基于人/鼠嵌合模型的人黑色素瘤mage-3基因疫苗的免疫学作用

目的 利用人 /鼠嵌合模型评价人黑色素瘤基因 mage-3基因疫苗的免疫效果. 方法 建立并鉴定 Trimera动物模型,并用重组质粒 mage-3/pCI neo作为基因疫苗对其进行免疫.检测免疫动物脾细胞 CTL的杀伤活性和血清中 mage-3特异性抗体. 结果 构建的 Trimera模型脾脏和腹腔中出现了大量的人淋巴细胞.接种后, Trimera模型体内出现了效价为 1 256的 mage-3特异抗体.免疫动物 CTL体外杀伤实验显示,注射基因疫苗的 Trimera小鼠脾脏淋巴细胞对靶细胞 LB373的最大杀伤率为 50%左右,而对照小鼠只有 10%以下的杀伤水平. 结论 mage-3是一种理想的肿瘤疫苗,在人源化动物模型中能激发出特异的细胞和体液免疫,对共享 mage-3抗原的各种肿瘤细胞的临床治疗提供了实验依据.     

构建重组肿瘤基因疫苗对肿瘤进展及生存率影响的实验结局

目的：利用P815肿瘤动物模型观察IL-12对肿瘤动物模型抗肿瘤作用的效应。方法：将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI—neo中；用P815细胞对DBA／2小鼠右腹侧皮下注射，构建P815小鼠肿瘤模型；以重组基因疫苗单独或与鼠IL-12真核表达质粒一起肌肉注射，观察肿瘤的消长、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况。结果：重组基因疫苗在体外有很好的表达，注射后细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效率为40％，IL-12共注射的CTL杀伤效率达到60％。免疫后，30％小鼠的肿瘤出现消退；同IL-12共注射则有50％的小鼠的肿瘤出现消退。两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论：长期存在的IL-12可以持续刺激机体细胞免疫，使肿瘤的生存环境持续恶化，从而达到治疗肿瘤的目的。     

构建重组肿瘤基因疫苗对肿瘤进展及生存率影响的实验结局

目的 利用 P815肿瘤动物模型观察 IL- 12对肿瘤动物模型抗肿瘤作用的效应. 方法 将小鼠肥大细胞瘤 P815特异抗原基因 P1A克隆到真核表达质粒 pCI- neo中;用 P815细胞对 DBA/2小鼠右腹侧皮下注射,构建 P815小鼠肿瘤模型;以重组基因疫苗单独或与鼠 IL- 12真核表达质粒一起肌肉注射,观察肿瘤的消长、特异细胞毒 T淋巴细胞激活和抗体的生成情况. 结果 重组基因疫苗在体外有很好的表达,注射后细胞毒性 T淋巴细胞(CTL)的杀伤效率为 40%, IL- 12共注射的 CTL杀伤效率达到 60%.免疫后, 30%小鼠的肿瘤出现消退;同 IL- 12共注射则有 50%的小鼠的肿瘤出现消退.两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生. 结论 长期存在的 IL- 12可以持续刺激机体细胞免疫,使肿瘤的生存环境持续恶化,从而达到治疗肿瘤的目的.     

构建重组肿瘤基因疫苗对肿瘤进展及生存率影响的实验结局(英)

目的:利用P815肿瘤动物模型观察IL-12对肿瘤动物模型抗肿瘤作用的效应。方法:将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI-neo中;用P815细胞对DBA/2小鼠右腹侧皮下注射,构建P815小鼠肿瘤模型;以重组基因疫苗单独或与鼠IL-12真核表达质粒一起肌肉注射,观察肿瘤的消长、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况。结果:重组基因疫苗在体外有很好的表达,注射后细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效率为40%,IL-12共注射的CTL杀伤效率达到60%。免疫后,30%小鼠的肿瘤出现消退;同IL-12共注射则有50%的小鼠的肿瘤出现消退。两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论:长期存在的IL-12可以持续刺激机体细胞免疫,使肿瘤的生存环境持续恶化,从而达到治疗肿瘤的目的。     

