单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建

背景：单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法。 目的：利用Cre/Loxp高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体。 方法：分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre重组酶的c66-SV40-cre质粒转染Vero细胞,构建一株带有Loxp位点的重组HSV-1框架载体HSVLoxp。构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT培养基筛选出阳性毒株后用GDNF引物做PCR鉴定,扩增培养后测定滴度。 结果与结论：成功构建pHV-TK-GFP质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01。成功构建HSV-1框架载体HSVLoxp及穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF基因,并将其转移到了HSV-1基因组上,成功构建了表达GDNF的单纯疱疹病毒HSV-1载体,测定其滴度约为2.25×106 IU/mL。     

纤溶酶和透明质酸酶复合诱导兔眼完全性玻璃体后脱离的效果及其安全性

背景：完全性玻璃体后脱离可缓解、控制增生性玻璃体视网膜疾病的发展和预后。目前，解除玻璃体视网膜黏连的主要手段是玻璃体切割术，其存在黄斑、视盘的损伤，视网膜破裂、脱离及神经纤维层和神经节细胞撕脱等并发症。 目的：联合应用纤溶酶和透明质酸酶诱导兔眼形成完全性玻璃体后脱离，评价其效果和安全性。 设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照实验，于2003-04/2004-09在内蒙古医学院实验室完成。 材料：健康成年日本大耳白兔16只（32只眼），纤溶酶和透明质酸酶，平衡盐缓冲液。 方法：采用玻璃体腔内注射，右眼为实验眼，注入1 U纤溶酶+20 U透明质酸酶0.1 mL，左眼为对照眼，注入平衡盐缓冲液0.1 mL。 主要观察指标：注药后15，60 min，1，3，5，7 d裂隙灯、直接、间接检眼镜、+90DVOLK前置镜检查眼部情况。注药后1，3，7 d B超检查玻璃体后脱离发生情况。注药后3 d采用Topcon 荧光造影机观察眼底形态、血管充盈时间、血管有无渗漏情况。注药前、注药后15，60 min，1，3 d进行闪光视网膜电图检查，计算同一眼注药前、后的b波的振幅值。注药后7 d光镜下观察视网膜形态和结构，透射电镜下观察视网膜超微结构变化。 结果：裂隙灯观察显示，对照眼无明显阳性表现。实验眼注药15 min后，全部有明显的睫状充血，房闪、不同程度的玻璃体炎症反应，1 d后发现3例白内障。B超观察显示，对照眼无明显改变，实验眼可见玻璃体程度不同的混浊，3 d后开始有玻璃体后脱离形成（5/16），7 d内全部形成。荧光造影机观察显示，实验眼视乳头周边神经纤维层完整，未见出血、水肿，造影动静脉充盈排空迅速、未见荧光渗漏。闪光视网膜电图检查发现实验眼b 波在15 min时下降，随着观察时间的延长b 波在60 min时恢复；对照眼无明显变化。组织学检查未发现形态和结构的异常。 结论：1 U纤溶酶+20 U透明质酸酶可诱导形成兔眼完全性玻璃体后脱离，其对视网膜的功能有可逆性的影响，此剂量不足以引起视网膜组织结构的破坏。     

微透析活体采样比较静脉和玻璃体内注射万古霉素在兔玻璃体内的通透性

背景：目前眼部药代动力学研究的人体及动物实验采样方法，均是在体外进行，存在诸多的弊端。 目的：利用微透析活体采样技术，建立眼后节清醒动物药代动力学模型，比较静脉注射和玻璃体内注射万古霉素在兔玻璃体内的通透性。 方法：纳入15只兔，制备眼内炎模型。将微透析探针植入清醒兔眼玻璃体内24 h后，随机分成3组，即静脉注射组、玻璃体内注射组及静脉注射+玻璃体内注射组，分别根据不同的给药方式注射万古霉素。高效液相色谱-紫外检测法连续检测兔眼玻璃体万古霉素的浓度，3p97药代动力学软件拟合药动学参数。 结果与结论：静脉注射组兔眼玻璃体内的药物浓度较低，达不到有效的治疗效果；玻璃体内注射组及静脉注射+玻璃体内注射组兔眼给药后72 h，玻璃体内万古霉素的浓度均高于有效治疗浓度。提示微透析方法联合高效液相色谱-紫外检测法，可以连续、在线、活体检测清醒动物玻璃体内药物浓度；单次静脉注射万古霉素后，玻璃体内不能达到有效治疗剂量。     

疱疹病毒性脑炎并发视力下降二例

目的探讨疱疹病毒性脑炎和视力下降的关系。方法对2例疱疹病毒性脑炎患者腰椎穿刺,行脑脊液测压、常规、生化、细胞学及病原学检查及头颅磁共振(MRI)检查;例1患者行眼科超声检查。结果2例患者均在入院治疗过程中出现视力下降。例1为单纯疱疹病毒感染,例2为巨细胞病毒感染。2例患者头颅MRI扫描均有脑实质炎性改变,均涉及岛叶。例1眼科超声提示视网膜坏死及视网膜脱离。结论疱疹病毒感染与急性视网膜坏死综合征及视神经炎有关。对于病毒性脑炎患者应给与足够的抗病毒治疗,期间若出现视力下降,警惕合并急性视网膜坏死综合征及视神经炎。     

