GM-CSF修饰肿瘤细胞疫苗治疗前后肺癌患者Treg的变化及其临床意义

目的:观察GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗(GM-CSF modified tumor cell vaccine,GVAX)治疗前后肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)比例的变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系及对患者生存的影响。方法:选择2007年3月至2010年7月天津医科大学附属肿瘤医院接受GVAX治疗的85例肺癌患者,其中鳞癌28例、腺癌47例、小细胞癌10例,早期(Ⅰ～ⅢA期)23例、晚期(ⅢB～Ⅳ期)62例。流式细胞术检测患者GVAX治疗前后外周血Treg的比例,分析治疗前后Treg比例变化与肺癌临床病理特征和患者生存期的关系。结果:接受GVAX治疗的85例肺癌患者1、3年的生存率分别为69.3%、48.2%,治疗后外周血Treg比例明显下降[(4.86±2.52)%vs(5.52±2.68)%,P<0.05]。患者血清LDH水平正常组治疗后Treg比例明显下降[(4.50±2.23)%vs(5.59±2.76)%,P<0.05],而LDH增高组治疗后Treg比例上升[(6.04±3.07)%vs(5.31±2.48)%,P<0.05];GVAX治疗超过1个疗程者较治疗1个疗程者治疗后Treg比例下降更明显[(-0.39±2.39)%vs(-2.11±1.62)%,P<0.05]。治疗前后外周血Treg比例的变化与患者预后相关,治疗后Treg比例下降组患者中位总生存期(overall survival,OS)明显长于升高组(21个月vs 10个月,P<0.05),晚期肺癌患者中Treg比例下降者的OS延长更明显(18个月vs 8个月,P<0.05)。结论:肺癌患者GVAX治疗前后外周血Treg比例变化可能成为评价GVAX疗效及判断患者预后的免疫指标,GVAX治疗后患者Treg比例的下降提示其疗效和预后都较好。     

乳腺癌术后化疗对外周血T细胞亚群、NK细胞和Treg细胞的影响

目的 探讨乳腺癌术后化疗对患者外周血T细胞亚群、NK细胞（CD16+CD56+自然杀伤细胞）和Treg细胞（CD4+CD25+调节性T细胞）的影响及临床意义。方法 采集62例乳腺癌患者术后首次化疗前1天和第6次化疗结束2周的外周血, 应用流式细胞技术检测外周血中T细胞亚群、NK细胞和Treg细胞的比例。结果 化疗后与化疗前相比,外周血CD4+T细胞的比例下降（24.78±1.62 vs. 33.78±2.1）,CD8+T细胞（26.26±2.00 vs. 22.95±3.48）和NK细胞（24.09±0.83 vs. 12.26±1.09）比例升高,CD4+／CD8+T细胞比例降低（0.84±0.15 vs. 1.46±0.35）,Treg细胞比例下降（10.35±1.48 vs. 17.47±1.11）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。在分层分析中发现,采用TEC方案化疗组患者的外周血中Treg细胞下降的幅度要高于FEC方案化疗组。结论 化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时可能在不同水平影响机体免疫功能,而且使用不同的化疗方案会有一定的差异。     

Th17/Treg平衡失调与食管鳞状细胞癌浸润转移的相关性

目的:检测食管鳞状细胞癌患者外周血中辅助性T细胞17(T helper 17,Th17)和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的表达,探讨食管鳞状细胞癌中Th17/Treg比例的变化与食管鳞状细胞癌转移的关系。方法:收集山东大学齐鲁医院2009年9月至2010年5月食管鳞状细胞癌患者37例,其中男22例、女15例,平均年龄(61±7.85)岁;23例健康志愿者为对照。流式细胞术检测外周血Th17的表达情况,分析Th17占CD3+T细胞的比例,同样流式细胞术检测外周血Treg的表达及其占CD4+T细胞的比例。分析Th17/Treg比例变化与食管鳞状细胞癌病理特征的相关性。结果:食管鳞状细胞癌患者外周血中Th17占CD3+T细胞的比例显著升高[(2.11±0.66)%vs(0.84±0.19)%,P<0.01],Treg占CD4+T细胞的比例也显著升高[(6.21±1.48)%vs(4.43±0.78)%,P<0.01];食管鳞状细胞癌患者转移组与未转移组相比,Th17比例明显升高[(2.42±0.55)%vs(1.61±0.51)%,P<0.01],而Treg比例无明显差异。食管鳞状细胞癌患者外周血中Th17/Treg比例显著高于正常对照组[(0.35±0.13)%vs(0.19±0.04)%,P<0.01];食管鳞状细胞癌患者淋巴结转移组与未转移组相比,Th17/Treg比例显著升高[(0.39±0.13)%vs(0.29±0.10)%,P<0.05]。结论:食管鳞状细胞癌患者外周血中Th17/Treg比例显著升高,可能参与食管鳞状细胞癌的浸润和转移。     