bcr-abl融合基因真核表达载体诱导小鼠特异性免疫应答

目的在小鼠体内外研究bcr-abl融合基因真核表达载体诱导的特异性免疫应答,探索肿瘤免疫治疗的新途径。方法构建表达bcr-abl融合基因cDNA片段的真核细胞质粒pVbcr-abl,将 pVbcr-abl质粒用纳米颗粒聚乙烯亚胺包裹后给BALB／c小鼠肌内注射,检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。小鼠免疫后20 d皮下接种具有相同遗传背景的SP2／0／ber-abl细胞(H-2~d),观察小鼠生存情况、移植肿瘤的生长情况和肿瘤细胞浸润情况。利用免疫组织化学方法观察肿瘤组织中T淋巴细胞浸润情况;流式细胞术分析免疫小鼠脾脏T细胞亚群的变化;LDH释放法检测脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果成功构建真核表达载体pVbcr-abl,bcr-abl融合基因cDNA片段在真核细胞中可得到高效表达。pVbcr-abl免疫BALB／c小鼠能激活机体免疫系统,诱导产生特异性抗体和特异性CTL活性,并形成特异性免疫保护力。免疫小鼠的移植肿瘤形成时间、表面出现破溃时间、生长速度明显降低,荷瘤生存时间明显延长。免疫小鼠移植肿瘤组织中有大量CD3~+T细胞浸润。免疫小鼠的脾细胞杀伤SP2／0／bcr-abl细胞的细胞毒活性明显升高。小鼠脾脏T细胞亚群发生改变,CIM~+／ CD8~+细胞比值升高到1．54±0．29。结论pVbcr-abl真核表达载体除能在小鼠体内诱导产生特异性抗体以外,还能诱导高水平特异性CTL活性,直接杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的生长速度。     

人B细胞淋巴瘤独特型DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

本研究目的在于探讨含人B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链可变区基因片段的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫反应的情况，为人B细胞淋巴瘤疫苗的应用提供基础实验研究资料。本研究通过PCR方法获得人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa膜表面免疫球蛋白重链可变区(VH)基因片段，同时克隆小鼠单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)作为免疫佐剂分子，进一步以重组PCR的方法获得MCP-3和、VH基因的融合基因片段，构建DNA疫苗重组质粒。在体外以瞬时转染的方法证实以融合基因片段作为抗原基因的DNA疫苗质粒能够在真核细胞中正确表达。DNA疫苗质粒大量提取后免疫小鼠。用流式细胞术检测小鼠抗体生成情况，并用LDH释放法测定CTL活性以检测抗独特型细胞免疫。结果表明，从接种疫苗第8周开始小鼠体内特异性抗独特型抗体明显升高，并且抗体滴度可维持高水平至少至第20周。在DNA疫苗免疫组中5只免疫小鼠有3只产生抗体。所诱导的抗体只特异性识别肿瘤细胞表面独特型抗原，而不识别人A549对照细胞。用乳酸脱氢酶释放法未测到明显CTL反应的产生。结论：以MCP-3与VH的融合作为抗原基因构建的DNA疫苗能够诱导小鼠体内产生抗淋巴瘤细胞的特异性抗独特型抗体，为DNA疫苗临床用于人B细胞淋巴瘤治疗提供了初步实验支持。     

氧化型甘露聚糖修饰的LL/2c肿瘤细胞疫苗诱导Th1免疫反应

目的：观察氧化型甘露聚糖修饰的LL／2c肿瘤细胞疫苗(Oxidative mannan-conugated LL/2c,ox-ML)能否诱导Th1抗瘤免疫反应。方法：乙醇固定的LL/2c细胞(fixed LL／2c,f—L)、ox—M—L腹腔免疫小鼠,取脾脏制备T淋巴细胞悬液,采用ELISA检测体外刺激的T细胞INF-γ、IL-4分泌,^51Cr释放实验观察CTL。(cytotoxic T lymphocytes,CTL)杀伤活性。结果：ox—M—L免疫小鼠的T细胞经丝裂霉素C预处理的LL／2c体外刺激,其INF-γ分泌显著提高：^51Cr释放实验显示出对LL／2c细胞特异性的CTL杀伤活性,且这种杀伤活性具有CD8 T细胞的依赖性：未修饰的LL／2c免疫小鼠的T细胞诱导了较高的IL-4分泌,但未显示出CTL杀伤活性。结论：LL／2c肿瘤细胞作为抗原,经氧化型甘露聚糖修饰有效的诱导了Th1类型的抗瘤免疫反应。     