改良激素性股骨头坏死动物模型的建立与评价

背景：在股骨头坏死发病机制的研究中,目前仍缺乏有效的动物模型,各种股骨头坏死治疗新方法的发展需要能够模拟人股骨头坏死自然病程动物模型的基础实验。 目的：通过联合应用马血清和低剂量甲基强的松龙建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型。 方法：20只健康日本大耳白兔随机分成2组。实验组动物注入马血清,间隔2周后,再次注入马血清,第1次注射马血清后24 h肌肉注射甲基强的松龙,每隔1周注射1次,共8周。对照组动物单纯注射同等量的生理盐水。于第1次注射马血清前、注射甲基强的松龙后2,4,8周行血液学检查。并分别于注射甲基强的松龙后4,8周行MRI检查、苏木精-伊红染色和电镜观察股骨头缺血坏死情况。 结果与结论：与对照组比较,2,4,8周实验组三酰甘油、胆固醇均明显上升(P < 0.05);激活部分凝血活酶时间则明显下降(P < 0.05)。4周实验组MRI显示部分动物可见局部信号改变,8周时可见皮质下出血;对照组比较,4,8周实验组骨髓周围有坏死的骨髓细胞碎片存在,空骨陷窝率逐渐增加(P < 0.01);4周时实验组个别骨细胞结构模糊不清,或有大空泡;8周时部分骨细胞核破裂、核溶解,凋亡细胞大量出现,骨胶原结构排列紊乱。结果证实联合运用激素和马血清明显提高股骨头缺血性坏死的发生率,能够较好地建立激素性兔股骨头缺血性坏死动物模型。     

血清IL-6在小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型复发感染中的意义

目的探讨血清中IL-6在小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型复发感染中的意义。方法将单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染的小鼠用过热作为应激原，诱发病毒的复发感染。以免疫组化检测病毒抗原的表达观察病毒活化；用放射免疫的方法检测血清中IL-6水平的变化。结果热应激后，疱疹病毒潜伏感染小鼠的部分三叉神经节细胞出现HSV-1抗原阳性表达，12-24h OD值达高峰，之后下降。小鼠血清IL-6水平也出现升高，12h为峰值，24h后开始下降，持续48h。与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IL-6能够诱发单纯疱疹病毒-Ⅰ型的复发感染。     

低剂量激素诱导股骨头缺血性坏死模型的建立

背景：激素性股骨头缺血性坏死的发病机制尚未明确。 目的：单纯应用低剂量激素作用于新西兰大白兔，建立激素性股骨头缺血性坏死模型并观察造模效果。 方法：将30只新西兰大白兔随机分为2组。实验组每周经臀肌注射4 mg/kg甲泼尼龙琥珀酸钠，对照组于相同时间点注射等量生理盐水。同时迫使动物直立进食、饮水，以增加股骨头的负重。 结果与结论：肌注甲泼尼龙琥珀酸钠后，白兔出现不同程度的精神萎靡、活动减少、体质量减轻等。给药4周后，兔血清总三酰甘油及低密度脂蛋白增高、高密度脂蛋白降低(P < 0.05)；血清碱性磷酸酶及总胆固醇分别在给药6，8周后明显增高 (P < 0.05)。苏木精-伊红染色显示；给药4周后，兔股骨头骨髓腔内脂肪细胞体积增大，数量增多；给药6周后，空骨陷窝率增大；给药8周后，骨小梁稀疏变细、结构紊乱，软骨区可见死骨形成及部分性坏死和软骨面塌陷。说明单纯注射低剂量激素可以复制出典型的激素性股骨头缺血性坏死模型。     