冷冻消融对肝癌患者外周血CD4+CD25+调节T细胞影响的初步研究

目的探讨氩氦冷冻对肝癌外周血CD4 CD25 调节T细胞的影响及临床意义.方法原发性肝癌患者20例.其中Ⅱ期14例、Ⅲ期6例,分别采集氩氦冷冻治疗术前及术后1个月外周血,采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3 T、CD4 T、CD8 T、CD4 T/CD8 T、NK细胞)及Treg细胞.结果肝癌Ⅲ期患者外周血Treg细胞占CD4 T细胞比例明显高于Ⅱ期患者(6.5%±1.2%、9.1%±2.0%,P=0.013).与氩氦冷冻治疗前比较治疗后1个月Treg细胞一定程度降低(8.2%±1.1%、7.7%±1.0%),但差异无显著性(P=0.052);CD4 T、CD4 T/CD8 T、NK细胞明显升高,CD8 T细胞降低(P＜0.05).结论肿瘤负荷可显著促进肝癌患者外周血Treg细胞分化.肝癌氩氦冷冻治疗后短期内Treg细胞比例轻度下降,T淋巴细胞亚群分布异常得到一定改善.     

非霍奇金淋巴瘤患者外周血T细胞亚群及NK细胞检测的临床意义

目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血T细胞亚群及NK细胞检测的临床意义.方法 收集病理确诊的初治NHL患者62例,采集静脉血经流式细胞术检测T细胞亚群及NK细胞水平,与30名健康对照者进行比较；并比较不同年龄、性别、病理类型患者之间的表达差异,分析其与临床分期、国际预后指数(IPI)、有无B症状等因素的相关性.结果 NHL组外周血CD3、CD4、NK细胞比例[(64.13±19.83)％、(27.10±8.20)％、(13.51±10.59)％]低于健康对照组[(65.78±10.69)％、(31.95±12.74)％、(18.76±7.36)％](P＜0.05)；CD8、调节性T细胞(Treg细胞)比例[(32.15±13.83)％、(10.44±3.00)％]高于健康对照组[(29.25±12.35)％、(7.51±4.36)％](P＜0.05).NHL患者≤60岁组CD3、NKT细胞比例[(67.06±19.24)％、(4.91±3.69)％]明显高于＞60岁组[(59.18±20.33)％、(4.89±3.05)％](P＜0.05),T细胞NHL组Treg细胞比例明显高于B细胞NHL组[(8.17±6.41)％比(7.11±2.53)％](P＜0.05).NHL患者外周血CD3、CD4、NK、NKT细胞比例与临床分期相关(均P＜ 0.05)；CD8细胞比例与IPI相关(P=0.000)；Treg细胞比例与IPI、B症状相关(均P＜ 0.05).结论 NHL患者存在细胞免疫抑制,其外周血T细胞亚群及NK细胞比例在不同性别、年龄、病理亚型之间存在不同,与临床分期、IPI、有无B症状等的相关性尚需进一步探讨.     

