胸腺肽α1对80岁以上老年人外周血树突状细胞体外培养及功能的影响

目的观察胸腺肽α1对≥80岁老年人外周血单核细胞体外诱导培养生成的树突状细胞(dendritic cell,DC)的活力及其功能的影响作用。方法取30例高龄老年人作为研究对象,给予胸腺肽α1注射剂1.6mg皮下注射,每周2次,疗程为1月,各取治疗前后的外周血,用淋巴细胞分离液离心获得单个核细胞,贴壁培养2h后获得单核细胞,以含有重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组白细胞介素-4的培养基培养1周,观察治疗前后DC的生长、活力、存活时间、对同种T淋巴细胞的刺激反应,并进行比较。结果治疗前≥80岁老年人DC培养过程中细胞逐渐死亡,培养至第7天大部分细胞死亡,获得的DC数量较少,其中有8例未能培养出DC;而治疗后培养的DC的活力保持较好,至第7天获得的DC数量较治疗前明显增多,对同种T淋巴细胞的刺激能力也明显增强。结论≥80岁老年人应用胸腺肽α1外周血培养的DC生长活力、T细胞刺激能力明显增强,由此可以推断胸腺肽α1可以在某种程度上提高≥80岁老年人的免疫功能。     

慢性丙型肝炎患者树突状细胞功能的研究

目的　探讨树突状细胞 (DC)与慢性丙型肝炎患者体内病毒持续感染的关系。方法　从外周血分离单核细胞 ,用含粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF) ,白细胞介素 (IL) 4的AIM V无血清培养基诱导培养DC。观察DC外部形态和超微结构 ,检测DC表型 ,进行混合淋巴细胞反应(MLR) ,检测DC诱导同种异体静止T细胞增殖的能力和上清中细胞因子水平。结果　实验组DCCD86表达率为 (5 2 4± 13 3) % ,明显低于对照组的 (83 7± 15 8) % (P <0 0 1) ;实验组DC诱导同种异体静止T细胞增殖的能力每分钟液闪计数值 (cpm)为 192 4 5± 2 788,明显低于对照组的 2 6 5 2 9± 32 18(P <0 0 1) ;实验组MLR中IL 12p40 平均值为 (40 4± 10 3)ng/L ,干扰素γ平均值为 (7891± 82 1)ng/L ,分别低于对照组 (80 2± 2 0 5 )ng/L和 (13490± 15 5 4 )ng/L(P <0 0 0 5 )。结论　慢性丙型肝炎患者DC功能低下 ,提示与HCV持续感染有关。     

恩替卡韦对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的体外影响

目的:研究恩替卡韦(ETV)对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)功能的影响.方法:体外常规分离CHB患者及健康人外周血单个核细胞,诱导扩增后常规培养.第4天将其与一定浓度的恩替卡韦共培养,第8天收获DC进行细胞表型、同种异体混合淋巴细胞反应等相关检测.结果:细胞培养8 d时DC形态分化健康对照组优于CHB ETV处理组,CHB ETV处理组优于CHB组;CHB组CD1a(35.73±3.12 vs 62.31±5.22,P<0.01),CD80(28.19±1.64 vs 45.38±3.10,P<0.01),CD83(22.24±2.14 vs 40.63±7.21,P<0.01)及HLA-DR(36.74±0.98 vs 56.05±3.89,P<0.01)表达明显低于健康对照组,而ETV处理组与CHB组相比CD83 (27.41±9.23 vs 22.24±2.14,P<0.05),CD80(32.67±7.82 vs 28.19±1.64,P<0.05)及HLA-DR(40.84±5.57 vs 36.74±0.98,P<0.01)显著高表达;淋巴细胞增殖能力测定ETV处理组DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力较CHB组增强(1.53±0.09 vs 1.45±0.12,P<0.05).结论:恩替卡韦作为治疗CHB的新一代核苷类药物,除了直接抑制乙肝病毒DNA合成外,也能够增强CHB患者外周血DC的功能,通过调节机体的免疫系统发挥间接抗病毒作用.     

