lobus prostatae of tumor invasion (P < 0.01), but the expressions of the remaining five miRNAs were not correlated with that (P > 0.05). In addition, the expression of miR-15b was negatively related to that of miR-96,miR-182 and miR-183, respectively (P < 0.01, r < 0.00).There was a positive correlation among the expressions of miR-96, miR-182 and miR-183 in prostate cancer (P < 0.01, r > 0.00). The expression of miR-16 was positively related to that of miR-let-7g (P < 0.01, r >0.00).CONCLUSION The results suggest that miRNA expression profiling could have relevance to the biological and clinical behavior of prostate cancer, and they might be important biomarkers for early detection and prognostic assessment of prostate cancer.     

REGgamma在胃癌组织与不同分化胃癌细胞株中的表达及其临床意义

目的:探讨REGgamma(REGγ)在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达水平及其临床意义.方法:应用免疫组化SP法检测70例胃癌组织和30例正常胃组织中REGγ蛋白的表达水平,并分析其与胃癌生物学行为的关系;分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测正常胃粘膜细胞株(GES-1)、胃癌高分化(MKN-28)、中分化(SGC-7901)和低分化(BGC823)细胞株中REGγ mRNA转录情况和蛋白表达水平.结果:免疫组化结果表明在胃癌组织中.REGγ蛋白的表达阳性率(74.3%)显著高于正常胃粘膜组织(40.0%,P<0.01),且表达与肿瘤的大小(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、浸润程度(P<0.01)及远处转移(P<0.05)相关;RT-PCR结果表明在正常胃粘膜细胞株及胃癌高、中、低分化细胞株中,REGγmRNA表达水平逐渐增强,分别为0.459±0.079、0.588±0.118、0.715±0.066、0.873±0.099(P<0.01),Western blot结果表明在正常胃粘膜细胞株及胃癌高、中、低分化细胞株中,REGγ蛋白表达水平逐渐增强,分别为0.712±0.065、1.176±0.185、1.533±0.127、2.061±0.398,结果差别有统计学意义(P<0.05).结论:REGγ在正常胃粘膜组织和胃癌组织中呈一定比例的阳性表达,其表达水平与胃癌癌肿大小、是否有淋巴结转移、分化程度、浸润程度及是否远处转移等肿瘤的恶性生物学行为有关.REGγ表达与胃癌的分化程度相关,随着细胞分化程度的降低其表达逐渐增强,检测REγmRNA及蛋白的表达可望成为胃癌早期诊断和判断预后的分子指标之一.