体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为T淋巴细胞

目的 体外诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为T淋巴细胞. 方法 借助小鼠胚胎干细胞体外自然分化形成的类胚体(EB)中含有=三胚层细胞的独特细胞环境,加入多种细胞因子和胸腺肽α1,体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化.利用流式细胞仪在不同时间点检测诱导细胞表面T淋巴细胞发育相关的表面标志CD25、CD44、CD3、CD4、CD8以及T细胞受体(TCR)αβ和TCRγδ分子的表达水平. 结果 诱导3 d后,出现CD44+细胞;第6天出现CD44+、CD44+CD25+和CD25+细胞群;第15天开始表达CD3分子;1周后开始出现CD4+CD8+双阳性细胞.随着诱导时间的延长,CD3+细胞和CD4+CD8+细胞的百分比不断升高.培养1个月后,出现少量的CD4+和CD8+的单阳性细胞.诱导细胞早期表达TCRαβ和TCRγδ.随着诱导时间的延长,T细胞进一步成熟,诱导细胞以TCRαβT细胞为主. 结论 细胞因子和胸腺肽α1的共同作用可以在体外诱导小鼠胚胎干细胞分化成具有T淋巴细胞表型的细胞,且细胞的表型变化与T细胞体内正常的胸腺发育过程中的表型变化一致.     

人T细胞抗原受体基因的命名

<正>人T细胞抗原受体(TCR)是由二硫键连接的二条多肽链(αβ或γδ)经组成的异二聚体,属lg基因超家族,每条链具有与lg分子相似的V区、D区(仅对β和δ链)J区和C区.根据TCR的不同,可将T细胞分为αβ~+T细胞和γδ~+T细胞.人外周血中95%的T细胞为αβ~+TCR,其配体是MHC-抗原肽复合物;而γδ~+TCR一般仅表达于CD4~-CD8T细胞,这些γδ~+T细胞识别的抗原结构目前尚不清楚,但在机体抗感染免疫和抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用.从胸腺内的发育过程来看,αβ~+T细胞和γδ~+T细胞可能来源于同一祖先,而且γδTCR的表达要早于αβTCR,分别相当于妊娠第九周和第十周.     

人胎儿胸腺细胞表型分析

利用流式细胞计分析了人中期妊娠引产胎儿胸腺细胞的某些表面分子的表达,结果表明从胎儿发育的第17周直到儿童期,胸腺细胞 CD1、CD2、CD3、CD4、CD8、CD38、TCR 以及 HLA 抗原的表达无明显变化.在这一发育阶段,胸腺细胞表型呈现以下特征:1.CD3/TCRαβ分子的表达呈现从弱到强的连续性分布,可以分为三个亚群,从弱到强依次称为 L-CD3/TCRαβ、M-CD3/TCRαβ和 H-CD3/TCRαβ.个体之间三个亚群含量差异很大.2.大部分单阳性成熟型胸腺细胞也表达 CD1抗原.3.HLA Ⅰ类抗原在胸腺细胞上表达呈现密度不等的变化.大部分胸腺细胞为弱阳性,少部分为强阳性.HLA Ⅰ类抗原表达量和胸腺细胞成熟度相关.4.根据胸腺细胞比重将胸腺细胞分为 Thy-L 和 Thy-H2个亚群.Thy-L 亚群中成熟型和早期胸腺细胞含量较多,而 Thy-H 主要由中间发育阶段的胸腺细胞构成.     

生长抑素在胚胎早期胰及胃肠道发育中的表达及分布

目的:探讨人胚胎早期发育中生长抑素在胰及胃肠道的表达及分布.方法:采用免疫组织化学SABC法对30例7～14周人胚胎胰及胃肠生长抑素阳性细胞进行定位.结果:胚胎7周时胰导管上皮及小肠均未见有生长抑素阳性细胞;9周时,胰导管上皮可见较少的生长抑素阳性细胞,14周时生长抑素阳性细胞增多并开始聚集参与形成胰岛;11周时小肠内才出现生长抑素阳性细胞,阳性细胞分布在小肠黏膜上皮及固有层内,14周时生长抑素阳性细胞明显增多.结论:胚胎早期发育中,分布于胰导管上皮的D细胞其生长抑素的表达早于小肠的D细胞;生长抑素不仅参与胰岛细胞的分化发育,还与胃肠道的内分泌功能形成密切相关.     

小鼠CD3+TCRαβ+CD4-CD8-胸腺细胞特性分析

目的分析CD3+TCRαβ+ DN(double negative)胸腺细胞的特性,推断其在胸腺发育中表型和功能的成熟过程. 方法分离纯化小鼠胸腺DN细胞,用多重染色的方法分析CD3+TCRαβ+ DN细胞的表型和TCR库,并与外周淋巴结的相应细胞进行对比. 结果 DN胸腺细胞为异质性细胞,包括CD3- DN细胞和CD3+ DN细胞,而CD3+ DN细胞又分为CD3+TCRαβ+和CD3+TCRγδ+ 2个亚群.其中,CD3+TCRαβ+ DN细胞体积较小,绝大部分细胞对可的松耐受,细胞中能与自身反应的Vβ3+和Vβ11+细胞比例极低,表型较为成熟,与髓质型SP(single positive)细胞相当. 结论 CD3+TCRαβ+ DN细胞不同于CD3-TCRαβ- DN细胞,是一个独特的细胞亚群,只有在经历表型和功能的进一步成熟后才能迁出胸腺,移至外周.     