构建四氯化碳诱导的家兔肝纤维化模型

背景：四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型常用于抗肝纤维化药物的筛选和评价，但目前很少有四氯化碳诱导兔肝纤维化模型的报道。 目的：建立家兔肝纤维化动物模型，并观察造模过程中动物的肝脏功能和组织病理学变化。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-12/2008-04在解放军成都军区昆明总医院实验动物中心完成。 材料：40只普通级日本大耳家兔，雌雄各半，体质量1.75~2.25 kg，用于建立家兔肝纤维化动物模型。 方法：40只家兔采用随机数字表法分为实验组(n=30)和对照组(n=10)。实验组腹腔注射40 g/L 四氯化碳橄榄油溶液，对照组腹腔注射等量生理盐水。1~3周四氯化碳剂量为0.1~0.2 mL/kg，根据动物的情况每周注射2次；3~6周四氯化碳剂量调整为0.3~0.4 mL/kg；6~8周为0.4~0.5 mL/kg。于注药后4，8，12周分别留取肝组织和血清标本，进行苏木精-伊红染色病理观察和生化检测。 主要观察指标：实验家兔肝脏大体及病理学改变，静脉血生化指标的变化。 结果：纳入日本大耳家兔40只，造模20 d 时，实验组家兔死亡4只，原因主要为急性肝坏死及对药物的耐受性差。40 d 时死亡1只；50 d 腹腔注射因药物误入血管死亡1只。①对照组家兔肝脏外观呈暗红色，病理切片示：肝小叶结构完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。实验组8周时，肝脏呈暗紫色，表面有轻微粟粒样改变，病理切片示：肝细胞点状及点灶状坏死，汇管区炎症细胞浸润，呈早期纤维化症状。12周时，肝脏呈灰褐色，有较明显粟粒样改变。病理切片示：肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，间质纤维组织增生，有炎性细胞浸润，为明显肝纤维化症状。③家兔血生化指标随着注药时间的延长，白蛋白含量及白球蛋白比值逐渐下降，球蛋白、间接胆红素、直接胆红素逐渐升高，谷丙转氨酶、谷草转氨酶前期明显升高后期又有所下降。 结论：长期给予四氯化碳可导致家兔的肝纤维化形成，并有较明显的阶段性变化。     

激素性股骨头缺血性坏死兔模型的构建☆

背景：成人股骨头缺血性坏死可导致股骨头塌陷和髋关节破坏，但其真正的病因和发病机制尚未完全明了。因此建立实验性动物模型是目前研究激素性股骨头缺血性坏死的重要手段之一。 目的：建立兔激素性股骨头缺血性坏死模型，探讨其可能的发病机制。 方法：将健康成年新西兰白兔以抽签法随机分成4组。对照组，注射生理盐水；激素组，注射甲基泼尼松龙3次；单次内毒素组，静脉注射大肠杆菌内毒素24 h后，立即注射甲基泼尼松龙3次；双次内毒素组，大肠杆菌内毒素注射24 h后重复给药1 次，随后注射甲基泼尼松龙3次。造模前及造模后行X射线片、MRI 检查及组织学检查、透射电镜观察，并计算空骨陷窝率。 结果与结论：造模第8周时激素组、单次内毒素组、双次内毒素组空骨陷窝率较对照组明显增高(P < 0.01)，并且双次内毒素组空骨陷窝率明显高于激素组和单次内毒素组(P < 0.01)。双次内毒素组较激素组及单次内毒素组股骨头出现坏死的时间更早、坏死的效果更显著，并且随着时间的推移股骨头坏死的效果越来越明显。说明在相同的实验条件下，实施双次内毒素与激素联合诱发股骨头坏死出现最早、坏死效果最明显，且骨陷窝空虚率随时间的延长而增加。 关键词：股骨头缺血性坏死；甲基泼尼松龙；激素；内毒素；动物模型；骨陷窝     

构建兔菜花耳模型和曲安奈德对耳郭的影响

背景：菜花耳主要是皮下的纤维组织增生，目前还没有找到一种令人满意的动物模型，曲安奈德常用于治疗增生性瘢痕和咬肌肥大，其是否也可以诱导其增生的组织萎缩呢？ 目的：构建菜花耳兔模型并观察注射曲安奈德对其增生性瘢痕的修复和治疗作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验；组织学观察，于2008-08/2009-02在广西中医学院动物实验中心进行。 材料：健康新西兰兔10只，耳郭没有异常，雌雄不限；曲安奈德注射液为昆明积大制药有限公司产品(国药准字53021604)。 方法：10只健康、耳郭正常的新西兰兔通过反复重物撞击耳郭造模，6轮实验后成功构建菜花耳模型，随机分为对照组和实验组，每组5只兔子(10只耳郭)。对照组在增厚的耳郭内注射利多卡因0.3 mL，实验组注射曲安奈德40 mg (1 mL)和利多卡因1 mL混合液0.3 mL，每3周1次，共3次，游标卡尺测量耳郭的厚度，实验结束进行组织病理检查。 主要观察指标：①两组兔大体观察。②耳郭厚度。③耳郭组织病理学观察。 结果：6轮实验后，全部的耳郭显著增厚变硬，造模成功，两组耳郭厚度差异无显著性意义，注射后实验组显著比对照组变薄变软。实验结束的组织病理检查，对照组的组织特点同菜花耳，皮下大量的纤维组织增生，组织致密；实验组可见药物残留，其周围的纤维组织变得疏松，有的出现变性、玻璃样变、胶原断裂和钙盐沉积；而离药物较远的位置纤维组织增生、更致密，同菜花耳治疗前。 结论：通过反复重物坠落撞击兔耳可构建菜花耳模型，局部注射曲安奈德可修复模型耳郭变薄变软。