日本血吸虫成虫抗原合并蚯蚓抗原对小鼠胸腺淋巴细胞及亚群的影响

ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经可溶性日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）或／和可溶性蚯蚓抗原（ＳＥＷＰ）免疫后,观察、计数其胸腺Ｔ细胞总数、活性Ｔ细胞、Ｌ３Ｔ４细胞以及Ｌｙｔ２细胞。结果显示,ＳＷＡＰ免疫组Ｌ３Ｔ４细胞明显增加（Ｐ＜０．０５）;ＳＥＷＰ免疫组４个指标则均无明显变化（Ｐ＞０．０５）;ＳＷＡＰ与ＳＥＷＰ混合制剂免疫组Ｔ细胞总数、活性Ｔ细胞以及Ｌ３Ｔ４细胞均显增加（Ｐ＜０．０５）。相关分析表明：ＣＤ＋４Ｔ细胞（即Ｌ３Ｔ４细胞）在ＳＷＡＰ所诱导的保护性免疫力中可能起重要作用,而ＳＥＷＰ存在细胞免疫以外的其它可能保护性免疫机制,但ＳＥＷＰ与ＳＷＡＰ有明显的协同作用     

日本血吸虫成虫抗原合并蚯蚓抗原对小鼠胸腺淋巴细胞及亚群 …

ＢＡＬＢ／ｃ小鼠经可溶性日本血吸虫成虫抗原或／和可溶性蚯蚓抗原免疫后，观察，计数及其其胸腺Ｔ细胞总数，活性Ｔ细胞，Ｌ３，Ｔ４细胞以及Ｌｙｔ２细胞。结果显示，ＳＷＡＰ免疫组Ｌ３Ｔ４细胞明显增加；ＳＥＷＰ免疫组４个指标则均无明显变化；ＳＷＡＰ与ＳＥＷＰ混合制剂免疫组Ｔ细胞总数，活性Ｔ细胞以及Ｌ３Ｔ４细胞均显增加。     

旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠T淋巴细胞亚群的动态变化

目的　观察旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠T淋巴细胞亚群的动态变化。方法采用流式细胞术分别检测旋毛虫感染后 7、14、2 1、2 8、35天小鼠外周血CD+ 4 、CD+ 8T淋巴细胞的百分率。结果　免疫小鼠CD+ 4 、CD+ 8细胞增加 ,CD+ 4 /CD+ 8细胞比值与正常组比较无明显差异。结论　旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠未出现免疫抑制现象     

日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验

目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原(AWA)中的组分抗原，分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原，计算各组分抗原的分子量，并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠，攻击感染日本血吸虫尾蚴，感染后45d剖杀，观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原，选择收集其中4个较纯的组分抗原，分子量分别为52kD、63kD、67kD和74kD；其中63kD和67kD抗原与感染血清有强的反应，而52kD和74kD抗原则反应弱；4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。63kD抗原诱导的免疫保护力水平较52kD、67kD和74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性，且63kD抗原有一定的免疫保护性。     

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞SDH的影响

目的以琥珀酸脱氢酶(SDH)为指标,探讨亚精胺(Spermidine ,Spd)对日本血吸虫成虫培养细胞生长代谢的影响。方法将24 d龄的日本血吸虫成虫用冷消化法制成细胞悬液,联合法将细胞接种于小盖玻片上培养。培养至第4 d ,一部分细胞用含Spd终浓度分别为0(对照)、25、50、75、80、90、100、150、200μmol/L的无血清培养基处理24 h,另一部分细胞用终浓度为75μmol/L的Spd分别处理0(对照)、12、24、36、48、60、72 h。然后用PBS清洗3次,再换用常规培养基继续培养。至第8 d ,对处理过的培养细胞进行SDH细胞化学染色,Olympus-BH2显微镜下观察、拍照,并将结果输入HPIAS-2000图像分析仪进行图像分析。结果用Spd作用24 h,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随Spd浓度的升高逐渐增强,75μmol/L时达到最高,>75μmol/L,SDH活性逐渐减弱。当Spd作用浓度为75μmol/L时,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随着Spd作用时间的延长逐渐增强,48 h时达到最高,然后逐渐减弱。统计学分析显示,Spd处理后的实验组培养细胞,其SDH活性与对照组细胞比较差异具有显著性(P<0 .05) ;用终浓度为75μmol/L的Spd处理培养细胞48 h,培养细胞的SDH活性显著强于其余各组(P<0 .01)。结论Spd可显著增强日本血吸虫培养细胞的生长代谢活性;用终浓度为75μmol/L的Spd处理48 h,培养细胞的SDH活性最强。     

