内毒素上调血管内皮细胞肾上腺髓质基因及其机制探讨

目的探讨内毒素对血管内皮细胞肾上腺髓质素(ADM)mRNA的影响,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在其中所起的作用.方法应用逆转录-巢式聚合酶链反应,测定血管内皮细胞株ECV304在不同剂量内毒素作用时ADM mRNA的量以及采用p38 MAPK特异性抑制剂SB20358(10 mmol/L)抑制p38 MAPK后ADM mR-NA的量.结果内毒素0.1、1.0、10、50、100μg/L与ECV 304共培养24h后ADM mRNA/β-actin mRNA均不同程度高于正常培养水平,而SB203580抑制p38 MAPK后可部分抑制内毒素引起的ADM mRNA水平增高.结论内毒素可诱导ADM基因转录增强,激活p38 MAPK可能是一种重要机制.     

脂多糖刺激人血管内皮细胞分泌内皮素和肾上腺髓质素及其机制研究

目的:研究脂多糖(LPS)刺激人血管内皮细胞(HVEC)分泌内皮素-1(ET-1)与肾上腺髓质素(Adm)的机制。方法:在培养的HVEC上,用放射免疫法测定不同浓度LPS刺激HVEC分泌的ET-1与Adm,以及不同的细胞信号转导阻断剂对其分泌的影响。结果:LPS呈时间和浓度依赖性地增加HVEC分泌ET-1和Adm,ET-1/Adm比值与对照组比较无明显差异(P＞0.05)。在LPS刺激基础上,细胞外信号调节激酶(ERKs)抑制剂PD₀₉₈₀₅₉和P38蛋白激酶抑制剂SB₂₀₂₁₉₀可明显降低LPS刺激HVEC分泌ET-1(P＜0.01),仅SB₂₀₂₁₉₀显著降低Adm的分泌(P＜0.05),其余PKC抑制剂H₇,钙调素(CaM)抑制剂W₇,Ca²⁺阻断剂nicardipine,钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环孢霉素(CsA)对LPS刺激HVEC分泌ET-1和Adm均无明显影响(P＞0.05)。结论:LPS刺激HVEC分泌ET-1可能与ERKs和P38两条途径有关,LPS刺激HVEC分泌Adm只与P38信号通路有关,两者均不取决于PKC、Ca²⁺、CaM、CaN依赖的信号通路。     

内毒素对内皮细胞的损伤机制

内皮细胞在维持血管的完整性、对机体的凝血功能调节中起着重要作用。内毒素可直接或间接对内皮细胞造成损伤，使其形态、功能及表面特性发生改变。ＬＢＰ／ＣＤ１４ 在ＬＰＳＥＣ 相互作用中起着关键性的调节和增敏作用。ＭＡＰＫ 酪氨酸磷酸化在ＬＰＳ 作用于内皮细胞的信号转导机制中可能起重要作用。     

肾上腺髓质素对兔血管内皮细胞cAMP、cGMP及Ca2+水平的影响

目的观察肾上腺髓质素（ADM）对兔血管内皮细胞内信号转导途径的影响。方法用原代培养的兔血管内皮细胞，给予肾上腺髓质素、cAMP激动剂forskolin（10^-7mol／L）、NO供L-精氨酸（1mmol／L）、NO合酶抑制剂L-NMMA（10^-5mol／L）、异丙肾上腺素（10^-6mol／L）、8-bromo-AMP（10^-7mol／L）及cGMP抑制剂L-NAME（10^-4mol／L），观察细胞内cAMP、cGMP水平及Ca^2＋荧光强度的变化。用酶联免疫法测定cAMP及cGMP。用Fluo-3AM荧光负载兔血管内皮细胞测定细胞内钙浓度。结果肾上腺髓质素呈浓度依赖性升高兔血管内皮细胞内cAMP，而降低cGMP水平。肾上腺髓质素可使钙离子（Ca^2＋）水平下降（P〈0．001），L-NMMA预处理组无明显作用，当加入L-精氨酸后荧光强度急剧下降。结论肾上腺髓质素能够影响兔血管内皮细胞的cAMP、cGMP及细胞内钙水平，从而实现其对细胞的多种生物学效应。     

肺心病患者肾上腺髓质素测定的临床意义及其相关因素分析

为探讨肾上腺髓质素(ADM)在慢性肺心病发生发展中的作用, 以及吸烟、缺氧、肺功能等因素对肾上腺髓质素的影响, 测定63例慢性肺心病患者急性发作期和缓解期的ADM, 并用多元回归分析方法分析患者年龄、病程、吸烟和肺功能等因素对ADM的影响. 发现慢性肺心病患者急性发作期及缓解期ADM比正常人显著升高(P＜0.001).一秒钟用力呼气容积(FEV1)与动脉氧分压PaO2、吸烟、阻塞性通气功能障碍、缺氧是影响ADM水平的因素. 结果表明, 慢性肺心病患者ADM高于正常人, 且ADM升高与病情的严重程度有关.     

