GADD45β在肝癌中的异常表达

目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的异常表达,分析GADD45β与临床病理学特征的关系及其异常表达的可能分子生物学机制.结果:正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中GADD45β mRNA的阳性表达率分别为80％、60％和26％,肝癌组织与正常肝组织间有非常统计学差异(x2=15.128,P<0.01); GADD45β在肝癌组织中的表达缺失与病理学分级显著相关(P<0.01).结论:GADD45β作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起到相当重要的作用,且与肿瘤分化程度密切相关.     

p21基因转染人肝癌SMMC-7721 细胞对化疗药物敏感性的研究

目的探讨p21基因转染人肝癌SMMC-7721细胞（7721细胞）对化疗药物的敏感性，深入研究p21基因对肝癌细胞的治疗作用。方法应用磷酸钙介导p21基因转染人肝癌7721细胞；通过G418筛选稳定表达细胞株并扩大培养；采用MTT法检测肿瘤细胞增殖速度；流式细胞术检测细胞周期变化。结果经过3～4w G418筛选得到稳定表达的细胞株，p21基因稳定转染并联合化疗药物应用可明显抑制7721细胞的体外增殖，细胞周期明显改变，细胞从G1期到G2期发生阻滞。结论提示转染外源p21基因联合化疗药物可使7721细胞周期阻滞于G1期，并可抑制肿瘤细胞增殖。     

转化生长因子β1正,反义基因对人肝癌细胞SMMC—7721增殖的影响

目的探讨人转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）正、反义基因对人肝癌细胞 ＳＭＭＣ－７７２１增殖的影响。方法将ＴＧＦβ１正、反义基因分别导入ＳＭＭＣ－７７２１细胞,观察各转染细胞生长情况、凋亡特征及Ｆａｓ、ｐ５３的表达。结果与空质粒转染细胞相比,正义ＴＧＦβ１基因转染细胞生长速度减慢,出现明显的细胞凋亡形态学改变,３－羟基末端标记法（ＴＵＮＥＬ）为阳性,而反义基因转染细胞未发生上述改变,两者都可检测到ｐ５３信号,但未检测到Ｆａｓ表达。结论ＴＧＦβ１可通过诱导ＳＭＭＣ－７７２１凋亡而对其生长起负调控作用,其机制可能与Ｆａｓ／ＦａｓＬ、ｐ５３无关。     

肝癌中细胞凋亡水平和p73基因转录表达的研究

目的　通过观察肝癌组织 ,对应癌旁组织和远癌肝组织中细胞凋亡及p73基因转录表达水平的变化 ,探讨细胞凋亡及p73基因转录表达水平与肝癌发生、发展的关系。方法　采用TUNEL及RT_PCR技术检测 3 2例乙肝相关肝癌癌组织、癌旁组织 ,以及良性肝脏疾病和对应正常肝组织细胞凋亡和p73mRNA的表达水平 ,并结合临床病理学资料进行统计学分析。结果　①肝癌癌组织中的凋亡指数明显高于癌旁组织和远癌组织 (P <0 0 1) ,细胞凋亡水平与肝癌组织学类型和P_TNM分期无明显关系 (P >0 0 5) ;②肝癌组织p73mRNA表达水平和表达率明显高于癌旁肺组织、远癌组织和肝良性病变组织 (P <0 0 1) ;③组织中凋亡指数的升高和p73基因转录表达水平的增加呈显著的正相关 (P <0 0 1)。结论　肝癌组织中存在细胞调亡水平的升高和p73基因的过度转录表达     

基因GADD45-β在肥厚型心肌病发病机制中的潜在作用浅谈

GADD45-β是GADD45家族中的一员,属于核内蛋白,主要通过调控p38和JNK来抑制细胞生长及细胞凋亡过程的。细胞核因子NF-kB是GADD45-β的上游调节因子,它对GADD45-β的调节有多种方式,但是最终都落到调节细胞生长及凋亡过程上来。目前关于GADD45-β的研究主要集中在肿瘤、癌症方面,有很多涉及GADD45-β的文献主要是研究它在肿瘤、癌症方面的功能。     

