α-干扰素与慢性髓性白血病来源的树突状细胞

 各种临床观察肯定了α-干扰素（IFN-α）治疗慢性髓性白血病的疗效,其可明显延长白血病的慢性期及患者生存时间。树突状细胞（DC）作为功能最强的专职抗原递呈细胞,能有效递呈白血病抗原,逆转机体对白血病抗原的耐受,启动特异抗白血病的T细胞应答。IFN-α用于诱导慢性髓性白血病来源的DC,已经取得一定成绩,用IFN-α诱导慢性髓性白血病细胞分化成为具有较强功能的"临床型"DC被寄予厚望。     

重组人粒系集落刺激因子对白血病细胞的作用

作者观察了重组人粒系集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对ＨＬ－６０细胞和原代培养的急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞的作用，结果显示，ｒｈＧ－ＣＳＦ可刺激白血病细胞生长，并诱导部分ＡＭＬ细胞向粒系分化。提示ｒｈＧ－ＣＳＦ对白血病细胞存在着增殖与分化的双重作用，这种作用对改进白血病治疗可能产生重要影响。     

粒-巨噬细胞集落刺激因子剂量对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟状态的影响

 目的　观察不同剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对小鼠树突状细胞（DC）形态、纯度、成熟程度的影响,为不同用途的DC疫苗制备选择合适的GM-CSF质量浓度提供理论依据。方法　用低剂量（5 ng／ml）、常规剂量（20 ng／ml）、高剂量（50 ng／ml）GM-CSF联合重组小鼠白细胞介素-4（mIL-4）诱导小鼠骨髓细胞体外分化为DC,流式细胞术测定CD11c、CD80和CD86表达率。结果　低剂量GM-CSF组诱导的DC不具有典型的DC形态,低表达CD11c、CD80和CD86。常规剂量GM-CSF组诱导的DC高表达CD11c、CD80和CD86,具有更强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。高剂量GM-CSF组CD11c、CD80和CD86表达率最高,并具有最强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论　GM-CSF剂量影响诱导分化的DC成熟程度。低剂量的GM-CSF诱导的DC为不成熟的DC,常规剂量和高剂量GM-CSF诱导分化的DC为细胞表型和功能成熟的DC。高剂量GM-CSF诱导的DC细胞表型和功能最成熟。     

α-干扰素结合羟基脲治疗慢性髓细胞白血病15例疗效观察

已经证实干扰素（ＩＦＮ）对慢性髓细胞白血病ＣＭＬ慢性期细胞有显著的抑制增殖作用,并能减少Ｐｈ染色体,在少数病例它能完全抑制Ｐｈ染色体〔１〕。然而单独使用干扰素,病情缓解较慢。为探讨如何尽快控制血象、骨髓象,并使Ｐｈ染色体减少,我们将干扰素与羟基脲结合...     

α-干扰素治疗对慢性髓细胞性白血病患者骨髓间质的影响

目的 :探讨长期 α-干扰素 (α- INF)治疗后慢性髓细胞性白血病 (CML)患者骨髓间质的改变。方法 :应用 HGF染色、CD41 免疫组织化学染色、Gomori网硬蛋白及 Masson胶原纤维三色染色方法 ,对比分析 2 9例CML 患者经 α- INF联合羟基脲 (HU)治疗或 HU单剂治疗后骨髓塑包切片上网硬蛋白纤维、脂肪组织及巨核系的改变。结果 :长期 α- INF治疗后网硬蛋白纤维含量增加 ,脂肪细胞大小不等 ,与对照组相比均有明显差异 (P<0 .0 1和 P<0 .0 5 ) ,但 CD+ 4 1 细胞数量无明显改变 (P>0 .0 5 ) ,其形态以成熟型巨核细胞为主。结论 :长期 α- INF治疗可引起 CML 患者骨髓间质改变 ,骨髓切片有助于全国评价 α- INF的治疗作用。     