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞SDH的影响

目的以琥珀酸脱氢酶（SDH）为指标,探讨亚精胺（Spermidine,Spd）对日本血吸虫成虫培养细胞生长代谢的影响. 方法将24 d龄的日本血吸虫成虫用冷消化法制成细胞悬液,联合法将细胞接种于小盖玻片上培养.培养至第4 d,一部分细胞用含Spd终浓度分别为0（对照）、25、50、75、80、90、100、150、200 μmol/L的无血清培养基处理24 h,另一部分细胞用终浓度为75 μmol/L的Spd分别处理0（对照）、12、24、36、48、60、72 h.然后用PBS清洗3次,再换用常规培养基继续培养.至第8 d,对处理过的培养细胞进行SDH细胞化学染色,Olympus-BH2显微镜下观察、拍照,并将结果输入HPIAS-2000图像分析仪进行图像分析. 结果用Spd作用24 h,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随Spd浓度的升高逐渐增强,75 μmol/L时达到最高,〉75 μmol/L,SDH活性逐渐减弱.当Spd作用浓度为75 μmol/L时,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随着Spd作用时间的延长逐渐增强,48 h时达到最高,然后逐渐减弱.统计学分析显示,Spd处理后的实验组培养细胞,其SDH活性与对照组细胞比较差异具有显著性（P〈0.05）;用终浓度为75 μmol/L的Spd处理培养细胞48 h,培养细胞的SDH活性显著强于其余各组（P〈0.01）. 结论 Spd可显著增强日本血吸虫培养细胞的生长代谢活性;用终浓度为75 μmol/L的Spd处理48 h,培养细胞的SDH活性最强.     

诱导小鼠淋巴细胞表达γ-干扰素的血吸虫成虫可溶性抗原组分

目的分离纯化日本血吸虫成虫可溶性抗原(soluble adult worm antigens,SAWA)各个组分,并分别鉴定其诱导小鼠脾淋巴细胞表达γ-干扰素(IFN-γ)的能力。方法常规制备血吸虫SAWA,经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)层析法分离、收集并透析纯化各抗原组分,SDS-PAGE检测分析其含量及相对分子质量(Mr)。常规制备感染42 d小鼠脾淋巴细胞悬液,设立PBS阴性对照组及各组分抗原实验组,分别刺激体外培养的感染小鼠脾淋巴细胞,诱生IFN-γ,用双抗夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组IFN-γ水平,筛选出能诱导IFN-γ高表达的抗原组分。结果获得20种Mr不同且含量较高的SAWA组分抗原,Mr(×10~3)分别为22、23、24、28、40、45、56、62、64、65、68、70、71、74、78、91、95、100、102、105,其电泳图谱均显示为清晰的单一带。各组分抗原均能不同程度地诱导IFN-γ表达,其中Mr(×10~3)为22、24、45、62、64、65的组分抗原诱导IFN-γ的表达量较高,尤其是62×10~3组分抗原诱导表达IFN-γ水平显著高于其他实验组(P＜0．01)。结论电泳层析法能很好地将日本血吸虫成虫可溶性抗原分成多个组分：62×10~3组分抗原具有诱导小鼠脾淋巴细胞高表达IFN-γ的能力,推测它可能是一个很强的Th1型淋巴细胞活性诱导分子。     

左旋吡喹酮对日本血吸虫成虫体表抗原暴露的影响

感染日本血吸虫小鼠1次口服75mg/kg左旋吡喹酮或150mg/kg的混旋吡喹酮后,间隔10min～7d不同时间取虫,以IFA分别检测整体虫和成虫切片的体表抗原。结果显示,给药后10～30min有半数虫体体表有点状弱荧光;1～6h后虫体吸盘处和尾端有较明壳荧光;6h后,几乎整个虫体均有较强荧光。至第3d,虫体荧光强度较前减弱。且两治疗组虫体体表抗原暴露情况无明显差异。提示,左旋吡喹酮与混旋吡喹酮一样亦可干扰血吸虫成虫皮层代谢过程,使皮层损害,体表抗原暴露。     

