诱导体外扩增的小鼠骨髓CD34+造血细胞分化为树突状细胞

诱导体外培养扩增后的小鼠骨髓ＣＤ３４＋造血细胞分化为树突状细胞（ＤＣ）。方法Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠骨髓ＣＤ３４＋细胞采用血管内皮细胞共培养方法进行体外扩增，扩增后的ＣＤ３４＋细胞经磁性细胞分选技术纯化，并用ＧＭ┐ＣＳＦ等细胞因子诱导其向ＤＣ分化。结果小鼠骨髓ＣＤ３４＋造血细胞不论是否经过体外培养均可被诱导分化为ＤＣ，后者具有典型的树突状形态特征，表达高水平的ＭＨＣⅠ、Ⅱ类抗原和ＣＤ８６共刺激分子，在混合白细胞反应（ＭＬＲ）中能有效地刺激静息期Ｔ淋巴细胞增殖。结论小鼠骨髓ＣＤ３４＋细胞经体外培养扩增后仍然具有向ＤＣ分化的能力，通过骨髓细胞体外培养扩增可以显著提高ＤＣ产量。     

脐血造血细胞的体外扩增及分化特征

目的：了解造血生长因子的不同组合对人脐血ＣＤ３４＋细胞的扩增效应及分化特性。方法：采用人脐血单个核细胞（ＭＮＣ）经ｒｈＩＬ－１,ｒｈＩＬ－３,ｒｈＩＬ－６,ｒｈＧ－ＣＳＦ,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ和ｒｈＳＣＦ的不同组合进行体外扩增培养,动态观察了不同细胞因子组合对有核细胞总数的扩增数量,应用流式细胞技术（ＦＡＣＳ）动态分析了造血细胞的表面标志,并对液态扩增后造血细胞的粒－巨噬集落形成率（ＣＦＵ－ＧＭ）进行了动态观察。结果：经上述６种细胞因子培养２０ｄ,有核细胞总数增殖４４倍,液态扩增培养８ｄ后,ＣＦＵ－ＧＭ比原代ＭＮＣ增加１４．７４倍,扩增１８ｄ后,ＣＦＵ－ＧＭ明显减少,仅为原代ＭＮＣ的６．４２倍,且集落小于前者。扩增培养至６～８ｄ时,ＣＤ３４＋细胞总数是原代 ＭＮＣ的１２７．７９～１９６．４０倍,１８ｄ时下降至１０１．５１倍。结论：外源性造血生长因子可使脐血ＣＤ３４＋细胞及ＣＦＵ－ＧＭ产生明显的扩增效应。     

CIK的体外增殖及体内外杀瘤活性的实验研究

目的:从人骨髓造血前体细胞体外培养扩增树突状细胞(dendritic cells,DCs),测定其表型及T细胞刺激活性.方法:采用Mini-MACS分离技术,从正常人骨髓、脐血分离CD34~ 造血干细胞,体外以重组hGM-CSF,hTNF-α,hIL-3诱导培养2周,流式细胞术检测扩增细胞的表面表型及细胞内IL-12的表达,体外同种混合淋巴细胞反应检测扩增DCs的T细胞刺激活性.结果:从正常人骨髓、脐血分离得到高纯度(>90%)的CD34~ 造血干细胞,经重组hGM-CSF,hTNF-α的共同诱导培养,扩增得到大量DCs,加人hIL-3可以进一步增加DCs产量;FACS检测表明,扩增的DCs表达HLA-DR,CD40,CD54,CD80,CD86分子,细胞内有hIL-12的P35,P40亚基的表达;与外周血单核细胞培养生成的DCs相比,由CD34~ 干细胞扩增的DCs具有更强的激发同种T细胞增殖的能力.结论:人CD34~ 干细胞体外经诱导培养,可以生成大量功能成熟的DCs,从而为进一步开展DCs的基础及临床研究打下了基础.     

