漂洗技术对血液中肿瘤细胞去除作用的研究

目的　观察血液回收机漂洗技术能否将血液中的肿瘤细胞去除。方法　选择繁殖能力强 ,不易受损的细胞系肠肿瘤细胞LOVO和胃肿瘤细胞SGC ,计数后分别混入浓缩的红细胞中。采用血液回收机将其过滤、离心、漂洗。在漂洗后的浓缩红细胞中分离肿瘤细胞 ,台盼蓝染色计数存活的肿瘤细胞。将分离出的肿瘤细胞培养 1 4d ,进行克隆形成实验及DNA代谢物测定 ,观察肿瘤细胞的活性。结果　经血液回收机漂洗后仍然存在肿瘤细胞 ,但活性受到显著抑制 ;细胞培养 7d时 ,未发现肿瘤细胞有克隆形成 ;培养 1 4d后 ,肿瘤细胞有克隆形成。免疫组化实验显示 ,漂洗后肿瘤细胞DNA合成能力与对照组无显著性差异。结论　单纯采用血液回收机漂洗技术可显著减少血液中的肿瘤细胞 ,但不能完全去除血液中的肿瘤细胞     

塞来昔布对结肠癌细胞株HT-29的放射增敏研究

目的研究塞来昔布对结肠癌细胞株HT-29的放射增敏效应,并初步探讨其作用机制。方法体外培养结肠癌细胞株HT-29,用不同浓度的塞来昔布作用于HT-29细胞,以成克隆实验检测细胞辐射敏感性;建立结肠癌荷瘤裸鼠模型,不同实验条件下观察肿瘤体积变化并绘制肿瘤生长曲线;采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果克隆形成实验结果显示,塞来昔布30μmol/L和50μmol/L作用后的放射增敏比分别为1.304和1.475;肿瘤生长曲线表明,联合治疗组的肿瘤增长最缓慢;塞来昔布组可致肿瘤组织中VEGF表达下降（P〈0.05）。结论塞来昔布在体内和体外实验中均可增强结肠癌细胞HT-29细胞的放射敏感性,其机制可能与其抑制肿瘤新生血管形成相关。     

IFITM3过表达降低黑色素瘤细胞的放射敏感性

目的：探讨干扰素诱导的跨膜蛋白3(IFITM3)过表达对黑色素瘤细胞放射敏感性的影响及可能的机制。方法：建立稳定过表达IFITM3的黑色素瘤细胞株及对照组并验证,通过Western Blot检测其IFITM3的表达量以及照射后细胞LC3的表达量,通过克隆形成实验检测照射后的细胞存活能力,细胞增殖实验评价细胞增殖能力,免疫荧光实验评价照射后的细胞DNA损伤;建立黑色素瘤小鼠移植瘤模型,绘制照射后的肿瘤生长曲线以评价IFITM3的体内放射抵抗效应。结果：稳定过表达IFITM3的黑色素瘤细胞株B16F1-IFITM3建立成功,照射后黑色素瘤细胞中的IFITM3表达量显著增高（P<0.05）,细胞受照射后的克隆能力和增殖能力显著增强（P<0.05）,DNA损伤及自噬水平显著下降（P<0.05）,过表达组小鼠移植瘤受射线照射后生长速度无明显减低（P>0.05）。结论：IFITM3过表达能够降低黑色素瘤细胞的放射敏感性,其机制与减少放射治疗中的DNA损伤以及降低细胞自噬水平有关。     

塞来昔布对3种肿瘤细胞株放射增敏效应的研究

目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对3种不同肿瘤细胞株（肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE）的放射增敏作用。方法选择适当浓度的塞来昔布进行放射增敏实验,设置对照组（C）、药物组（D）、单纯照射组（R）和照射＋药物组（R＋D）,采用集落形成法分别检测塞来昔布对肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE的放射增敏效应,并绘制细胞存活曲线。结果塞来昔布对3种肿瘤细胞株均显示出放射增敏效应,R＋D组与R组相比较,反映放射敏感性指标的SF2、D0.01、D0、Dq出现不同程度的下调。30μmol/L塞来昔布作用A549细胞、HeLa细胞、CNE细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.26和1.34、1.25和1.33、1.24和1.32;当塞来昔布浓度增加到50μmol/L时,放射增敏比SERD0和SERDq分别增至1.74和1.84、1.36和1.47、1.33和1.61。结论塞来昔布在体外实验中可提高3种肿瘤细胞株的放射敏感性,呈浓度依赖性。塞来昔布有望作为放射增敏剂在临床广泛应用。     

塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞放射增敏效应的观察

目的探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人宫颈癌HeLa细胞株的放射增敏作用及其机制。方法MTT实验测定塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的毒性,筛选出塞来昔布的半数抑制浓度(IC50),实验分为不同浓度药物组(10、20、40、80μmol/L)、对照组和空白组。克隆形成实验检测20%IC50浓度的塞来昔布对He-La细胞的放射增敏作用,实验分为空白对照组、单纯放射组(2、4、68、Gy)、单纯加药组(药物浓度为20%IC50)、放射加药组(20%IC50药物浓度+2、4、68、Gy放射剂量),根据各组的克隆形成率,计算放射敏感性相关参数;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期的分布情况,实验分为对照组和药物组(药物浓度为20%IC50)。结果MTT实验显示塞来昔布对HeLa细胞毒性呈现出浓度和时间依赖性,72 h的IC50是44μmol/L;克隆形成实验显示,放射加药组与单纯放射组相比,反映放射敏感性的指标平均致死剂量(D0)、准域剂量(Dq)、2 Gy照射的存活分数(SF2)均下降,放射增敏比(SER)升高。流式细胞术检测细胞周期S期细胞明显减少,G0~G1期细胞增多,细胞阻滞于G1期。结论塞来昔布能增强宫颈癌HeLa细胞的放射敏感性,其机制可能与促进细胞凋亡、抑制肿瘤细胞亚致死性损伤修复和促进肿瘤细胞周期再分布有关。     

计算机在放射生物学中的应用Ⅱ.再生长延缓(Regrowth Delay)的数据处理及绘图(简报)

本文主要报道再生长延缓(Regrowth Delay)的数据处理及绘图的计算方法。 Regrowth Delay法是放射生物学中常用的观察实体瘤的方法。它可以用于观察肿瘤的放疗、放射增敏剂、放射防护剂、热疗、化疗药物等对肿瘤的影响及任何影响肿瘤生长的因素的效应,并且可以反映出它们与剂量学的关系。但是由于此方法的实验数据庞大,每批实验有一万多个实验数据需要处理,而且这些数据处理过程并不简单,远非小计算器所能解决,因此一直未被国内学者所采用。面对这些问题,我们编写     

放射事故外照射对人体剂量分布的研究

目的 研究各种放射照射条件下人体内剂量分布及剂理学参数的特点。方法 考虑各种参数在计算中的影响后,用组织－空气比方法计算得出人体内的剂量分布,进而计算出各剂量学参数,并利用组织等效仿真人体模型进行了实验验证。结果 人体内剂量分布越均匀,干细胞剂量与平均剂理直接近;干细胞剂理可大于平均剂量;全身干细胞剂理计算值与实验值之差小于５％。理论 所用计算方法与程度是可靠的。该计算程序已在实际事故处理中得到了     

人食管鳞癌细胞的体外培养及生物学性状

目的研究人食管鳞癌细胞的体外培养及生物学性状。方法自原发食管鳞癌组织中获取标本,应用消化培养法培养出可连续传代的肿瘤细胞,对培养的细胞进行形态学观察、免疫组织化学鉴定;MTT法测定细胞数,绘制生长曲线和计算细胞倍增时间,平板克隆实验以测定平板克隆形成率、流式细胞仪测定细胞周期分布。结果30例患者的肿瘤组织有6例成功体外培养出肿瘤细胞,培养出的细胞符合鳞癌特性;细胞生长具有平台期,细胞倍增时间（33．12±6．10）h,平板克隆形成率（15．73±4．46）％;（77．57土6．57）％细胞处于细胞增殖的G0、G1期,少数细胞处于活跃的增殖期。结论人食管鳞癌细胞成功获得了体外培养;肿瘤细胞的增殖能力不同,只有少数细胞增殖活跃。     

