阳离子多聚物转基因载体的研究进展

综述阳离子多聚物作为非病毒载体的研究现状。同时阐述阳离子多聚物转基因栽体与脂质体、病毒载体的联合应用。     

纳米树突状多聚物颗粒在基因治疗中的应用

基因治疗作为一种新型的治疗方法 ,其首要的技术问题就是实现外源基因的输送。在基因输送的研究领域中人们一直在探寻一种安全、高效的基因运输载体。许多种合成的载体被研究作为可能的基因传输工具。这些合成的载体包括带正电的多肽 ,阳离子脂质体和阳离子多聚物等 ,与病毒载体相比 ,这些载体具有制备方法简单 ,免疫原性较低 ,安全低毒等优点。但它们的基因转染效率都低于重组病毒载体 ,如腺病毒。ＰＡＭＡＭ(Ｐｏｌｙａｍｉｄｏａｍｉｎｅ)Ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ是最早被合成、定性并商业化的一种纳米级球状多聚物。其大小、形状及功能基团的…     

新型基因转移系统在人肝癌基因治疗中的应用

目前基因治疗的主要问题之一是基因导入系统效率低下,缺乏靶向性.病毒类载体,如临床常用的逆转录病毒和腺病毒,体内导入率极低且无靶向性;脂质体等非病毒类载体系统,具有同样的局限性.人们曾经尝试用针对某种受体的配体及多聚阳离子多肽与DNA形成复合物,从而介导外源基因进入受体过度表达的细胞.但是,内吞小体和溶酶体融合后,内吞复合物会被溶酶体的酶系所降解.     

肿瘤基因治疗的病毒载体研究进展

采用病毒载体进行基因转移是目前肿瘤基因治疗中的主要技术手段。本文主要介绍逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒等载体的特性、载体构建、目的基因的表达调控、靶向性方面的研究进展，探讨不同载体的优势与不足，以期在基因治疗的实施中选择合适的载体进行基因转移。     

羧甲基壳聚糖季铵盐作为基因载体及动物体内分布研究

基因疗法是治疗肿瘤的新手段[1-2]。但目前面临的主要障碍是缺乏合适的基因治疗载体[3-4]。由于病毒性基因载体存在导向性差、携带能力低、免疫原性和潜在致瘤性等缺点[5]。因此,针对其缺点研制非病毒载体近来成为研究的热点,主要包括真核细胞表达质粒载体、阳离子聚合     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达，须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明．阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题，对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

多聚赖氨酸-硅纳米颗粒的生物相容性研究

背景与目的：多聚赖氨酸-硅纳米颗粒是一种新型的非病毒纳米颗粒基因传递载体。本研究主要阐述其生物相容性,为其进一步的体内应用提供实验依据。方法：细胞转染和流式细胞仪分析在含血清培养基中多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导质粒DNA和反义寡核苷酸的转染能力,随后通过血浆蛋白反应滤过试验和红细胞聚集试验进一步评价其生物相容性。结果：在含血清培养基中,多聚赖氨酸-硅纳米颗粒介导质粒DNA和反义寡核苷酸传递的能力显著下降。多聚赖氨酸-硅纳米颗粒／DNA(／ODN)复合物可与小鼠血浆蛋白成分结合,并可引起红细胞聚集。结论：多聚赖氨酸-硅纳米颗粒可能与含血清培养基中的血浆蛋白相互作用,影响体外细胞转染效率。多聚赖氨酸-硅纳米颗粒可能与体内外周血血浆蛋白和外周血红细胞反应而影响其体内基因传递能力,其生物相容性还有待于进一步提高。     

肿瘤基因治疗载体的研究现状和展望

随着对肿瘤发生发展分子机制认识的不断深入，肿瘤的基因治疗已成为攻克和治愈肿瘤最具希望和挑战的研究领域。如何建立安全有效的治疗基因导人系统成为研究者们首要解决的问题。目前，常用的载体主要有病毒载体和非病毒载体两类：病毒载体的转移效率高，在基础研究和临床试验中应用广泛，但近年来因存在安全性的问题，其使用受到了一定的制约；非病毒载体基因导人的效率相对较低，但具有安全性好且容易制备的特点，日益受到人们的重视。现就近年来国内外对于肿瘤基因治疗载体的研究现状及未来发展趋势作一综述。     