人 SART 3 基因疫苗对荷瘤小鼠的免疫杀伤作用

目的研究表达人T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3（SART3）基因的DNA疫苗在小鼠体内对表达该基因肿瘤细胞的免疫杀伤作用。方法构建表达人SART3基因的C3H小鼠骨肉瘤细胞LM8-SART3,将其接种到C3H小鼠成瘤,比较疫苗治疗组和空载体对照组中肿瘤的生长情况,取小鼠淋巴细胞检测免疫反应活性并行病理切片镜下比较。结果荷瘤小鼠经疫苗注射后肿瘤生长延缓,免疫反应活性与淋巴细胞数量有关,镜下可见肿瘤细胞坏死并淋巴细胞浸润。结论表达人SART3基因的DNA疫苗能诱导小鼠免疫杀伤肿瘤细胞,抑制表达该基因的肿瘤细胞在小鼠体内生长。     

IL-2、IFN-γ和GM-CSF基因佐剂对pcDNA3/MDC-VP1 DNA疫苗免疫作用的影响

目的:观察IL-2、IFN-γ和GM-CSF重组质粒对pcDNA3/MDC-VP1 DNA疫苗免疫的免疫增强效果。方法:将50只4～6周龄雄性BALB/c小鼠随机分成pcDNA3组、pcDNA3/MDC-VP1组、pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/hIL-2组、pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/m IFN-γ组、pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/mGM-CSF组,每组10只。均每3周接种1次,共3次。每次接种的第20d内眦静脉采血,用微量中和试验(固定病毒-稀释血清法)检测血清中和抗体效价。第3次免疫后3周,每组取3只小鼠脾脏制备淋巴细胞悬液,检测淋巴细胞增殖活性与特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果:各组血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P0.05);第3次免疫后pcDNA3/MDC-VP1+pcDNA3/mGM-CSF组的血清中和抗体滴度、脾脏淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性均高于其他组(P0.05)。结论:三种细胞因子基因佐剂均能增强pcDNA3/MDC-VP1的免疫效果,GM-CSF基因佐剂的免疫效果优于IL-2和IFN-γ。     

人乳头瘤病毒58型L1/E7“假病毒”疫苗的制备及免疫效果评价

目的构建人乳头瘤病毒58型L1/E7"假病毒"疫苗,并研究其免疫学特性。方法采用sf9昆虫-杆状病毒表达系统表达HPV58L1蛋白,体外解离重组病毒颗粒,向已经解离的衣壳中加入mE7-pcDNA3.1+质粒,CaCl2室温透析促使病毒样颗粒(VLP)重新聚合,用"假病毒"颗粒滴鼻免疫小鼠,检测小鼠血清IgG,IgA中和抗体以及脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。结果 SDS-PAGE,Western blot和红细胞凝集实验证实sf9昆虫-杆状病毒表达系统有效表达有功能活性的HPV58L1蛋白,HPV58L1蛋白能够有效的折叠、解聚以及再折叠为VLP。小鼠免疫保护实验发现,用包含有mE7-pcDNA3.1~+质粒的HPV58L1"假病毒"免疫小鼠,抗HPV58L1特异性IgG,IgA明显升高(P0.001),"假病毒"免疫组产生的IFN-γ明显高于VLP免疫组(P0.001);"假病毒"免疫过的小鼠脾淋巴细胞可以特异性杀伤Tc-1细胞,引起CTL反应。结论成功制备了人乳头瘤病毒58型L1/E7"假病毒"疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生。     