肾上腺髓质素

肾上腺髓质素（ＡＭ）是近年发现的一种在体内广泛分布的内源性血管活性肽。人ＡＭ前体含有１８５个氨基酸残基，成熟ＡＭ由５２个氨基酸残基组成。ＡＭ具有舒张动脉、降低血压、排钠利尿等生物作用，在人、鼠体内分布广泛     

肾上腺髓质素受体研究进展

肾上腺髓质素 (ADM)是一种多功能调节肽 ,体内分布广泛。ADM实现其多种生物学功能的物质基础是其受体的多样性及其调控的复杂性。ADM受体主要有CGRP1受体和孤儿G 蛋白偶联受体RDC 1、L1及降钙素受体样受体。ADM受体表型不仅取决于受体本身结构 ,还取决于受体活性修饰蛋白的调控及信号通路中受体成分蛋白的调节。此外 ,血循环中的ADM结合蛋白也从ADM的生物利用度及其与受体的相互作用等方面影响其生物学效应     

肾上腺髓质素研究进展

肾上腺髓质素是一种新发现的降压肽，广泛分布于体内多种脏器、神经组织和某些神经细胞瘤中。具有调节动脉血压、呼吸系统、肾脏、细胞增殖和迁移等作用。它在高血压的降压、呼吸系统疾病的发生及治疗方面有重要意义。     

肾上腺髓质素前体不同肽段的心血管效应

本工作在整体大鼠、离体大鼠心脏与血管和培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上观察和比较了肾上腺髓质素前体（ｐｒｏＡｄｍ）四个不同肽段的心血管效应。肾上腺髓质素（Ａｄｍ）ｐｒｏＡｄｍＮ端２０肽（ＰＡＭＰ）和ｐｒｏＡｄｍ４５－９２肽均可以舒张大鼠主动脉环、降低血压,而肾上腺升压肽（Ａｄｔ）则收缩大鼠主动脉环。ｐｒｏＡｄｍ的四个肽段对大鼠心脏均无明显变时性和变力性作用。Ａｄｔ可以刺激大鼠ＶＳＭＣ的增殖,Ａｄｍ和ＰＡＭＰ则拮抗Ａｄｔ的促ＶＳＭＣ增殖效应。     

内毒素和过氧化氢对肺血管内皮细胞的损伤作用

观察内毒素、中性粒细胞弹性蛋白酶、中性粒细胞组织蛋白酶Ｇ和过氧化氢对肺血管内皮细胞释放５１Ｃｒ的影响，结果表明，体外培养的肺动脉内皮细胞经５１Ｃｒ标记后，内毒素和Ｈ２Ｏ２可使内皮细胞释放５１Ｃｒ明显增多；中性粒细胞弹性蛋白酶和组织蛋白酶的作用不明显。内毒素和Ｈ２Ｏ２增加内皮细胞内之５１Ｃｒ的释放，表明内皮细胞受到了损伤。     

内毒素诱导的细胞内信息转导

Depending on LBP/CD14 systems, LPS activates a series of signal - transducing systems in cells. Protein tyrosin kinase(PTK)system, ceramide activated kinase(CAK)system might play an important role in cells signal - transducing. This article give a summary about signal transduction in cells induced by en-dotoxin.     

肾上腺髓质素对尾加压素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察肾上腺髓质素(ADM)对尾加压素Ⅱ(UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC;[³H]-胸腺嘧啶([³H]-TdR)掺入测定反映VSMCDNA合成;[γ-³²P]-ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:UⅡ(10^-8mol/L)显著促进VSMC-TdR掺入和激活MAPK比对照组分别高38%(P＜0.05)和260%(P＜0.01)。UⅡ加10^-10、10^-9、10^-8mol/LADM组VSMC-TdR掺入分别较UⅡ组低7%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和41%(P＜0.01)。MAPK活性分别低24%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和36%(P＜0.05)。结论:肾上腺髓质素抑制UⅡ诱导的VSMC增殖,可能与其抑制MAPK活性有关。     

AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老及凋亡相关基因的表达

目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。方法: 体外培养人脐静脉内皮细胞, 采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率，用AngⅡ(10^-6mol/L)及valsartan（AngⅡ1型受体特异性拮抗剂）干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组及valsartan组，采用β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术鉴定细胞衰老，通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化，并利用免疫细胞化学染色法、RT-PCR法和Western blotting分析各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA及蛋白的表达水平。结果: 与对照组相比，10^-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的（81.90±0.04)%; (80.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色。流式细胞仪检测细胞周期停滞于G₀-G₁［(91.36±6.45)%］，证实细胞衰老；荧光显微镜可见明显的细胞凋亡［(31.84±2.86)%］。与AngⅡ诱导组相比，valsartan组Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05), Bax mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论: AngⅡ可诱导体外培养的HUVECs老化。经AngⅡ诱导的衰老HUVECs发生凋亡，提示细胞凋亡参与了AngⅡ诱导HUVECs细胞的衰老过程。AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老的分子机制之一可能与Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达的失衡有关。缬沙坦对血管内皮细胞衰老有一定保护作用。     

内毒素对巨噬细胞和内皮细胞前列腺素合成的影响

内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞和牛主动脉内皮细胞合成前列腺素I2、F2α、E2和血栓素A2。这种刺激作用有剂量和时间依赖性。对于预行色[^3H]花生四烯酸标记的内皮细胞，内毒素增加放射性花生四烯酸的释放和前列腺素I2的合成，多粘菌素B，放线菌酮和地塞米松抑制内素素对前列腺素合成的刺激作用。结果提示内毒素可能通过影响花生四烯酸由细胞脂质的释放过程刺激前列腺素合成。     

蛋白激酶C调节血管内皮细胞CD44分子表达的机制

目的：研究血管内皮细胞蛋白激酶C对CD44分子表达的调控机制。方法：以人脐静脉血管内皮细胞（humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs）为研究模型。利用免疫沉淀法制备Raf-1激酶的提取物,以Western blot及增强化学发光法检测Raf-1激酶活性;放射自显影检测CD44的磷酸化情况;RT-PCR方法检测CD44基因表达。结果：与未处理的细胞相比较,加入10ng/ml的Phorbol-myristate-acetate（PMA）后,CD44磷酸化随时间延长而明显增强,尤以30分钟时最显著。HUVECs的PKC活化后,Raf-1Kinase活性明显增强,加入Calphostin C后其活性则被抑制;10ng/ml PMA处理1分钟,即能看到CD44基因表达明显升高（P〈0.05）,而先加入0.05μmol/L Calphostin C、30μmol/L RKIP,5μmol/L PD98059、10μmol/LGenistein预处理HUVECs,则能抑制PMA对CD44基因表达的上调作用。结论：PKC活化通过对CD44的磷酸化作用而影响CD44基因表达,其信号传导途径为PKC→Raf-1Kinase→MEK→ERK。此路径相关酶的抑制剂能抑制CD44基因的表达。     

肾上腺髓质素在心血管系统的分布及在心血管功能调节中的作用

目的：观察肾上腺髓质素（ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｉｎ，ＡｄＭ）在大鼠心血管系统的分布及缩血管活性肽对血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素表达的影响。方法与结果：应用免疫组织化学方法（ＡＢＣ法）证实，在大鼠的外周组织，尤其是主动脉和心肌等心血管组织以及培养的血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和心肌细胞，均含有丰富的免疫活性的肾上腺髓质素。应用半定量反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分析方法证实，缩血管活性肽－内皮素（ＥＴ－１）和血管紧张素Ⅱ（ＡＧＴ）可明显地降低培养的血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素ｍＲＮＡ水平，这一作用可选择性地分别被ＥＴ－１的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３和ＡＧＴ的特异性受体阻断剂Ｄｕｐ７５３所抑制，提示ＥＴ－１／ＡＧＴ可抑制肾上腺髓质素的表达。应用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和细胞计数发现，肾上腺髓质素可抑制培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞的ＤＮＡ合成和细胞增殖。结论：心血管系统含有丰富的肾上腺髓质素，其表达受ＥＴ－１和ＡＧＴ的调控，它可能作为一种增殖抑制因子而抑制ＳＨＲ血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成和细胞增殖。     

iNOS红色荧光蛋白报告基因载体的构建及其在细胞中的表达

目的:构建iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体, 为研究细胞内iNOS的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法:采用基因重组技术构建了含iNOS启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-iNOSp;用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞, 观察iNOS启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应。结果:酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在NIH3T3细胞静息状态下表达水平很低, 经LPS刺激后, 在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论:所构建的iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的, 对生理相关刺激有很好的反应, 可有效地用于iNOS基因表达信号调控机制的研究。