丙型肝炎病毒抗体的两种检测方法结果比较

目的 比较双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法与间接ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)灵敏度和特异性,为无偿献血的血液筛查提供参考依据.方法 采用双抗原夹心ELISA法和间接ELISA法分别对1500份无偿献血者标本(经血液筛查抗-HCV阴性标本1416份,抗-HCV阳性标本84份)进行检测,记录标本结果与丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的符合性,评价两种检测方法的差异.结果 双抗原夹心ELISA法检测84份抗-HCV阳性标本的灵敏度为97.6%(82/84),间接ELISA法的阳性检出率为85.7%(72/84),双抗原夹心ELISA法灵敏度高于间接ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心ELISA法的特异性为100.0%(1416/1416),高于间接ELISA法的85.9%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 双抗原夹心法的灵敏度和特异性优于间接法,可降低间接ELISA法引起的假阳性,减少血液不必要浪费,同时也避免了献血者淘汰.     

双抗体夹心ELISA定量检测血清Cap43蛋白方法的建立与评价

目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法。并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异，以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测。结果双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRGl多克隆抗体（PcAb）、Ⅰ抗兔抗人Cap43PcAb以及辣根酶（HRP）标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为1：750，1：1200，1：350，标准蛋白曲线的回归方程为：y=0．53566＋0．00046x，R2=0．9939，P〈0．0001。应用该方法初步检测结果显示：肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组（P〈0．01），且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组（P〈0．01）。该方法的敏感度（SE）为84．51％，特异度（SP）为35．00％。结论建立了一种敏感度高，重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法；Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达，且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组。     

血清学方法检测SARS病毒抗体的比较

目的：比较血清学方法(间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法)对SARS患者特异性抗体的检出情况。方法：采用间接法和双抗原夹心法分别检测健康人、发热非SARS患者、不同时期的SARS患者血清中的特异性抗体水平。结果：双抗原夹心法的阳性检出率为73．6％，而间接法的阳性检出率为57．5％，前者对SARS患者各时期特异性抗体的阳性检出率高于间接法，特别是住院第1周的阳性检出率为30％，而间接法对住院第1周的阳性检出率为0％。结论：双抗原夹心法检测SARS患者特异性抗体优于间接法。     

ELISA法检测HBsAg错误结果分析

临床多采用ELISA双抗体夹心法,检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg),其基本原理:包被抗原或抗体后,通过抗原抗体免疫学反应使酶标抗体结合到载体上,使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离,洗去游离的酶标抗体,加人底物,生成有色产物,在一定温度下一定时间后终止反应,根据颜色深浅进行定性或定量分析.在ELISA方法中,应用辣根过氧化物酶(HRP)作为标记酶最普及,用此方法检测HBsAg时,常出现一些错误的结果即假阳性或假阴性,本文对产生假阳性或假阴性的错误结果进行分析如下.     

恶性肿瘤患者血清细胞因子检测的临床意义

目的探讨肿瘤患者Th亚群（Th1/Th2）的变化与免疫功能的关系以及化疗对它的影响。方法采用双抗体夹心ELISA法检测58例恶性肿瘤患者化疗前和化疗后、50例健康体检者Th1和Th2两类细胞因子IFN-r、IL-2、IL-6和IL-10的水平,并进行相互比较。结果血清中Th1类细胞因子（IFN-r、IL-2）在化疗前、化疗后及健康体检者的水平渐进性升高,而Th2类细胞因子（IL-6、IL-10）呈渐进性下降,p〈0.05,并与病期相关。结论恶性肿瘤患者Th亚群（Th1/Th2）的变化与免疫功能密切相关,化疗可缓解肿瘤对机体造成的免疫抑制,检测Th1/Th2类细胞因子的水平,可更合理安排病人的治疗。     

两种方法检测自身免疫抗体的比较

目的：应用免疫印迹技术（IBT）与斑点ELISA法同时对自身免疫抗体进行检测,对两种方法进行方法学评价。方法：66例经临床确诊为自身免疫性疾病的患者血清同时用两种方法检测。结果：IBT法阳性率为60．6％;“斑”法阳性率为72．7％,在统计学上并无显著差异（P＞0．05）。重复试验,IBT法的重复率为98．5％;“斑”法的重复率为83．3％,两法有明显差异（P＜0．01）。结论：以两法同时对自身免疫抗体进行检测,对自身免疫性疾病的诊断分型,疗效观察有一定的意义。     

