壳聚糖/聚磷酸钙复合支架的生物相容性研究

目的:评价比较不同配比壳聚糖/聚磷酸钙(Chitosan/Calcium polyphosphate,CS/CPP)复合支架的细胞相容性和组织相容性,探讨其应用于组织工程半月板支架材料的可行性。方法:采用扫描电镜检测半月板细胞在支架材料上的生长情况。采用MTT法检测不同配比CS/CPP支架材料浸提液对第3代半月板细胞的毒性,通过肌袋内植入试验评价支架材料的体内组织相容性。结果:扫描电镜下可见:不同比例CS/CPP复合支架材料呈三维多孔的结构。复合第3代半月板细胞体外培养7 d,细胞在支架材料上均匀分布,紧贴支架铺展伸长,生长良好。MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照DF培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P>0.05),支架无细胞毒性。肌袋内植入试验评价:肌袋内植入实验显示动物术后生存良好,各植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染。术后1周植入体周围有较多中性粒细胞浸润;术后2~8周植入体周围中性粒细胞浸润逐渐减少,出现淋巴细胞浸润,淋巴细胞多于中性粒细胞,纤维囊壁厚薄不均;3个月后植入体周围未见炎症细胞浸润,主要为胶原纤维和成纤维细胞。随植入时间的延长,炎症细胞浸润逐渐减少,浸润范围逐渐缩小,包膜先逐渐变厚再变薄,植入材料内部逐渐有组织长入,并且逐渐降解。结论:CS/CPP具有良好的细胞相容性和组织相容性,有望成为半月板组织工程的支架材料。     

兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究

目的:比较研究不同代次间兔半月板纤维软骨细胞生物学特性的改变,为构建组织工程半月板和细胞治疗中的种子细胞优选提供进一步的理论和实践基础。方法:采用机械分离与酶连续消化相结合的方法体外分离兔半月板纤维软骨细胞,单层培养传代至第5代。采用相差倒置显微镜和SEM观察各代细胞的形态变化和超微结构,MTT法检测细胞增殖情况并描绘生长曲线,采用细胞化学染色和免疫组化鉴定细胞分泌的蛋白聚糖和Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白。结果:半月板纤维软骨细胞原代接种后8~12 h开始贴壁,48~72h大部分细胞贴壁,胞质逐渐展开,细胞变大伸长,形成突起,呈多角形,细胞形态规则,轮廓清晰,镜下观察有立体感,7~10 d后,细胞长满传代。传代后细胞贴壁生长能力和增殖速度明显加快,原代至第2代细胞形态较规则,多呈多角形,大小均一。第3代后随着传代次数的增加,细胞中梭形细胞增多,分泌和增殖能力下降,传代周期延长。第5代分裂相少见,密度稀疏,细胞形态不佳,约80%呈长梭形,分泌和增殖能力下降。SEM示第1代半月板细胞形态规则,呈多极性,表面有突起;第5代细胞形态不规则,多呈梭形。生长曲线可见第4代前半月板细胞生长速度及生长周期均相似,第5代后细胞生长速度减慢,增殖减缓。细胞化学和免疫组化染色分析胶原和蛋白聚糖的表达:随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减弱而Ⅰ型胶原表达逐渐增强。结论:体外单层培养条件下,随着传代的进行,细胞活力逐渐下降,生长速度减慢,传代周期延长,逐渐变为梭形,形态不规则。体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞表型随传代的进行,Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的表达逐渐减少而Ⅰ型胶原表达逐渐增多,体外单层培养条件下培养的半月板纤维软骨细胞从第3代开始逐渐失去其特异性表型,发生去分化,逐渐变为成纤维细胞的表型。体外单层分离培养的第5代前半月板细胞基本维持纤维软骨细胞的表型和生物学特性,可作为组织工程半月板的种子细胞。     