联合放疗热疗对人宫颈癌HeLa细胞作用的实验研究

目的观察放疗联合热疗时相同放射剂量不同温度和不同持续时间,不同处理顺序及同一处理顺序不同时间间隔对人宫颈癌HeLa细胞杀伤效果的影响。方法对人宫颈癌HeLa细胞进行放疗、热疗及放疗联合热疗处理后绘制生长曲线,计算克隆形成率及抑制率。结果1)热疗43℃持续30 min与42℃持续2 h相比,肿瘤细胞生长抑制率、克隆形成率及克隆形成抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。2)放疗联合热疗对HeLa细胞的抑制作用强于单独应用放疗或热疗(P<0.05)。3)不同处理顺序(放疗后热疗、热疗后放疗)对HeLa细胞抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。4)同一处理顺序、不同时间间隔(30 min、2 h、24 h)对HeLa细胞抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论放疗联合热疗比单用放疗或热疗更有效地抑制HeLa细胞生长及克隆形成。相同放射剂量的条件下,采用不同时间间隔放疗后热疗或热疗后放疗对HeLa细胞生长抑制无显著影响。     

三株人肺癌细胞放射敏感性体外研究

目的通过体外实验探讨三株人肺癌细胞的放射敏感性。方法使用^60钻γ射线对人小细胞型肺癌细胞株（NCI-H446）和人肺鳞癌细胞株（SK—MES-1）和人肺腺癌细胞株（Lu-165）进行照射，采用克隆形成实验拟合细胞存活曲线，根据D0、Dq、N及SF2值等放射生物学参数，比较肿瘤细胞的放射敏感性。流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率，分析3种肿瘤细胞的凋亡率与放射敏感性之间的关系。结果3种肿瘤细胞D0、Dq、N及SF2值大小依次为NCI—H446〈SK—MES-1〈Lu—165，放射敏感性依次为NCI—H446〉SK—MES-1〉Lu—165。流式细胞仪检测到明显的凋亡峰，肿瘤细胞凋亡率随着照射剂量的增加而增加，并且3种肿瘤细胞株凋亡峰值依次为NCI-H446〉SK—MES-1〉Lu-165，与其放射敏感性高低一致。结论肿瘤细胞凋亡率的检测对预测其放射敏感性有一定的价值。     

EGF诱导结肠腺癌HCT-116细胞神经内分泌分化实验

目的 利用表皮生长因子 (EGF) 及表皮生长因子受体 (EGFR) 抑制剂西妥昔单抗 (Cetuximab) 诱导和阻断诱导结肠腺癌HCT-116细胞神经内分泌分化 (NED) , 探讨诱导和阻断诱导后肿瘤细胞生物学变化特点及相关因素.方法 通过HE和免疫组化染色, 观察肿瘤细胞裸鼠种植成瘤后及NED诱导前后肿瘤细胞形态变化特点和免疫组化表达情况;低密度平板克隆实验检测肿瘤细胞克隆形成率;流式细胞术检测肿瘤细胞生长周期;MTT法绘制肿瘤细胞生长曲线.结果 结肠腺癌HCT-116裸鼠种植后成肿瘤细胞明显异型;经EGF及EGFR作用前后HCT-11肿瘤细胞形态无明显变化;EGF组克隆形成率增加 (P>0.05) , 肿瘤细胞Cg A、Ki-67、Bcl-2表达增强, 增殖活性增高, EGF作用后肿瘤细胞与其它各组相比差异有显著统计学意义 (P<0.01) .而CEA、CA19-9、CDX2、COX2、Syn、NSE在各组表达差异无统计学意义 (P>0.05) .结论 EGF可诱导结肠腺癌细胞HCT-116 NED;肿瘤细胞增殖活性增加、抗凋亡能力增强;EGFR可阻断EGF诱导HCT-116 NED及相应生物学特性变化;而CEA、CA19-9、CDX2、COX2对肿瘤细胞NED和增殖凋亡无明显调节作用.     