HA-1树突状细胞核酸疫苗的构建及其特异性CTL的诱导

本研究以次要组织相容性抗原HA-1为靶点，构建HA-1树突状细胞核酸疫苗用于造血干细胞移植后抗白血病治疗。体外培养移植供者树突状细胞，用流式细胞术、混合淋巴细胞反应检测其免疫活性，通过电转法将HA-1基因转染树突状细胞，构建树突状细胞核酸疫苗。48小时后检测HA-1蛋白表达情况。将转染后的树突状细胞与同基因淋巴细胞共孵育诱导特异性CTL，应用LDH释放实验检测其体外杀伤活性。结果表明：经外周血单核细胞诱导的树突状细胞表达树突状细胞表型，能刺激同种淋巴细胞增殖。电转48小时后，Western blot可检测到HA-1蛋白表达。诱导的CTL体外杀伤活性高于对照组。结论：次要组织相容性抗原HA-1可作为造血干细胞移植后抗白血病治疗的靶点。     

类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤小鼠模型的免疫学特征

本研究建立类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤的BALB／c小鼠模型并探索其免疫学特征。将鼠源性B淋巴瘤细胞株（A20细胞）接种于同源BALB／c小鼠以建立B细胞淋巴瘤鼠模型。实验分为3组：成瘤小鼠组,未成瘤小鼠组和正常小鼠组（对照组）。用流式细胞术检测肿瘤细胞CD抗原表达及成瘤小鼠、未成瘤小鼠和对照正常小鼠的外周血和脾脏的T／B淋巴细胞亚群比例。结果表明：在成功构建病理学形态类似人弥漫大B细胞淋巴瘤的BALB／c鼠模型肿瘤组织中,检测到CD3、CD4、CD8、CD19、CD30阳性细胞的比例分别为（49．27±23．75）％,（6．07±3．65）％,（51．2±23．1）％,（67．06±16．39）％,（37．93±17．03）％,与接种前A20细胞相比,其CD3和CD8阳性细胞比例显著升高,CD19阳性表达比例显著下降（P〈0．05）。成瘤小鼠外周血淋巴细胞亚群阳性表达比例较正常小鼠有显著差异,其CD3和CD4阳性细胞比例显著降低（P〈0．05）。未成瘤小鼠脾脏淋巴细胞亚群的阳性表达比例与正常小鼠相比,CD3、CD4、CD8阳性细胞比例降低,而CD19阳性细胞比例升高（P〈0．05）。结论：本研究为在有免疫功能的小鼠体内进行B细胞淋巴瘤相关研究提供了免疫相关实验依据。     

转基因细胞毒性T淋巴细胞的生物学特性及其对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用

背景：肿瘤患者体内的抗肿瘤免疫受到抑制。增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphOCyte，CTL)的活性是提高过继免疫治疗效果，促进肿瘤康复的有效途径之一。目的：对转导肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的CTL的生物学特性及抗肿瘤活性进行研究，探讨细胞因子基因疗法和过继免疫治疗肿瘤的新途径。设计：随机区组实验研究。地点和对象：实验在广西医科大学医学实验中心完成。从人肝细胞癌组织中分离淋巴细胞，用BEL7404和IFN-r诱导得到CTL。BALB／c裸小鼠28只。雄性，4∽6周龄，体质量18～20g，购自北京医科大学实验动物科学部(SPF级，合格证书：医动字第01-3048号) 干预：用重组反转录病毒载体介导对CTL进行TNF-a基因转导。于每只裸鼠右前肢腋窝皮下注射注射BEL7404建立荷瘤裸鼠模型，28只裸鼠按体质量分为4组，每组7只。观察转基因CTL对肿瘤原位(右前肢腋窝)及异位(左前肢腋窝皮下)注射治疗效果，分别用生理盐水注射治疗作对照。主要观察指标：①检测TNF-a基因转导前后CTL的生长形态，增殖能力。TNF-a分泌量、细胞表型。②体外不同作用时间和效靶比浓度对BEk7404的杀伤效应。③各实验组的肿瘤生成时间，生长速度及肿瘤生成率。结果：转基因CTL的生长形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似，但具有持续、高效表达TNF-a的能力，72h表达量达410ng／L。转基因CTL对BEL7404具有较高的体外杀伤作用，其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关。当效靶比达20：1时，杀伤活性接近100％。效靶比浓度为5：1和20：1时转基因CTL的杀伤活性高于CIL(q=7．9658，4．1897．P<0．05)。转基因CTL对荷瘤裸鼠肿瘤生长部位进行过继免疫后，移植瘤的生成延迟、生长减慢，成瘤率降低，与异位注射及生理盐水对照组相比差异有显著意义(P<0．05)。结论：转基因CTL可持续表达的TNF-a，具有良好的抗肿瘤活性。转基因CTL构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞，对防治肿瘤转移和复发，促进肿瘤康复具有积极的意义。     

