腹内高压对肝硬化小鼠肺水通道蛋白1及水通道蛋白5表达的影响

目的 探讨腹水引起的腹内高压对肝硬化小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白5(AQPS)表达的影响.方法 雄性美国癌症研究所(Institudo of Cancer Reseach.ICR)小鼠50只,随机取10只作正常对照组(腹压0 cm H<,2>O,1 cm H<,2>O=0.098 kPa),其余40只...     

大鼠脑外伤诱导反应性星形胶质细胞表达水通道蛋白1和水通道蛋白9

目的 研究水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白9(AQP9)在大鼠自由落体脑损伤后的表达变化以及与脑水肿的关系.方法 复制大鼠自由落体脑损伤模型,在外伤后1 h、6 h、24 h、48 h和168 h用干重-湿重法测定损伤侧脑组织水含量,利用免疫组化染色和Western印迹法检测AQP1和AQP9表达的变化.结果 脑外伤后损伤侧脑组织水含量增加,24 h达高峰,168 h接近恢复.脑外伤后6 h损伤周围出现AQP1和AQP9免疫染色阳性的星形胶质细胞,外伤后24 h免疫染色阳性细胞数最多,且损伤周围处血管内皮细胞AQP1表达异常增加.结论 脑外伤诱导AQP1和AQP9的表达,共同参与脑水肿的发展过程.     

水通道蛋白与脑组织内水转运

水通道蛋白(aquaporins,AQP)是一组构成水通道与水通透有关的细胞膜转运蛋白,该通道是由一系列具有同源性的内在膜蛋白家庭成员所形成,广泛存在于动物、植物及微生物界,介导着不同类型细胞膜的跨膜水转运。水的跨膜转运对维持细胞正常代谢具有重要作用,所有组织细胞都允许水以简单扩散方式通过细胞膜,但某些细胞如红细胞、肾近曲小管上皮细胞等对水的通透性很高,不能以水穿越脂质双分子层弥散来解释。1991年,Preston等[1] 完成了对第一个水通道的cDNA的分子克隆和功能鉴定,才证明了在哺乳动物的细胞膜上存在特异转运水的孔道———AQP。…     

水通道蛋白亚型AQP1的研究进展

<正>水是生命最基本的组成成分,机体的水平衡对动物的生命维持非常重要。长期以来,人们一直认为水跨生物膜的移动仅靠单纯扩散。但近10余年来大量研究证实机体内广泛存在着特异性的水     

高压氧对急性高原肺水肿大鼠水通道蛋白1和水通道蛋白5的影响

目的 观察高压氧(HBO)对急性高原肺水肿(HAPE)模型大鼠水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白5(AQP5)的影响.方法 56只Wistar大鼠按随机数字法分为正常对照组、高原肺水肿组(HAPE组)、高压氧治疗1次组(1HBOT组)、高压氧治疗2次组(2HBOT组)和常压氧治疗组(NOT组).正常对照组大鼠8只,其余每组12只大鼠.除正常对照组外,余各组制作HAPE模型后分别给予HBO干预.使用Western Blot定量检测各组大鼠肺组织AQP1、AQP5蛋白水平的表达,同时观察肺组织病理变化.结果 正常对照组的损伤评分为0,HAPE组、1 HBOT组、2HBOT组和NOT组的损伤评分分别为(4.46±1.54)、(3.17±1.83)、(1.30 ±0.73)和(3.29±2.27)分;HAPE组较其它各组肺组织损伤程度严重,与正常对照组和2HBOT组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);2HBOT组与NOT组和1HBOT组比较,肺组织损伤程度减轻(P＜0.05).正常对照组AQP1和AQP5的灰度值为1.00,HAPE组、1HBOT组、2HBOT组和NOT组AQP1的相对灰度值分别为(0.58 ±0.20)、(0.76±0.16)、(0.87±0.11)和(0.75±0.27),其AQP5的相对灰度值分别为(0.75±0.12)、(0.80±0.14)、(0.96 ±-0.14)和(0.84±0.18);HAPE组AQP1和AQP5蛋白水平均较其它各组低,且与正常对照组和2HBOT组间的差异有统计学意义(P＜0.01和P＜0.05);2HBOT组AQP1和AQP5蛋白水平与1HBOT组比较,均有提高,且2组间比较,AQP5蛋白水平差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HAPE模型大鼠肺组织内AQP1、AQP5蛋白水平表达降低;HBO能够上调AQP1、AQP5的表达,减轻肺水肿;对于减轻肺水肿,行2次HBO治疗比行1次HBO治疗及NOT效果更明显.     