哮喘小鼠骨髓树突状细胞的表型及共刺激分子研究

目的 探讨哮喘小鼠骨髓来源树突状细胞（DCs）的表型及共刺激分子在哮喘发病中的影响。方法 用卵清蛋白建立哮喘模型，利用rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DCs，流式细胞仪检测DCs表面共刺激分子的表达，混合淋巴细胞反应检测DCs刺激同种异体的T淋巴细胞增殖的能力。结果 在两种细胞因子的作用下，从骨髓中可以诱导出大量的DCs；且均表达DCs的表面标志（33D1）。哮喘组DCs表达CD86分子的水平高于对照组。而CD40、CD80在两组之间没有差异；哮喘组与对照组DCs均能强烈刺激同种异体T淋巴细胞的增殖，哮喘组DCs的刺激能力明显强于对照组。结论 哮喘组DCs的抗原递呈能力增强，表明DCs在哮喘的发病中可能起着重要作用。     

人外周血树突状细胞体外稳定培养方法的建立及与磁珠法的比较

目的 建立一种稳定的人外周血树突状细胞(DCs)体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法 通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞(PBMC),再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)诱导获得DCs.倒置显微镜观察细胞形态变化,并分别在第3、5、6天用台盼蓝染色法进行细胞活力检测;经过1、2、5 h的贴壁培养后,应用流式细胞仪检测单核细胞表面CD14、CD1a、HLA-DR的表达以确定最佳贴壁时间;经人重组细胞因子诱导培养后,对所获得的细胞检测CD14、CD1a、CD86、CD83、HLA-DR的表达.采用同种混合淋巴细胞反应,评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果 经贴壁2 h后诱导培养的DCs形态较典型.磁珠分选法获得的DCs第5、6天细胞活力[(53.333±5.774)%、(38.333±7.638)%]明显低于第3天[(68.667±3.215)%,P均＜0.05];贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天的细胞活力[(92.667±3.055)%、(94.000±1.000)%和(94.667±1.528)%]比较,差异无统计学意义(F=0.737,P＞0.05);贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天细胞活力均高于磁珠分选法(t值分别为9.374、12.021、12.527,P均＜0.05).PBMC经磁珠分选前后CD14的阳性表达率分别为(32.457±12.351)%、(41.914±14.858)%,二者比较差异无统计学意义(t=1.295,P＞0.05).单核细胞表面CD14的阳性表达率在培养2 h时[(35.267±4.658)%]高于培养1、5 h时[(15.033±6.189)%、(21.233±4.895)%,P均＜0.05].培养第6天,DCs表面CD14的阳性表达率[(2.200±1.356)%]较第1天[(32.328±14.517)%]明显下降(t=5.467,P＜0.05),CD1a的阳性表达率[(43.371±16.250)%]较第1天[(12.300±6.223)%]显著升高(t=2.545,P＜0.05);而CD86、CD83、HLA-DR的阳性表达率[(16.857±5.686)%、(9.343±5.230)%、(72.800±17.881)%]与第1天[(12.550±16.758)%、(6.250±1.323)%、(64.671±15.588)%]比较,差异无统计学意义(t值分别为0.652、1.137、0.907,P均＞0.05).同种混合淋巴细胞反应,随着淋巴细胞的增多,增殖能力下降.磁珠分选法中,DCs与淋巴细胞的比例为1:50、1:100时,细胞增殖能力(1.502±0.055、1.507±0.029)较1:10时(1.859±0.049)降低(P均＜0.05);贴壁培养法中,DCs与淋巴细胞的比例为1:100时,细胞增殖能力(1.545±0.066)较1:10时(2.015±0.301)降低(P＜0.05).在DCs与淋巴细胞的比例相同时,两种方法得到的DCs在刺激T淋巴细胞方面的能力相近(P＞0.05).结论 与磁珠分选法比较,贴壁培养2 h后的人外周血PBMC再行诱导可获得形态与功能较优的DCs,且此法稳定、简便、经济,是一种适于基础、临床研究的DCs体外培养方法.     