半月板纤维软骨细胞接种脱钙松质骨支架构建组织工程半月板的方法选择

目的:探讨半月板纤维软骨细胞(MFCs)接种脱钙松质骨(DCB)支架的最佳接种方法。方法:实验分静滴法、注射法、离心法、负压法等4组。取兔MFCs,采用上述4种方法对孔隙率为80%、平均孔径为268μm的DCB支架进行细胞接种。Live/Dead染色检测其细胞活性,并通过软件分析其细胞分布情况。CCK-8法和Hoechst 33258法检测支架内MFCs增殖情况和支架内DNA含量。结果:通过Live/Dead染色显示,离心法接种细胞后其存活率优于其他3组(P<0.05);细胞分布均匀,由浅至深各层细胞比例无明显统计学差异(P>0.05);1~5天细胞增殖能力优于其他3组(P<0.05),14~21天支架DNA含量亦优于其他3组(P<0.05)。结论:离心法可以明显提高MFCs在DCB上的细胞分布和细胞增殖能力,是一种简单、高效的,利于组织工程半月板(TEM)构建的接种方法。     

人半月板纤维软骨细胞培养及生物学特性研究

为探索分离培养人半月板纤维软骨细胞的简便实用方法，采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法，简便快速地获得大量成活率高的人半月板纤维软骨细胞，在F－12培养液中进行原代和传代培养，并对传代培养纤维软骨细胞进行了免疫组化鉴定，光镜及超微结构的观察，结果显示，光镜下，原代培养细胞呈线形，单层排列，电镜可见细胞内有丰富的粗面内质网及线粒体，细胞呈多极性，表面有突起，纤维软骨细胞免疫组化Ⅱ型胶原染色阳性，提示本实验建立的人纤维软骨细胞分离培养方法是一种可行的方法。，     

体外器官培养系统中纤维软骨组织修复的实验研究

半月板是一种纤维软骨组织，由纤维软骨细胞与以Ｉ型胶原为主的基质构成。以往认为纤维软骨细胞缺乏再生能力，使半月板损伤不能愈合。近来有研究表明脱离了基质的纤维软骨细胞在体外单层培养条件下有很强的增生分化能力。因此我们在体外器官培养并提供纤维蛋白支架的条件...     

纤维软骨细胞-胶原复合物修复半月板损伤的实验研究

为了探讨纤维软骨细胞－胶原复合物对半月板损伤的修复作用，分离提取狗半月板纤维软骨细胞，体外扩增培养后种植于自制胶原模板上形成细胞－胶原复合物，将18只狗随机分为3组，在狗的外侧半月板作一楔形缺损，缺损内分别植入细胞－胶原复合物、胶原或不作处理，在不同时间取材进行大体和组织学观察。结果显示，植入的复合物形成与正常半月板相似的组织，胶原支架逐渐降解，而胶原对照组及空白对照组缺损区仅少部分修复或无修复。提示，这一新的组织工程学方法具有一定的指导意义及实用性。     

体外培养半月板纤维软骨细胞增殖和胶原表达特性的研究

目的　研究体外单层培养条件下猪半月板纤维软骨细胞增殖和胶原的表达,为构建自体组织工程化半月板奠定基础。　方法　采用改良的Klagsbrun法,从8只45d龄长枫杂交仔猪的半月板消化获取细胞进行体外单层培养。形态学观察、群体倍增时间(populationdoubletime,PDT)、增殖速度趋势图、原位杂交及免疫细胞化学染色法作为评定指标。　结果　半月板组织的平均细胞获得率为(2.31±0.66)×10     

采用温敏性壳聚糖水凝胶体外构建组织工程化软骨的实验研究

目的 验证自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶作为软骨细胞支架材料构建组织工程化软骨的可行性.方法 以壳聚糖、β-甘油磷酸钠和羟乙基纤维素为原料,制备温敏性壳聚糖水凝胶,通过SD大鼠肌内注射植入,进行组织相容性检测.在此基础上,将其与软骨细胞复合构建组织工程化软骨,观察软骨细胞在壳聚糖水凝胶中的存活情况,并于体外培养3周后,作相关组织形态学检测.结果 制备的壳聚糖水凝胶具有温度敏感性,即室温时为液态,37℃时10～15min可发生交联反应成为固态凝胶.SD大鼠肌内注射不同时间点组织相容性检测表明,该材料具有良好的组织相容性,植入体内2、4周时有少量炎性细胞浸润,6周时材料降解明显,8周时已经基本降解.采用该材料构建的组织工程化软骨体外培养3周后取材,通过组织学检查,HE染色可观察到软骨陷窝样结构,甲苯胺蓝染色、番红O染色及免疫组化染色结果显示软骨细胞具有分泌细胞外基质的功能.结论 本研究自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶材料具有良好的组织相容性,将其与软骨细胞复合后,可以在体外再造组织工程化软骨,是一种有广泛应用前景的软骨组织工程支架材料.     