CD8+CD25+FOXP3+调节性T淋巴细胞在恶性胸腔积液中的表达及其临床意义

目的 通过检测恶性胸腔积液中CD8+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(T8reg)的表达,探讨其与恶性胸腔积液患者临床预后的关系.方法 同步采集30例肺癌合并胸腔积液患者的胸腔积液和外周血,20例良性胸腔积液患者的胸腔积液和外周血,另采集20例健康对照者外周血,用流式细胞术检测上述标本中CD8+CD25+Foxp3+T淋巴细胞的表型、百分比,分析其与恶性胸腔积液患者生存时间的关系.结果 恶性胸腔积液组中T8reg占总CD8+T细胞的比例显著高于良性胸腔积液组[(2.20±0.25)%vs(0.38±0.05)%,P=0.018],亦高于自身外周血组[(0.52±0.06)%,P=0.000],恶性胸腔积液患者外周血中T8reg的比例高于正常健康者外周血中的比例[(0.52±0.06)%vs(0.31±0.04)%,P=0.005].而良性胸腔积液组胸腔积液、外周血(0.34±0.04)%与健康对照组外周血三组中T8reg细胞的数量占总CD8+T细胞比例没有明显升高,差别没有统计学意义(P＞0.05).T8reg高、低表达水平组患者的中位生存时间分别为105、195d,两者差异有统计学意义(P=0.004).Cox回归模型多因素分析显示MPE中T8reg的表达水平、肿瘤大小是影响MPE患者预后的独立因素(P值分别为0.018、0.006).结论 肺癌伴胸膜转移患者的MPE及其外周血T8reg细胞的比例明显增高;MPE中T8reg细胞表达下降预示MPE患者生存率会明显改善,提示CD8+CD25+Foxp3+T细胞在肺癌发生、发展的免疫病理过程中具有显著意义.     

IL-21对慢性粒细胞白血病患者调节性T细胞的影响

目的:观察白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的作用,为CML的免疫治疗提供新思路.方法:收集兰州大学第二医院血液科初诊CML患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),免疫磁珠法分选出CD4+T细胞.分别加入50、100、200 ng/ml IL-21与CD4+T细胞共培养72 h后,流式细胞术检测Treg的比例,并设生理盐水空白对照组.Real-time PCR法检测Treg细胞中Foxp3 mRNA的表达,ELISA法检测各组细胞上清液中IL-10、TGF-β的水平.结果:与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml IL-21组CD4+ CD25+ Treg占CD4+T细胞的比例均降低[(3.42±0.76)％、(6.81±0.33)％、(7.98±0.76)％vs(12.09±0.91)％,P＜0.05];且3组的Foxp3 mRNA均降低[(0.05±0.02)、(0.16±0.02)、(0.25±0.02)vs 1,P＜ 0.05];Treg分泌IL-10量减少[(26.13 ±7.28)、(44.88 ±3.72)、(79.77±3.94) vs(133.00±12.32) pg/ml,P＜0.05],分泌TGF-β量也减少[(9.25 ±0.84)、(16.70±1.00)、(20.47±1.60)vs (26.05±1.81) pg/ml,P＜0.05].结论:IL-21在体外可减少CML患者外周血中Treg的比例,并抑制其功能.     

氩氦冷冻消融对晚期肾癌外周血调节性T 细胞的影响*

目的:研究氩氦冷冻消融治疗对晚期肾癌患者外周血CD4 +CD 25+ 调节性T 细胞（Treg ）的影响及临床意义。方法:回顾性分析本院32例晚期肾癌患者临床资料,所有患者均于氩氦冷冻消融治疗术前、术后1～6 个月分别取外周血,应用流式细胞仪检测外周血T 淋巴细胞亚群（CD3 + T、CD4 + T、CD8 + T、CD4 +T/CD 8 +T、NK细胞、Treg 细胞）变化情况。术后1 个月采用增强MRI或CT评价肿瘤坏死情况,影像学显示肿瘤无强化区即认为肿瘤坏死,根据Cavalieri 方法计算肿瘤坏死率,进而评价肿瘤负荷。结果:冷冻消融治疗术后,Treg 细胞比例由术前（4.18± 1.58）% 逐渐下降至第3 个月达最低值（1.96± 0.54）% ,二者差异有统计学意义（P=0.001）。 CD3 +T、CD4 +T、CD4 +T/CD 8 +T、NK细胞比例分别由术前（19.26± 7.52）% 、（43.54± 12.99）% 、（1.15± 0.57）% 、（17.49±8.36）% 逐渐上升至第3 个月达最大值（30.83± 5.69）% 、（49.58± 10.76）% 、（1.84± 0.12）% 、（27.63± 8.20）% ,差异均有统计学意义（P=0.000,P=0.003,P=0.02,P=0.001）。 CD8 + T由术前（40.86± 8.89）% 逐渐下降至第3 个月达最低值（26.74± 4.29）% ,差异具有统计学意义（P=0.000）。 冷冻治疗后3～6 个月CD3 +T、CD4 +T、CD4 +T/CD 8 +T、NK、CD8 + T、Treg 细胞比例虽略有改变但差异均无统计学意义（P>0.05）。相关性分析结果表明:经氩氦冷冻治疗后Treg 细胞比例变化与肿瘤负荷下降程度呈正相关（r=0.793,P<0.01）。结论:肾癌氩氦冷冻治疗后外周血T 淋巴细胞亚群分布异常得到一定改善,抗肿瘤免疫反应增强,Treg 细胞比例变化与肿瘤负荷有关。      