人脾脏树突状细胞大量培养的新方法

目的：建立人脾脏单核细胞体外培养生成大量树突状细胞的新方法。方法：人脾脏细胞悬液培养2h获得贴壁的单核细胞,加入重组人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF)100μg/L或rhGM-CSF100μg/L 重组人白细胞介素－4（rhIL-4)500kU/L,体外培养7天,收集悬浮细胞,以流式细胞仪分析细胞表型及抗原内蚕能力,体外混合淋巴细胞反应检测细胞抗原呈递功能。结果：以细胞因子培养7天生成的悬浮细胞,20％－80％表达树突状细胞（DC）特异性标志CD1a,表达高水平的HLA－DR、B7－1、B7－2分子,具有较强的抗原内吞能力,体外可以强烈刺激同种T细胞增生,其形态,表型与人外周血单核细胞获得的DC相似。结论：从人脾脏获得的贴型的单核细胞,体外以GM-CSF rhIL-4培养,可以获得极其大量的DC（＞10^9细胞／个脾脏）为进一步研究和应用打下了基础。     

树突状细胞体外分离扩增技术研究进展

树突状细胞（DC）是目前所知的体内功能最强的专职抗原呈递细胞,是机体免疫反应的始动者,被称为机体防御病原微生物侵袭的重要“哨兵”,在移植排斥、抗肿瘤、抗病毒感染和自身免疫疾病中发挥着重要作用。获得大量高纯度且表型、功能典型的DC是上述基础和临床研究的前提。从直接分离提取到添加细胞因子诱导扩增DC研究获得很大进展,成为当今免疫学及肿瘤治疗学等相关学科的研究热点。本文对DC体外分离、纯化及扩增方法作一简要综述。     

人外周血树突状细胞体外培养与扩增的研究进展

树突状细胞是机体内功能最强的抗原递呈细胞，目前其已成为肿瘤生物治疗的热点。如何激活树突状细胞和得到大量树突状细胞是以树突状细胞为基础的肿瘤主动免疫治疗的关键所在。近来树突状细胞的体外培养扩增技术日益成熟，但仍存在树突状细胞大量扩增方法的最优化和树突状细胞的异质性问题。本文介绍了树突状细胞的生物学特性、体外培养方法，体外扩增及其影响因素。     

乙型肝炎患者外周血树突状细胞的培养及表型分析

树突状细胞（dendritic cells，DC）是已知体内功能最强及唯一能活化静息T细胞的专职抗原递呈细胞,并且在增强或调节细胞介导的免疫反应中起管决定性作用．在CHB患者中不仅DC的表型不成熟并且存在着功能的缺失，树突状细胞这种功能改变及数量变化与乙型肝炎患者针对HBV特异的CTL反应下降有密切关系。     

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外扩增、鉴定及生物学特性研究

目的 为树突状细胞(DC)的研究和应用奠定基础.方法 以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL-4)和脂多糖(LPS)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞表面分子,混合淋巴细胞反应检测其刺激T细胞增殖能力.结果 经体外诱导培养第2～8天可见大量细胞集落形成;获得的DC具有典型树突状形态,同时DC可显著刺激同种异体混合淋巴细胞增殖.结论 体外诱导培养可获得小鼠骨髓来源DC,可广泛应用于临床及实验研究.     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的体外影响

树突状细胞(DC)是人体内抗原提呈能力最强的抗原提呈细胞(APC),在抗病毒的细胞免疫中起重要作用[1].慢性乙型肝炎(CHB)形成的重要原因之一是患者DC功能低下[2];胸腺肽α1是一种由28个氨基酸构成的胸腺多肽,被广泛用于调节机体免疫,促进T淋巴细胞功能可能是其重要机制之一.作为临床上治疗CHB的重要辅助用药,我们对胸腺肽α1调节CHB患者DC功能进行了研究.     