卵清蛋白多克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量。方法 建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),对该方法的反应条件进行优化,确定定量范围及检测下限,并对重复性、特异性和准确度进行验证。结果 建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1%BSA+1%蔗糖。该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313-20.000ng/ml,定量下限为0.078ng/ml。重复性好,板内变异系数为3.428%~25.953%,板间变异系数为5.375%~ 27.614%。特异性好,准确度高,检测结果与试剂盒检测结果符合率为91.43%~102.96%。稳定性好,预包被的酶标板冻存于-20℃,半年内检测样本变异系数为1.976%~14.409%。结论 建立了快速、简便、低成本的OVA定量检测方法,可用于鸡胚流感疫苗中OVA定量检测。     

肺癌患者血清可溶性B7-H4分子的检测及其临床意义

目的:分析肺癌患者血清中可溶性分子B7-H4的水平变化并探讨其临床意义。方法:确诊为肺癌的患者37例,用ELISA夹心法检测患者治疗前后血清中的B7-H4水平变化,用微粒子化学发光法测定患者治疗前后肿瘤抗原125(CA125)水平的变化,分析比较B7-H4与CA125水平变化与患者病理类型及其诊断的相关性;选取30例健康人群血清作为对照。结果:与健康组相比:治疗前患者血清中B7-H4水平(1.53±0.22)μg/L明显高于治疗后的水平(0.96±0.17)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05);同时也发现腺癌患者血清B7-H4水平(2.05±0.33)μg/L远高于小细胞癌、大细胞癌和鳞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。B7-H4分子的敏感度为62.2%低于CA125分子的75.7%,而二者联合使用时的敏感度可达91.9%。肺癌患者血清B7-H4水平与CA125水平呈正相关(P<0.05)。结论:肺癌患者血清中B7-H4水平变化与病理类型密切相关,在腺癌的诊断上B7-H4分子可作为一个重要的参考指标,而在鳞癌的诊断上不建议采用该分子作为一个诊断指标。     

重组人源细胞珠蛋白单抗制备及检测方法建立

目的 制备重组人源细胞珠蛋白(recombinant human Cytoglobin,rhCygb)单克隆抗体,并建立检测该蛋白双抗体夹心ELISA法,为下一步研究rhCygb药代动力学做准备.方法 用纯化的rhCygb免疫BALB/c小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法获得抗rhCygb的单克隆抗体杂交瘤细胞,间接E...     

定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.方法:采用Protein A亲和层析法纯化自制的抗ProMBP单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western blot对纯化抗体特性进行鉴定;利用简易过碘酸钠法对抗ProMBP mAb进行标记辣根过氧化物(HRP)后行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)/ProMBP抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收性实验评价ELISA方法,初步对人血清中的ProMBP水平进行检测.结果:最佳配对组合为抗ProMBP mAb 4C6E5B9和HRP标记的抗ProMBP mAb 9G4A6G10,最适工作浓度分别为2.5 μg/ml和1:3 000,该方法的批内、批间变异系数分别为4.6%～6.2%和4.6%～10.5%,灵敏度达2.0 ng/ml,回收率为92%～113%.正常非妊娠血清、9～11周妊娠血清、15～17周妊娠血清ProMBP水平分别为(26.37±2.90)ng/ml、(357.71±33.60)ng/ml和(1088.77±58.13)ng/ml.结论:建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法.     

非小细胞肺癌hnRNP A2/B1免疫组化及定量测定的临床意义

目的:探讨hnRNP A2/B1对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值及与NSCLC临床病期、淋巴结转移的关系.方法:标本系胸外科手术切除的石蜡包埋组织或新近手术切除标本,其中原发性NSCLC 39例、肺良性肿瘤22例、正常肺50例,各组年龄、性别均具可比性.采用免疫组化S-P法和流式细胞术(FCM)分别检测肺组织hnRNP A2/B1的表达及细胞内hnRNP A2/B1的含量.结果:(1)NSCLC组hnRNP A2/B1免疫组化表达阳性率(74.4%)显著高于肺良性肿瘤组(40.1%,P<0.01)及正常肺组(38.0%,P<0.01),NSCLC组中有淋巴结转移者阳性率(94.7%)明显高于无淋巴结转移者(55.0%,P<0.05);(2)NSCLC细胞内hnRNP A2/B1定量测定含量(67.25±14.02,阳性率82.1%)显著高于肺良性肿瘤细胞(31.79±6.79,阳性率4.5%,P<0.01)及正常肺细胞(30.15±5.85,阳性率0,P<0.01),NSCLC组中有淋巴结转移者阳性率(100%)明显高于无淋巴结转移者(65.0%,P<0.05).结论:hnRNP A2/B1对NSCLC的诊断、病情预测、判断淋巴结转移的程度均具有重要的临床价值.FCM与免疫组化方法相比,具有阳性率高、简便、快速等优点.     