ApoE基因敲除小鼠认知功能障碍的Morris水迷宫观察

目的：评估ApoE基因敲除（ApoE knockout，ApoEKO）小鼠的学习记忆功能。方法：采用经典Morris水迷宫，测试3月龄雄性ApoEKO小鼠与C57BL／6J小鼠，共训练7天，记录每天的潜伏期与游泳轨迹，分析小鼠在目的象限停留的时间；第8天去除平台，记录小鼠停留各象限的时间百分比。结果：所有小鼠的潜伏期都逐渐缩短，C57BL/6J小鼠获取隐藏平台位置的速度明显比ApoEKO小鼠快，在目的象限停留的时间也明显比ApoEKO小鼠长，但这仅表现在最初几天，最终二者的成绩日趋接近，第8天空间搜索实验结果二者差异无显著性意义。结论：水迷宫测试成绩显示ApoEKO小鼠存在认知功能障碍，主要表现在训练最初阶段，即获取信息阶段：给予足够的训练后，ApoEKO小鼠的表现能够达到正常C57BL／6J小鼠的水平。     

水通道蛋白1在胆囊黏膜中的表达及临床意义

胆囊炎是肝胆外科常见疾病,其主要病因为胆囊结石形成。胆囊炎主要病理表现为胆囊壁水肿,胆囊内胆汁淤积或结石形成[1]。水通道蛋白-1（AQP-1）主要参与黏膜内外水分的转运,有报道[2]称其表达同炎症、肿瘤的发生发展存在相关性。本研究探讨AQP-1与胆囊结石的相关性,现报告如下。     

水通道蛋白-1与腹膜透析超滤相关性的研究进展CSCD

研究证实腹膜组织上有水通道蛋白-1(aquaporin 1,AQP1)表达,AQP1是腹膜超小孔的分子对应物,在腹膜跨细胞水转运中起重要作用,其结构或功能受损及在细胞内分布的改变可能导致超滤衰竭(ultrafiltration failure,UFF)的发生,是引起腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)失败的主要原因之一,AQP1编码基因的一种常见变异与超滤(ultrafiltration,UF)减少和患者预后、技术生存率下降显著相关,证实腹膜UF功能受到遗传背景的影响。调控AQP1表达的因素包括渗透性调控、药物调控、pH调控,AQP1通道活性调控等。近年来发现,腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)也表达AQP1,且与UF存在相关性,在PD过程中AQP1可能具有更多重要功能,譬如AQP1对PMCs、腹膜纤维化改变具有保护作用,以AQP1作为调控靶点在改善PD超滤功能中的作用也越来越受到关注,特别在AQP1基因水平、通道活性选择性药理学调节方面。本文将对AQP1与PD超滤相关性的研究进展进行综述。     

