虾过敏症特异性IgE的ELISA检测方法的研究

目的研制虾过敏症特异性IgE的ELISA检测试剂。方法以纯化的刀额新对虾的2种主要变应原30 kD和33 kD蛋白为抗原分别包被酶标反应板,对抗原的包被浓度和时间、封闭液的选择与封闭时间、酶标二抗稀释度等ELISA条件进行优化。结果 30 kD和33 kD变应原的最适包被浓度分别为200 ng/孔和12.5ng/孔,最适包被条件为37℃孵育3 h,4℃过夜;酶标反应板的封闭以1.0%BSA、4℃封闭过夜为最适条件;HRP标记的羊抗人IgE抗体以1∶1 500为最适稀释度。结论以刀额新对虾的33 kD主要变应原为诊断抗原研制特异性IgE的ELISA检测试剂,适用于临床虾过敏症的实验诊断。     

天津地区食物过敏患者sIgG检测结果分析

目的:了解天津地区过敏患者血清食物过敏原特异性IgG(sIgG)的表达情况,探讨食物不耐受与过敏性皮肤病的关系。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对834例疑似食物变态反应性疾病患者血清中食物过敏原的sIgG抗体进行检测,分析食物过敏原种类特点。结果:834例患者中有638例有1~11种不等的食物过敏原sIgG升高,总阳性率为76.5%,其中存在1~2种食物不耐受的比例最高(58.1%)。在14种食物中,食物过敏原sIgG升高以鸡蛋(51.9%)最多见,其次分别是蟹(21.6%)、虾(19.3%)、牛奶(16.5%),猪肉sIgG阳性率(0.5%)最低。另外,≤14岁患者与>14岁患者对鸡蛋、牛奶、蟹、虾、小麦、西红柿过敏情况差异有统计学意义(均P<0.01)。241例皮肤病患者中有171例食物过敏原检测结果呈阳性,阳性反应率为71.0%。结论:鸡蛋、甲壳类(蟹、虾)、牛奶是食物变态反应性疾病的主要过敏原。食物过敏或食物不耐受的症状与皮肤过敏性疾病关系密切。     

蟹类食物过敏症的ELISA检测试剂的研究

目的研制蟹类食物过敏症的ELISA检测试剂。方法以纯化的中华绒螯蟹主要过敏原蛋白为抗原包被酶标反应板,对包被浓度和包被时间、封闭液的种类与封闭时间、酶标二抗稀释度等ELISA条件进行优化。结果中华绒螯蟹过敏原蛋白的最适包被浓度为100ng/孔,最适包被条件为37℃孵育3h、4℃过夜;酶标反应板的封闭以20g·L-1脱脂奶粉、37℃孵育3h、4℃封闭过夜为最适条件;HRP标记羊抗人IgE抗体以1∶2 500为最适稀释度。结论以中华绒螯蟹的主要过敏原蛋白为诊断抗原制备ELISA检测试剂,适用于临床蟹类食物过敏症的实验诊断。     

牛奶过敏患者血清特异性抗体检测方法构建

目的:建立双抗原夹心酶联免疫法检测疑似牛奶过敏患者血清特异性抗体。方法:将4种牛奶过敏原P1组分、酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白按质量比3:1:4:2混合作为包被抗原制备酶标反应板;同时4种成分分别标记辣根过氧化物酶制备酶标记抗原,经棋盘滴定确定酶标抗体浓度并最终建立双抗原夹心酶联免疫法检测牛奶特异性抗体。以阴性对照在450nm波长处吸光度(A450)的2.1倍为临界点判定阴、阳性结果,并以德国MEDIWISS酶免疫印记检测试剂检测结果为参比标准计算灵敏度与特异度。结果:本文建立的双抗原夹心酶联免疫法批间精密度为5.8%～13.6%,批内精密度为3.7%～11.3%。与参比方法比对,灵敏度为91.7%,特异度为94%,准确度为93.3%。结论:本文建立的双抗原夹心酶联免疫法可检测血清牛奶特异性抗体,用于牛奶过敏患者的体外诊断。     

食物过敏原特异性的IgG抗体浓度检验

目的 检测食物不耐受患者血清中14种食物的特异性IgG抗体浓度.方法 儿童组47例,成人组33例,应用酶联免疫吸附试验检测80例患者血清中14项食物特异性IgG抗体.结果 鸡蛋、牛奶不耐受IgG抗体阳性率明显高于其他食物;儿童组总阳性率明显高于成人组,差异有统计学意义.结论 食物特异性IgG抗体浓度检验显示,食物不耐受现象集中出现于儿童群体,致敏源主要为牛奶和鸡蛋.     