SMMC-7721肝癌细胞膜上β2糖蛋白Ⅰ可能的受体

研究β2糖蛋白Ⅰ（β2GPI）与肝细胞相互作用的过程,以进一步探讨β2GPI在乙型肝炎病毒感染肝细胞过程中所发挥的作用.采用Ligand blot技术,从SMMC-7721、HL-60及SGC-7901三个细胞株中,筛选出具有与人β2GPI特异结合蛋白成分的细胞.SMMC-7721细胞在40kD处出现一特异染色带,而HL-60及SGC-7901二种细胞则无此反应.在SMMC-7721细胞中存在有与人β2GPI特异结合的蛋白,这种蛋白可能参与了HBV感染肝细胞的过程.     

p73基因不同异构体模式对U2OS细胞顺铂敏感性的影响

目的研究骨髓瘤细胞中p73不同异构体表达模式对该细胞顺铂敏感性的影响。方法将化学合成的针对p53的si RNA序列转染至U2OS细胞,建立U2OS-p53细胞,以Western印迹法检测转染效率。采用溶剂对照、5、10、20、6和40μmol/L的顺铂处理处于对数生长期的U2OS-p53细胞。采用MTT比色法检测U2OS-p53细胞的生长率变化,采用流式细胞术分析U2OS-p53细胞凋亡变化情况,采用Western印迹方法检测U2OS-p53细胞中TAp73、DNp73、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果顺铂处理显著降低了U2OS-p53细胞生长率(P<0.01),促进了U2OS-p53细胞凋亡水平(P<0.01);TAp73和DNp73蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且TAp73的升高趋势强于DNp73,使得TAp73/DNp73蛋白表达比显著升高(P<0.01);Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),但Bcl-2蛋白表达水平变化不明显(P<0.01),使得Bax/Bcl-2比值随之显著升高(P<0.01)。结论TAp73/DNp73比值的增加可显著提高U2OS-p53对化疗药物顺铂的敏感性,p73不同异构体表达模式将有可能作为骨髓瘤基因治疗的新靶点。     

SMMC-7721肝癌细胞膜上β_2糖蛋白I可能的受体

研究β2糖蛋白I(β2GPI)与肝细胞相互作用的过程,以进一步探讨β2GPI在乙型肝炎病毒感染肝细胞过程中所发挥的作用。采用L igand b lot技术,从SMMC-7721、HL-60及SGC-7901三个细胞株中,筛选出具有与人β2GPI特异结合蛋白成分的细胞。SMMC-7721细胞在40kD处出现一特异染色带,而HL-60及SGC-7901二种细胞则无此反应。在SMMC-7721细胞中存在有与人β2GPI特异结合的蛋白,这种蛋白可能参与了HBV感染肝细胞的过程。     

SMMC-7721肝癌细胞膜上β2糖蛋白Ⅰ受体的表达

目的:研究β2糖蛋白I(β22GPI)与 SMMC-7721肝细胞膜的相互作用过程,探讨乙型肝炎病毒(HBV)嗜肝性的发生机制．方法:采用荧光显微镜及流式细胞仪分析的方法．检测SMMC-7721、HL-60及SGC-7901 三种细胞膜与FITC-β2GP I相结合的情况以及二者的结合特性．结果:仅SMMC-7721细胞膜表面附有大量荧光,其余2种细胞无此现象．加FITC-β2GP I 20 μL时,SMMC-772 1与FITC-β2GP I 的结合率为19％,明显高于FITC-β2GP I与 HL-60的结合率(1．7％)及与SGC-7901的结合率(1．9％)(P<0．01)．加FITC-β2GP I 50μL 时,SMMC-7721与FITC-β2GP I的结合率为 20．8％,与20 μL的结合率无差异(P>0．05),说明SMMC-7721与FITC-β2GP I的结合率不随 FITC-β2GP I量的增加而增高．结论:在SMMC-7721肝细胞膜表面存在能与人β2GP I特异结合的蛋白．     

SMMC-7721肝癌细胞膜上β2糖蛋白Ⅰ受体的表达

目的:研究β2糖蛋白Ⅰ(β22 G P Ⅰ)与SMMC-7721肝细胞膜的相互作用过程,探讨乙型肝炎病毒(HBV)嗜肝性的发生机制.方法:采用荧光显微镜及流式细胞仪分析的方法,检测SMMC-7721、HL-60及SGC-7901三种细胞膜与FITC-β2GP Ⅰ相结合的情况以及二者的结合特性.结果:仅SMMC-7721细胞膜表面附有大量荧光,其余2种细胞无此现象.加FITC-β2GPⅠ 20μL时,SMMC-7721与FITC-β2GP Ⅰ的结合率为19%,明显高于FITC-β2GP Ⅰ与HL-60的结合率(1.7%)及与SGC-7901的结合率(1.9%)(P＜0.01).加FITC-β2GP Ⅰ 50 μL时,SMMC-7721与FITC-β2GP Ⅰ的结合率为20.8%,与20μL的结合率无差异(P＞0.05),说明SMMC-7721与FITC-β2GP Ⅰ的结合率不随FITC-β2GP Ⅰ量的增加而增高.结论:在SMMC-7721肝细胞膜表面存在能与人β2GP Ⅰ特异结合的蛋白.     