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原对CD4~+ T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)、可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠CD4+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响。方法以免疫磁珠分选正常小鼠脾细胞中的CD4+T淋巴细胞后,与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的抗原递呈细胞共培养,并分别以PBS、SWA、SEA刺激。36h后以流式细胞术(FCM)结合caspase-3荧光抗体标记技术检测CD4+T淋巴细胞的凋亡水平;96h后以碘化丙锭染色结合FCM分析CD4+T淋巴细胞周期分布情况。结果凋亡分析结果显示,经SEA和SWA刺激后,外周CD4+T细胞的凋亡百分比分别为(1.24±0.29)%和(1.52±0.38)%,两者差异无统计学意义(P0.05)。细胞周期分析表明,SWA组处于G1期、S期和G2/M期的细胞百分比分别为(78.91±2.98)%、(7.39±0.85%)和(10.69±1.05)%;与之相比,SEA组G1期细胞百分比[(59.42±1.32)%]显著降低,S期[(21.07±0.88)%]和G2/M期[(18.88±1.21)%]显著增加,差异均有统计学意义(P均0.01)。结论SWA、SEA均可诱导CD4+T淋巴细胞凋亡,SEA促进CD4+T淋巴细胞进入分裂周期的作用更明显。     

日本血吸虫未成熟卵抗原和成虫抗原分别与联合免疫小鼠的研究

目的探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（SIEA）和成虫抗原（SA）分别与联系免疫小鼠的抗卵胚胎发育效果和抗感染效果。方法采用SIEA与SA分别与联合免疫小鼠,于攻击感染后48天剖杀,统计雌雄虫数及肝脏各期虫卵数。结果与对照组比较,SIEA单独免疫产生显著抗卵胚胎发育的免疫力,肝组织成熟卵数下降37,3％,成熟卵比例下降24．0％;SA单独免疫产生显著抗感染免疫力,减虫率为34．5％;SIEA与SA联合免疫,产生显著抗感染免疫力和最佳抗卵胚胎发育免疫力,减虫率33．5％,成熟卵数和成熟卵比例分别下降73．8％和45．0％,抗卵胚胎发育免疫力显著高于SIEA单独免疫组。结论提示来源于成虫的抗感染抗原与来源于未成熟虫卵的抗卵胚胎发育抗原联合应用是血吸虫疫苗研制中有希望的发展方向。     

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.     

日本血吸虫感染小鼠组织内的抗原,抗体定位

应用间接荧光抗体试验(IFAT)检测小鼠感染血吸虫后肝、肠内抗原,结果感染后4wk未检出抗原,6wk抗原水平显著升高,10—12wk达到高峰、其几何均数倒数分别高达512和483。组织内虫卵肉芽肿的病变,亦最为显著,而肝内虫卵肉芽肿的直径显著大于肠内的。用直接荧光抗体试验(DFAT)及IFAT测定小鼠感染血吸虫后肝、肠组织内抗体,结果在感染6wk后,三种抗体(IgG、IgM和IgA)均达低水平,10—12wk均显著上升,而肝、肠组织内IgG抗体则非常显著地高于IgM和IgA的。提示血吸虫虫卵肉芽肿的免疫应答,主要是IgG抗体。     

益肾蠲痹丸及雷公藤对日本血吸虫虫卵肉芽肿的影响

对感染15条日本血吸虫尾蚴的雌性小鼠.分别于感染后25d及45d起喂服益肾蠲痹丸和雷公藤.结果表明益肾蠲痹丸对虫卵肉芽肿发展具明显抑制作用,肉芽肿平均直径和肉芽肿内嗜酸粒细胞均明显减少.雷公藤对急性期虫卵肉芽肿可有促进发展作用,而对慢性期虫卵肉芽肿则有抑制作用.     