骨修复材料多孔聚磷酸钙的制备及细胞相容性研究

目的 为了解决骨组织工程中成骨细胞在可降解支架材料上三维生长这一问题,本文对无机聚合物聚磷酸钙（CPP）生物陶瓷进行了研究.方法 实验制备出CPP多孔材料,并以羟基磷灰石,磷酸三钙作为对照材料,检测了材料的细胞毒性,并与成骨细胞进行复合生长.结果 表明聚磷酸钙不仅无细胞毒性,而且能促进成骨细胞的生长,与成骨细胞复合后,细胞能在材料中三维生长,并能分泌出细胞外基质,因此具有良好的细胞相容性.结论 多孔聚磷酸钙能促进成骨细胞生长,并为细胞良好生长提供三维空间环境,同时本实验也为可降解无机聚合物作为骨组织工程支架材料的研究提供了新的思路.     

脱钙骨基质与左旋聚乳酸/聚磷酸钙纤维对骨髓间充质干细胞黏附作用的比较

目的探讨左旋聚乳酸／聚磷酸钙纤维（PLLA／CPPf）与同种异体的脱钙骨基质（DBM）对BMSCs黏附作用的差异，为构建组织工程骨提供理想的支架材料。方法用扫描电镜观察两种支架材料的孔径；通过测吸水率比较其亲水性。将普通培养瓶培养的第3代BMSCs分别成骨诱导培养1周后，在体外分别与PLLA／CPPf和同种异体的DBM复合构建组织工程骨，于构建后10h计算细胞黏附率，并用扫描电镜观察比较两种支架材料对BMSCs黏附作用的差异。构建后每天在相差显微镜下观察BMSCs在两种支架材料上的生长情况，构建后第10天再行扫描电镜观察BMSCs在两种支架材料上的生长情况。结果DBM的孔径明显较PLLA／CPPf的大，孔隙率高，体外构建后10hDBM组的细胞黏附率为（91．3±8．2）％，PLLA/CPPf组为（82．2±7．7）％，两者之间差异具有统计学意义（P〈0．05）。DBM组于术后第3天网孔间出现细胞外基质，且随着时间的推移，基质变得稠密，而PLLA／CPPf的细胞外基质鲜见；第10天的扫描电镜也证实DBM组的细胞在支架材料上数量多，且细胞外的基质分泌较多。结论DBM较PLLA／CPPf更适于BMSCs的黏附生长，是理想的组织工程支架材料。     

聚乳酸-羟基乙酸／磷酸三钙人工骨的体外构建

目的体外构建兔骨髓间充质干细胞与聚乳酸一羟基乙酸（PLGA）／磷酸三钙（TCP）及PLGA支架材料的复合体,初步评价人工骨构建效果。方法股骨骨穿获得兔骨髓,传代至3～4代,成骨诱导后进行成骨性能检测。同时转染腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白（EGFP）后分别与PLGA及PLGA／TCP支架材料复合,采用激光扫描共聚焦显微镜和扫描电子显微镜对细肜支架复合物进行形态学观察。结果与结论种子细胞在两种支架上均可黏附、生长：PLGA／TCP复合支架材料较PLGA更有利于细胞生长,为下一步兔自体骨缺损修复提供了良好的实验基础。     