混合性热休克蛋白/肽疫苗与白细胞介素-12联合诱导特异性细胞毒T淋巴细胞产生的实验研究

目的研究肿瘤组织来源混合热休克蛋白（mHSPs）／肽疫苗诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的作用及其抗肿瘤免疫效应，为应用其治疗人类恶性肿瘤提供实验依据。方法利用细胞培养、流式细胞技术、蛋白质的分离纯化技术、电泳技术、Western blot检测方法、T淋巴细胞的诱导及体外扩增、乳酸脱氢酶法等。测定肿瘤多肽复合物诱导活化小鼠体内CTL杀伤效应。结果mHSPS免疫组和mHSPs＋Cy＋IL-12免疫组体外诱生的CTL反应活性均比对照组的CTL活性有所升高，尤其mHSPs＋Cy＋IL-12免疫组升高明显，且随效靶比的上升而上升；与正常小鼠（CD4^＋46％、CD8^＋18％）比较。对照组、mHSPs免疫组及mHSPs＋Cy＋IL-12免疫组小鼠CD4^＋亚群的比例分别为38％、46％、54％。CD8^＋亚群的比例分别为26％、22％、16％。结论混合热休克蛋白／肽可诱发强大的抗肿瘤免疫效应，当与IL-12、低剂量Cy者联合应用后免疫功能增强最为明显。     

地甘口服液对免疫介导再障小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的影响

目的：研究中药复方地甘口服液对免疫介导再障小鼠模型脾脏淋巴细胞凋亡的影响。方法：选用Ｂａｌｂ／ｃ小鼠为实验对象，在注射ＤＢＡ／２小鼠胸腺与淋巴结混合细胞后，立即接受亚致死剂量射线照射，形成锅是导再障小鼠模型，分组处理后，摘取脾脏制成单细胞悬液，然后上流式仪（ＦＡＣＳ）进行分析。结果：免疫介导再障小鼠脾脏细胞凋亡率明显高于正常对照组，地甘口服液小鼠脾脏细胞凋亡率较模型组明显下降，仍高于正常对照组；结     

基于戊型肝炎病毒中和表位HEV-p179的靶细胞的构建及应用

目的以HEV-p179编码基因为目的片段,构建并筛选戊型肝炎病毒(HEV)的靶细胞,评估HEV疫苗的细胞免疫活性。方法将p179编码基因克隆入pIRES质粒中,构建pIRES-179质粒;将pIRES-179重组质粒转染Sp2/0细胞,用G418压力筛选靶细胞;用间接免疫荧光法和western blot检测靶细胞中目的蛋白p179的表达;用HEV蛋白和基因疫苗免疫BALB/c小鼠,第6周分离小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,用MTT法对细胞进行细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验。结果成功构建重组质粒pIRES-179,转染Sp2/0细胞后,经G418的压力筛选,在800μg/mL筛选到单克隆细胞;间接免疫荧光法和western blot分析表明靶细胞能够有效地表达靶抗原p179;CTL杀伤实验结果表明,pVax-p179-C3d3重组质粒免疫组的杀伤活性为(58.26±4.36)%,p179蛋白免疫组为(37.24±3.71)%,对照组为(6.45±1.74)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论经G418压力筛选pIRES-179转染的Sp2/0细胞可作为HEV的靶细胞,用以评估HEV疫苗的细胞免疫活性。     