免疫耐受对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响

目的探讨免疫耐受对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响.方法分别用10、100、和1000μg的日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)腹腔注射1周龄小鼠,诱导其对虫卵抗原产生免疫耐受性.在感染日本血吸虫尾蚴后42、56、70和84d分批剖杀小鼠,取出肝脏作病理切片测量肉芽肿的大小.结果100～1 000μg SEA可诱导小鼠产生一定程度的免疫耐受性,使虫卵肉芽肿反应减轻.但是随着时间的延长,这种耐受性逐渐减弱或消失.结论SEA诱导的免疫耐受性可以减轻血吸虫感染早期的肝脏肉芽肿反应,但对慢性期的作用较弱.     

日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位对小鼠免疫保护性的研究

目的研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6 kDa有效抗原表位对小鼠的免疫保护性,预测其在抗血吸虫感染中的作用.方法用纯化的抗Sj 22.6 kDa的多克隆抗体IgG对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选,挑取克隆,经Western-blot免疫识别、动物初筛及序列分析后,将获得的阳性克隆免疫BABL/c小鼠.结果共获得4个有效抗原表位,各免疫组和对照组相比,4种表位混合免疫组小鼠,获得了39.5%(P＜0.05)的减虫率及57.1%(P＜0.01)肝总减卵率;4种表位分别免疫4组小鼠,各组分别获得了27.5%(P＜0.05)、5.4%(P＜0.05)、22.8%(P＜0.05)、11.6%(P＜0.05)的减虫率及41.4%(P＜0.01)、29.7%(P＜0.05)、32.2%(P＜0.05)、30.9%(P＜0.05)肝总减卵率.结论所获得4种有效抗原表位均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力,可望为血吸虫疫苗研究增加新的内容.     

日本血吸虫酚氧化酶抗原诱导免疫对病鼠肝脏病理变化的影响

目的观察日本血吸虫酚氧化酶天然蛋白抗原诱导免疫对病鼠肝脏的病理变化.方法将42 d活成虫置于含0.05%戊巴比妥钠的RPMI 1640培养基中孵育8 h后洗净,匀浆,超声粉碎、低温高速离心,将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,嗣后分别在两侧切取胶宽约1 cm进行酶染色,解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶.冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜.高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原.设立3组进行免疫实验:实验组、佐剂对照组和空白对照组.初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,最后1次免疫10 d后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染.42 d剖杀动物,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化.结果与对照组相比,酚氧化酶免疫实验组小鼠肝脏表面较光滑,隐约可见少量灰白色小点,肝色泽略带灰色,质地较软;压片观察小鼠肝脏内虫卵集聚数量明显减少,且以未成熟虫卵为主.肝脏内伴少量肝细胞坏死,细胞浸润不明显,可见较多未成熟卵周围无肉芽肿反应.小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积比对照组小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积明显减小,两组间差异有非常显著性(P<0.01).结论日本血吸虫酚氧化酶蛋白具抗原性,能诱导宿主一定的抗血吸虫病的免疫保护性作用.     

小鼠日本血吸虫病经胎传播的实验观察

目的进一步了解小鼠日本血吸虫病的经胎传播.方法分别对不同怀孕期的母鼠感染日本血吸虫尾蚴(60±1)条.在感染30～40 d后,用灌洗法观察母鼠、仔鼠的感染情况.结果妊娠早、中、晚期感染血吸虫的母鼠平均检获的虫数分别为(48.0士4.9)条、(33.3±9.4)条、(21.0±13.4)条.但其仔鼠均未检获虫体,肝脏无虫卵结节.结论本实验未发现小鼠能经胎传播日本血吸虫病,可能与不同动物种系及尾蚴感染的剂量有关.     

日本血吸虫感染对小鼠雄性激素水平的影响

[目的 ]研究日本血吸虫感染对 C5 7BL/ 6小鼠雄性激素的影响。[方法 ]应用放射免疫测定法检测实验感染日本血吸虫动物血清中雄性激素睾酮的水平。 [结果 ]感染日本血吸虫 45 d小鼠血清中睾酮的水平明显低于对照组。 [结论 ]日本血吸虫感染可导致小鼠宿主雄性激素睾酮水平显著降低。