鼻咽癌染色体3p14的精细等位基因缺失研究

目的　研究鼻咽癌染色体 3p14区域的精细等位基因杂合性丢失 (lossofheterozygosity,LOH)情况 ,并探讨LOH与鼻咽癌临床分期、临床病理和EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)感染的关系。方法　采用 3p14区域 6个精确高密度的微卫星多态性位点 ,对 32例患者鼻咽癌组织进行LOH分析。结果　 32例患者中有 2 3例 ( 71 9% )在至少 1个位点发生LOH ,丢失频率较高的 3个位点是D3S1313( 46 4% )、D3S130 0 ( 5 0 0 % )和D3S1312 ( 44 4% )。在具有丢失的 2 3例患者中 ,12例表现为一个连续的非随机的LOH区域 ,其最小共同缺失区为D3S1313～D3S1312。该区域的LOH与临床分期、EBV感染有明显关系。 30例低分化鳞癌的LOH频率为 70 0 % ,2例泡状核细胞癌均存在 2个位点的LOH。结论　鼻咽癌染色体 3p14区存在较高的LOH率 ,提示在D3S1313和D3S1312之间可能存在尚未克隆的与鼻咽癌发生发展相关的抑癌基因。     

鼻咽癌FRA3B脆性部位的杂合性丢失与临床病理特征的关系

目的 研究鼻咽癌染色体脆性部位FRA3B区域的等位基因杂合性丢失（loss of heterozygosity，LOH）情况，并探讨LOH与鼻咽癌临床病理特征及EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染的关系。方法 选择FRA3B区域的8个微卫星多态标记对40例鼻咽癌组织进行LOH分析。结果 77．5％（31／40）的鼻咽癌在FRA3B脆性部位出现LOH，丢失频率较高的2个位点是D3S1300（55．6％）和D3S2757（50．0％），其共同缺失区为D3S4103-D3S4260。LOH与鼻咽癌的临床病理特征（肿瘤T分期、颈淋巴结转移、临床分期、肿瘤分化程度、肿瘤复发情况及EBV壳抗原IgA抗体滴度）相关，临床Ⅲ～Ⅳ期、低分化鳞癌、肿瘤复发和抗体滴度≥1：40者LOH频率明显高于临床Ⅰ～Ⅱ期、中分化鳞癌、无肿瘤复发及抗体滴度〈1：40者（P〈0．05）。结论 FRA3B脆性部位的LOH为鼻咽癌的频发事件，可能参与了鼻咽癌的发生发展，共同缺失区D3S4103-D3S4260可能是其优先作用的分子靶点。     

微切割喉鳞状细胞癌9p13—23区域微卫星杂合性缺失的研究

目的：探讨喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）在9p13-23区域微卫星（microsatellite)发生杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH)的热点。方法：采用显微切割法从病理切片中挑取肿瘤组织,选取位于9p13-23区域的13个高多态性微卫星引物对42例喉鳞癌组织进行聚合酶链反应和变性凝胶电泳。结果：（1）42例喉鳞癌在9p13-23区域等位基因LOH的总发生率是97．6％（41／42）。在13个微卫星引物中,LOH发生率最高者是位于9p22-23的D9S162（89．5％）,其次是位于9p21的D9S171（80．0％）,与p16基因紧密连锁的D9S1748的LOH发生率仅50．0％,（2）等位基因缺失作图分析发现42例喉鳞癌组织在9p13-23上存在2个明显的LOH较小区域,分别位于9p21的D9S161－D9S171之间和9p22-23的IFNA和D9S162之间。结论：喉鳞癌在9p13-23区域除抑癌基因p16以外可能还存在2个或2个以上候选抑癌基因,这些候选抑癌基因也许和p16-一样与喉鳞癌的发生,发展密切相关。     

鼻咽癌FRA3B脆性部位的微卫星不稳定性分析

目的 探讨鼻咽癌染色体脆性部位FRA3B区域的微卫星不稳定性（Microsatellite Instability,MSI）。方法 选择FRA3B区域附近的6个微卫星多态标记对30例鼻咽癌进行MSI分析。结果 MSI的发生率为63．33％（19／30）,其中复制错误（Replication Errors,RER)阳性率为36．67％（11／30）。MSI频率较高的3个位点为D3S1547（30．8％）、D3S1313（34．6％）和D3S1300（37．5％）。临床Ⅰ－Ⅱ期患者MSI频率高于Ⅲ－Ⅳ期（P＜0．05）。结论 提示FRA3B脆性部位的MSI为鼻咽癌形成过程中的早期分子事件,可能参与了鼻咽癌的发病。     