抗蛋白酶3抗体检测及影响因素的研究

目的研究血清样本稀释度、封闭液、孵育条件、洗涤条件及酶标板包被后保存时间对血清抗蛋白酶3(PR3)抗体检测结果的影响。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对159份血清进行抗PR3抗体检测,并用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析确定阳性界限(cut-off)值。结果血清样本最佳稀释度为1∶50;5%脱脂奶粉封闭酶标板能有效地降低本底值;孵育缓冲液中加入牛血清白蛋白及脱脂奶粉比单用磷酸盐缓冲液(PBS)对测定值有明显影响。经ROC曲线分析实验的阳性临界值为正常阴性对照吸光度(A)值的2.5倍,灵敏度和特异性分别为84.62%和98.46%。结论血清抗PR3检测结果受血清样品稀释、封闭液、孵育条件及阳性临界值的选择等多因素的影响。     

促红细胞生成素酶联免疫吸附测定法的研究

目的:建立血清促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)的酶联免疫检测(ELISA)方法,观察其临床应用价值.方法:制备EPO多克隆抗体,异丙醇洗涤处理酶标板以增强其吸附能力,利用交叉反应法选择出抗原、抗体及酶标抗体的最佳的配对工作浓度.反应后,观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标,观察效果.以正常血清为对照组,测定缺铁性贫血组、乳腺癌组,并与放射免疫检测对比.结果:酶标板结合蛋白能力增强.抗体、酶标抗体、抗原最佳工作浓度分别为1∶1 000,1∶6 000,1∶800.灵敏度为0.46 U/L,与生长激素、铁蛋白交叉反应率低;高浓度、低浓度样品平均回收率分别为96.3%、97.3%,批内和批间变异分别为8.31%、7.82%,稳定性好.乳腺癌组、缺铁性贫血组EPO水平均明显高于正常对照组.放射免疫检测及酶联免疫检测检出结果差别无统计学意义.结论:本血清EPO双抗体夹心ELISA法的建立在诊断相关疾病方面有一定的临床应用价值.     

妊娠相关血浆蛋白A定量测定方法的建立

目的:建立人外周血妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)定量酶联免疫测定方法.方法:以生物素化牛血清白蛋白-链霉亲和素间接包被微孔板,将标记有生物素的抗PAPP-A抗体作为捕获抗体,结合标本中的抗原成分;标记有辣根过氧化物酶的抗PAPP-A抗体作为检测抗体,经酶催化底物显色,定量测定人体外周血PAPP-A.结果:所建立的测定方法灵敏度为0.31 mg/L,回收率均在95%～100%之间;该方法线性、稳定性及特异性良好;3份低、中、高浓度的血清标本重复测定10次,批内变异系数(CV)均小于10%,批间CV均小于15%;该方法测量结果与国外同类方法测量结果具有相关性(r=0.982,P<0.05),2种检测方法高度相关.结论:本文采用间接包被技术所建立的人外周血PAPPA固相酶联免疫测定方法灵敏、可靠、稳定性好,与国外同类方法的试剂盒之间相关性较高.     

双抗体夹心免疫-PCR检测弓形虫循环抗原的实验研究

目的探索弓形虫病的病原学检测方法。方法用游离的亲合素将生物素化的二抗和生物素化的腺病毒六邻体基因重组质粒DNA偶联起来,通过PCR扩增标记的DNA检测弓形虫循环抗原,建立了免疫-PCR检测方法;用该方法和ELISA法平行检测感染鼠的血清,对比研究两者敏感性及循环抗原的检出时间。结果免疫-PCR法检测弓形虫循环抗原阳性血清的最大稀释度为1∶2560,ELISA法为1∶10;免疫-PCR法在感染后第2天检测到循环抗原,ELISA法在第4天检测到循环抗原。结论免疫-PCR是一种特异性高、敏感性强的弓形虫循环抗原的检测方法,可作为弓形虫病病原学的诊断方法。     

b型流感嗜血杆菌多糖竞争ELISA检测方法的建立与应用

 目的   建立检测b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多聚核糖基核糖醇磷酸盐(polyribosylribitol phosphate,PRP)的竞争酶联免疫吸附法(competative enzyme-linked immunosorbent assay,cELISA).   方法 以Hib PRP-酪胺(PRP-Ty)为包被抗原,待测PRP为竞争抗原,利用方阵滴定法确定抗原与血清抗PRP抗体的最适反应条件,建立cELISA法并验证其准确性和精密度,并将该法与传统检测法进行比较.   结果 最适包被PRP-Ty浓度为1.30 mg/L,血清抗PRP抗体稀释度为1∶40 000.该法的检测线性范围为6.25～100.00 mg/L,决定系数(R2)为0.99,批内精密度为3.39％～6.53％,批间精密度为8.48％.该法对Hib PRP的检测结果与传统化学法一致.  结论 建立的Hib多糖cELISA法的准确性和精密性良好,可特异性检测Hib PRP.     