茜草蒽醌对SMMC-7721肝癌细胞的抑制作用及分子机制

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人SMMC-7721肝癌细胞的抑制作用及分子机制。方法将茜草蒽醌作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞，采用MTY法检测其对肝癌细胞生长的抑制作用，应用TRAP-PAGE银染半定量法和RT—PCR半定量法检测端粒酶活性及端粒酶亚单位即端粒酶相关蛋白1（TP1）基因、端粒酶RNA（hTR）基因、端粒酶催化亚单位（hTERT）基因变化。结果茜草蒽醌能抑制肝癌细胞的生长，呈现与浓度、时间的依赖趋势；降低端粒酶活性，使hTERT基因的表达量明显下降（P〈0．01），而hTR、TP1基因的表达无显著变化（P〉0．05）。结论茜草蒽醌能显著抑制肝癌细胞的生长并抑制端粒酶的活性，可能与其下调hTERT基因的表达有关。     

三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其分子机制.方法 利用MTS/PMS法检测As2O3对SMMC-7721细胞增殖的影响;划痕愈合和侵袭实验检测As2O3对SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力的影响;实时定量PCR、Western印迹检测As2O3作用SMMC-7721细胞后MMP-9的表达.结果 2.0 μmol/L的As2O3对肿瘤细胞增殖有抑制作用;划痕实验结果显示,2.0μmol/LAs2O3处理SMMC-7721细胞12和24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞迁移.Transwell实验结果显示,2.0μmol/LAs2O3处理SMMC-7721细胞12h和24 h后,穿膜细胞数较未处理组明显减少(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞侵袭能力.实时定量PCR和Western印迹结果显示,以2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞后,MMP-9 mRNA和蛋白表达均明显下调(P＜0.05).结论 As2O3可通过抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭,抑制肿瘤的转移.     

牛蒡子苷元对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察牛蒡子苷元（ARG）对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的ARG作用于SMMC-7721细胞,并设不加ARG对照组。MTT法测算细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法检测细胞中的Bcl-2 mRNA。结果与对照组比较,随ARG浓度增加,SMMC-7721细胞增殖率逐渐降低（P均〈0.05）,G0/G1期细胞比例显著增加（P均〈0.05）,G2、M、S期细胞比例减少（P均〈0.05）;随ARG浓度增加、作用时间延长,SMMC-7721细胞凋亡率显著增加（P均〈0.05）,Bcl-2 mRNA表达量减少（P均〈0.05）。结论 ARG可明显抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡;可能与ARG下调细胞中Bcl-2基因的表达有关。     

花姜酮对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭及CXCR4表达的影响

目的研究花姜酮对人肝癌SMMC-7721细胞生长侵袭能力的影响及对CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响,探讨花姜酮抗肝癌侵袭可能的作用机制。方法分别应用花姜酮10μmol/L、20μmol/L处理人肝癌细胞,采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR、Western blotting实验检测CXCR4 mRNA及蛋白表达的变化。结果花姜酮处理人肝癌细胞48 h后,对照组细胞透膜数为(56.8±7.8)个/视野,10μmol/L组透膜数为(41.4±4.8)个/视野,20μmol/L组透膜数为(23.2±5.6)个/视野,随花姜酮浓度增加,细胞侵袭人工基底膜的能力显著降低(P<0.05),RT-PCR及Western blotting结果显示CXCR4 mRNA及蛋白表达随花姜酮浓度的增加而降低(P<0.05)。结论花姜酮可能通过降低CXCR4的表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长和侵袭能力。     