喉鳞状细胞癌中微卫星的异常改变

目的：从分子生物学水平探究微卫星的不稳定性（MSI）与杂合性缺失（LOH）在喉鳞状细胞癌发病机制中的意义。方法：选择3号,5号及11号染色体的3个微卫星位点采用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳-硝酸银染色方法对40例喉鳞状细胞癌患者手术切除的癌组织及癌旁正常组织进行微卫星分析。结果：40例喉鳞状细胞癌中,35例（87．5％）分别有1～3个微卫星位点发生MSI或LOH。微卫星异常改变发生率最高的位点为D5s592,占70％（28／40）;其次是D3s1228位点,占52．5％（21／40）。结论：在3p14区域及5q23区域附近的抑癌基因参与致癌机制,D3s1228和D5s592的微卫星改变与喉鳞状细胞癌的临床分期相关。     

喉癌及癌前病变等位基因不平衡性的相关研究

目的探讨喉鳞状细胞癌变过程中微卫星DNA等位基因不平衡性的特征及其意义。方法选取染色体3P、9P和17P上6个多态性微卫星位点D3S1234、D9S171、D9S1748、D9S162、INFA和D17S796,利用聚合酶链式反应一简单序列长度多态性一银染技术,对49例喉癌癌前病变和喉癌组织进行等位基因不平衡分析,统计杂合性缺失（10ssofheterozygosity,LOH）和微卫星不稳定性（microsatelliteinstability,MSI）的发生率及其与临床病理特征的相关性。结果6个微卫星标记物LOH和MSI发生率分别为：喉癌癌前病变中单纯过度增生为3．7％和14．8％,轻度不典型增生为10．8％和21．6％,重度不典型增生为26．0％和23．3％;喉鳞状细胞癌为38．7％和21．3％。其中LOH的总检出率在不同病理组间有统计学意义（X2=17．686,P=0．000）,而MSI的检出率统计学意义（X2=0．314,P〉0．05）。不同病理组间D9S171和D9S162单个位点LOH检出率有统计学意义（P=0．022,P=0．025）。在癌前病变早期MSI发生率高于LOH。结论等位基因不平衡可能参与喉癌发生发展,微卫星分析法为喉癌癌前病变的早期诊断提供新的途径。     

鼻咽癌染色体7q31.3—36微卫星位点缺失图谱分析

目的：细胞遗传学研究发现，鼻咽癌染色体７ｑ３２－ｑｔｅｒ常有缺失。为进一步证实鼻咽癌在这个染色体区域的遗传变化。方法：选择位于７ｑ３１３～３６的１３个微卫星标记对２４例鼻咽癌进行等位基因缺失分析。结果：７９％（１９／２４）的鼻咽癌至少在一个位点存在等位基因丢失，高频缺失位点是Ｄ７Ｓ４９５（４６％），Ｄ７Ｓ５００（４５％），Ｄ７Ｓ６３１（３０％）和Ｄ７Ｓ５１４（３５％）。依据缺失图谱分析，一个较小的共同缺失区域可能存在于７ｑ３２的Ｄ７Ｓ４９５和Ｄ７Ｓ５００之间，其遗传距离约为９６ｃＭ。且这个小区域的缺失与鼻咽癌的临床分期无显著相关性（Ｐ＞００５）。结论：这些结果提示，鼻咽癌在７ｑ３２的Ｄ７Ｓ４９５与Ｄ７Ｓ５００之间可能存在与鼻咽癌相关的抑瘤基因。     

微切割喉鳞状细胞癌9p13-23区域微卫星杂合性缺失的研究

目的探讨喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)在9p13-23区域微卫星(microsatellite)发生杂合性缺失(1ossofheterozygosity,LOH)的热点.方法采用显微切割法从病理切片中挑取肿瘤组织,选取位于9p13-23区域的13个高多态性微卫星引物对42例喉鳞癌组织进行聚合酶链反应和变性凝胶电泳.结果①42例喉鳞癌在9p13-23区域等位基因LOH的总发生率是97.6%(41/42).在13个微卫星引物中,LOH发生率最高者是位于9p22-23的D9S162(89.5%),其次是位于9p21的D9S171(80.0%).与p16基因紧密连锁的D9S1748的LOH发生率仅50.0%.②等位基因缺失作图分析发现42例喉鳞癌组织在9p13-23上存在2个明显的LOH较小区域,分别位于99211的D9S161～D9S171之间和9p22-23的IFNA和D9S162之间.结论喉鳞癌在9p13-23区域除抑癌基因p16以外可能还存在2个或2个以上候选抑癌基因,这些候选抑癌基因也许和p16一样与喉鳞癌的发生、发展密切相关.     