丙戊酸钠联合粒细胞集落刺激因子诱导髓系白血病细胞分化作用机制的探讨

目的 探讨丙戊酸钠（VPA）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）联合用药对急性髓细胞白血病细胞株U937的诱导分化的作用机制。方法 选取对数生长期U937细胞,分别经0.5 mmol/L VPA、50 ng/ml G-CSF单药或两者联合处理后,采用瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原及G-CSF受体（G-CSFR）的变化,免疫印迹法检测髓系分化相关转录因子增强子结合蛋白（C/EBPα）及G-CSFR在处理前后的表达。结果 VPA可以诱导U937细胞髓系分化,其表面抗原CD11b表达从（11.49±3.48）%升至（62.48±9.96）% （P<0.05）,联合G-CSF后CD11b表达升至（97.65±0.49）% （P<0.05）。流式细胞检测VPA能够使U937细胞表面的G-CSFR表达率从（29.50±6.80）%增至（59.88±9.99）%。VPA能够上调U937细胞C/EBPα的蛋白表达,使细胞G-CSFR蛋白水平明显升高。 结论 G-CSF可以加强VPA诱导髓系白血病细胞分化。VPA可能是通过抑制组蛋白去乙酰化酶活性,促进分化转录因子C/EBPα的表达恢复及上调G-CSFR,从而发挥联合诱导分化作用。     

α干扰素促进急性髓性白血病来源的树突状细胞的成熟分化

目的:研究α干扰素(interferon alpha,IFN-α)对不同亚型的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫表型及功能的影响。方法:5例初发AML患者(其中M2 1例、M4 2例、M5 2例)的外周血单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的无血清培养液中培养11 d,其后加入IFN-α-2a(1 000 U/ml)继续培养3 d,获得DC(IFN-AML-DC),光镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞免疫表型,同种异体混和淋巴细胞反应检测DC的免疫功能。结果:所有患者白血病细胞培养14 d后均转化为IFN-AML-DC,与正常人外周血单核细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(monocyte-derived DC,MoDC)及AML细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(AML-DC)相比,IFN-AML-DC具有典型成熟形态的细胞明显增多,表达CD83 细胞的比例显著增加,HLA-DR、CD86分子的表达水平增高,对同种异体T淋巴细胞的激活能力明显高于MoDC及AML-DC。结论:IFN-α能够促进AML-DC的体外成熟,形成更强的免疫激活能力,为AML的免疫治疗提供更有力的手段。     

STI571对慢性髓细胞白血病树突状细胞发育的影响

目的研究STI571对慢性髓细胞白血病（CML）树突状细胞（DC）发育的影响。方法分离CML患者及正常人的骨髓单个核细胞,将实验分为CML实验组、CML对照组及正常对照组。CML对照组及正常对照组：在培养体系中加入重组人粒单核细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重组人白细胞介素4（rhIL-4）培养;CML实验组：在对照组的基础上,再加入药物STI571培养。于实验第8天,各组加入重组人肿瘤坏死因子α（rhTNF-α）进一步刺激成熟。Wright染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型,荧光原位杂交（FISH）进行细胞遗传学分析,混合淋巴细胞反应（MLR）检测抗原递呈功能;ELISA法检测培养上清中血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果各组均呈现典型的树突状细胞形态;CML实验组CDS0、CD86、CD83和HLA—DR的表达均显著高于CML对照组（P〈0．05）,经FISH证实,CMLDC来源于白血病细胞;各组DC均具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,CML实验组刺激淋巴细胞增殖的能力显著高于CML对照组（P〈0．05）,而与正常对照组相似（P〉0．05）;CML实验组VEGF的浓度较CML对照组显著降低（P〈0．05）。结论STI571可促进CML骨髓来源DC的活化,可能与其抑制了CML细胞VEGF的过度分泌,从而解除了VEGF对CMLDC的分化抑制有关。     