冷冻消融对晚期前列腺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节T细胞影响的临床观察

目的:分析探讨氢氦冷冻治疗对前列腺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响及临床意义.方法:前列腺癌患者40例,分别于氩氦冷冻治疗术前、术后3个月、6个月采取外周血.放射免疫法检测外周血PSA,流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T、NK细胞、Treg细胞)变化情况.结果:前列腺癌患者冷冻后外周血PSA较冷冻前明显下降(P<0.01).与治疗前比较,治疗后3个月、6个月CD3+T、CD4+T、CIM+T/CD8+T、NK细胞比例明显增高,CD8+T细胞比例降低(P<0.05),Treg细胞比例较治疗前降低(P<0.05).冷冻后6月与冷冻后3月比较,Treg细胞无明显变化(P>0.05).相关性分析结果表明:经氩氦冷冻治疗后Treg细胞比例变化与PSA下降呈正相关(r=0.76,P<0.01).结论:前列腺癌氩氦冷冻治疗后外周血T淋巴细胞亚群分布异常得到一定改善,Treg细胞比例变化与肿瘤负荷大小有关.     

新辅助化疗对乳腺癌患者调节性T细胞的影响

目的探讨新辅助化疗对乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)的影响。方法采集68例乳腺癌患者新辅助化疗前1d和化疗后第10天的外周静脉血,应用流式细胞仪检测外周血中Treg细胞及CD3+、CD4+及CD8+T细胞占T淋巴细胞的百分比。定量资料分别采用独立样本或配对样本t检验进行统计分析。结果化疗前,乳腺癌患者外周血Treg细胞占T淋巴细胞的百分比较健康对照组明显增高[(4.77±0.76)%比(0.68%±0.36)%,t=21.176,P=0.000]。化疗后CD4+/CD8+较化疗前升高[(1.95±0.72)%比(1.19±0.43)%,t=8.280,P=0.000];化疗后Treg细胞较化疗前明显降低[(1.59±0.58)%比(4.77±0.76)%,t=19.041,P=0.000]。化疗有效组Treg细胞较无效组明显降低,差异有统计学意义(t=8.227,P=0.000)。结论新辅助化疗可调控乳腺癌患者机体的肿瘤免疫耐受,改善其免疫功能,从而达到治疗肿瘤的效果。     

The Establishment of Gene Gun-Mediated Human GM-CSF Gene Transfection System and It′s Stable Expression in Tumor Cells

目的：建立基因枪介导的基因转移系统，为基因修饰的肿瘤细胞疫苗研究奠定实验基础。方法：采用基因枪转导的方法，将真核表达质粒（pcDNA3.1 GM-CSF）转导入人胃癌细胞株（SGC），经G418筛选获得阳性克隆（SGC-GM-CSF），通过RT-PCR方法鉴定，重组载体已整合到胃癌细胞的基因组中。结果：SDS-PAGE和Western blot分析的SGC-GM-CSF上清液结果显示rhGM-CSF主带在30kD左右，SGC-GM-CSF在体外长期培养中保持稳定分泌，分泌量达到24h平均247ng/10^6cell。结论：建立的基因枪介导的基因转移系统安全、有效，为应用于肿瘤基因治疗提供了实验基础。     

