二冬膏含药血清对人肺癌A549细胞的抑制效应初探

目的探讨二冬膏含药血清对人肺癌A549细胞的抑制效应。方法采用中药血清药理学方法,选择高、中、低剂量的二冬膏水溶液以灌胃方式给药,获取二冬膏含药血清,以空白血清为对照,干预A549细胞,应用MTT法、划痕实验法及Transwell侵袭实验法检测二冬膏含药血清对A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果二冬膏高、中、低剂量组干预A549细胞24 h后均可不同程度抑制肺腺癌A549细胞增殖,差异有统计学意义(P0.05),并呈时间、剂量依赖性,以二冬膏中剂量组抑制作用最明显;二冬膏高、中、低剂量组A549细胞的迁移距离较空白组缩短,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组细胞迁移距离最短;二冬膏高、中、低剂量组均能降低A549细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组侵袭过膜的细胞数最少。结论二冬膏含药血清能抑制肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力,中剂量抑制作用最明显。     

扶正合剂含药血清对肺癌细胞生长及耐药基因表达的影响

目的：探讨扶正合剂对肺癌细胞生长及耐药基因表达的作用。方法：选择人肺腺癌细胞株A549／DDP为模型，采用血清药理学及MTT、免疫组化及流式细胞法，进行肺癌细胞生长率、凋亡率及耐药基因LRP的表达。结果：扶正合剂荷瘤动物含药血清能够显著提高DDP抑制肺癌细胞生长的作用，促进肿瘤细胞的凋亡，与0％含药血清比较，差别有统计学意义（P〈0．05）；与0％含药血清比较，其对肺癌细胞A549／DDP肺耐药蛋白LPR表达有显著的抑制作用（P〈0．01），而正常兔血清对LRP的表达差别无统计学意义（P〉0．05）。结论：扶正合剂药物血清有抑制肺癌细胞生长，促进肺癌细胞凋亡，抑制肺癌细胞耐药基因表达的作用，正常动物含药血清无此作用，二者有显著性差异。     

加味四君固本汤与Iressa联合抑制肺癌细胞增殖的实验研究

目的探讨自拟加味四君固本汤含药血清与表皮生长因子受体（EGFR）靶向治疗药物Iressa联用对人非小细胞肺癌细胞系A549及HCC827增殖的抑制作用。方法大鼠灌胃制备高、中、低剂量加味四君固本汤含药血清,采用MTT法检测加味四君固本汤含药血清单用以及联合Iressa使用对人非小细胞肺癌细胞系A549和HCC827增殖的影响。结果 Iressa抑制A549和HCC827细胞增殖的半数抑制浓度（IC50）分别为46.18μmol/L和61.99μmol/L（P〈0.05）;加味四君固本汤含药血清作用于肺癌细胞后,随着含药血清浓度的逐渐增加,抑制率逐渐增高（P〈0.05）;加味四君固本汤含药血清与Iressa联用加强了对A549和HCC827细胞增殖抑制作用（P〈0.05）。结论加味四君固本汤含药血清具有一定的抗肺癌作用,并存在一定的量效关系,联合Iressa使用可协同抑制A549和HCC827细胞增殖。     

加味当归补血汤含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的:探讨加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响.方法:应用加味当归补血汤灌胃荷瘤Wistar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、调亡.结果:加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2/M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡.结论:加味当归补血汤含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2/M期和诱导细胞凋亡而实现.     

三七提取物对经MNNG转化后的GES-1细胞增殖抑制及促凋亡作用

目的通过细胞培养方法,研究灌服三七提取物后犬血清对胃癌前病变细胞增殖抑制及促凋亡作用。方法采用永生化的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞被N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）进一步转化后的细胞（简称MC细胞）作为胃癌前病变细胞的体外研究模型;以三七提取物给彼格犬一次性灌胃,取给药前的血清及给药后不同时点的血清作为实验药物血清。以四甲基固氮唑盐（MTT）法分别检测每个采血时间点上含药血清对MC细胞作用72h后的抑制情况,找出最佳含药血清时点（2h、6h）;根据以上结果,以流式细胞仪（flow cytometry）分别检测2h和6h药物血清对MC细胞作用72h后的促凋亡作用。结果2h和6h时点的药物血清对MC细胞的抑制率最高,分别达到45．3％和42．4％,与空白血清组比较差异有显著性（P〈0．01）;其能明显促进MC细胞的凋亡,与空白血清组比较其凋亡比例增加（P〈0．05）。在2h和6h药物血清的作用下MC细胞在G0／G1期细胞比例明显下降（P〈0．05）;而G2／M期细胞显著增加（P〈0．05）;但S期并没有一致性的变化。结论灌服三七提取物后2h、6h药物血清对MC细胞的增殖抑制作用最强;均对MC细胞有显著的促凋亡作用,且能降低MC细胞在G0／G1期的比例及增加G2／M期的比例．这可能是其抑制MC细胞增殖及促凋亡的原因之一。     