伊马替尼联合干扰素-α治疗慢性髓细胞性白血病的疗效

目的探讨伊马替尼联合干扰素-α治疗慢性髓细胞性白血病的疗效。方法回顾性分析50例慢性髓细胞性白血病患者的临床资料,分为接受伊马替尼联合干扰素-α治疗的观察组(28例)和接受干扰素-α治疗的对照组(22例),观察治疗后缓解情况、不良反应例数以及生活质量。结果两组患者血液学缓解情况无明显差异,观察组细胞遗传学反应情况明显好于对照组,各类不良反应例数明显少于对照组,KPS评分、躯体功能、心理功能、社会功能、认知功能和总体生活质量评分明显高于对照组。结论伊马替尼联合干扰素-α能够改善治疗的细胞遗传学反应、减少不良反应例数、提高患者生活质量,是行之有效的治疗方式。     

粒细胞集落刺激因子受体在急性髓系细胞白血病患者骨髓CD34~+细胞中的表达及其临床意义

背景与目的检测粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR,CD114)在急性髓系细胞白血病(AML)患者骨髓CD34+细胞上的表达,评价G-CSF应用于AML化疗患者的安全     

干扰素α-2b联合低剂量阿糖胞苷治疗慢性髓细胞白血病的临床研究

目的:探讨慢性髓细胞白血病(CML)患者使用干扰素α蛳2b(IFNα蛳2b)联合低剂量阿糖胞苷(LD Ara蛳C)治疗,其血液学和细胞遗传学的缓解率,寻找治疗CML的新途径。方法:采用IFNα蛳2b(300万U/d)+Ara蛳C(20mg·m2·d-1,每月用10 d)治疗CML慢性期(CP)患者30例,检测治疗后血液学缓解率和细胞遗传学缓解率,并与IFNα蛳2b+羟基脲(Hu)治疗组和单纯Hu治疗组作对照。结果:Hu+IFNα蛳2b+LD Ara蛳C治疗组治疗6个月的CHR率、总CHR率和Ph染色体阳性细胞下降病例百分数均显著高于IFNα蛳2b+Hu治疗组(P=0.004、P<0.005和P=0.009)和单纯Hu治疗组(P=0.006、P<0.005和P<0.005),CML急变发生率低于单纯Hu治疗组(P<0.005),而且发生急变的时间晚,5 a生存率明显高于IFNα蛳2b+Hu治疗组(P=0.014)和单纯Hu治疗组(P<0.005)。结论:CML(CP)患者采用IFNα蛳2b+LD Ara蛳C治疗可显著提高CML患者的CHR率,提高CML患者的细胞遗传学缓解率,延长CML患者的生存期。     

非清髓性移植治疗慢性淋巴细胞性白血病合并慢性髓细胞性白血病1例

慢性淋巴细胞性白血病(CLL)合并慢性髓细胞性白血病(CML)极少见，我科曾发现1例，并成功地进行非清髓性异基因外周血造血干细胞移植术(nonmyeloablative stem cell transplantation．NAST)，特报道如下。     

rhG-CSF对Ara-C杀伤急性髓性白血病细胞影响的实验研究

目的探讨ｒｈＧ－ＣＳＦ对２１例急性髓性白血病（ＡＭＬ）细胞体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）敏感性的影响。方法采用ＭＴＴ法检测Ａｒａ－Ｃ的细胞毒作用。结果ｒｈＧ－ＣＳＦ可显著增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性,与对照组相比Ｐ＜０．０５;结论ｒｈＧ－ＣＳＦ可能通过促进耐药ＡＭＬ细胞进入增殖周期,而增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性,从而具有耐药的逆转效应,预示着ｒｈＧ－ＣＳＦ与Ａｒａ－Ｃ联合运用治疗耐药ＡＭＬ的潜在价值     

促红细胞生成素、粒细胞及粒-巨噬细胞集落刺激因子对慢性粒细胞白血病急变细胞生长的影响

为了解外源性细胞因子对慢性粒细胞白血病急变细胞增殖的影响，观察了促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子和粒－巨噬细胞集落刺激因子在体外对慢粒急变细胞生长的影响。实验结果显示慢粒急变细胞的增殖不受这些外源性细胞生长因子的影响，提示急变期细胞的生长特性发生了改变，同时这一结果也对细胞生长因子的临床应用有一定的意义     