不同细胞因子对DC成熟的影响及细胞穿膜肽的穿膜效率比较

目的 通过比较不同因子促进树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟的差别,探讨如何提高DC成熟度。进一步研究多种细胞穿膜肽(Cell penetrating peptide,CPP)的入胞效率,寻找高效的CPP负载肿瘤抗原,以提高DC靶向治疗肿瘤的效果。方法 针对体外培养的DC细胞,应用不同种类、不同浓度的DC培养因子和成熟因子分别诱导DC成熟,通过倒置显微镜观察成熟DC细胞数量、形态;流式检测成熟DC细胞表达CD80、CD83、CD86、HLA-DR的水平。免疫荧光染色观察TAT、SecPen、PanPro和Pan四种细胞穿膜肽穿膜效率的异同。结果 常量及倍量GM-CSF诱导成熟DC的数量无统计学差异(P＞0.05),CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达无统计学差异;应用改良方案培养的成熟DC数量明显高于采用传统IL-4+GM-CSF及IFN-γ诱导的成熟DC数量,差异具有统计学意义(P＜0.05),但是,成熟DC细胞CD80、CD83、CD86、HLA-DR等表面标记表达无统计学差异;SecPen的穿膜效率(83.3±3.0%)明显高于其他三种穿膜肽,具有统计学意义(P＜0.05)。结论 改变GM-CSF的浓度并不能提高成熟DC的数量和比例;相比传统方法,改良方法诱导的DC成熟能力比传统方法有优越性;穿膜肽可以有效进入DC细胞,但不同穿膜肽穿透细胞膜的能力有显著差异,在DC肿瘤疫苗的靶向治疗中需要谨慎选择。     

GM-CSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用

目的: 研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocytemacrophage colony stimulating factor, GMCSF)膜修饰小鼠黑素瘤B16.F10细胞制备的疫苗对小鼠种植肿瘤的抑制作用。方法：采用生物素链亲合素GMCSF融合蛋白技术制备GMCSF膜修饰B16.F10黑素瘤细胞疫苗,将BALB/c小鼠随机分为GMCSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组、GMCSF与B16.F10细胞混合疫苗组、B16.F10细胞疫苗组、GMCSF组、生理盐水组。各组于第1天和第7天分别进行免疫接种,第14天皮下注射0.2 ml B16.F10细胞（1×106个细胞）进行攻击,观察各组小鼠无瘤率和生存期;攻击后24 d 用ELISA法检测小鼠脾细胞INFγ分泌水平。结果：接受B16.F10细胞攻击后第60天和第90天,GMCSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组小鼠均未成瘤,存活率为100%;GMCSF与 B16.F10细胞混合组无瘤率分别50%和40%,存活率分别为70%和40%;B16.F10细胞疫苗组无瘤率均为20%,存活率分别为80%和20%;GMCSF组和生理盐水组无瘤率为0,无小鼠存活。GMCSF膜修饰B16.F10细胞疫苗组的IFNγ分泌量比其他组明显升高（P<0.01）。结论：GMCSF膜修饰B16.F10肿瘤细胞疫苗可以激发BALB/c小鼠特异性抗肿瘤免疫反应,有效防止B16.F10肿瘤细胞的攻击。     

GM-CSF-Survivin融合基因的构建及其在树突状细胞的表达

目的:构建以Survivin为肿瘤抗原,GM-CSF为基因佐剂的融合基因,并将该融合基因转入DC,研究DC疫苗抗肿瘤治疗的新方法。方法:参照GenBank收载的Survivin基因序列设计引物,提取HT-29肿瘤细胞中的mRNA,经RT-PCR反应获得野生型Survivin cDNA基因片段。人工合成GM-CSF、Survivin两端和中间连接接头引物。PCR反应获得GM-CSF、Survivin DNA片段。经BamHⅠ酶切,T4DNA连接酶连接获得GM-CSF-Survivin融合DNA。以此DNA为模板,用两端引物作PCR扩增以获得较纯的融合DNA片段。经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后与相同双酶切的pcDNA3.1(-)载体质粒混合,加入T4DNA连接酶,16℃连接20h。用连接物转化大肠杆菌DH5α,挑选克隆提取质粒。结果:经PCR和限制性内切酶酶切初步鉴定后,选取一株送样作DNA序列测定,结果与设计序列完全一致。质粒定名为pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的pcGM-Sur质粒转染DC。采用RT-PCR和Western blot检测到DC中的融合基因mRNA和表达的Survivin抗原。结论:质粒pcGM-Sur DNA序列与设计完全一致,转染DC后能转录出完整的融合基因mRNA并表达出具有Survivin抗原性的融合蛋白。     

MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的构建、表达及其双重生物学功能的初步研究

目的:利用基因工程技术制备具有双重生物学活性的MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白.方法:通过引物设计和分级克隆的策略构建了MIP-2γ/GM-CSF融合基因真核表达载体,MIP-2γ与GM-CSF由(Gly4Ser)3相连;瞬时转染293-T细胞后收集含融合蛋白的细胞培养上清;研究了该融合蛋白在体外的促造血细胞增殖活性和对免疫细胞的趋化活性.结果:MIP-2γ/GM-CSF融合基因载体构建正确;融合蛋白分子量约为24.9 kD;初步生物学功能研究表明,融合蛋白能有效促进TF-1细胞增殖,比活性约为2.2×107IU/mg,并能显著刺激骨髓细胞的集落形成;融合蛋白能有效趋化未成熟树突状细胞和CD3 T细胞.结论:MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白具有促进造血和趋化免疫细胞的双重活性,有望成为在造血调控和抗肿瘤免疫中具有良好开发应用前景的新型细胞因子.     

Phase I/II dose escalation study of docetaxel and carboplatin combination supported with amifostine and GM-CSF in patients with incomplete response following docetaxel chemo-radiotherapy: additional chemotherapy enhances regression of residual cancer

Taxanes have been shown to interact with anti-apoptotic proteins. In the present study we investigated whether the addition of taxane in combination with DNA damaging drugs can further enhance tumor shrinkage in cases with incomplete response to radiotherapy. Since the dose of docetaxel in combination with carboplatin is not known, the above hypothesis was tested in the context of a dose escalation phase I study. Twenty-eight patients with locally advanced chest or pelvic tumors, showing residual disease on CT scans performed 40 d following docetaxel radio-chemotherapy, were recruited in a dose escalation protocol of docetaxel/carboplatin supported with amifostine and GM-CSF. The starting dose of docetaxel was 40 mg/m² every 2 weeks. Carboplatin dose was calculated using the Calvert formula and was escalated in cohorts of 4 patients (starting dose AUC2 every two weeks; AUC0.5 increments up to AUC3). Thereafter the docetaxel dose was increased to 50 and 60 mg/m², while carboplatin was escalated (by AUC0.5 increments) starting from AUC3 and AUC4 respectively. Amifostine (600 mg/m²) was administered i.v. before carboplatin and GM-CSF (480μg) was injected s.c. on days 5, 6 and 10, 11 of each cycle. Six cycles were given and response was assessed 2 weeks after the end of chemotherapy. None out of four patients treated in the 6th dose level cohort (50mg/m² of docetaxel and AUC4 of carboplatin every 2 weeks) showed any grade 2–4 hematologic toxicity. Mild non-hematologic toxicity such as neuropathy, leg edema, pleural effusion, pyrexia, alopecia grade 2 and hypersensitivity was observed in 4–12% of patients. Out of four patients treated in a 7th cohort (docetaxel 60mg/m² and carboplatin AUC4), one developed grade IV neutropenia and two developed grade 3 severe asthenia requiring treatment delay for 2 weeks. Out of 11 patients with PR following docetaxel radio-chemotherapy, 7 (63%) showed CR after docetaxel/carboplatin additional chemotherapy. Eight out of 17 patients with MR following docetaxel radio-chemotherapy showed PR (47%) and one showed CR (6%) after additional chemotherapy. High dose combined docetaxel (50 mg/m²) and carboplatin (AUC4) chemotherapy can be safely administered on a two-weekly basis if supported with amifostine and GM-CSF. Such an additional therapy may be important in patients with incomplete response after chemo-RT. Broad spectrum cytoprotection with amifostine and GM-CSF may also contribute to the reduction of incidence of neurosensory reactions and asthenia in patients treated with taxanes.     