水通道蛋白1、5在肺出血新生大鼠肺组织中的表达

目的研究新生大鼠肺出血发生的过程中水通道蛋白1、5在肺中表达的变化和意义。方法将80只4～5 d龄新生SD大鼠分为4组,对照组1组和实验组3组,对照组为常温常氧6 h;实验组分别为低温缺氧1 h复温供氧2 h、低温缺氧2 h复温供氧2 h和低温缺氧4 h复温供氧2 h,用断头法处死大鼠后开胸取肺做病理切片和免疫组化染色。结果观察到随着低温缺氧时间的延长病理改变可从正常肺组织向着肺水肿、点状肺出血、局灶性肺出血至弥漫性肺出血的方向发展。水通道蛋白1(AQP 1)主要表达于胸膜脏层周围毛细血管内皮细胞腔膜面和基侧膜面以及脏层胸膜的间皮细胞,肺泡Ⅱ型上皮细胞顶膜面也有少量表达,AQP 1还存在于气管腔上皮细胞顶膜面和支气管黏膜下腺上皮细胞。水通道蛋白5(AQP 5)表达于Ⅰ型上皮细胞的顶膜。随着低温缺氧时间的延长,复温供氧后AQP 1在肺毛细血管内皮细胞表达明显下降,这种减少全肺均能观察到,肺泡Ⅰ型上皮细胞AQP 5的表达也一致减少。对应的病理改变为细胞炎症反应,肺水肿、肺泡腔及间质出血。结论 AQP 1、AQP 5与新生大鼠肺出血关系密切,AQP 1、AQP 5可能与肺水肿、肺出血的形成有关。通过调节AQP 1及AQP 5的表达可能预防新生儿肺出血的发生。     

糖皮质激素对鼻息肉水通道蛋白表达的影响

鼻息肉是耳鼻咽喉头颈外科常见病、多发病,发病率和复发率均高,目前多采用手术方法治疗,但部分患者术后易复发。糖皮质激素为治疗鼻息肉的有效药物,术前使用可减轻鼻塞、流涕、头痛等症状,术后使用可降低鼻息肉复发率,促进患者嗅觉恢复,且鼻腔局部应用不良反应轻。本文就水通道蛋白在鼻息肉发病中的作用及糖皮质激素对其表达的影响作一综述。     

囊性纤维化跨膜调节因子在小鼠胸膜腔液体转运中的作用

目的:探讨囊性纤维化跨膜调节因子(cystic fibrisis transmembrane conductance regulator.CFTR)在小鼠胸腔液体转运中的作用。方法:小鼠吸入麻醉后,胸膜腔内分别注入0.25ml等渗液体,分别予以异丙肾上腺素、CFTR激动剂CF-16和抑制剂CF_(mh)-172.在不同时间点回收胸腔液体,测量其容积。根据胸腔液体滤出率和吸收率变化,研究CFTR在胸腔液体转运中的作用。用RT-PCR检测ENaC和CFTR在胸膜上的表达情况。结果:小鼠胸膜上有ENaC和CFTR的表达,CFTR抑制剂CF_(mh)-172显著抑制异丙肾上腺素对于胸腔液体吸收的促进作用(P<0.01),激动剂CF-16不能显著增强异丙肾上腺素的这种作用(P>0.05)。结论:CFTR抑制剂可以显著抑制异丙肾上腺素对胸腔内等渗液体吸收促进作用,但是CFTR激动剂则没有明显作用。     

CEA、sICAM—1联合检测对胸腔积液鉴别诊断的意义

目的：探讨肿瘤标记物CEA、sICAM-1联合检测对良、恶性胸腔积液鉴别诊断的临床意义。方法：采用免疫放射法和ELISA法分别检测48例恶性胸水和45例良性胸水患血清、胸水样本中CEA及sICAM-1的含量，并计算其胸水／血清（P／S）比值，结果：恶性组血清、胸水样本中CEA、sICAM-1的含量以及CEA、sICAM-1之P／S值均明显于良性（P＜0．01），恶性组胸水中CEA、sICAM-1的含量高于血清（P＜0．01）。联合检测胸水CEA、sICAM-1的含量对恶性胸水诊断的灵敏度和特异性分别为91．7％和97．8％，若采用CEA、sICAM-1之P／S值可使灵敏度和特异性提高至93．8％和100％。结论：联合检测胸水，血清中CEA、sICAM-1的含量并计算P／S值对胸腔积液鉴别诊断有重要的临床价值。     