γδT细胞的生物学意义

<正>T淋巴细胞表面可分别表达两种与CD3分子相关联的T细胞抗原受体(T cell re-ceptor,TCR):由α链和β链(TCRαβ)或γ链和δ链构成的异质二聚体.人们一直对αβT细胞的结构和功能研究予以很大程度上的关注,而对于γδT细胞研究投入要少些.主要原因可能是人们认为TCRγδ细胞是一个外周淋巴细胞库中的数量较小的亚群,不大可能在免疫应答中起主要作用.γδT细胞约占正常人外周血淋巴细胞总数的3%～10%,在其表面表达CD3分子,但绝大多数不表达CD4及CD8分子.然而在长期进     

人胎儿胸腺T细胞亚群抗原的表达及其定位—免疫组织化学研究

用免疫组织化学法和多种识别Ｔ细胞亚群的抗体，观察了１５例胎儿胸腺内Ｔ细胞亚群的抗原表达及其分布。结果表明，胸腺皮、髓质Ｔ细胞对Ｌｅｕ４抗体均呈阳性，但髓质部较强。Ｌｅｕ３ａ和Ｌｅｕ２ａ阳性细胞分布于胸腺皮持、髓质，但髓质部阳性数目少于皮质。ＡＩＧ３和ＮＫ阳性细胞均分布于髓质，皮质几乎为阴性，ＩＬ－２Ｒ细胞分布于被膜下、皮质和髓质。ＢｒｄＵ标记的细胞主要存在于皮质，特别是外皮质区。此外胸腺内还有γδ     

抗鼠T细胞受体抗体抑制胸腺细胞的迁出

目的 通过检测抗仓鼠T细胞受体抗体对胸腺T细胞输出的影响，进一步研究胸腺是提供外周免疫细胞输出的有关机理。方法 体内注射抗TCR抗体48h后FACS分析新迁出细胞在胸腺、淋巴结的表达。结果 小鼠成熟髓质区高表达T细胞受体的单阳性细胞数目成倍增加，同时皮质区低表达T细胞受体的不成熟双阳性细胞数目减少。成熟的单阳性胸腺细胞高表达归巢受体L-Selectin，表型分析(TCRαβ、CD69、HAS、Vβ7-integrin、Qa-2)显示增加的这群细胞为胸腺的新迁出细胞，此群成熟细胞的高表达，表明胸腺的细胞迁出受到了抑制。胸腺内注射异硫氰酸荧光素16h后，抗TCR抗体注射小鼠外周淋巴结及脾脏CD4^ 、CD8^ 新迁出细胞数量减少。结论 抗TCR抗体能抑制胸腺T细胞向外周迁移。     

皮下脂膜炎性T细胞性淋巴瘤的临床特征及分子生物学特点

目的：对皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床特征、病理、免疫表型及分子生物学特点进行研究。方法：临床观察及实验室、病理检查研究SPTCL的临床、病理特点，免疫表型通过LCA、CD3、UCIL、L26单抗进行石蜡免疫过氧化物酶染色、用αβTCR、γδTCR抗体进行冷冻切片免疫过氧化物酶的染色，用识别Vδ^1、Vδ^2的抗体进行γδTCR亚型分析，PCR检测SPTCL患者TCR基因重排。结果：7例SPTCL患者均有皮下结节、高热、体重下降，5例出现嗜血细胞综合征，7例SPTCL患者均有电介质、酸碱平衡失调及酶学检查的异常。7例SPTCL患者的病理均在脂肪组织内见大量异型淋巴细胞浸润，均表达LCA、CD3、UCHL，不表达L26。4例SPTCL患者中有3例表达γTCR，1例表达αβTCR，3例γδTCR患者均表达Vδ^2 ，4例有3例出现TCRγ基因重排。结论：SPTCL大多病情严重，肿瘤细胞来源于T细胞系的皮肤淋巴细胞组织相关的Vδ^2 细胞，可以出现TCRγ基因重排。     

γδT细胞淋巴瘤

外周T细胞淋巴瘤常表达αβTCR ,只有少数表达γδTCR。由γδT细胞肿瘤性增生所形成的T细胞肿瘤称为γδT细胞淋巴瘤 ,最具代表性是肝脾γδT细胞淋巴瘤 ,瘤细胞累及肝脾、骨髓 ,呈窦内侵犯 ;大多数表达CD4 CD8 ,可表达NK细胞相关抗原及细胞毒淋巴细胞标记 ;遗传学上可检测到 7号染色体异常i(7q)。发生于结外 ,如皮肤、消化道、呼吸道的γδT细胞淋巴瘤以及发生于淋巴结的γδT细胞淋巴瘤都有其特殊临床病理学特征。