化疗诱导Egr-1启动子调控的GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血损伤的作用

背景与目的: 电离辐射可以通过产生活性氧激活Egr-1启动子高度保守序列CArG,Egr-EG为构建的上游含Egr-1调控序列CArG元件,启动TNF或GM-CSF的pCIneo表达载体,该机制可用于辐射所致的造血损伤或治疗肿瘤.化疗药物通常是通过产生活性氧和DNA损伤导致肿瘤细胞死亡,我们假设化疗药物可以产生活性氧.因此,化疗可以诱导Egr-1启动子调控下游造血因子基因表达,这种化疗诱导基因疗法针对化疗所致的造血损伤具有恰当的治疗效果.本文旨在探讨化疗诱导Egr-1启动子调控的造血因子基因表达对化疗后造血恢复的作用.方法: 将构建的携带有早期生长因子(Egr-1)启动子的GM-CSFcDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入荷瘤(黑色素瘤)小鼠体内,对其实施5-FU化疗,观察外周血象动态改变、人基质细胞植入检测、外源基因eGFP、GM-CSFmRNA、蛋白表达以及对CFU-GM的增殖作用的检测.结果: 实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组问CFU-GM差异无显著性.肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达无关:5-FU处理后72 h实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞,RT-PCR和Western印迹显示GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强.结论: 5-FU诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法对化疗后造血损伤具有促进造血恢复作用.     

携带TIP30与人IFN-γ 基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及抗腺样囊性癌的初步研究

目的:研究锚定表达GM-CSF的小鼠黑色素瘤作为肿瘤疫苗的有效性.方法:GM-CSF基因嵌合GPI信号肽修饰序列实现在B16小鼠黑色素瘤细胞表面的锚定表达,研究锚定修饰的B16细胞于同源C57BL/6小鼠的成瘤性及诱导抗肿瘤免疫的效果.结果:抑瘤实验结果表明,锚定修饰GM-CSF的肿瘤细胞免疫原性增强,成瘤性明显下降;成瘤率为58.8%,而肿瘤对照组为100%.活瘤苗接种实验结果显示锚定修饰的肿瘤细胞可以预防肿瘤的发生,肿瘤发生率仅为20%,说明抗肿瘤的免疫应答有记忆性,能够有效地防止野生型肿瘤细胞的攻击.结论:锚定修饰GM-CSF的肿瘤细胞可以诱导抗特异性的抗肿瘤反应,这种设计可以应用于肿瘤疫苗的研究中.     

Abscopal effect of metastatic pancreatic cancer after local radiotherapy and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor therapy

The role of immunotherapy in combination with traditional treatment regime in improving the survival of cancer patients has attracted more and more attention. Especially the abscopal effect that describes the phenomenon of localized radiotherapy leading to regression of distant unirradiated tumors and the role of enhanced radiotherapy-induced immunogenic cell death and activation of immune system have become a focus of the studies. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is known a powerful stimulator of the generation, migration and activation of antigen presenting cells such as dendritic cells (DC) and macrophages. Here we report a case of a 67-year-old refractory metastatic pancreatic cancer patient who obtained evident abscopal effect and survival benefit from concurrent localized radiotherapy and GM-CSF.     

转GM-CSF基因瘤苗联合IL-12治疗T细胞淋巴瘤的实验研究

目的　探讨用转粒细胞巨噬细胞 集落刺激因子 (GM CSF)基因瘤苗 ,联合白介素 12 (IL 12 )治疗小鼠T细胞淋巴瘤的方法。方法　将小鼠GM CSF真核表达质粒 ,用电穿孔法导入小鼠T细胞淋巴瘤细胞系RMA ,有限稀释法制备单个细胞克隆 ,经RT PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验 ,筛选相对高表达GM CSF的RMA克隆 ,该克隆细胞用丝裂霉素灭活后免疫小鼠 ,以诱导产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力 ,并观察其与IL 12联合应用对淋巴瘤的治疗作用。结果　获得了高表达GM CSF的小鼠T细胞淋巴瘤克隆 ,其动物体内致瘤活性降低 ,将其用丝裂霉素灭活后作为瘤苗可使小鼠产生抗肿瘤的免疫保护力 ,与IL 12联合应用增强其抗肿瘤活性。结论　转GM CSF基因瘤苗可作为有效的抗肿瘤瘤苗 ,与IL 12联合应用较其单独应用更为有效