短程大剂量格拉诺赛特动员APBSC移植(附1例报告)

目的：报导短程大剂量格拉诺赛特（ｒｈＧ－ＣＳＦ）动员外周血造血干细胞,进行自体外周血造血干细胞移植（ＡＰＢＳＣＴ）治疗急性白血病。方法：ｒｈＧ－ＣＳＦ,５００μｇ／ｄ皮下注射４天,第５、６天单采外周血单个核细胞（ＭＮＣ）,行ＣＦＵ－ＧＭ培养,ＣＤ３４＾＋细胞由流式细胞仪检测。于ＭＡＣ方案处理,回输自体外周围血造血干细胞（ＡＰＢＳＣ）。结果：动员后ＣＦＵ－ＧＭ明显增高,ＣＤ３４＾＋细胞增多,骨髓造血     

白细胞介素18基因修饰的树突状细胞的表型分析及其免？…

目的：研究ＩＬ－１８基因修饰后的树突状细胞（ＤＣ）的表型和功能的变化。方法;以含ＩＬ－１８基因的重组腺病毒体外转染小鼠骨髓来源的ＤＣ,ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－１８分泌水平,以ＲＴ－ＰＣＲ检测ＩＬ－１８ｍＲＮＡ表达,以ＦＡＣＳ法分析其ＤＣ表型变化,采用（＾３Ｈ）－ＴｄＲ检测其ＭＬＲ的变化。     

CpG-ODN对树突状细胞的分化成熟的影响

目的：探讨ＣｐＧ－ＯＤＮ对小鼠骨髓来源的树突状细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ,ＢＭＤＣ）分化成熟的影响。方法：利用合成的含非甲基化ＣｐＧ基序的寡核苷酸（ＧｐＧ ｍｏｔｉｆ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＣｐＧ－ＯＤＮ）,通过酶切鉴定ＤＮＡ制品ＣｐＧ基序甲基化程序,ＦＡＣＳ分析ＤＣ表型和内吞作用的变化,ＥＬＩＳＡ检测ＤＣ培养上清     

细胞因子对造血干/祖细胞在体外扩增作用的研究进展

造血干／祖细胞为一类具有自我更新和潜在的重建造血细胞第能力的细胞。ＣＤ３４＾＋造血祖细胞具有良好的体外扩无反应,来自于骨髓（ＢＭ）,动员外周血及脐带血的ＣＤ３４＾＋细胞在干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－２、３、４、６、７、９、１０、粒单集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、粒系集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、促红细胞生成素（ＥＰＯ）、ＰＩＸ３２１等细胞因子的没组合刺激下,经８－１４ｄ即可扩增细胞总数     

树突状细胞提呈凋亡癌细胞抗原的实验研究

目的：建立从人外周血诱导扩增树突状细胞（ＤＣ）及吞噬凋亡小体负载抗原。方法：从正常人外周血分离获得单核细胞,加入５０ｍｇ／ｍｌ ｒｈＧＭ－ＣＳＦ,１０００ｎｇ／ｍｌ ｒｈＩＬ－４,隔天一次,共４次,培养第三天,加入γ射线照射过的胆管癌细胞,再继续体外培养一周后,用树突细胞富集柱收集ＤＣ。结果：见ＤＣ高表达共刺激分子Ｂ７和ＣＤ１ａ,表面具有典型不规划突起,ＤＣ还可捕捉凋亡小体、吞噬凋亡小体。负载抗原     

树突状细胞诱导抗人肝癌细胞系的肿瘤免疫

目的 以树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导抗肝瘤免疫。方法 自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ对ｅｐＧ２细胞,ＢＥＬ－７４０２细胞、ＳＧＣ－７９０１细胞、ＬＯＶＯ细胞及ＨＯＳ－     