PDE5抑制剂介导ASK1/JNK蛋白低表达对输尿管梗阻大鼠肾组织损伤保护机制研究

目的 探究PDE5抑制剂介导ASK1/JNK蛋白低表达在输尿管梗阻大鼠肾组织损伤中的保护机制。方法 选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组（N组）,模型组（M组）,刺芒柄花素组（F组）,PDE5抑制剂组（P组）,每组10只,对M、F、P组采用输尿管结扎法进行输尿管梗阻建模,N组不建立该模型,建模成功后,对F组灌胃50 mg/kg的刺芒柄花素,对P组灌胃12 mg/kg的PDE5抑制剂,N组、M组同期给与灌胃同体积生理盐水。全自动生化检测仪检测大鼠肾功能,HE染色法及Masson染色法检测肾组织损伤情况,免疫组化法检测肾组织PDE5阳性表达,免疫印迹法检测大鼠肾组织ASK1/JNK蛋白表达。结果 与N组比较,M组肾脏指数、Scr及BUN含量、肾组织中PDE5阳性表达及ASK1、JNK蛋白表达明显增多（P<0.05）。与M组比较,F、P两组肾脏指数、Scr及BUN含量、肾组织中PDE5阳性表达及ASK1、JNK蛋白表达减少（P<0.05）,且P组比F组降低显著（P<0.05）。N组肾组织未见明显病理变化,肾间质无明显纤维组织增生,而M组肾小管可见肾小管上皮细胞出现萎缩、脱落和坏死,可见大量纤维组织增生。与M组比较,F组、P组肾小球、肾小管情况明显改善,肾间质纤维化增生程度明显减轻。与B组比较,A组肾小管上皮细胞中ASK1、JNK蛋白表达降低（P<0.05）。结论 PDE5抑制剂可有效改善输尿管梗阻大鼠肾组织损伤,提高肾功能,抑制PDE5水平,其机制可能与降低ASK1/JNK蛋白表达有关。     

5-HT1A受体激动和5-HT重摄取抑制双靶标新药YL-0919在小鼠体内的组织分布

目的研究5-HT1A受体激动和5-HT重摄取抑制双靶标新药YL-0919在小鼠体内的组织分布特征。方法 15只雄性昆明小鼠随机分为3组,单剂量YL-0919(6 mg/kg)灌胃后,分别于2,5,60 min摘眼球取血,处死后解剖取组织。采用液相色谱串联质谱法测定YL-0919浓度。结果小鼠YL-0919灌胃后2 min即在小肠、胃和肝达到最高值,其他组织在给药后5 min浓度达到最高值,浓度由高到低依次为:小肠>胃>肝脏>脂肪>肾脏>肺脏>心脏>脾脏>血>脑>肌肉>睾丸,60 min后各组织的药物浓度均降至较低水平。结论 YL-0919在小鼠体内的吸收和分布较快,药物入血后很快分布到体内各个组织中;药物在组织中的消除也较快,没有组织蓄积现象。     

探讨SPECT/CT图像融合对骨转移瘤的增益价值

目的 探讨SPECT/CT图像融合技术在诊断骨转移瘤中的应用价值.方法 回顾性分析2010年1月～2013年1月在我院核医学科进行肺癌术前查体的患者资料,其中376例为全身骨显像（whole-body bone scintigraphy,WBBS）,172例为局部SPECT/CT（single photon emission computed tomography-computed tomography）融合图像检查,对两种检查能够提供有效诊断的比例进行统计学比较.以临床诊断或随访结果为最终判定标准,对两组显像方式的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度进行比较.结果 SPECT/CT的诊断效能明显高于WBBS（Z=2.769,P =0.006）.SPECT/CT显像的灵敏度为94.4％、特异度为89.0％、阳性预测值为86.1％、阴性预测值为95.7％、准确度为91.5％,明显高于SPECT的82.4％（χ^2 =4.281,P=0.039）、80.1％（χ^2=4.085,P=0.043）、54.7％（χ^2=21.658,P =0.000）、94.0％（χ^2 =0.392,P=0.531）、80.6％（χ^2=10.012,P=0.002）.结论 SPECT/CT图像融合较WBBS能够提高骨转移瘤患者的诊断符合率,能够为临床医生提供更多有价值的诊断信息.     