当归补血口服液含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的：探讨当归补血口服液荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响。方法：应用当归补血口服液灌胃荷瘤WiStar大鼠，10日后采集含药血清体外培养A549，MTT测细胞活性，流式细胞法测细胞周期、凋亡。结果：当归补血口服液荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖，且呈剂量、时间依赖性，可阻滞A549细胞的细胞周期，使G2／M期细胞增多，S期细胞减少，同时诱导A549细胞的凋亡。结论：当归补血口服液含药血清体外具有抑制A549细胞生长，其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2／M期和诱导细胞凋亡而实现。     

鹤蟾片诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究鹤蟾片对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大鼠含药血清,MTT法检测鹤蟾片含药血清对A549细胞的生长抑制率。利用PI染色观察和流式细胞术研究该含药血清对A549细胞凋亡的影响。RT-PCR检测含药血清对细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA表达的调节作用。结果鹤蟾片含药血清明显抑制A549细胞生长,并使该细胞呈凋亡形态学改变。10%、20%含药血清组的细胞凋亡率为20.5%、33.2%,与对照组(6.1%)比较,差异均有统计学意义(P0.05)。含药血清组的细胞EGFR表达明显低于对照组(P0.05)。结论鹤蟾片具有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,分子机制可能与抑制EGFR基因的转录有关。     

芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路影响的研究

目的:观察芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路的影响。方法:分别运用MTT法检测含药血清对A549细胞增殖的影响;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测含药血清对A549细胞凋亡的影响;Western-blot法检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响;RT-PCR法检测含药血清对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为24.26%,16.44%和10.89%,含药血清浓度越大,对细胞的抑制作用越显著。与空白组相比,芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组细胞凋亡率显著升高,且含药血清浓度越大,对细胞凋亡的作用越显著。芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因相对表达量与空白组相比,表达量降低,且含药血清浓度越大,对A549细胞凋亡相关蛋白和基因表达的影响越显著。结论:芪杉胶囊通过影响A549细胞凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因表达,从而抑制细胞增值、促进细胞凋亡。     

白露汤含药血清对人肺癌A549细胞活力、凋亡及周期的影响

目的:研究白露汤含药血清对人肺癌A549细胞活力、凋亡及生长周期的影响。方法:将人肺癌A549细胞培养至对数生长期,分别加入白露汤低、中、高剂量含药血清,空白对照组加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,采用CCK-8法检测细胞活力;Western-blot法测定人肺腺癌A549凋亡细胞Bax、Bcl-2、C-caspase、HIF-1α及β-actin蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期。结果:与空白对照组比较,白露汤各给药组的A549细胞活力在24、48、72 h均明显降低(P0.05),且呈剂量依赖性。作用24、48、72 h后,白露汤各给药组均出现不同程度的细胞凋亡。流式细胞术检测显示,白露汤作用后,可使人肺腺癌A549细胞其发生早期凋亡(P0.05)。结论:白露汤可抑制人肺癌A549细胞活力、诱导细胞凋亡、延缓细胞周期进程,这可能与下调GLUT1、HK2、PKM2、LDH-A、HIF-1α和β-actin等表达有关。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

二陈汤对肺癌A549细胞中黏附分子-1和p38表达的影响

目的研究二陈汤对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的肺癌A549细胞中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和p38表达的影响。方法实验分为空白对照组、二陈汤对照组、TNF-α诱导组、二陈汤干预组、p38阻滞组,并给予相应干预。采用TNF-α诱导肺癌A549细胞产生ICAM-1高表达,以二陈汤含药血清处理ICAM-1高表达的肺癌A549细胞,采用Western blot免疫印迹法测定p38蛋白表达,以PCR法测定ICAM-1 mRNA水平,对二陈汤处理前后的ICAM-1表达水平及p38蛋白表达进行分析。结果二陈汤干预组肺癌A549细胞中血清ICAM-1表达及p38活性与TNF-α诱导组比较显著降低（P〈0.01）。结论在体外实验中,二陈汤有可能通过抑制p38的活性而实现对ICAM-1表达的调控,这可能为二陈汤控制肺癌转移的机制之一。     

养心通脉有效部位方对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响

目的 探讨养心通脉有效成分部位方(YTⅡ)对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响.方法 制备养心通脉有效部位方组(YTⅡ组)、养心通脉方原方组(YT Ⅰ组)、麝香保心丸组(SBW组)、重组牛碱性成纤维细胞生长因子组(bFGF组)和无药血清组(KX组)各组的含药血清,另外设置空白组,共6组,每组25个鸡胚.复制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型.从0 h、24 h、48 h、72 h和96 h共5个时间点,观察YTⅡ及各组对CAM模型鸡胚存活情况、CAM标本形态和CAM新生血管数量的影响.结果 分组加药后96 h时,bFGF组和YTⅡ组存活率明显高于其它各组.加药72 h后各药物组粗大血管及细小分支迅速增多,血管网络清晰,呈叶脉样,放射性生长,加药96 h时更明显,尤以bFGF组和YTⅡ组血管生长最为旺盛.加药48 h,72 h和96 h,各药物组与空白组、KX组比较,均具有显著性差异(P<0.05),各组血管新生数呈bFGF组>YTⅡ组>YT Ⅰ组>SBW组>KX组>空白组的趋势.结论 YTⅡ与YTⅠ、SBW、bFGF同样具有促血管新生的作用,且YTⅡ作用与bFGF作用相当,明显优于YT Ⅰ和SBW.     