基质金属蛋白酶1及其组织抑制物1在结核性和肿瘤性胸腔积液鉴别诊断中的价值

目的：探讨基质金属蛋白酶1（MMP-1）及其组织抑制物1（TIMP-1）在结核性和恶性胸腔积液形成过程中的作用及在上述胸腔积液诊断和鉴别诊断中的价值。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定36例结核性胸膜炎、38例恶性肿瘤胸腔积液患者胸水中MMP-1和TI MP-1的浓度。结果：（1）结核性胸腔积液组胸水中MMP-1浓度、TIMP-1浓度和MMP-1/TIMP-1比值均高于恶性胸腔积液组（213.37±53.18ng.mL-1比157.43±53.79ng.mL-1;600.17±121.46ng.mL-1比512.05±89.48ng.mL-1;0.377±0.139ng.mL-1比0.318±0.121;P〈0.05）。（2）以胸腔积液MMP-1 163.22ng.mL-1作为诊断分界点,其敏感性为80.6%,特异性为57.9%;以TIMP-1 550.93ng.mL-1作为诊断分界点,其敏感性为71.1%,特异性为63.9%;以MMP-1/TIMP-1比值0.313作为诊断分界点,其敏感性为66.7%,特异性为57.9%。若将MMP-1和TIMP-1串联（即两者同时高于分界点为阳性）,则诊断恶性胸腔积液的特异性升高至86.8%,敏感性降低至44.4%;若将MMP-1和TIMP-1并联（即两者任何一项高于分界点为阳性）,则诊断恶性胸腔积液的敏感性升高至100%,特异性降低至42.1%。结论：MMP-1和TIMP-1与结核性胸膜炎和恶性胸腔积液的形成密切相关,MMP-9/TIMP-1比例的失衡在此过程中起重要作用,检测胸水MMP-1和TIMP-1有助于结核性胸膜炎和恶性肿瘤所致胸腔积液的鉴别诊断。     

检测核不均一核糖核蛋白A2/B1在胸水细胞学鉴别诊断中的意义

目的：观察核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNPA2/B1）在胸水转移性肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达,评价其用于两者鉴别诊断的价值。方法：采用细胞块技术对100例胸水进行免疫组织化学检测,观察hnRNPA2/B1在肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达。结果：hnRNPA2/B1标记肺腺癌细胞的敏感度为100%,特异度为70%。结论：检测hnRNPA2/B1对鉴别胸水肺腺癌细胞和间皮细胞很有帮助。     

Effects of nitric oxide system and osmotic stress on Aquaporin-1 in the postnatal heart

Aquaporin-1 (AQP1) is expressed in the heart and its relationship with NO system has not been fully explored. The aims of this work were to study the effects of NO system inhibition on AQP1 abundance and localization and evaluate AQP1 S-nitrosylation in a model of water restriction during postnatal growth. Rats aged 25 and 50 days (n = 15) were divided in: R: water restriction; C: water ad libitum; RL: L-NAME (4 mg/kg day) + water restriction; CL: L-NAME + water ad libitum. AQP1 protein levels, immunohistochemistry and S-nitrosylation (colocalization of AQP1 and S-nitrosylated cysteines by confocal microscopy) were determined in cardiac tissue. We also evaluated the effects of NO donor sodium nitroprusside (SNP) on osmotic water permeability of cardiac membrane vesicles by stopped-flow spectrometry. AQP1 was present in cardiac vascular endothelium and endocardium in C and CL animals of both ages. Cardiac AQP1 levels were increased in R50 and RL50 and appeared in cardiomyocyte plasma membrane. No changes in AQP1 abundance or localization were observed in R25, but RL25 group showed AQP1 presence on cardiomyocyte sarcolemma. AQP1 S-nitrosylation was increased in R25 group, without changes in the 50-day-old group. Cardiac membrane vesicles expressing AQP1 presented a high water permeability coefficient and pretreatment with SNP decreased water transport. Age-related influence of NO system on AQP1 abundance and localization in the heart may affect cardiac water homeostasis during hypovolemic state. Increased AQP1 S-nitrosylation in the youngest group may decrease osmotic water permeability of cardiac membranes, having a negative impact on cardiac water balance.     