应用免疫球蛋白重链可变区上框架区来源的抗原九肽获得的细胞毒T细胞功能分析

目的明确存B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的框架区(FR)上是否存在可以激发细胞毒T淋巴细胞(CTL)的抗原表位，这些来源于FR的抗原肽是否能够激发家族特异性的免疫反应，探讨按照B淋巴细胞肿瘤的IgHV基因分型进行家族性的免疫治疗的可能性，方法利用生物信息学系统预测了40例B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白序列的抗原表位，人工合成不同基因家族的抗原几肽，利用1、2细胞结合实验检测预测的抗原肽和HLA分子的亲合力利用体外CTL刺激扩增体系。诱导特异性的CTL细胞增殖，用肽／HLA四聚体检测特异性CTL的数目，应用LDH释放实验检测CTL的细胞毒活性并验证其家族特异性。结果在B淋巴细胞肿瘤的7个IgHV基因家族中找到了12个高亲和力的抗原九肽，其中10个(83％)位于FR，以HLA-A*0201正常供的外周血单个核细胞(PBMNC)负荷该九肽作为抗原呈递细胞去刺激自身PBMNC，经过4轮刺激，CD8和肽／HLA四聚体双阳性细胞从0．38％上升到49．38％LDH释放实验证明对HLA—A*0201( )、IgHV1( )靶细胞有明显的杀伤作用，并且被IgHV1肽刺激出的CTL不能识别负荷IgHV3肽的靶细胞：结论IgHV基因FR抗原儿肽可以刺激产生具有HLA限制性的并且肽特异性的CTL，同时这样的杀伤作用具有家族特异性，以此为靶位有望对B淋巴细胞肿瘤进行家族特异性的免疫治疗。     

丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析

目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L,该载体能诱发小鼠产生高滴度的抗丙肝核心抗原的抗体,流式和real time结果证实该质粒能诱使小鼠T淋巴细胞由T0期向Th1和Th2转换,并以Th1为主,CTL杀伤结果显示该表达质粒能诱使小鼠产生高水平的细胞杀伤能力。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-core-CD40L,该质粒能够在小鼠体内正确表达,并能诱发高水平的细胞杀伤活性。     

转铁蛋白-多聚乙烯亚胺介导IL-12基因对小鼠抗骨肉瘤免疫的增强作用

目的：研究以转铁蛋白一多聚乙烯亚胺(transferririn-polyethylenimine．Tf-PEI)为靶向性载体，体内转染小鼠白细胞介素12(murine interleukin-12，mIL-12)基因治疗小鼠骨肉瘤模型的疗效。方法：分别以PEI和Tf-PEI为载体，将mIL-12基因导人体外培养的小鼠骨肉瘤细胞，并观察游离转铁蛋白对Tf-PEI转染效率的影响。建立小鼠骨肉瘤动物模型，在荷瘤部位将Tf-PEI包裹mIL-12基因直接注入肿瘤中，检测此基因在肿瘤细胞中的蛋白表达情况和小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)、细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性。结果：Tf-PEI组mIL-12蛋白表达效率显著高于PEI组(f=38．15，P&;lt;0．001)。游离转铁蛋白可显著抑制Tf-PEI组的转染效率(1=44．36，P&;lt;0．001)。在注射有mIL-12基因的肿瘤组织中，小鼠IL-12蛋白水平明显升高，为(72&;#177;5)ng／L(F=3．449，P&;lt;0．001)，小鼠脾细胞：NK，CTL活性增强(t=5．04，t=6．13，P&;lt;0．001)。结论：Tf-PEI是一种高效率的肿瘤靶向性基因转染载体，它可以成功的将mIL-12基因导入小鼠骨肉瘤模型，mIL-12基因治疗可提高机体的抗肿瘤免疫应答。     

抗P-gp/抗CD3双功能抗体在裸鼠体内介导人T细胞杀伤白血病耐药细胞

目的研究抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体介导T细胞对白血病耐药细胞的特异性靶向杀伤活性。方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体可溶性表达产物，并用SDS—PAGE，Western blot及活细胞间接免疫荧光法鉴定纯化产物；采用人白血病耐药及敏感裸鼠移植瘤模型测定该微型双功能抗体介导的体内靶向杀伤活性。结果纯化的抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体具有与Jurkat(CD3阳性)和K562／A02细胞(P—gp阳性)的结合活性，结合阳性率分别为86．25％，86．26％；在对人白血病裸鼠移植瘤模型的生物治疗中，抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体能有效抑制耐药自血病移植瘤的生长，抑瘤率98．57％。结论抗P—gp／抗CD3微型双功能抗体在体外及动物肿瘤模型实验中能介导人T细胞有效杀伤表达P—gp抗原的耐药肿瘤细胞，具有潜在的临床应用前景．