低剂量环磷酰胺增强MHC I类限制性肿瘤抗原多肽冲击致敏 …

目的：研究低剂量环磷酰胺（Ｃｙ）联合ＭＨＣ Ｉ类限制性肿瘤抗原多肽Ｍｕｔｌ致敏、白细胞介素２（ＩＬ－２）基因修饰的树突状细胞（ＤＣｓ）对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理。方法：制备小鼠骨髓来源的ＤＣｓ,用转移性Ｌｅｗｉｓ肺癌特异性多肽Ｍｕｔｌ预激经ＩＬ－２基因修饰的ＤＣｓ联合低剂量Ｃｙ治疗转移性肺癌小鼠。通过ＦＡＣＳ分析其脾细胞内Ｔ淋巴细胞比例的变化,＾５１Ｃｒ释放法检测ＣＴＬ和ＮＫ细胞杀伤     

肺癌可溶性抗原联合超抗原修饰致敏ＤＣ诱导抗瘤免疫的研究

目的　观察经肺癌肿瘤可溶性抗原（ＴＳＡ）和超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）联合修饰致敏树突状细胞（ＤＣ）体外诱导抗肺癌的免疫效应。方法　３ｍｏｌ／Ｌ氯化钾提取法获得人肺癌细胞ＧＬＣ ８２的可溶性抗原;从人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中诱导扩增ＤＣ,并用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测表型;以肺癌ＴＳＡ和ＳＥＡ联合修饰致敏的ＤＣ、单纯肺癌抗原致敏的ＤＣ和未经抗原修饰的ＤＣ分别与同种异体外周血Ｔ淋巴细胞共同孵育,刺激Ｔ淋巴细胞活化增殖（作为效应细胞分别称为ＴＳＡ-ＳＥＡ-ＤＣＬ、ＴＳＡ-ＤＣＬ、ＤＣＬ）,直接活细胞计数法观察增殖倍数;ＭＴＴ法检测不同ＤＣ∶Ｔ淋巴细胞比例的效应细胞对靶细胞ＧＬＣ-８２的体外杀伤效应。结果　诱导出高表达ＣＤ１ａ、ＣＤ８０、ＨＬＡ-ＤＲ的ＤＣ,光镜下具有典型的ＤＣ特性;联合抗原修饰后的ＤＣ具有较强的免疫刺激活性,少量致敏ＤＣ即可强烈激发Ｔ细胞的增殖;ＴＳＡ-ＳＥＡ-ＤＣＬ对靶细胞ＧＬＣ-８２的杀伤率明显高于ＴＳＡ-ＤＣＬ及ＤＣＬ;联合抗原修饰的ＤＣ以１∶１００与Ｔ淋巴细胞共孵后的杀伤肿瘤细胞效应最强。结论　经肺癌ＴＳＡ和ＳＥＡ联合修饰致敏的ＤＣ可强烈激发同种异体Ｔ淋巴细胞活化增殖;肺癌ＴＳＡ联合超抗原ＳＥＡ诱导的ＤＣ疫苗对肺癌细胞有高效杀伤作用,经肺癌ＴＳＡ与超抗原ＳＥＡ联合修饰ＤＣ的活性明显强于单用肺癌ＴＳＡ。     

通关藤提取物体外对人正常免疫细胞及造血干细胞的影响

目的　观察通关藤提取物（消癌平注射液）对正常免疫细胞及造血干细胞功能的影响。方法　采用ＭＴＴ法检测通关藤提取物对正常人淋巴细胞以及ＣｏｎＡ、ＬＰＳ诱导的人淋巴细胞增殖活性的影响,中性红法检测巨噬细胞的吞噬功能,ＣＦＵ-ＧＭ半固体集落培养法检测造血干细胞的集落形成能力。结果　通关藤提取物体外对ＣｏｎＡ诱导的正常淋巴细胞和ＬＰＳ诱导的正常淋巴细胞有促增殖作用且呈剂量依赖性。通关藤提取物对正常巨噬细胞吞噬中性红染液的能力无明显影响。对正常骨髓／外周血造血干细胞ＣＦＵ-ＧＭ的形成没有显著影响。结论　通关藤提取物体外对正常免疫细胞和造血干细胞无明显细胞毒作用,并且有促进Ｔ、Ｂ细胞的增殖作用。     