健择对人鼻咽癌细胞系放射增敏作用的研究

目的：观察放射联合健择(gemcitabine)对人鼻咽低分化鳞癌细胞系(CNE-2)的放射增敏效应。方法：应用细胞克隆形成实验并绘制细胞存活曲线,观察健择对放射敏感性的影响。结果：健择联合放射能明显降低CNE-2细胞的存活分数,5、15、20mg／L健择组的放射增敏比分别为1．02、1．30和1．37。结论：健择对CNE-2细胞有中度放射增敏作用。     

胃癌相关基因GCRG213真核表达载体的构建及其对胃癌细胞成瘤性的影响

目的:研究胃癌相关基因GCRG213正义、反义转染对胃癌细胞MKN45成瘤性的影响。方法:采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果:平板克隆形成实验显示转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞其细胞克隆形成数量低于转染空载体的细胞。在裸鼠体内进行的转染细胞的成瘤性实验可见,转染了GCRG213正向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性高于转染空载体的细胞,而转染了GCRG213反向克隆的MKN45细胞在裸鼠体内成瘤性低于转染空载体的细胞。结论:胃癌相关基因GCRG213可促进肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞的成瘤性,GCRG213反义转染可抑制肿瘤细胞的生长,抑制肿瘤细胞的成瘤性。     

复方苦参注射液对人宫颈癌细胞株 Hela 的体外放射增敏作用

目的 观察复方苦参注射液对Hela细胞的毒性和体外放射增敏作用.方法 MTT法观察复方苦参注射液对Hela细胞的抑制效应,绘制量效曲线测IC10浓度.用此药物浓度分别作用细胞24 h和48 h,置于6MV的X线下单次照射.克隆形成法计算细胞存活率,单靶多击数学模型拟合细胞存活曲线,求出各组的D0值和Dq值,计算放射增敏...     

沉默CD133基因对CD133+肝癌干细胞放射敏感性的影响

目的 研究沉默CD133基因对人肝癌CD133+-HepG2干细胞放射敏感性的影响.方法 免疫磁珠分选HepG2细胞;流式细胞术检测分选前后CD133表达率;NOD/SCID小鼠成瘤实验验证其干性;靶向沉默CD133基因并分组(空白组、阴性感染组、阳性感染组);RT-PCR和Western blot检测各组CD133基因mRNA和蛋白表达;克隆形成实验检测各组细胞经不同剂量照射后的克隆形成率及存活率,绘制存活曲线并计算各组细胞放射生物学参数Do、Dq、N及放射增敏比(SER);流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.结果 流式细胞术检测结果显示,分选前后CD133表达率分别为(1.36±0.20)％和(87.62±1.92)％.CD133+细胞在细胞数为1×103/ml时即可形成皮下移植瘤.RT-PCR和Western blot检测结果显示,阳性感染组CD133 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制.流式细胞术检测结果显示:阳性感染组G1、S 期减少G2期增加,细胞凋亡率明显增加.克隆形成实验显示阳性感染组D0、Dq、N值与SF2均减小,放射敏感性明显增强,其SER为(1.37±0.02),差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 CD133作为肝癌干细胞的表面标志物之一,可能成为肝癌干细胞放射治疗增敏的靶点.     

反复照射建立食管癌放射抗性细胞系方法的重复性和稳定性研究

目的探讨射线反复照射方法建立食管癌放射抗性细胞系的重复性及稳定性,并观察辐射抗性细胞与其亲代细胞之间的放射敏感性的差异。方法应用射线对人食管鳞状细胞癌细胞TE13进行反复照射,累计剂量120 Gy,建立具有放射抗性的细胞系TE13R120。采用细胞克隆形成实验测定2种细胞的放射生物学参数,检测其辐射抗性,采用单击多靶模型拟合存活曲线。经连续8 d培养细胞,绘制2种细胞的生长曲线并用Logrank检验计算群体倍增时间。比较此次实验结果与初次建系时结果的相似性。结果接受120 Gy总剂量照射后,TE13R120较TE13表现出明显的放射抗性,TE13R120的放射生物学参数D₀、Dq、N均高于TE13（2.36、2.17、2.50 vs 1.90、1.11、1.80）,SF₂、α/β均低于TE13（0.53、2.67 vs 0.73、8.00）。TE13R120的细胞群体倍增时间为20.70 h,长于亲代TE13（17.67 h）。该结果与此前初次建系时结果相似。结论应用射线反复照射并逐步筛选建立辐射抗性细胞系的方法可靠,能建立具有稳定辐射抗性表型的细胞系。     