乳腺癌组织中Cx43 表达水平及其 临床意义的Meta 分析

目的 Cx43 被发现与多种恶性肿瘤相关,但在评估乳腺癌预后及临床病理意义上的价值尚 存在争议,该研究通过采集国内外有关文献并对Cx43 和乳腺癌的关系进行系统评价。方法 计算机检索 PubMed、Embase、Web of Science、循证医学数据库、中国知网及万方数据库,并加以文献追溯的手段收集 整理大量乳腺癌组织中Cx43 表达及其临床病理特征相关的患者进行对照研究,检索时限从建库至2017 年 4 月。根据纳入与排除准则对文献制定挑选并采用纽卡斯尔渥太华量表对文献进行质量评价,采用Review Manager 5.3 软件对数据进行Meta 分析。结果 该研究共纳入14 篇文献对照研究,其中乳腺癌组织标本有 632 例,正常乳腺组织标本有240 例,乳腺增生组织标本有167 例。Meta 分析结果显示：① Cx43 在乳腺癌 组织的阳性表达率低于正常乳腺组织（P <0.05）;② Cx43 在乳腺癌组织中阳性表达率低于乳腺增生组织 （P <0.05）;③乳腺癌TNM Ⅲ、Ⅳ期中Cx43 的阳性表达率低于TNM Ⅰ、Ⅱ期（P <0.05）;④ Cx43 在乳腺 癌组织学分级Ⅲ级中的阳性表达率低于组织学分级Ⅰ、Ⅱ级（P <0.05）;⑤ Cx43 在有淋巴结转移的乳腺癌 组织中的阳性表达率与无淋巴结转移无差异（P >0.05）。结论 目前研究证明,Cx43 与乳腺癌的各项临床特 征有密切联系, 参与了乳腺癌的进展。     

镍接触工人中Cap43蛋白的过表达:一个潜在的筛查指标

目的通过检测钙激活蛋白43(Cap43)在镍接触工人尿液及血清中的蛋白表达情况,探讨Cap43表达在镍接触人群与非镍接触人群之间有无差异,及其表达高低与镍接触检体标本之间的关系。方法采用双抗夹心ELISA法检测150例镍接触工人[尿镍超标(>0.17μmol/ml)17例,尿镍未超标133例]及10例正常人群尿液及血清中Cap43的表达。结果尿液中Cap43的表达:尿镍超标组为(1.138±0.236)ng/ml,尿镍未超标组为(0.987±0.098)ng/ml,正常人群组为(0.609±0.012)ng/ml。血清中Cap43的表达:尿镍超标组为(2.4145±0.3475)ng/ml,尿镍正常组为(1.5614±0.5101)ng/ml,正常人群组为(1.2127±0.4135)ng/ml。结论Cap43表达与镍接触直接相关,尿中Cap43含量高低与血清中Cap43含量有正相关关系(r=0.7755,P<0.01),Cap43检测应以血清标本为宜,本实验结果为Cap43蛋白作为镍接触人群一个普查和疾病预防指标提供了有力的依据。     

转移抑制因子1和钙激活蛋白43在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨转移抑制因子1（MTSS1）和钙激活蛋白43(Cap43)在食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中表达,阐明其与食管鳞癌临床病理特征间的关
系。方法：收集食管鳞癌标本80例和癌旁正常组织30例,采用免疫组织化学SP染色法和RT-PCR法检测食管鳞癌组织和正常组织中MTSS1、Cap43蛋白和mRNA的表达情况,分析MTSS1和Cap43表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系,分析两者在食管鳞癌组织中表达的相关性。结果：免疫组织化学SP染色法,MTSS1和C
ap43在癌细胞的胞浆/细胞膜呈现棕黄色,MTSS1在正常组织和食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为83.3%（25/30）和21.3%（17/80）,Cap43在正常组织和食管癌组织中的阳性表达率分别为16.7%（5/30）和76.3%（61/80）,组间比较差异均有统计学意义（P<0.01）。RT-PCR法检测,MTSS1 mRNA在正常组织和食管鳞癌组织中表达水平分别为0.703±0.085和0.295±0.065,而Cap43 mRNA在正常组织和食管鳞癌组织中的表达水平分别为0.236±0.052和0.693±0.078,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。食管鳞癌组织中MTSS1和Cap43的表达与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期有关联（P<0.05）,而与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小和组织类型均无关联（P>0.05）;MTSS1与Cap43的表达呈负相关关系（r＝－0.457,P<0.05）。结论：食管鳞癌组织中MTSS1的低表达和Cap43的高表达可能促进
了肿瘤的浸润和转移,二者之间的平衡失调可能是食管鳞癌侵袭和转移的重要机制之一。     