联合使用MACS,FACS富集纯化造血干／祖细胞及其亚群

目的建立获得高纯度ＨＳＣ／ＨＰＣ细胞群的方法，用于研究造血干／祖细胞（ＨＳＣ／ＨＰＣ）的功能与生物学特性。方法利用免疫磁珠分选法（ＭＡＣＳ）从新鲜脐血和骨髓穿刺液中富集ＣＤ３４＋细胞，再用荧光激活细胞分选术（ＦＡＣＳ）分选纯化ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－和ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋细胞亚群。结果ＭＡＣＳ分选的ＣＤ３４＋细胞群纯度可达９５％；ＦＡＣＳ分选的ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－和ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋两细胞亚群纯度均可达９９％以上。结论联合使用ＭＡＣＳ和ＦＡＣＳ可在数小时内大量纯化ＨＳＣ／ＨＰＣ及其中重要细胞亚群。     

混合脐血血浆用于CD3AK细胞培养的研究

近年来,对于脐带血的研究重新引起了人们的重视,如脐带血造血干细胞替代骨髓进行移植、脐血输注治疗慢性再障、脐血ＬＡＫ细胞培养,脐血细胞用于基因治疗的实验也正在积极开展。脐血血浆的利用也日益增多,如脐血血浆用于造血于细胞体外扩增的研究等。本文旨在探讨混合脐血血浆用于免疫效应细胞培养的效果。采用混合脐血血浆和成人ＡＢ血清培养两组ＣＤ３ＡＫ细胞,于不同培养天数行细胞计数,并于第７,１４天用Ｍ３Ｔ法测两组细胞对Ｋ５６２,ＨＬ－６０肿瘤细胞株的杀伤活性,用ＡＰＡＡＰ法检测其免疫表型。结果显示,混合脐血血浆组…     

二氢叶酸还原酶耐药基因对人外周血CD34+细胞的保护作用

目的 探讨突变的二氢叶酸还原酶（ｍＤＨＦＲ）耐药基因在人外周血ＣＤ３４＾＋细胞中抗甲氨喋呤（ＭＴＸ）的效应。方法 应用免疫磁珠分选系统（ＭＡＣＳ）分离纯化外周血ＣＤ３４＾＋细胞后,用含ｍＤ－ＨＦＲ基因的逆转录病毒上清转染人外周血ＣＤ３４＾＋细胞,采用造血祖细胞集落形成实验进行转导后细胞抗ＭＴＸ分析。结果 在ＭＴＸ（２０ｎｍｏｌ／Ｌ）存在的条件下,转导ｍＤＨＦＲ耐药基因的外周血ＣＤ３４＾＋细胞集落形     

树突状细胞体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫

为研究肿瘤患者外周血树突状细胞（ＤＣ）能否在体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫反应，作者自骨肉瘤患者外周血中分离ＤＣ。以源于人骨肉瘤细胞系ＨＯＳ－８６０３肿瘤细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ，以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）联合刺激ＤＣ，ＤＣ激活同源的Ｔ淋巴细胞，被激活的Ｔ淋巴细胞及其上清液杀伤ＨＯＳ－８６０３肿瘤细胞。发现以ＴＡＡ激活并经ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４联合刺激的ＤＣ能够诱导同源Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ），该ＣＴＬ及其上清液对ＨＯＳ－８６０３肿瘤细胞有高效而特异性的杀伤作用。结果表明，肿瘤患者外周血ＤＣ在体外能够诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫反应，提示ＤＣ作为一新概念上的肿瘤疫苗将在肿瘤治疗及预防中发挥重要作用。     