拉米夫定体外对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响

目的:体外研究不同浓度拉米夫定(lamivu- dine,LAM)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者树突状细胞(dendritic cell,DC)功能影响．方法:分离慢乙肝患者外周血单核细胞,在含GM-CSF IL-4及不同浓度LAM(0,0．125, 0．25,0．5,1,2 mmol／L)培养条件下制备DC．观察DC形态学变化并用MTT法测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM) 测定其细胞表型分子CD1a,CD83,CD80及 HLA-DR的表达,ELISA法检测培养上清中 IL-12和IL-6含量．结果:在LAM 0．5 mmol／L组,DC表型分子 CD83,CD1a,HLA-DR的表达最高,CD80与 LAM未处理组相比无明显差异．与LAM未处理组相比,LAM 0．5 mmol／L处理组DC膜表面分子CD1a,CD83,HLA-DR表达增高(CD1a: 54．0±9．2 vs 33．6±10．1,P<0．05;CD83:20．3 ±6．1 vs 11．8±6．2,P<0．05;HLA-DR:74．5± 7．1 vs 52．9±7．7,P<0．05);其上清液中IL-12 分泌水平增高(810．0±91．5 ng／L vs 268．0± 34．3 ng／L,P<0．05),IL-6则显著降低(28．1± 2．6 ng／L vs 55．3±7．4 ng／L,P<0．05);刺激同种异体淋巴细胞增殖能力(SI)增强(1．9±0．6 vs 1．2±0．5,P<0．05)．结论:LAM体外可增强慢乙肝患者树突状细胞活性．     

The biological characteristics of dendritic cells derived in vitro from myelogeneous leukemia cells and healthy donor cells

Successful adoptive immunotherapy for leukemia depends on the generation of T cells that can specifically react with malignant cells. Dendritic cells (DCs) are important antigen-presenting cells in the development of antileukemia T-cell responses. Mononuclear cells (MNC) were isolated from peripheral blood or bone marrow of patients with chronic myelogenous leukemia (CML), and acute myelogenous leukemia (AML). After incubation with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, interleukin (IL)-4, and tumor necrosis factor-alpha, MNC developed morphological characteristics of DCs in vitro, which were confirmed by phenotypic assay. Fluorescence in situ hybridization demonstrated the presence of fusion gene in the nuclei of representative CML or AML-M3 samples, indicating that the cells were leukemic in origin. IL-12 levels were significantly higher in AML-DCs and CML-DCs prestimulated with phorbol 12-myristate 13-acetate than in the corresponding leukemic cells, but were lower than that of healthy donors. These cells were potent stimulators of lymphocyte proliferation in specific in vitro assays for DC function. However, the stimulatory abilities of allogeneic T cells in a mixed lymphocyte reaction were impaired compared with those of mature DCs derived from healthy donors, although T-cell stimulatory effects were significantly increased in these differentiated leukemia-DCs. These results suggest that functional DCs may be derived from leukemic (AML, CML) blasts in a significant number of patients and may be capable of inducing leukemia-specific immune responses with potentially clinically beneficial effects.     

α-干扰素对慢性粒细胞白血病树突状细胞分化及功能的影响

目的 :观察α 干扰素 (IFN α)对慢性粒细胞白血病 (CML)来源的树突状细胞 (DCs)分化及功能的影响。方法 :10例CML慢性期患者 ,Ph染色体阳性率均为 10 0 %。应用小牛血清体系培养CML来源的DCs,以重组干细胞因子 (rhSCF)、重组FIt 3配体 (rhFlt 3L)作为扩增体系的细胞因子 ,以rhGM CSF、rhTNF α、rhIL 4诱导DCs的生成 ,加或不加IFN α ,即分为A组 (0U/ml)、B组 (30 0U/ml) ,培养 2周后流式细胞仪检测培养细胞的免疫表型 ,G显带法显示Ph染色体 ,MTT法检测CML DCs刺激健康人外周血T淋巴细胞增殖情况。结果 :B组较A组培养细胞的总数减少 ,但DCs比例增加。Ph染色体两组比例分别为 10 0 %、81.75 %。B组较A组CD86、CD83、CD4 0、MHC Ⅰ类分子的表达明显升高 (P <0 .0 1)。同种混合淋巴细胞反应中 ,B组较A组A值亦明显升高 (P <0 .0 1)。结论 :IFN α可以加速CML DCs的成熟 ,增强CML DCs的功能。     