Mice lacking acid‐sensing ion channels (ASIC) 1 or 2, but not ASIC3, show increased pain behaviour in the formalin test

Extracellular acidification is a component of the inflammatory process and may be a factor driving the pain accompanying it. Acid-sensing ion channels (ASICs) are neuronal proton sensors and evidence suggests they are involved in signalling inflammatory pain. The aims of this study were to (1) clarify the role of ASICs in nociception and (2) confirm their involvement in inflammatory pain and determine whether this was subunit specific.This was achieved by (1) direct comparison of the sensitivity of ASIC1, ASIC2, ASIC3 and TRPV1 knockout mice versus wildtype littermates to acute thermal and mechanical noxious stimuli and (2) studying the behavioural responses of each transgenic strain to hind paw inflammation with either complete Freund’s adjuvant (CFA) or formalin.Naïve ASIC1^?/? and ASIC2^?/? mice responded normally to acute noxious stimuli, whereas ASIC3^?/? mice were hypersensitive to high intensity thermal stimuli. CFA injection decreased mechanical and thermal withdrawal thresholds for up to 8 days. ASIC2^?/? mice had increased mechanical sensitivity on day 1 post-CFA compared to wildtype controls. TRPV1^?/? mice had significantly reduced thermal, but not mechanical, hyperalgesia on all days after inflammation. Following formalin injection, ASIC1^?/? and ASIC2^?/?, but not ASIC3^?/? or TRPV1^?/?, mice showed enhanced pain behaviour, predominantly in the second phase of the test.These data suggest that whilst ASICs may play a role in mediating inflammatory pain, this role is likely to be modulatory and strongly dependent on channel subtype.     

激素对肺损伤大鼠肺内水通道蛋白-1及钠钾-ATP酶的影响

目的 观察不同剂量氢化可的松（hydrocortisone,HC）对急性肺损伤（ALI）大鼠肺内水通道蛋白-1（AQP-1）和钠钾-ATP酶的影响及机制.方法 间隔5 h分2次注射灭活大肠杆菌建立早期休克Wistar大鼠ALI模型.40只鼠随机分为5组：正常对照组、肺损伤组、大剂量HC组（150 mg/kg）、中剂量HC组（20 mg/kg）、小剂量HC组（6 mg/kg）.给药2 h后收集肺组织标本,观察肺组织病理形态和计算肺损伤病理评分,并采用免疫组化法观察肺内水通道蛋白-1、钠钾-ATP酶、糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）的表达.结果 肺损伤组肺损伤病理评分显著高于正常对照组（P＜0.05）.使用HC干预后,各剂量组较肺损伤组明显降低（P＜0.05）,以小剂量组下降最明显（P＜0.05）.中剂量组肺损伤病理评分虽较大剂量组降低,但两组间差异无显著性;肺内AQP-1和钠钾-ATP酶表达,肺损伤组显著低于正常对照组（P＜0.05）,使用HC干预后,各剂量组肺内AQP-1和钠钾-ATP酶表达均较肺损伤组升高,以小剂量组最明显（P＜0.05）,中剂量组较大剂量组表达增强,但差异无显著性;肺内GR表达,肺损伤组显著低于正常对照组（P＜0.05）,使用HC干预后,各剂量组肺内GR表达均较肺损伤组升高,但仅小剂量组差异达显著性（P＜0.05）.大、中剂量组间差异无显著性.指标间相关性分析提示,GR与AQP-1和钠钾-ATP酶表达均存在明显直线正相关关系（r=0.43,P=0.007;r=0.31,P=0.015）.结论 不同剂量HC干预早期休克大鼠ALI显示,在改善肺泡液体转运、肺组织病理改变等方面,均以小剂量HC最佳,未发现剂量依赖效应.不同剂量HC干预效果差异的原因可能与GR表达水平有关.     