Omi/HtrA2在食管癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨Omi/HtrA2蛋白在食管鳞癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法对95例经病理确诊为食管鳞癌患者的正常组织、癌旁组织及癌组织进行Omi/HtrA2蛋白半定量免疫组化分析,用TUNEL法检测石蜡切片中肿瘤细胞凋亡情况,通过统计学软件SPSS 11.0进行结果分析,确定食管癌中Omi/HtrA2表达对肿瘤细胞凋亡的影响。结果①Omi/HtrA2在食管正常组织、癌旁组织、鳞癌组织的阳性表达率分别为22.50%、27.50%、74.74%。②Omi/HtrA2蛋白在不同组织中的表达情况进行两两比较,发现癌组织的阳性率与正常组织、癌旁组织比较,有显著性差异（P〈0.05）,正常组织与癌旁组织阳性率比较未见有显著性差异,无统计学意义（P〉0.05）。③Omi/HtrA2表达阳性者细胞凋亡指数明显高于Omi/HtrA2表达阴性者（P〈0.01）。结论 Omi/HtrA2参与了食管鳞癌的发生、发展,可以作为判断食管鳞癌预后的指标,Omi/HtrA2在食管癌细胞的凋亡中发挥凋亡促进作用。     

MRI联合血清F-PSA/T-PSA对前列腺癌的诊断价值

目的探讨MRI联合血清游离前列腺特异性抗原(F-PSA)与总PSA(T-PSA)比值对前列腺癌(PCa)的诊断价值。资料与方法对已获得病理结果的99例前列腺疾病患者的MRI资料和血清T-PSA及F-PSA检测结果进行回顾性分析,比较单独应用MRI诊断PCa及MRI联合F-PSA/T-PSA比值诊断PCa的敏感性、特异性及准确性。结果 99例中有37例PCa,其中18例癌灶局限于前列腺内部,19例癌灶有前列腺外侵犯,MRI诊断前列腺癌的敏感性、特异性、准确性分别为91.89%、82.26%、85.86%,将MRI与F-PSA/T-PSA比值联合,F-PSA/T-PSA比值的截点分别取0.10、0.15及0.18,当截点选取0.15时,诊断价值最大,其敏感性、特异性及准确性均较高,分别为89.19%、90.32%、89.90%。结论 MRI联合F-PSA/T-PSA明显提高了对PCa的诊断及鉴别诊断水平。     

The Clinical Usefulness of 18F-FDG PET/CT in Patients with Systemic Autoimmune Disease

Purpose

Individuals with systemic autoimmune disease have an increased susceptibility to both inflammation and malignancy. The aim of this study was to evaluate the clinical usefulness of ¹⁸F-FDG PET/CT in patients with systemic autoimmune disease.

Methods

Forty patients diagnosed with systemic autoimmune disease were enrolled. Diagnostic accuracy of FDG PET/CT for detecting malignancy was assessed. FDG PET/CT findings, including maximum standardized uptake (SUVmax) of lymphadenopathy (LAP), liver, bone marrow, spleen, joint and muscles, were considered for the characterization of LAPs.

Results

FDG PET/CT could detect metabolically activated lesions in 36 out of 40 patients (90%) including inflammatory lesions in 28 out of 32 patients (88%). The sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value, and negative predictive value of FDG PET/CT for the detection of malignancy were 100, 67, 70, 25, and 100%, respectively. Multiple LAPs were found in 25 of 40 patients (63%), and comprised three malignancies, four cases of tuberculosis, and 18 reactive changes. A SUVmax ratio of bone marrow to liver below 0.78 could distinguish malignancy from tuberculosis + reactive change (AUC = 1.000, sensitivity: 100%, specificity: 100%). The SUVmax ratio of spleen to liver in the reactive group was also significantly higher than that in the malignancy group (P = 0.014). SUVmax of LAP in the TB group was significantly higher than that in the reactive group (P = 0.040).

Conclusions

PET/CT is useful in detecting and differentiating inflammation and malignancy in patients with systemic autoimmune disease. Frequent false-positive interpretations can be minimized by consideration of FDG uptake in bone marrow and spleen.