用微血管内皮细胞体外扩增的骨髓造血干细胞重建大剂量化疗后的？…

目的 探索造血干细胞体外培养扩增的新方法。 方法 采用磁性细胞分离技术纯化小鼠骨髓血管内皮细胞,将其与骨髓造血细胞一起培养。培养的骨髓细胞移植给大剂量化疗后的小鼠,观察其造血重建功能。 结果 纯化的血管内皮细胞具有鹅卵石样细胞形态,表达多种内皮细胞相关抗原如ＣＤ３１,ＣＤ３４,ＩＣＡＭ－１,ＶＣＡＭ－１和凝集素ＢＳ－１结合位点。将内皮细胞与骨髓造血细胞共同培养后,骨髓细胞数明显增加,其中６０％为原     

β２微球蛋白抑制非霍奇金淋巴瘤患者树突状细胞成熟和功能的研究

目的：探讨β_２微球蛋白（β_２-ＭＧ）对非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）患者树突状细胞（ＤC）分化成熟和功能的抑制作用。方法：采集ＮＨＬ患者骨髓单个核细胞,经ＧＭ-ＣＳＦ、ＩＬ-４和ＴＮＦ-γ诱导ＤＣ生成。于ＤＣ培养第１天起加入β_２-ＭＧ设为实验组Ａ,ＤＣ培养第４天起加入β_２-ＭC设为实验组Ｂ,将同时段ＤＣ加入人血白蛋白分别设为对照组Ａ和Ｂ,设空白对照组。光镜下观察ＤＣ形态;流式细胞术检测ＤＣ表型;培养ＤＣ与自身淋巴细胞共孵育,ＥＬＩＳＡ法检测ＩＦＮ-γ和ＩＬ-１０水平。结果：与其他４组相比,实验组Ａ的ＤＣ体积小,无明显树突状突起。表型分析显示,除ＣＤ１ａ外,ＣＤ８３、ＣＤ８０、ＣＤ８６和ＨＬＡ-ＤＲ的表达均明显降低（Ｐ＜０.０５）;激活Ｔ细胞分泌ＩＦＮ-γ水平下降（Ｐ＜０.０５）,分泌ＩＬ-１０的水平升高。结论：β_２-ＭＧ可以抑制ＮＨＬ患者ＤＣ的分化成熟及Ｔ细胞活化,可能对揭示ＮＨＬ的进展机制及进一步免疫治疗具有重要意义。     

逆转录病毒载体介导人 GM-CSF 基因在 HL-60 白血病细胞的高效转移和表达

目的探讨将外源基因导入白血病细胞的条件及可行性，为造血系统恶性肿瘤的基因治疗奠定基础。方法采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）包装技术将Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ｈＧＭ－ＣＳＦ导入包装细胞ＰＡ３１７，获得重组逆转录病毒，将重组病毒悬液感染人髓系白血病ＨＬ－６０细胞，经Ｇ４１８筛选出ＨＬ－６０转基因细胞群，应１用ＭＴＴ法测定ＧＭ－ＣＳＦ活性。结果ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测结果证实，ＧＭ－ＣＳＦ基因成功地转移并整合到ＨＬ－６０细胞基因组中，而未转基因和转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞经ＰＣＲ检测未能扩增出特异性片段。经ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ－１检测，转基因细胞分泌的ＧＭ－ＣＳＦ生物学活性为６０～２００ｎｇ／ｍｌ（细胞１×１０６，培养２４小时），而未转基因及转空载体Ｎ２Ａ的ＨＬ－６０细胞培养上清无ＧＭ－ＣＳＦ活性。结论逆转录病毒载体介导的ｈＧＭ－ＣＳＦ基因能在体外培养的人ＨＬ－６０白血病细胞中获得高效的转移和表达。     

体外长期培养骨髓基质细胞对造血调控的实验研究

体外长期培养骨髓基质细胞对造血调控的实验研究王兰琴，曲垣瑞，崔小平骨髓体外长期培养（ＬＴＢＭＣ）是研究骨髓造血的理想模型。我们对７例正常骨髓细胞的ＬＴＢＭＣ生长特点及内源性ＣＳＦ活性进行观察，将结果报导如下：材料与方法１．骨髓细胞来源３例取自胸外科手...