细胞周期素G1反义硫代脱氧寡核苷酸抑制HL-60细胞在裸鼠体内生长的实验研究

目的：探讨细胞周期素G1(cyclin G1)反义硫代脱氧寡核苷酸对HL-60细胞在裸鼠体内生长的抑制作用。方法：将裸鼠随机分成对照组、正义寡核苷酸(SON)组、反义寡核苷酸(ASON)组，其中SON组和ASON组接种转染的HL-60细胞(HL-60／S和HL-60／AS)前接受3Gy的^60Co照射；将各组HL-60细胞接种于裸鼠皮下连续观察裸鼠的出瘤时间、瘤体大小，计算抑瘤率；病理切片用苏木精．伊红染色，电镜观察移植瘤组织的结构和细胞形态变化；用流式细胞仪(FCM)和RT-PCR分别检测cyclin G1蛋白和mRNA水平的表达；电镜和FCM检测细胞凋亡。结果:①cyclin G1 ASON组与SON组和对照组比较，对HL-60细胞在裸鼠体内生长有明显抑制作用，抑瘤率为69．4％。成瘤率、瘤重、瘤体积明显小于SON组和对照组。②镜下见cyclin G1 ASON组的HL-60细胞部分细胞形态发生改变，核分裂象少见，细胞的异型性较小，并且有凋亡细胞出现。结论:cychn G1 ASON能明显抑制HL-60细胞在裸鼠体内的生长，并且促使部分细胞发生凋亡。     

热休克因子在过氧化氢所致小鼠胚胎成纤维细胞损伤中的作用

[目的]探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)对过氧化氢所致小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)损伤的影响.[方法]利用HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和转基因技术,通过稳定转染SV40大T抗原基因,建立缺失HSF1基因(HSF1-/-纯合子)和含有HSF1基因(HSF1 / 野生型)的永生化MEFs,并采用免疫印迹和基因组DNA PCR技术进行鉴定.向细胞培养基中加入终浓度为0.5 mmol/L的过氧化氢导致细胞损伤,采用甲苯胺兰染色和总蛋白合成能力分析方法来判定致细胞损伤程度(核仁的结构和功能改变).[结果]PCR产物电泳显示在各种基因型MEFs中均含有SV40大T抗原基因,在HSF1-/-MEFs中仅含有替代基因,在HSF1 / MEFs中仅含HSF1基因,在HSF1-/ MEFs中则含有替代基因和HSF1基因;免疫印迹显示热休克反应(heat shock response,HSR)不能诱导HSF1-/-MEFs中HSP70表达.甲苯胺兰染色和总蛋白合成能力分析显示0.5 mmol/L过氧化氢可引起HSF1 / MEFs及HSF1-/-MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制,与正常对照组相比,P＜0.05;HSR能显著抑制过氧化氢所致HSF1 / MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制,与单纯过氧化氢损伤组相比,P＜0.05,但HSR对过氧化氢所致HSF1-/-MEFs核仁分离及蛋白质合成抑制没有影响,与单纯过氧化氢损伤组相比,P＞0.05.[结论]HSR以一种HSF1依赖方式显著抑制过氧化氢所致细胞核仁结构与功能损伤.     

罗格列酮对人腹膜间皮细胞和脐静脉内皮细胞水孔蛋白-1的影响

目的探讨体外条件下核受体Peroxisome proliferator-activated receptor gamma（PPAR-gamma）激动剂罗格列酮（RosiglitazoneRGZ）对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells HPMCs）、人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells HUVECs）水孔蛋白-1（aquaporin 1 AQP1）增殖以及基因水平的影响。方法以HPMCs和HUVECs为研究对象,将实验分成四组：对照组、RGZ组（10uMRGZ）、GW9662组（peroxisome proliferator-activated receptor gamma antagonist 20uMGW9662）以及GW9662＋R组（20uMGW9662提前作用1H后加入10uMRGZ）。应用比色法（CCK-8）观察RGZ等对HPMCs和HUVECs增殖的影响。应用Realtime-PCR方法检测罗格列酮等对水孔蛋白-1基因水平表达的影响。结果①GW9662＋R组与对照组相比,可以明显抑制HPMCs增殖（P〈0.01）,其他组对HPMCs增殖没有明显影响（P〉0.05）。而对HUVECs,RGZ组、GW9662组以及GW9662＋R组都可以促进其增殖（P〈0.01）;②罗格列酮上调这两种细胞AQP1基因水平的表达。结论在体外,罗格列酮可影响HPMCs和HUVECs水孔蛋白质1基因水平的表达。其作用机制可能是通过激活PPAR-gamma从而影响上述两种细胞的AQP1的表达。