两种慢性髓系白血病细胞株对干扰素-α的敏感性

背景和目的：临床研究表明干扰素-α(interferon-alpha,IFN-α)是造血系统恶性肿瘤和淋巴瘤的有效治疗剂之一。然而,IFN-α仅可使约70％～80％的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者获得血液学缓解。不同的CML患者对IFN-α反应性不同的机制尚未阐明。本研究旨在比较两种CML细胞株KA-1／A3、K562对IFN-α的不同敏感性。方法：(1)采用MTT、半固体集落形成和台盼蓝染色液体培养细胞检测,不同浓度IFN-α(100、500、1000、5000和10000u／ml)对KT-1／A3及K562细胞生长的影响;(2)IFN-α(1000u／ml)诱导KT-1／A3、K562细胞48h后,采用流式细胞分析(flow cytometry,FCM)、荧光染色和DNA片段检测细胞凋亡;(3)加入IFN-α(1000u／m1)培养KT-1／A3、K562细胞48h后采用相对定量RT-PCR分析细胞bcr／abl基因表达水平。结果：(1)IFN-α呈剂量依赖性(从100u／ml到10000u／ml)抑制KT-1／A3细胞生长;(2)IFN-α(1000u／m1)诱导48h后使KT-1／A3细胞凋亡率从3．3％升到11．8％,并使KT-1／A3细胞中bcr／abl嵌合基因的表达水平降至对照组的66．7％;(3)IFN-α对K562细胞的生长、凋亡及bcr／abl嵌合基因表达无明显调节效应。结论：不同类型的CML细胞对IFN-α的反应性不同。     

慢性髓细胞白血病细胞诱导分化成为树突状细胞的实验研究

目的:将慢性髓性白血病患者的白血病细胞体外诱导分化成为树突状细胞。方法:从8例慢性髓性白血病患者的骨髓或外周血中获取非贴壁细胞,利用细胞因子(rhGM蛳CSF、rhIL蛳4、rhTNF蛳α)联合培养,每3 d补充新的细胞因子,其中rhTNF蛳α为第9天添加,第12天收获细胞。培养前后分别用光镜、倒置显微镜、电镜观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞表面标志,MTT法检测收获细胞激发混合淋巴细胞反应的能力。结果:8例CML标本分化成为具有典型树突状形态的细胞,流式细胞仪检测白血病细胞的HLA蛳DR由(16.16±10.70)%增至(39.94±20.79)%,CD86由(3.53±1.75)%增至(8.83±6.11)%,CD1a由(8.78±4.90)%增至(19.17±8.51)%,差异有统计学意义(P <0.01)。在混合淋巴细胞反应中具有强烈激发同种T淋巴细胞增生的能力。结论:慢性髓性白血病细胞可以诱导分化成为具有DC形态、表型、功能的细胞。     

伊马替尼联合粒细胞集落刺激因子治疗慢性粒细胞白血病11例

 目的　研究伊马替尼（IM）联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）降低单药IM疗效欠佳的慢性粒细胞白血病（CML）残留病的疗效。方法　采用IM联合G-CSF治疗11例IM治疗后Ph染色体转阴率≥35 %的CML患者。起始治疗量为IM 400或600 mg／d,G-CSF 5 μg?kg-1?d-1,皮下注射。白细胞计数≥30×109／L者,延迟或间断使用G-CSF直至白细胞＜20×109／L。治疗过程中定期检测外周血bcr-abl转录水平,治疗6个月后转录水平降低未超过0.5个对数（log）者,停用G-CSF。bcr-abl转录水平持续下降但仍未获得完全分子生物学缓解者,继续使用该方案治疗1～6个月。结果　11例患者中9例出现bcr-abl转录水平的明显下降（包括7例下降＞1个对数和2例下降＞0.5个对数）,2例出现bcr-abl转录水平的下降小于0.5个对数。7例下降＞1个对数者,其中2例获得完全分子生物学缓解,5例原为部分细胞遗传学缓解的患者获得完全细胞遗传学缓解。所有患者均能耐受,未出现因不良反应中断治疗和治疗相关性死亡病例。结论　IM联合G-CSF方案治疗单药IM治疗反应欠佳的CML患者有效、安全。     