缝隙连接蛋白43 (Cx43)与神经炎症的研究进展

 缝隙连接蛋白43(connexin43, Cx43)是中枢神经系统(central nervous system, CNS)中含量最丰富的连接蛋白,主要分布于星形胶质细胞,以缝隙连接(gap junction, GJ)和半通道(hemichannel, HC)的形式存在,分别介导细胞间和细胞与外环境间的信息交流。随着人口的老龄化,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)、脑卒中及术后认知功能障碍等疾病的发生率越来越高,神经炎症是这些CNS疾病的一个共同特征,涉及到白细胞聚集、胶质细胞激活、炎性因子释放等,该过程需要高效的信息交流,研究表明Cx43在该过程中发挥着不可忽视的作用,主要表现为GJ抑制和HC活性增加并影响神经功能。本文重点综述Cx43与神经炎症的关系,为多种CNS疾病的治疗提供新的靶点。     

间隙连接蛋白43与疾病关系的研究进展

间隙连接是间隙连接蛋白构成的一种细胞间连接方式。相邻细胞间通过间隙连接介导的细胞间隙连接通讯进行信息和能量的交换,参与细胞间物质交换的代谢偶联和电信号传递的电耦联,对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程有重要的调控作用。Cx43是间隙连接蛋白成员之一,与心血管疾病、肿瘤、创伤愈合及某些生殖、消化、神经系统疾病的病理及生理过程有着密切联系。现就国内外Cx43与一些疾病的关系的研究作一综述。     

Cx43在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织中Cx43蛋白及mRNA的表达及意义.方法 应用免疫组织化学、Western blot和原位分子杂交观察48例非小细胞肺癌（NSCLC）及22例癌旁正常肺组织中Cx43蛋白及mRNA的表达.结果 ①癌旁正常肺组织和NSCLC组织中Cx43蛋白阳性表达率分别为90.91%和47.92%;Cx43mRNA的阳性表达率分另别为95.45%和60.42%.NSCLC组织中Cx43蛋白及mRNA阳性表达率均低于正常肺组织（P均＜0.05）.②有淋巴结转移组Cx43蛋白及mRNA阳性表达率分别为16.00%和20.00%;无淋巴结转移组两者的阳性表达率分别为69.57%和78.26%.两两比较差异均有统计学意义（P均＜0.05）.③Western blot显示NSCLC组织中Cx43的蛋白表达水平低于正常肺组织,有转移组中Cx43的蛋白表达水平低于无转移组,各组比较差异均有统计学意义,P均＜0.05.结论 Cx43蛋白和mRNA低表达与非小细胞肺癌发生和转移有关.     

缬沙坦抑制缺氧时肥大心肌细胞凋亡及Cx43表达下调

目的探讨缬沙坦对缺氧环境下肥大心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法培养心肌细胞或在诱导肥大后分别缺氧24h,采用免疫荧光方法和Western-blot法分别检测缝隙连接蛋白Cx43总蛋白表达变化,同时观察缬沙坦对缺氧状态下肥大心肌细胞Cx43表达的影响。结果缺氧24h后可致正常心肌细胞Cx43表达下调13%（P〈0.01）,心肌细胞经血管紧张素Ⅱ诱导48h后可出现肥大,而肥大心肌细胞比正常心肌细胞在缺氧24h后Cx43总蛋白表达显示出更明显的下调（P〈0.01）,缬沙坦可抑制缺氧状态下肥大心肌细胞的凋亡和Cx43总蛋白表达的下调。结论缺氧可导致心肌细胞Cx43表达下调,而肥大心肌细胞在缺氧时总蛋白下调更为明显,而缬沙坦可部分抑制肥大心肌细胞缺氧时的凋亡和Cx43总蛋白下调,这可能与缬沙坦改善缺氧时肥大心肌的电生理重构和恶性心律失常的机制有关。     

GAP-43对脊髓全横断损伤后的运动功能的影响

目的通过制备完全性脊髓损伤成年SD大鼠模型，观察脊髓全横断损伤后运动功能和断端脊髓的病理学改变，探讨生长相关蛋白GPA-43对脊髓损伤后的修复作用，为临床治疗提供实验依据．方法咬除T7-T8棘突及相应椎板，用剪刀将脊髓完全横断，制成脊髓损伤模型．雌性8周龄sD大鼠75只，随机分为三组：GPA-43抗体组，GPA-43抗原组，对照组，每组25只．使用直接注射法将GPA-43抗原和GPA-43多克隆抗体分别注入抗原组和抗体组大鼠脊髓的断端，观察各组大鼠的肢体功能恢复情况．用BBB评分法评价不同的时段运动功能，HE染色病理学检查脊髓组织形态学变化．结果三组在运动功能上相比均具有显著差异，对照组在不同时间运动功能评分最低，抗原组评分最高，脊髓损伤区出现明显的病理改变；抗体组早期恢复出现明显的停滞状态，但随后能很快恢复，说明多克隆抗体对神经组织不产生不可逆改变．结论GAP-43对脊髓损伤的恢复有一定的疗效．