shRNAmir慢病毒载体沉默环氧合酶-2对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响

摘要：目的探讨COX-2基因沉默对鼻咽癌C666-1细胞放射敏感性的影响。方法以稳定沉默COX-2基因表达的鼻咽癌
Anti-COX-2 C666-1细胞和对照细胞Anti-GL-2 C666-1为研究对象,采用克隆形成实验及曲线拟合计算不同剂量辐射后
各放射生物学参数和放射增敏比;采用流式细胞仪检测辐射后细胞周期的变化;采用体内荷瘤裸鼠动物模型检测放疗后
皮下移植瘤的生长曲线,并计算抑瘤率。结果Anti-COX-2 C666-1细胞SF2、D0、Dq值较对照组均明显偏低,α/β显著增
高,放射增敏比为1.4014;COX-2 沉默后降低了辐射诱导的G2/M 期阻滞,并增加辐射后荷瘤裸鼠的抑瘤率。结论
COX-2基因稳定沉默后可改变鼻咽癌C666-1的放射生物学参数,并降低辐射引起的G2/M期阻滞,增大抑瘤率,能够起到
放疗增敏的作用。
     

人不同乳腺癌细胞株端粒酶活性与放射敏感性的关系

目的 :通过检测人不同乳腺瘤细胞株的端粒酶活性及其 2Gy的存活分数 (SF2 )的相关性 ,探讨端粒酶活性是否能成为检测肿瘤细胞放射敏感性的一个指标。方法 :8株人不同肿瘤细胞株 (Hep 2、Hela、U2 5 1、ZR 75 30、MCF 7、MDA MB 4 35S、T 4 7 D、F5 39 15 90 )在指数增长期留取细胞 ,然后分别用TRAP ELISA检测其端粒酶活性 ,克隆形成实验检测其放射敏感性参数SF2 。结果 :8株人乳腺癌细胞株端粒酶活性各不相同 (P <0 .0 1) ,其中ZR 75 \|30端粒酶活性检测呈阴性 ,余 7株细胞端粒酶活性检测呈阳性 ,SF2 亦不相同 (P <0 .0 1) ,但端粒酶活性与SF2 之间无明显的直线相关关系 (P =0 .341)。结论 :8株人不同肿瘤细胞株的端粒酶活性及其放射敏感性各不相同 ,但其端粒酶活性不能成为检测其放射敏感性的指标。     

小鼠尾静脉注射125I标记的抗CEA人鼠嵌合抗体rch24的药代动力学研究

目的探讨125I-rch24在小鼠体内的药代动力学过程。方法7只BABL/c小鼠,溴代琥珀酰亚胺(NBS)法标记的抗体125I-rch24尾静脉注射,于注射后不同时间尾根部取血,测定放射性计数,绘制血清除曲线,计算药代动力学参数。结果①125I与CEA人鼠嵌合抗体rch24结合,采用纸层析法测定的标记率为95.5%±02%;②标记抗体的放射化学纯度至14天后为92.6%,35天后为89.3%;③经计算机模拟,为双指数曲线,标记抗体的血液分布、清除符合二房室模型。结论正常小鼠尾静脉注射标记抗体125I-rch24后的药代动力学过程符合二房室模型,静脉注射适宜用于结肠癌放射免疫导向手术。     

计算机绘制ALT标准曲线表

赖氏法测转氨酶时，标准曲线中标准管酮酸量与相应的酶活力单位不呈直线关系，绘制及重校标准曲线时，手续烦琐且易造成误差。分析上述问题，根据吸光度与酶活力在坐标系中曲线的特点和各种插值法的特点，在此向读者介绍一种三次样条（ｓｐｌｉｎｅ）插值方法绘制ＡＬＴ标准曲线。１　材料与方法３８６计算机，由中国长城公司提供；ＡＬＴ度剂盒，由上海生物制品研究所提供；７２１分光光度计，由上海医用仪器厂生产。１．２　实验方法　由卫生部临床检验中心推荐的赖氏法和按上海生物制品研究所的ＡＬＴ测定试剂说明操作，作空白管和四种不…