阿德福韦酯体外对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响

目的:探讨体外阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者外周血树突状细胞(dendritic cell.DC)功能的影响.方法:分离CHB患者及健康自愿者外周血单核细胞(Mo),在含rhGM-CSF rhIL-4及不同浓度ADV(20、100、500μg/L)培养条件下制备单核细胞源DC(MoDC).在倒置显微镜下观察DC的形态:FACS分析DC的表型;MTT法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力;ELISA检测DC培养上清中IL-12 p40 p70的含量.结果:与CHB未处理组比较,CHB ADV处理组DC形态分化明显,激发初始T细胞增殖的能力加强.上清液中分泌的IL-12 p40 p70增多;在CHB ADV处理组(100μg/L),CDla 、CD83 、CD866和MHC-DR DC的数量均最多,显著高于CHB未处理组(43.5±5.7 vs 20.6±2.8.34.64±1.9 vs 16.7±3.4.40.94±2.8 vs 25.8±6.6,66.94±5.4 vs 40.74±4.2,均P＜0.05),但低于健康对照组,三组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:ADV可以增强CHB患者外周血MoDC的免疫功能,提示其可能通过调节DC的功能而参与免疫应答,发挥间接抗病毒作用.     

Impaired phenotype and function of monocyte derived dendritic cells in pulmonary tuberculosis

Pulmonary tuberculosis (PTB) is often associated with impaired immunological functions. Blood monocytes, which can differentiate into dendritic cells upon cytokine stimulation, play a central role in adequate immune reactivity. Here, we investigated the morphologic, phenotypic and functional characteristics of in vitro-generated monocyte derived dendritic cells (MoDC) from PTB patients in comparison with healthy subjects. Phenotypic analysis revealed a defective differentiation of MoDC in PTB patients as assessed by a strong down regulation of CD1a, MHC II, CD80 and CD83 expression and impaired allostimulatory function under the influence of IL-4 and GM-CSF. In contrast, the expression of CD86 was not affected and remained same as in healthy subjects. Furthermore, the maturation status of lipopolysaccharide (LPS) stimulated MoDC was not optimal in PTB. However, the MoDC of PTB patients produced significantly higher levels of TNF-alpha and IL-6 but lower levels of IL-12 compared to healthy subjects. These findings suggest that there is a fundamental defect in the differentiation and maturation of dendritic cells during PTB that may compromise the antigen presentation and subsequent immune functions.     

肝癌患者外周血树突状细胞免疫功能的研究

目的研究树突状细胞(DC)表面免疫分子 HLA-DR 及 B_7表达水平及其与 DC 免疫诱导能力相关性,并进一步探讨 DC 免疫功能在宿主免疫功能中的作用.方法以健康成人(n=10)作为对照,检测临床确诊肝癌患者(n=10)外周血 DC 表面免疫分子 HLA-DR 及 B_7表达水平及 DC 免疫诱导能力.结果肝癌患者 DC 表面 HLA-DR 及 B_7表达水平(6.7±1.6及6.1±1.1)明显低于对照组(10.7±1.4及9.6±1.2 VOF,P<0.05),其 DC 体外诱导 T细胞增殖能力(3100±120cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm,P<0.01);以抗 HLA-DR 单抗及抗 B_7单抗完全封闭对照组 DC 表面 HLA-DR 及 B_7。则该 DC 诱导 T 细胞增殖能力(3900±1.5cpm)亦明显低于对照组(6200±90cpm,P<0.05)。结论肝癌患者 DC 表面 HLA-DR 及 B_7表达水平下降与 DC 免疫功能低下密切相关,DC 免疫功能低下可能是肝癌(或许包括其它肿瘤)逃避宿主免疫监视的重要原因。