慢性髓性白血病来源的树突状细胞诱导的CTL体外作用研究

 目的　研究慢性髓性白血病来源的树突状细胞的免疫功能。方法　分离慢性期CML患者外周血单个核细胞 (PBMNC) ,用细胞因子GM CSF及IL 4在体外诱导培养DC ,检测细胞表型 ,并观察其诱导的CTL体外抗肿瘤效应。用酶联免疫 (ELISA)方法测定CML DC混合淋巴细胞反应 (MLR)上清液中IL 12及IFN γ的量 ,并与正常DC进行比较。结果　联合GM CSF及IL 4可诱导CML细胞分化为CML DC ,CML DC的CD1a、CD80、CD83表达率均低于正常DC ;CML DC混合淋巴细胞反应上清IL 12及IFN γ含量均低于正常DC ;CML DC能诱导出对自身CML细胞有特异性杀伤作用的CTL。结论　CML DC具有抗原提呈细胞的免疫功能 ,能诱导抗白血病CTL反应。     

粒细胞集落刺激因子在急性髓系白血病缓解期化疗中的费用效果分析

 目的 探讨急性髓系白血病缓解期化疗后应用G-CSF的必要性。方法 采用自身前后对照,比较了24例急性髓系白血病患者两次化疗后用与不用G-CSF的感染率、感染时间和医疗费用情况。结果 用与不用G-CSF感染率分别为79.2 %和87.5 %,差异无统计学意义（P＞0.05）;用G-CSF较未用感染时间要缩短（1.75±1.69）d（P＜0.01）;用G-CSF者的医疗费用要超过未用者（P＜0.05）。结论 急性髓系白血病患者缓解期常规方案化疗后使用G-CSF有利于缩短感染期,但从经济上考虑预防性使用G-CSF是非必需的。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因修饰的树突状细胞疫苗增强体外抗肿瘤免疫效应

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰树突状细胞(DC)后形态、表型及功能的变化,以及增强DC疫苗对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 小鼠尾静脉注射趋化因子配体3(CCL3),分选得到B220- CDllc+细胞,经细胞因子培养诱导分化DC.在体外用含GM-CSF基因的重组腺病毒(AdGM-CSF)转染DC,酶联免疫吸附试验(ELJSA)检测转染后GM-CSF的水平.通过细胞形态学观察、表型分析及混合淋巴细胞反应(MLR),检测GM-CSF基因修饰前后DC的变化.反复冻融法制备胃癌可溶性抗原,将其与GM-CSF基因修饰的DC共同培养,制备DC疫苗,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测活化的T淋巴细胞在体外对小鼠前胃癌细胞(MFC)的杀伤作用,ELISA法检测干扰素γ(INF-γ)的分泌情况.结果 CCL3注射后,外周血中B220- CD11c+细胞明显增加,48 h达到高峰[占外周血单个核细胞的(13.88±1.10)%].AdGM-CSF转染后,培养液上清中GM-CSF浓度升高,当感染复数(MOI)为1:100时达到高峰[(130.00±12.61)pg/m1].经GM-CSF.基因修饰的DC在形态上更趋成熟,MHCⅡ类分子、CD80、CD86等细胞表型明显上调,具有更强的刺激T细胞增殖的能力.荷载胃癌抗原的DC激活的T淋巴细胞对MFC细胞具有特异性杀伤作用,并产生高水平的INF-γ[(1245.00±13.75)pg/ml].结论 GM-CSF转染DC后,能大量表达GM-CSF,DC形态及细胞表型更趋成熟,刺激T细胞增殖能力明显增强.GM-CSF基因修饰的DC在体外可诱导出针对靶肿瘤细胞的特异性杀伤作用.