来那度胺对人肝癌SMMC-7721细胞生长的影响

目的探讨来那度胺对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法利用MTS法检测来那度胺对SMMC-7721细胞增殖的影响;实时定量PCR、Western印迹检测来那度胺作用于SMMC-7721细胞后血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 50μmol/L的来那度胺对肝癌细胞SMMC-7721增殖有抑制作用;实时定量PCR和Western印迹结果显示,以25、50、100μmol/L来那度胺处理SMMC-7721细胞12 h后,VEGF mRNA表达水平显著减低(P<0.05);Western印迹结果表明,25、50、100μmol/L来那度胺处理SMMC-7721细胞24 h后,VEGF蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论来那度胺可能通过抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成发挥双重抗肿瘤作用。     

肝细胞肝癌组织中GP73的表达变化

目的观察肝细胞肝癌（HCC）组织中人高尔基蛋白73（GP73）的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化sP法检测80例HCC、10例肝胆管细胞癌、10例正常肝脏组织中的GP73,同法检测HCC组织中的AFP。结果GP73在HCC、肝胆管细胞癌、正常肝组织中的阳性率分别为85％、60％、37％,HCC组织中GP73阳性率与其他组织比较,P均〈0．05;GP73表达与HCC是否合并有肝硬化、腹水、淋巴结转移及门静脉分支侵犯等有关（户均〈0．05）;HCC组织中GP73阳性率为85％,AFP阳性率为65％,两者比较,P〈0．05。结论HCC组织中GP73表达增加,GP73与HCC的发生发展有关。     

苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞体外生长及细胞黏附分子表达的影响

采用CCK-8法检测苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞体外杀伤作用AnnexinV／PI双染色法检测苦参碱对体外培养的SMMC-7721细胞的体外诱导凋亡作用;流式细胞仪检测细胞膜表面E-Cadherin、CD44、CD14、V6租CD54的表达。结果 苦参碱在体外能明显抑制SMMC-7721细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡,具有明显的剂量和时间相关性。苦参碱作用48h后,SMMC-7721细胞膜表面的E-Cadherin表达增高,CD44、CD44、V6和CD54表达减少。提示苦参碱能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,同时能增加E—Cadherin的表达,减少其CD44、CD44、V6和CD54的表达。阻止其对邻近正常组织的浸润及远处转移,从而发挥抗癌作用。     

结肠癌及结肠腺瘤中p73基因改变的意义

ｐ73基因是新发现的基因 ,与结肠癌的关系尚不清楚。我们通过检测 ｐ73在结肠癌及结肠腺瘤中的表达情况 ,并检测其所在基因位点的突变、缺失情况 ,以期探讨其在结肠癌发生、发展中的作用。材料和方法一、材料结肠癌 40例、结肠腺瘤 49例及正常组织 12例的标本 ,均取自 1999年 3～ 10月我院肠镜检查病人 ,标本取得后一部分送病理 ,其余立即用液氮冷却后再转至 - 70°Ｃ冰箱保存。 40例结肠癌中腺癌 36例 ,其中低分化 19例 ,中、高分化2 1例 ;Ⅰ、Ⅱ期 16例 ,Ⅲ、Ⅳ期 2 4例。息肉癌变 4例 ,其中Ⅰ、Ⅱ期 2例 ,Ⅲ、Ⅳ期 2例。年龄为 5～ 81岁 …     

丙戊酸钠对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及对p21WAF1/CIP1mRNA表达的影响.方法:实验分为空白对照组、PBS组、VPA0.2mmol/L组、VPA1.0mmol/L组和VPA5.0mmol/L组.不同浓度VPA干预人肝癌SMMC-7721细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期;干预72h后,用Real-timePCR法检测VPA干预72h后p21WAF1/CIP1mRNA的表达情况.结果:与空白对照组及PBS组比较,不同浓度的VPA作用24h,48h及72h时组肝癌SMMC-7721细胞增殖均出现了不同程度抑制(请将具体数据列出来P<0.05),随着VPA药物浓度升高,细胞增殖抑制作用逐渐增强,随作用时间延长,抑制程度逐渐增强(P<0.05).随药物浓度升高,G1期细胞比例逐渐增多,S期细胞比例逐渐减少,细胞发生G0/G1期阻滞.VPA干预肝癌SMMC-7721细胞72h后,VPA组p21WAF/CIP1mRNA表达较空白对照组及PBS组表达明显升高(请将具体数据列出来P<0.01).结论:VPA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性,并诱导出现G0/G1细胞周期阻滞,同时上调p21WAF1/CIP1mRNA的表达.