降脂平肝汤含药血清对大鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察降脂平肝汤含药血清对大鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA和过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR)-γmRNA表达的影响,探讨其对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的可能机制。方法选择Wistar大鼠16只,诱导分化3T3-L1脂肪前体细胞为成熟的脂肪细胞并以肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导建立脂肪细胞的胰岛素抵抗模型,取诱导成功的胰岛素抵抗模型细胞分为对照组(基础培养液加入20%大鼠空白血清)、模型组(基础培养液加入20%大鼠空白血清和20ng/mlTNF-α)、罗格列酮组(基础培养液加入20%大鼠含药血清和20ng/mlTNF-α)、降脂平肝汤组(基础培养液加入20%大鼠含药血清和20ng/mlTNF-α)每组4只,培养48h,观察细胞IRS-1mRNA和PPAR-γmRNA表达水平的变化。结果模型组IRS-1mRNA和PPAR-γmRNA表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);罗格列酮组与降脂平肝汤组IRS-1mRNA和PPAR-γmRNA表达均明显增高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论降脂平肝汤可能通过增强大鼠IRS-1、PPAR-γ基因的表达起到抑制脂肪细胞胰岛素抵抗的作用。     

通降解毒方药物血清干预胃癌细胞增殖的实验研究

目的通过观察通降解毒方药物血清对胃癌MKN-45细胞增殖的影响,以期佐证其临床抑制肿瘤生长的作用。方法制备通降解毒方药物血清,MKN-45细胞随机分为空白对照组、空白血清组、通降解毒方血清组、5-Aza-CdR组,培养24、48、72 h后观察胃癌细胞的形态变化,CCK8法测定胃癌细胞活性。结果通降解毒方血清组、5-Aza-CdR组均能抑制MKN-45细胞的增殖,与空白对照组比较,差异有统计学意义。结论通降解毒方药物血清能抑制体外胃癌细胞的增殖,从体外实验的角度可以解释其临床抗肿瘤的效果。     

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

目的探讨阳和汤含药血清对成骨细胞、破骨细胞的影响作用。方法 SD大鼠连续7 d灌胃阳和汤,腹主动脉采血,制备含药血清。分离并培养原代成骨细胞、成骨细胞株UMR106、原代破骨细胞、破骨前体细胞RAW264.7。随机分为阳和汤含药血清低剂量组、中剂量、高剂量,空白血清组,各组加入相应含药血清进行培养,分别于24、48、72h收获细胞,采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响;比色法测定破骨细胞TRAP酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24、48、72h均能提高成骨细胞的增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组在48、72h也能明显提高细胞增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组对破骨前体细胞RAW264.7增殖率24、48、72h均没有影响,与空白血清组比较差异均无统计学意义;阳和汤含药血清中、高剂量组破骨前体细胞RAW264.7增殖率均低于空白血清组,24、48、72h比较差异有统计学意义;阳和汤含药血清低剂量组对破骨细胞的TRAP活性24、48 h影响不大,但72h TRAP活性低于空白血清组;阳和汤含药血清中、高剂量组48、72h破骨细胞TRAP活性均显著低于空白血清组。结论阳和汤能抑制体外培养的破骨前体细胞增殖,降低破骨前体细胞TRAP活性,对成骨细胞的增殖有促进作用。     

健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。     

二冬汤合逐风通痹汤配合西药治疗糖尿病周围神经病变临床研究

目的:观察二冬汤合逐风通痹汤配合西药治疗糖尿病周围神经病变的疗效。方法:将120例糖尿病周围神经病变患者随机分为两组。对照组60例,在糖尿病教育、饮食、运动、降糖药物(胰岛素或口服降糖药)等控制糖尿病基础上,给予:①前列地尔注射液10μg加20mL生理盐水,静脉推注,每日1次;②依帕司他片,每次50mg,口服,每日3次。治疗组60例,在对照组治疗基础上加服二冬汤合逐风通痹汤,每日1剂。两组疗程均为4周。结果:治疗组60例,显效21例,有效35例,无效4例,总有效率93.33%;对照组60例,显效14例,有效34例,无效12例,总有效率80%。两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:二冬汤合逐风通痹汤配合西药治疗糖尿病周围神经病变疗效显著,值得进一步研究。