微卫星不稳定和错配修复基因异常在喉鳞状细胞癌中相关性研究

目的 研究喉鳞状细胞癌中微卫星不稳定（microsatellite instability,MSI）发生的临床意义及其与错配修复基因（mismatch repair gene,MMR）表达的相关性。方法 50例喉鳞状细胞癌患者的石蜡切片选自北京同仁医院2002年至2003年的手术标本,利用显微切割-多聚酶链反应-单链长度多态性分析-银染的方法进行MSI的检测,统计MSI的发生率及其与临床资料的相关性,应用免疫组织化学观察MMR中hMLH1和hMSH2的表达。五个微卫星位点位于染色体1P,3p,5q,9p,17p上,分别临近BCAR3（breast cancer anti-estrogen resistance3）,FHIT,APC,CDKN2A（p16）,TP53等基因。结果 在五个微卫星位点（D17S796,D3S3544,D5S656,D1S375,D9S162）提供统计信息的病例数分别是44,42,45,44和40例。MSI的发生率低于杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）的发生率。MSI的发生率分别是：D17S796（TP53）20．5％（9／44）,D3S3544（FHIT）14．3％（6／42）,D5S65631．1％（14／45）,D1S375（BCAR3）20．5％（9／44）,D9S162（CDKN2A）15．0％（6／401。MSI的发生与年龄、性别、吸烟史、肿瘤部位、肿瘤分化、TNM分期的关系没有统计学意义（P〉0．05）,但是与肿瘤复发的相关性具有统计学意义（P〈0．01）。MSI的发生与MMR的表达存在相关性（P〈0．01）。MMR阳性细胞和阴性细胞共存在同一张切片内是MMR免疫组织化学的特点。结论 微卫星不稳定和错配修复基因异常可能参与部分喉鳞状细胞癌的发生,微卫星不稳定可能是喉鳞癌复发的特征性指标。     

鼻咽癌第三号染色体短臂等位基因丢失的研究

本文采用微小卫星多态性分析方法，对我国南方及北方鼻咽癌病人共18例在第三号染色体短管选取5个微小卫星标记位点进行分析。结果，18例中有5例肿瘤组织出现1个基因标记位点的等位基因丢失，1例全部5个位点均出现等位基因丢失，所有病人白细胞染色体中均未见等位基因丢失，杂合型丢失（LOH）频率分别为18.8％、6．6％、12．5％、12．5％和13．3％。结果表明，我国南北方鼻咽癌病人在分子遗传水平上无明显差别。本文选用的5个微星多态性基因标记，在鼻咽癌中无明确的特征性改变，但等位基因丢失只出现在肿瘤细胞染色体，而作为正常对照的其自身血液白细胞染色体均未出现丢失，因而仍在一定程度上反映了等位基因丢失与鼻咽癌的关系。     

鼻咽癌染色体3p14的精细等位基因缺失研究

目的 研究鼻咽癌染色体３ｐ１４区域的精细等位基因杂合性丢失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ,ＬＯＨ）情况,并探讨ＬＯＨ与鼻咽癌临床分期、临床病理和ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ,ＥＢＶ）感染的关系。方法 采用３ｐ１４区域６个精确高密度的微卫星多态性位点,对３２例患者鼻咽癌组织进行ＬＯＨ分析。结果 ３２例患者中有２３例（７１．９％）在至少１个位点发生ＬＯＨ,丢失频率较高     

Frequent allelic loss at the FRA3B site in endemic nasopharyngeal carcinoma: association with clinical features and Epstein-Barr virus infection