基因治疗载体的研究进展

载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗功的关键.基因治疗载体的研究从逆成转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等,其中病毒载体又新出现了牛痘病毒、杆状病毒、EB病毒、水疱性口炎病毒、人巨细胞病毒、肝炎病毒以及杂交体病毒载体等.但是现有的载体都还不能达到长期稳定表达外源基因的目的,还需要对现有载体做进一步的改进或开发出新的载体.     

肿瘤基因治疗阳离子载体应用中的问题与策略

采用阳离子载体将肿瘤治疗基因送入靶细胞中表达 ,须经历体内传递、穿过细胞膜、细胞内传递、细胞内表达等多个步骤。当前研究表明 ,阳离子载体在此过程中面临一系列独特的问题 ,对这些问题的研究与解决大大推动了对阳离子载体的认识与应用。     

慢病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具。目前常用的有病毒载体和非病毒载体两类,病毒载体由于转导效率较高且可以用于体内和体外的基因转导,是目前基因治疗研究和临床应用的主要工具,包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺伴随病毒载体等。慢病毒载体是近来受到广泛注意的一种逆转录病毒载体,由于具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫反应小等优点,适于体内基因治疗,因此有望成为理想的基因转移载体。本文以HIV-1为代表对慢病毒载体构建,结构优化及其在肿瘤基因治疗中的应用作一综述。     

肿瘤基因治疗载体的研究现状和展望

随着对肿瘤发生发展分子机制认识的不断深入,肿瘤的基因治疗已成为攻克和治愈肿瘤最具希望和挑战的研究领域。如何建立安全有效的治疗基因导入系统成为研究者们首要解决的问题。目前,常用的载体主要有病毒载体和非病毒载体两类:病毒载体的转移效率高,在基础研究和临床试验中应用广泛,但近年来因存在安全性的问题,其使用受到了一定的制约;非病毒载体基因导入的效率相对较低,但具有安全性好且容易制备的特点,日益受到人们的重视。现就近年来国内外对于肿瘤基因治疗载体的研究现状及未来发展趋势作一综述。     

胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的 探讨胃癌细胞中TWIST慢病毒表达载体的构建及构建。方法 参考Genbank的人TWIST基因序列设计出1对TWIST全基因扩增引物,从人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增TWIST基因,聚合酶链反应（PCR）产物线性化克隆入慢病毒表达载体GV341中,构建重组载体GV341-TWIST。将重组载体GV341-TWIST转染至人胃癌293T细胞包装病毒,免疫荧光检测293T细胞形态改变,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞TWIST表达水平,实时PCR法检测病毒滴度。结果 成功构建了GV341-TWIST慢病毒表达载体,经限制性酶切后出现651 bp的条带,DNA测序分析证实重组慢病毒载体GV341-TWIST的插入序列有近100%的正确率,重组慢病毒载体转染293T细胞后,Western blot检测TWIST融合蛋白为25 kD。实时PCR测定重组慢病毒载体GV341-TWIST病毒滴度2.00E+8 TU/ml。结论 本实验成功构建了人重组慢病毒载体GV341-TWIST慢病毒表达载体,在人胃癌293T细胞中高效表达了TWIST蛋白。     

基因治疗中非病毒载体的基因导入方法

随着基因治疗研究的深入,人们发现,基因治疗的关键是选择恰当的载体及导入方法,使目的基因获得靶向性导入,稳定有效的表达,可控性增强。目前用于基因治疗的载体有两种:病毒载体和非病毒载体。虽然基因治疗的临床实验研究多采用病毒载体,但是不同的病毒载体由于各自存在许多不足     

基因治疗载体的研究进展

载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗成功的关键。基因治疗载体的研究从逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等，其中病毒载体又新出现了牛痘病毒、杆状病毒、EB病毒、水疱性口炎病毒、人巨细胞病毒、肝炎病毒以及杂交体病毒载体等。但是现有的载体都还不能达到长期稳定表达外源基因的目的，还需要对现有载体做进一步的改进或开发出新的载体。     