天津地区食物过敏性患者sIgG检测结果分析

目的 检测过敏患者血清食物过敏原sIgG,探讨食物不耐受与过敏性皮肤病的关系。方法 应用酶联免疫吸附法（ELISA）对834例疑似食物变态反应性疾病患者血清中食物过敏原的sIgG抗体检测,分析食物过敏原种类特点。结果 834例患者中有638例有1～11 种不等的食物过敏原sIgG升高,总阳性率为76.5 %,其中存在1～2 种食物不耐受的比例最高,占58.15 %。在14 种食物中,食物过敏原sIgG升高以蛋清/蛋黄（51.9%）最多见,其次分别是蟹（21.6%）、虾（19.3%）、牛奶（16.5%）, 猪肉（0.5 %）sIgG阳性比率最低。另外,鸡蛋、牛奶、蟹、虾、小麦、西红柿六种食物阳性率存在年龄的差异（P < 0. 01) 。241例皮肤病患者中有171例食物过敏原检测结果呈阳性,阳性反应率为71.0 %。结论 蛋清/蛋黄、甲壳类(蟹、虾) 、牛奶是食物变态反应性疾病的主要过敏原。某些食物在不同年龄中有很高的不耐受率和不耐受程度,可能是食物过敏的主要原因之一。食物过敏或食物不耐受的症状与皮肤过敏性疾病关系密切。     

小鼠血清乙型肝炎病毒前S1抗体间接ELISA检测方法的建立和验证

目的  建立小鼠血清乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）前S1抗体的间接ELISA检测方法。方法  以合成的HBV前S1（21-47位氨基酸）多肽包被酶标板,利用方阵滴定法确定间接ELISA方法的最适工作条件,对该法的精密度、特异性和灵敏度进行验证,并与商品化试剂盒进行比较。结果  确定最佳抗原包被浓度为1.0 mg/L,血清稀释度为1︰10。该方法的特异性、灵敏度和精密度均符合检测要求。本法与商品化前S1抗体检测试剂盒测定结果的符合率为98.0%。结论  成功建立了HBV前S1抗体间接ELISA方法,可用于小鼠血清中前S1抗体的检测。     

甲基苯丙胺半抗原设计与抗体间接ELISA检测方法的优化

目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化.方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫抗原和包被抗原,...     

Magnetic particle-based chemiluminescence enzyme immunoassay for free thyroxine in human serum

A magnetic particles-based chemiluminescence enzyme immunoassay with high sensitivity, specificity, rapidity, and reproducibility was developed for the determination of free thyroxine in human serum. A competitive assay has been proposed with horseradish peroxidase labeled thyroxine analog. The immunomagnetic particles coated with anti-fluorescein isothiocyanate antibody was used as dispersed solid phase and separation means for the immunoassay. Experimental conditions, such as temperature, the volume of magnetic particles and substrate, incubation time, dilution ratio and other relevant variables upon the immunoassay have been examined and optimized. The proposed method exhibited high performance which the linear range was 1.59–122 pmol L⁻¹ and the detection limit was 0.25 pmol L⁻¹. A coefficient of variance of less than 15% was obtained for both intra-assay and inter-assay precision. The present method has been successfully applied to the analysis of free thyroxine in human serum. The diagnostic accordance rate of the method for normal serum, hyperthyroidism and hypothyroidism are satisfactory. Good correlations were obtained between the results by the proposed method and the commercial radioimmunoassay kit. The present method exhibits good potential in the fabrication of FT₄ diagnostic kits which could be used in the clinical analysis and facilitated the development of automated operation systems in the clinical practice.     

副肿瘤神经症自身抗体检测试剂盒初步应用及意义

目的验证并分析新型PNSNS快速检测试剂盒在临床肿瘤患者中常规检查的应用价值及意义。方法采用德国最新研制PNSNS试剂盒以简便免疫印迹法（western blot）N试常规送检的常见肿瘤患者血清中可能存在的PN．SNS相关抗体，稀释度为1：2000和1：200。结果各相关抗体阳性对照测试条目显示清晰，一小细胞肺癌患者双稀释度下均测定出抗CV：抗体。结论该试剂盒快捷、便利，准确易于临床实际使用。在常见肿瘤中开展PNSNS抗体检测筛查，对于此症诊治干预及提高肿瘤患者生存质量，有积极意义。     

间接ELISA测定血清中RI含量方法的建立

目的：建立检测血清中核糖核酸酶抑制因子（Ribonuclease Inhibitor，RI）含量的问：陵酶联免疫吸附法（EUSA），并分析该方法的特异性和敏感性。方法：用血清样品包被酶标板，兔抗人RI抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为二抗，建立血清RI定量检测的间接EUSA法。结果：所建立的用于血清中RI含量检测的间接ELISA方法特异性好．灵敏度高。结论：间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量，具有良好的灵敏度和稳定性，能够有效的反映出人血清中的RI表达情况。