In this study, we aimed to precisely define the patterns of allelic loss at the FRA3B site in endemic nasopharyngeal carcinoma and to determine whether an association exists between allelic loss, clinicopathological features and Epstein-Barr virus infection. We examined the loss of heterozygosity in 40 cases of nasopharyngeal carcinoma from an endemic area in southern China, using eight high dense, polymorphic, microsatellite markers within or flanking the FRA3B site. Loss of heterozygosity at the FRA3B region was shown in 31 (77.5 per cent) primary tumours. Loss of heterozygosity was found most frequently at the D3S1300 (55.6 per cent) and D3S2757 (50.0 per cent) loci. The common area of deletion was located between the D3S4103 and D3S4260 loci. In nasopharyngeal carcinoma, loss of heterozygosity at the FRA3B/fragile histidine triad locus correlated with the following clinicopathological parameters: tumour T-stage, lymph node status, clinical stage, tumour differentiation and serum antibody titres of immunoglobulin (Ig) A against Epstein-Barr virus capsid antigen. Significantly frequent loss of heterozygosity was observed in nasopharyngeal carcinoma with tumour stages T3 and T4, lymph node metastasis and advanced tumour-node-metastasis staging (III and IV). Very frequent loss of heterozygosity was also observed to correlate with World Health Organization type III nasopharyngeal carcinoma histopathology. We also found that nasopharyngeal carcinoma patients with high titres of IgA against Epstein-Barr virus capsid antigen showed very frequent loss of heterozygosity. Allelic loss at the FRA3B site occurs significantly more commonly in endemic nasopharyngeal carcinoma patients. This suggests that the region between D3S4103 and D3S4260 may represent a preferential molecular target in nasopharyngeal carcinogenesis.     

The role of genetic susceptibility in head and neck squamous cell carcinoma

Our research is an additional genetic study to uncover the molecular mechanisms involved in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) pathogenesis by studying loss of heterozygosity (LOH) and microsatellite instability (MSI) in both premalignant and malignant patients and to highlight the genotype of HNSCC in Upper Egypt. Patients with HNSCC from various parts of the world may have unique genotypes and this is the first genetic study of HNSCC in Sohag 500 KM to the south of Cairo. We performed a prospective study of 41 patients with precancerous and 79 patients with cancerous laryngeal, esophageal, nasopharyngeal, nasal and oral lesions, and 50 controls (The control patients were cases admitted for ear surgery or simple nasal surgery, from whom we took biopsy from mucosal lining of nasopharynx). The present study included 170 individuals who were admitted to the Ear, Nose and Throat department, Sohag University Hospital, Sohag, in Egypt in the period between April 2001 and March 2003. Samples which were taken by punch biopsy were frozen and stored at −80°C and were subjected to histopathological examination. We investigated LOH and MSI by using six microsatellite markers located at chromosomes 3, 5, 9, and 17. The markers used were D3S1286, D9S171, D9S753, D17S654, D17S695, and CFS1-R. LOH was in all premalignant and malignant lesions at 5q33.3-q34 and 13% of Controls. LOH at 17p21 was absent in all premalignant lesions and was found in 53% of malignant lesions and 12.4% of Controls. In premalignant lesions, LOH was at 3pter-3p24.2 (73% of cases), at 9p21 (46%), at 9q21.1-22.3 (37%), and at 17p13 (37%). These percents increased in malignant lesions to 87, 80, 67, and 63%, respectively. They were 14, 19.4, 17, and 19% in controls. Examination of LOH could improve diagnosis, adds additional confidence, in HNSCC by DNA extraction from suspicious lesions in high-risk groups (smokers and alcoholics) and LOH at 3p/9p seems to be of particular value for early detection and definition of progression risk. If there are high percent of LOH at these chromosomes, active intervention should be done (chemoprevention and regular follow up head and neck examination for very early detection and management).     

喉鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体基因微卫星的不稳定性和杂合性丢失

目的　探讨脆性组氨酸三联体 (fragilehistidinetriad ,FHIT)基因微卫星不稳定性(microsatelliteinstability ,MSI)和杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)与喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )发生、发展的关系。方法　采用聚合酶链式反应 简单序列长度多态性 银染技术 ,分析 4 1例喉鳞癌中FHIT基因D3S12 34和D3S130 0位点的MSI及LOH。结果　D3S12 34位点LOH发生率为 4 4 4 % (16 /36 ) ,MSI发生率为 19 4 % (7/ 36 ) ;D3S130 0位点LOH发生率为 36 4 % (12 / 33) ,MSI发生率为 2 4 2 % (8/33)。两个位点总的LOH发生率为 5 2 6 % (2 0 / 38) ,总的MSI发生率为 2 8 9% (11/ 38)。总的LOH发生率与喉鳞癌患者TNM分期、病理分级、淋巴结转移及复发有关 (P <0 0 5 ) ,总MSI发生率与喉鳞癌患者淋巴结转移有关 (P <0 0 5 )。结论　FHIT基因LOH和MSI与喉鳞癌的发生、发展有关 ,并可能为喉鳞癌的早期诊断提供新的途径和依据