HER2/neu胞外区片段基因免疫诱导特异细胞免疫及其抗瘤效应研究 *

目的：了解鱼精蛋白应用于血管内皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体的可行性。方法：ＣＶ１,ＣＶ２靶向性非病毒载体来比较多聚赖氨酸与鱼精蛋白对靶向性基因转移复合体携带ＤＮＡ的能力及体外基因转移效率的影响。结果：在Ａ３７５细胞中,鱼业 白与多聚赖氨酸参与形成的复合基因导入率都为５０％左右。在ＡＢＡＥ细胞中,鱼精蛋白参与形成的复合体基因导入率只有２０％左右,而多聚赖酸可达７０％左右。鱼精蛋白参与形成的复     

病毒载体在基因治疗中的应用

基因治疗是近年兴起的一种新的治疗模式,其关键之一在于使用有效的手段将目的基因准确地导入靶部位并有效、持久表达。在目前所用的基因转移技术中,病毒载体尤其引人注目。本文综述腺病毒载体、单纯疱疹病毒载体、腺相关病毒载体等病毒载体介导的基因转染的途径及其在遗传病、代谢病和肿瘤治疗中的应用。     

利用多聚腺苷酸信号缺陷逆转录病毒转化人胃上皮细胞GES-1

目的 通过人工改变多聚腺苷酸化信号的重组逆转录病毒感染人胃上皮细胞GES-1,检测病毒转录能否产生病毒-宿主融合转录产物及其是否具有转化胃上皮细胞GES-1的能力。方法使用人工定点突变多聚腺苷酸化信号的小鼠逆转录病毒载体,应用PA317病毒包装细胞获得多聚腺苷酸信号缺陷的重组逆转录病毒;用该病毒感染人胃上皮细胞GES-1,并用G418筛选抗性细胞。通过Northern blot方法检查通读RNA的表达;通过细胞形态、软琼脂集落形成实验检测细胞的转化。结果多聚腺苷酸化信号缺陷病毒可以在PA317病毒包装细胞形成病毒颗粒;用该病毒感染人胃上皮细胞GES-1,可捕获下游宿主细胞序列;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的GES-1混合细胞中的部分细胞集聚能力增强,个别克隆细胞形态发生改变,在软琼脂中集落形成率高于pLRD感染GES-1细胞和正常GES-1细胞。结论多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染GES-1细胞后可通过表达病毒-宿主通读RNA,激活下游宿主序列使细胞发生转化,为进一步应用多聚腺苷酸信号缺陷逆转录病毒发现胃癌相关基因奠定了基础。     

肿瘤基因治疗病毒载体相关研究生物安全问题浅析

近年来，肿瘤基因治疗无论在科研领域还是在临床应用中都取得突破进展。随着越来越多的以病毒为载体肿瘤基因治疗药物被批准上市，该领域的研究会快速增长。然而，病毒载体经过改造之后，对人类的致病性很弱，使科研工作者很容易忽视其潜在的生物安全风险。本文就常见病毒载体所涉及的生物安全方面的管理规定及潜在风险进行分析总结。     

携带溶瘤病毒细胞载体的研究进展

溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤性病毒,可通过多种机制发挥抗肿瘤作用。然而,机体的免疫监视作用使溶瘤病毒不能高效到达肿瘤部位而不足以治疗肿瘤。细胞载体作为溶瘤病毒的"特洛伊木马"可使溶瘤病毒逃避免疫监视,且两者联合具有更好的抗肿瘤疗效。根据细胞载体对肿瘤靶向程度的差异,细胞载体可分三大类:靶向肿瘤细胞的细胞载体,包括抗原特异性T细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞;靶向肿瘤基质的细胞载体,包括间充质干细胞、内皮系细胞和肿瘤相关巨噬细胞;靶向组织或器官的细胞载体,包括外周血淋巴细胞、树突状细胞和肿瘤细胞等。本文主要介绍该三类细胞载体的研究及应用进展,讨论其存在的问题与应对对策,并展望未来发展方向。